慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与病毒载量的相关性分析

目的 分析慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与HCV-RNA病毒载量的相关性,探讨HCV感染慢性化的免疫学机制.方法 流式细胞仪检测40例慢性丙型肝炎患者（CHC）外周血中髓样树突细胞（mDC）及浆样树突细胞（pDC）的含量,22例健康人作对照比较.实时荧光定量PCR法检测外周血HCV-RNA载量.结果 HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC表达（0.25％±0.09％,0.14％±0.07％）均低于健康对照组（0.38％±0.10％）,差异有统计学意义（t=4.340 9,9.222,P值均＜0.05）;HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血pDC（0.23％±0.10％,0.13％±0.08％）均低于健康对照组（0.33％±0.09％）,差异有统计学意义（t=6.552 4,11.04,P值均＜0.05）;HCV RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC,pDC的表达量明显低于HCVRNA1＋E003 IU/ml患者的表达,差异有统计学意义（t=4.349 6,2.671 8,P值均＜0.05）.结论 CHC患者外周血DC含量与HCV-RNA病毒载量呈负相关,CHC患者免疫功能低下.     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者外周血树突细胞的变化及意义

目的 探讨慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者体内树突细胞(DC)数量和功能的变化.方法 慢性ITP患者予以大剂量地塞米松(HD-DXM)冲击治疗,剂量40 mg/d,口服,连续4 d,观察短期疗效.用流式细胞术检测患者外周血中髓系DC(mDC)和浆细胞样DC(pDC)在治疗前后绝对数量的变化及与CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的相关性;流式细胞术检测外周血总Dc表面协同刺激分子的表达.将慢性ITP患者外周血单核细胞来源的DC、CD4+T淋巴细胞与自身血小板或健康人同源异基因血小板混合培养,观察CD4+T淋巴细胞增殖情况,检测DC血小板相关抗原的呈递功能.结果 与正常对照组比较,慢性ITP患者外周血pDC和mDC绝对数量均无明显变化(P值均》0.05);而外周血CD4+FOXP3+T细胞数明显降低(P《0.01),pDc和mDC与CD4+FOXP3+T细胞数之间均存在负相关性(r=-0.396,P=0.045和r=-0.410,P=0.037).HD-DXM治疗初始反应率达92.3%,pDC绝对数量较治疗前减少达75.5%(P《0.01);而mDC较治疗前虽增加了24.3%(P《0.05),但mDC上CD11c表达的平均荧光强度(MFI)从治疗前340±30降至199±21(P《0.01);CD4+F0xP3+T细胞数较治疗前显著增加(P《0.01),治疗后pDC与CD4+F0XP3+T细胞存在负相关(r=-0.524,P=0.006),而mDC与CD4+F0XP3+T细胞间无相关性(r=-0.360,P=0.071).慢性ITP患者外周血DC表面协同刺激分子CD86表达的MFI明显高于正常对照组(P《0.05);CD86、CD40、CD80表达阳性率及CD40、CD80表达的MFI与正常对照组比较差异均无统计学意义(P值均》0.05).慢性ITP患者CD4+T淋巴细胞增殖反应强度高于对照组(P《0.05),DC对血小板相关抗原呈递功能亢进.结论 DC可能参与了慢性ITP的免疫发病机制,并与CD4+CD25+Treg细胞有一定的关联.     

黄芪多糖体外对慢性粒细胞白血病患者治疗前后浆细胞样树突细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外实验研究黄芪多糖(APS)对浆细胞样树突细胞(pDC)功能及成熟的影响,进一步阐明APS洞节免疫的作用.方法 从初诊未治及缓解期慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血分选pDC,分别加入0、50、100、200 mg/L的APS共孵育,24 h后收集上清液,用ELISA法检测pDC的IFN-α、IL-6、TNF-α分泌水平,5 d后收集细胞,用流式细胞术检测DC免疫表型,光学显微镜下观察DC的形态,扫描电镜下观察DC的超微结构.结果 APS可显著提高CML缓解期患者pDC IFN-α、IL-6、TNF-α分泌水平[100 mg/L APS处理24 h与未加药组相比分别为(613±44)对(478±33)、(180±41)对(99±22)、(210±37)对(166±29)ng/L]及初诊未治患者pDC IL-6、TNF-α分泌水平[100 mg/LAPS处理24 h,与未加药组相比分别为(38±7)对(21±5)和(84±20)对(66±19)ng/L],并呈APS浓度依赖性(P＜0.05);APS可促进CML患者pDC向DC分化和成熟,并呈APS浓度依赖性(P＜0.05).结论 APS能够增强CML患者pDC的功能,并促进其向DC的分化和成熟.     

雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症患者浆细胞样树突细胞功能及成熟的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对原发免疫性血小板减少症(ITP)患者浆细胞样树突细胞(pDC)功能及成熟的影响.方法 取22例初治ITP患者(初治组)、22例精皮质激素治疗后完全缓解(CR)ITP患者(CR组)及22名健康志愿者(正常对照组)外周静脉血,分离单个核细胞,用流式细胞术分选pDC,分别加入0、5、10、30μg/L的雷公藤内酯醇共孵育.24 h后收集上清液,用ELISA法检测IFN-α、IL-6、TNF-α水平;5d后收集细胞,用流式细胞术检测髓样树突细胞(mDC)CD11c、CD80、CD86表达,光镜下观察mDC的形态,电镜观察mDC的超微结构.结果 加入10μg/L雷公藤内酯醇后初治组IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别为(451.32±85.77)、(105.68±23.85)、(135.78±30.62)ng/L,CR组分别为(391.71±72.49)、(84.73±17.77)、(108.16±23.21)ng/L,正常对照组分别为(335.51±67.54)、(73.62±21.82)、(95.58±32.85)ng/L,初治组及CR组高于正常对照组(P<0.05),初治组高于CR组(P<0.05),并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P<0.05);初治组及CR组mDC表型CD11c、CD80、CD86阳性率高于正常对照组(P<0.05),初治组高于CR组(P<0.05),加入雷公藤内酯醇后mDC表型阳性率呈浓度依赖性降低(P<0.05).加入雷公藤内酯醇后mDC较对照组突起变少、变短,形态上不成熟.结论 雷公藤内酯醇能够减弱ITP患者pDC的功能,并抑制其向mDC的分化和成熟.     

免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞亚群、数量及其临床意义

本研究旨在检测免疫相关性全血细胞减少症(IRP)患者树突状细胞(DC)亚群和数量,并探讨DC在IRP发病中的作用。应用流式细胞术检测65例IRP(37例初治、28例恢复)患者及17名健康对照者外周血浆细胞样DC(plasmacytoid dendritic cells,pDC)(Lin-HLA-DR+CD123+细胞)、髓系DC(myeloid dendritic cell,mDC)(Lin-HLA-DR+CD11c+细胞)数量、亚群。结果显示,IRP初治组外周血pDC占外周血单个核细胞(PBMNC)的比例为(0.91±0.64)%,明显高于恢复组(0.39±0.11)%和正常对照组(0.29±0.13)%(均P<0.01),恢复组明显高于正常对照组(P<0.05)。初治组、恢复组mDC占PBMNC的比例分别为(0.21±0.20)%、(0.34±0.21)%,与正常对照组(0.29±0.09)%比较均无统计学意义(P>0.05)。初治组pDC/mDC比值为6.75±7.11,明显高于恢复组(1.55±0.93)和正常对照组(1.07±0.43,均P<0.01),恢复组与对照组比较没有明显差别(P>0.05)。IRP组外周血pDC占PBMNC的比例与Th1/Th2呈负相关(r=-0.347,P<0.05),与骨髓单个核细胞膜表面抗体阳性率呈正相关(r=0.606,P<0.05),与CD5+B细胞数量呈正相关(r=0.709,P<0.05),与血红蛋白(r=-0.381,P<0.01)和血小板水平(r=-0.343,P<0.01)均呈负相关;mDC占PBMNC的比例与Th1/Th2呈正相关(r=0.595,P<0.05),与血红蛋白水平呈正相关(r=0.292,P<0.05);pDC/mDC与Th1/Th2水平呈负相关(r=-0.395,P<0.05),与骨髓单个核细胞膜表面抗体阳性率呈正相关(r=0.421,P<0.05),与CD5+B细胞数量呈正相关(r=0.423,P<0.05),与血红蛋白(r=-0.304,P<0.05)和血小板水平(r=-0.287,P<0.05)均呈负相关。结论:IRP患者外周血pDC数量增多,可能与IRP发病有关。     

免疫性血小板减少症患者树突状细胞的分布特点及其活化状态的研究

免疫性血小板减少症（ITP）患者树突状细胞（DC）存在异常。本研究旨在分析ITP患者DC的分布特点及其活化状态,以进一步明确ITP患者DC异常的机制。将ITP患者分为初诊纽、难治组、有效组（完全反应＋有效）,流式细胞术检测各组患者外周血、骨髓和／或脾脏中髓系树突状细胞（mDC）,浆细胞样树突状细胞（pDC）的分布比例,各部位mDC、pDC细胞分化程度、成熟mDC和pDC抗原CD80、CD86的表达。结果表明,各组患者各部位mDC比例均较pDC高,难治组各部位mDC、pDC比例较初诊组、有效组高,且难治组中脾脏mDC比例明显高于其他部位;各组pDC比例各部位差别不明显;各组患者各部位mDC、pDC的CD86的表达较CD80高,各组mDC、pDC的CD80的表达比例均较低,各部位差别不明显;难治组各部位mDC、pDC的CD86表达较初诊组、有效组高,且难治组中脾脏mDC的CD86表达明显高于其他部位。结论：ITP患者mDC、pDC的分布存在异常,脾脏mDC分布比例较高,分化较成熟,脾脏mDC可能与ITP发病较为密切。     

ST段抬高型急性心肌梗死患者外周血中树突状细胞及其亚型的变化

目的:探讨ST段抬高型急型心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者外周血中树突状细胞(dendritic cells,DCs)及其亚型的变化。方法:选择17例ST段抬高型AMI患者(AMI组)和14例稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP)患者(SAP组)为研究对象,并以15例性别、年龄相匹配的冠状动脉造影阴性者为对照组。采用流式细胞技术三色分析法测定3组人群外周血中DCs及其亚型占外周血单个核细胞的百分比和绝对数,其中DCs以Lin1-HLA-DR+确定,髓样树突细胞(myeloid dendritic cell,mDC)以Lin1-HLA-DR+CD11c+确定,浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)以Lin1-HLA-DR+CD123+确定;并采用酶联免疫吸附试验法检测3组人群外周血中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。其中ST段抬高型AMI患者在AMI发作7 d后进行随访。结果:AMI组患者急性期(<24 h)DCs占外周血单个核细胞的百分比、DCs的绝对数、mDC和pDC占外周血单个核细胞的百分比、mDC和pDC的绝对数、mDC与pDC比值均低于SAP组和对照组(P<0.01、0.05)。发作7 d后复查,AMI组DCs占外周血单个核细胞的百分比、DCs的绝对数、mDC和pDC占外周血单个核细胞的百分比、mDC和pDC的绝对数、mDC与pDC比值均高于急性期(P<0.01、0.05)。SAP组与对照组外周血中DCs占外周血单个核细胞的百分比、DCs的绝对数、mDC和pDC占外周血单个核细胞的百分比、mDC和pDC的绝对数、mDC与pDC比值差异均无统计学意义(P>0.05)。AMI患者急性期血清TNF-α及IL-6水平高于对照组和SAP组(P<0.05),发作7 d后IL-6水平明显降低(P<0.05)。结论:AMI时外周血中的DCs包括mDC及pDC在急性期均明显降低,发作7 d后恢复至正常水平,提示外周血中DCs在AMI急性期可能参与了不稳定斑块的形成。     

泛素在多器官功能障碍综合征小鼠脾脏中表达变化及其对树突细胞免疫调节作用的影响

目的 探讨多器官功能障碍综合征(MODS)脾脏中泛素(Ub)的表达变化及意义,研究泛素化主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)对树突细胞(DC)活性及免疫调节作用的影响.方法 210只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组(30只)和MODS组(180只),通过腹腔注射酵母多糖悬液复制MODS模型,MODS组再随机均分为6、12、24、48 h和5～7d、10 ～ 12 d组.采用免疫组化和免疫荧光法分别检测脾脏中Ub蛋白及CD11c+DC细胞和MHCⅡ类分子Ⅰ-Ab的表达;荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脾脏内Ub mRNA表达.结果 ①免疫组化显示:与正常对照组比较,MODS组伤后6h脾脏Ub阳性细胞逐渐增多,24 h达高峰[(16.83±0.38)％比(8.60±0.86)％,P＜0.05],后逐渐下降,至10～12 d Ub阳性细胞已显著低于正常对照组[(4.66±0.34)％比(8.60±0.86)％,P＜ 0.05].②荧光定量RT-PCR显示:与正常对照组比较,MODS组伤后6 h Ub mRNA表达增强,至24 h达高峰(2.17±0.20比1.00±0.00,P＜0.01),随后逐渐下降,至10～ 12d表达已显著低于正常对照组(0.72±0.08比1.00±0.00,P＜0.05).③免疫荧光标记显示:与正常对照组比较,MODS组伤后6 h CD1 1c+DC细胞明显增加,至24 h达高峰[(7.55±0.04)％比(2.08±0.13)％,P＜ 0.05],随后明显减少,至10～12 d已接近正常对照组[(2.28±0.06)％比(2.08±0.13)％,P＞0.05].MODS组伤后6 h Ⅰ-Ab阳性细胞明显增加[(10.90±1.40)％比(5.78±0.47)％,P＜0.01],24 h表达明显下降[(3.32±0.91)％比(5.78±0.47)％,P＜0.05],48 h、5～7d恢复至正常对照组水平后,10～12 d再次显著降低[(2.20±0.97)％比(5.78±0.47)％,p＜0.05].Ub阳性细胞数与Ⅰ-Ab、CD11c均呈显著正相关(n=0.899,r2=0.987,均P＜0.05).结论 Ub可能通过泛素化DC表面的MHCⅡ类分子影响DC成熟和活化,从而影响MODS各时期的免疫应答,为调控免疫应答提供新的认识途径与监测指标.     

利妥昔单抗对原发免疫性血小板减少症患者树突细胞功能的影响

目的 探讨利妥昔单抗对原发免疫性血小板减少症(ITP)患者树突细胞(DC)功能的影响,探讨其治疗机制.方法 取小剂量利妥昔单抗治疗有效的ITP患者治疗前后的外周血单个核细胞(PBMC)与重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)于37℃、5％CO2条件下共孵育诱导培养DC;第5天加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)继续培养48 h,获得成熟DC.倒置显微镜下观察DC形态;流式细胞术检测DC表型;ELISA法检测DC培养上清人白细胞介素12(IL-12p70)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度;噻唑蓝(MTT)法检测DC刺激自体T淋巴细胞的增殖能力.结果 ①治疗后DC较治疗前DC细胞膜缺乏典型的树枝状突起、体积较小、核多居中规则;②治疗后DC HLA-DR、CD80、CD83和CD86表达水平[(56.37±3.95)％、(36.41±2.82)％、( 30.45±4.61)％和(41.98±4.17)％]明显低于治疗前[(73.71±7.61)％、(55.14±7.30)％、(80.91±7.09)％和(59.03±3.43)％](P值均＜0.05),IL-12p70水平[(50.17±14.52)％]低于治疗前[(66.87±4.29)％],TGF-β1水平[(9.70±0.31)％]高于治疗前[(2.70±0.36)％](P值均＜0.05);③治疗后DC诱导的T细胞增殖指数较治疗前明显减低.结论小剂量利妥昔单抗治疗后ITP患者DC表型及分泌IL-12p70的能力明显降低、分泌TGF-β1能力增高、对自体T细胞增殖的刺激能力减低.小剂量利妥昔单抗下调DC的免疫活性可能是其治疗ITP的机制之一.     

重型再生障碍性贫血患者外周血调节性T细胞的数量异常及其临床意义

本研究旨在探讨调节性T细胞（Treg）在重型再生障碍性贫血（SAA）患者免疫失衡中的意义.采用流式细胞术检测44例SAA患者（初治25例、缓解19例）及23名健康对照者外周血CD4＋ CD25＋ CD127dimTreg数量,分析其与T细胞亚群（CD4＋/CD8＋比值）、树突细胞（DC）亚群（mDC/pDC比值）和白细胞（WBC）、网织红细胞百分比（Ret％）表达的相关性.结果表明,初治组CD4＋ CD25＋ CD127dim占外周血淋巴细胞（PBL）比例为（0.83±0.44）％,明显低于SAA患者恢复组（2.91±1.24）％（P＜0.05）及对照组（2.18±0.55）％（P＜0.05）,而恢复组与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.初治组CD4＋/CD8＋比值为（0.5±0.3）明显低于恢复组（1.2±0.4）（P＜0.05）及对照组（1.11±0.24） （P ＜0.05）.初治组mDC/pDC比值为（3.08±0.72）明显高于恢复组（1.61±0.49） （P ＜0.05）及对照组（1.39±0.36）（P＜0.05）.SAA患者CD4＋ CD25＋ CD127dim/PBL与CD4＋/CD8＋比值呈正相关（r=0.695,P＜0.01）,而与mDC/pDC比值呈负相关（r=-0.796,P＜0.01）;SAA患者CD4＋ CD25＋CD127dim/PBL与外周血WBC计数及RET％呈正相关（r=0.761,P＜0.01;r=0.749,P＜0.01）.结论：SAA患者外周血CD4＋ CD25＋ CD127dimTreg占淋巴细胞百分比降低,是引起免疫耐受被破坏、T细胞功能亢进,进而导致造血功能衰竭的机制之一.     

姜黄素上调线粒体融合蛋白2抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的实验研究

目的 研究姜黄素抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的作用与机制.方法 取45只清洁级BALB/c雄性小鼠,随机(随机数字法)分为3组,即假手术组(n=15),脓毒症组(n=15),姜黄素组(n=15),实验重复3次.脓毒症组行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),术前予等体积生理盐水灌胃1周;姜黄素组行CLP术,术前给予姜黄素200 mg/ (kg-d)灌胃1周;假手术组仅行开腹,不予以结扎、穿孔,术前等体积生理盐水灌胃1周.观察各组小鼠术后24h病死率,并处死存活小鼠,分离脾脏淋巴细胞.采用流式细胞术、TUNEL法检测淋巴细胞凋亡情况;流式细胞术检测线粒体膜电位水平;Western Blot检测线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)、Bax、Bcl-2蛋白表达.数据采用SPSS 18.0软件进行分析,计数资料采用x2检验,计量资料组间比较采用单因素方差分析.结果 小鼠病死率采用x2检验,脓毒症组小鼠术后24h病死率为46.7％,较假手术组0.00％明显升高(x2 =27.391,P＜0.01),姜黄素组病死率较脓毒症组有所降低(40.0％ vs.46.7％,x2=6.429,P=0.01).脾淋巴细胞凋亡率比较采用单因素方差分析,3组比较,P＜0.01,差异具有统计学意义.进一步两两比较,脓毒症组脾淋巴细胞凋亡率为(17.1±1.67)％,较假手术组(9.43±1.06)％明显增高(P ＜0.001);姜黄素组淋巴细胞凋亡率(12.70±1.25)％较脓毒症组比较明显下降(P=0.012).脾淋巴细胞线粒体膜电位比较采用单因素方差分析,3组比较P＜0.01,差异具有统计学意义.进一步两两比较,脓毒症组线粒体膜电位降低率为(45.13±4.14)％,较假手术组(21.63±1.62)％明显升高(P＜0.01),姜黄素组线粒体膜电位降低率为(29.67±2.15)％,较脓毒症组明显降低(P=0.001).蛋白表达情况采用单因素方差分析,3组线粒体Bax蛋白(P＜0.01)、胞浆Bax蛋白(P＜0.01),差异具有统计学意义.进一步两两比较,与假手术组比较,脓毒症组线粒体Bax蛋白表达水平明显上调(P=0.001),而胞浆Bax蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).经姜黄素预处理后线粒体Bax蛋白水平较脓毒症组明显降低(P=0.02),胞浆Bax蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).3组细胞总Mfn2蛋白(P ＜0.001)、Bcl-2蛋白(P=0.001),差异具有统计学意义.进一步两两比较,与假手术组比较,脓毒症组Mfn2蛋白(P=0.015)、Bcl-2蛋白(P=0.01)表达水平明显降低,经姜黄素预处理后Mfn2蛋白(P=0.002)、Bcl-2蛋白(P =0.001)水平明显上调.结论 姜黄素能够上调Mfn2表达,促进线粒体融合进而抑制脓毒症小鼠脾淋巴细胞的凋亡.     

二氧化硫对脓毒症大鼠致肺损伤炎性介质的调节

目的 探索内源性二氧化硫(sulfur dioxide,SO2)对脓毒症大鼠所致急性肺损伤过程炎性介质的调节作用.方法 雄性Sprague Dawley大鼠24只随机(随机数字法)被分入假手术对照组(control组),假手术+SO2组(SO2组),脓毒症组(sepsis组),脓毒症+SO2组(sepsis+ SO2组),每组6只.通过肺组织损伤半定量评分(Index of quantitative assessment,IQA)及肺组织湿干质量比(wet/dry weight ratio,W/D)对肺损伤进行评价.检测血浆SO2、白细胞介素6、8及10(interleukins-6,IL 6、interleukins-8,IL 8、interleukins-10,IL 10)及单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量.结果 脓毒症大鼠IQA及W/D与对照组相比显著升高(P均＜0.01),给予SO2干预后显著降低(P均＜0.01).血浆SO2含量在脓毒症组(3.17 ±3.44)μmol/L与对照组(5.87 ±1.96)μmol/L下降,给予SO2干预后显著升高(9.78±3.26) μmol/L,P＜0.01;血浆IL 6、IL 8、IL 10及MCP-1、TNF-α含量在脓毒症组分别为(87.08 ±22.03)、(79.82±19.69)、(66.38 ±21.77)、(157.58 ±42.36)及(65.04±19.42) pg/mg,对照组分别为(47.41 ±9.64)、(42.25±8.16)、(31.96±4.63)、(67.65±10.18)及(33.83 ±5.75)相比显著升高(P均＜0.01);给予SO2干预后分别为(66.01±16.52)、(61.52±18.32)、(45.61 ±16.47)、(117.86 ±34.20)及(61.49±15.33) pg/mg降低(IL 6及IL 8,P均＜0.05,IL 10及MCP-1,P均＜0.01).结论 在脓毒症所致肺损伤的发病过程中,内源性SO2可以通过抑制MCP-1、TNF-α进而减轻炎症因子的表达起到保护作用.     

胰岛素强化治疗拮抗烫伤大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨大鼠重度烫伤后胰岛素强化治疗拮抗心肌细胞凋亡的作用及机制.方法 将18只SD大鼠按随机数字表法分为假伤组、烫伤组和胰岛素强化治疗组(强化治疗组),每组6只.制作30％总体表面积(TBSA)Ⅱ度烫伤模型及胰岛素强化治疗模型.伤后6h取大鼠左室心肌组织,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,用免疫组化和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分别观察3种凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果 与假伤组比较,烫伤后心肌凋亡细胞明显增多[(13.1±3.4)％比(0.6±0.4)％,P＜0.01];caspase-3、Bax的蛋白表达明显增高(免疫组化caspase-3:13.72±4.13比1.36±0.95,Bax:29.64±5.42比2.24±1.04; Western blotting caspase-3:5.72±2.13比1,Bax:4.64±1.42比1),而Bcl-2表达水平显著降低(免疫组化:3.39±1.52比8.01±2.56;Western blotting:0.69±0.42比1,均P＜0.01).经胰岛素强化治疗后,心肌细胞的凋亡率较烫伤组明显降低[(6.7±1.8)％比(13.1±3.4)％,P＜0.01],3种凋亡相关基因的蛋白表达水平正好与烫伤组的变化相反(免疫组化caspase-3:8.88±3.36比13.72±4.13,Bax:14.43±3.69比29.64±5.42,Bcl-2:8.61±3.72比3.39±1.52;Western blotting caspase-3:2.18±0.86比5.72±2.13,Bax:2.87±1.35比4.64±1.42,Bcl-2:3.57±1.70比0.69±0.42,P＜0.05或P＜0.01).结论胰岛素强化治疗可能通过调节caspase-3、Bax和Bcl-2 3种细胞凋亡相关基因的表达,对烫伤后心肌细胞发挥抗凋亡作用.     

天年饮干预亚急性衰老大鼠模型的性腺功能

背景随着机体衰老性腺功能逐渐降低,中国传统医学认为精气虚弱是导致机体衰老的主要原因. 目的观察中药天年饮对亚急性衰老大鼠血清睾酮含量、睾丸组织超氧化物歧化酶的活性及睾丸生精细胞凋亡的影响. 设计随机对照实验. 单位承德医学院人体解剖学教研室. 材料实验于2003-04/07在承德医学院基础医学研究所进行.选择成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.模型组、用药组、对照组采用D-半乳糖连续腹腔注射200mg/(kg·d)制备亚急性衰老动物模型,1次/d,共40 d,模型组大鼠于造模成功后不再作任何处理.用药组大鼠于造模成功后每天用天年饮灌胃(天年饮由灸何首乌、怀牛膝、肉从蓉、茯苓、丹参、淫羊藿6味中药组成,经熬制后含生药1.5 g/mL),1次/d,共30 d;对照组大鼠在造模成功后每天灌胃同等剂量的生理盐水,时间同用药组大鼠.方法各组大鼠血清中睾酮的含量采用酶联免疫吸附方法检测,睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性采用黄嘌呤氧化酶法检测,睾丸生精细胞的凋亡情况采用免疫组化法观察. 主要观察指标①各组大鼠血清中睾酮的含量.②睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性.③睾丸生精细胞的凋亡情况. 结果40只大鼠均进入结果分析.①血清中睾酮的含量模型组大鼠血清睾酮含量低于正常组[(0.52±0.15)μg/L,(1.26±0.32)μg/L,(t=3.004,P＜0.05)],用药组高于模型组[(1.16±0.32)μg/L,(0.52±0.15)μg/L,(t=2.321,P＜0.05)].②睾丸组织超氧化物歧化酶的活性模型组明显低于正常组[(107.22±9.33)kNU/g,(147.73±11.9)kNU/g,(t=13.339,P＜0.01)],用药组明显高于模型组[(141.05±14.57)kNU/g,(107.22±9.33)kNU/g,(t=9.970,P＜0.01)].③生精细胞的凋亡情况模型组凋亡生精小管百分率、凋亡阳性细胞率均明显高于正常组[(53.95±2.02)%比(34.21±2.10)%,(8.67±0.80)%比(3.86±0.52)%,(x2=7.9,＜0.01,x25.01.P＜0.05)];用药组明显低于模型组[(35.33±2.18)%比(53.95±2.02)%,(4.68±0.74)%比(8.67±0.80)%,(x2=7.02,P＜0.01,x2=3.96,P＜0.05)]. 结论衰老模型睾丸生精细胞凋亡增多,经天年饮灌胃后可以使凋亡细胞阳性率明显下降,说明天年饮可以清除体内过多的氧自由基,减少凋亡发生,改善动物模型的生精功能.     

脓毒症患者辅助性T细胞17和CD4+CD25+调节性T细胞表达及血必净注射液的干预作用

目的 观察脓毒症患者外周血辅助性T细胞17(Th17)及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平,并探讨其意义及血必净注射液的干预作用.方法 ①将64例重症监护病房(ICU)脓毒症患者按疾病严重程度分为脓毒症组(26例)、严重脓毒症组(21例)、脓毒性休克组(17例),同时选取18例健康体检者作为对照组.观察不同严重程度脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg的表达及其与病情严重程度的关系.②按随机原则将64例患者分为常规治疗组(25例,给予常规集束化治疗)和血必净治疗组(39例,在常规治疗基础上加用血必净注射液50 ml静脉滴注,每日2次),两组均以7 d为1个疗程.入ICU当日和治疗7 d用流式细胞术检测外周血Th17及CD4+CD25+Treg表达,观察血必净注射液的干预作用.结果 ①健康对照组Th17表达率为(0.84±0.29)%,CD4+CD25+Treg表达率为(0.43±0.20)%;脓毒症患者细胞表达均较健康对照组明显升高(均P<0.05),其中Th17表达以严重脓毒症组最高[(3.18±0.84)%],CD4+CD25+Treg 表达以脓毒性休克组最高[(3.28±0.76)%].脓毒症患者CD4+CD25+Treg与急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅰ(APACHE Ⅰ)评分和血乳酸均呈正相关(r1=0.519,r2=0.451,均P=0.01).②与常规治疗组比较,血必净注射液能更有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达[Th17:(1.72±0.69)%比(2.35±0.81)%,CD4+CD25+Treg:(1.78±1.00)%比(2.30±0.85)%,均P<0.05],纠正免疫平衡紊乱,缩短住ICU时间[(4.7±2.6)d比(7.5±4.3)d,P=0.0023,使脓毒症患者28 d病死率有降低趋势(20.5%比28.0%,P>0.05).结论 脓毒症患者外周血Th17和CD4+CD25+Treg表达增加,且与病情严重程度呈正相关,提示Th17和CD4+CD25+Treg在脓毒症发生发展的免疫机制中可能起着重要作用.血必净注射液能有效降低脓毒症患者Th17和CD4+CD25+Treg的异常表达,有降低脓毒症患者病死率的趋势.

Abstract：

Objective To study the level and significance of T helper 17(Th17)and CD4+CD25+regulatory T cells(Treg)in peripheral blood of patients with sepsis and to evaluate the effects of Xuebijing of Anhui Provincial Hospital were divided into three groups:sepsis group(n=26),severe sepsis group (n=21),and septic shock group(n=17).Eighteen healthy individuals served as controls.The comparison in the expression of Th17 and CD4+CD25+Treg within groups and the correlation between their levels and group(n=25,received routine bundle treatment)and Xuebijing treatment group(n=39,received bundle treatment+Xuebijing treatment).Patients in Xuebijing treated group were given 50 ml Xuebijing injection two times per day in addition to routine bundle treatment.Seven days constituted one course of treatment.The expressions of Th17 and CD4+CD25+Treg of 64 patients on the 1 day and 7 days after treatment were detected by flow cytometry.The effects of Xuebijing injection on the patients were evaluated.Results in control group,and they were lower than that of patients with sepsis(P<0.05).The expression rate of Th17 was higher in severe sepsis group [(3.18±0.84)%]than that of other two groups(P<0.05).Moreover,The expression rate of CD4+CD25+Treg was highest [(3.28±0.76)%]in septic shock group (P<0.05),and it was positive correlated with acute physiology and chronic health evaluation Ⅰ(APACHE routine group,our study indicated that Xuebijing injection could reduce the abnormal expression of Th17[(1.72±0.69)%vs.(2.35±0.81)%,P<0.05] and CD4+CD25+Treg[(1.78±1.00)% vs.(2.30±0.85)%,P<0.05] and decrease length of stay in ICU[(4.7±2.6)days vs.(7.5±4.3)days,P=0.002].It also lowered 28-day mortality of patients with sepsis,but the difference between two groups was not significant(20.5%vs.28.0%,P>0.05).Conclusion The expression of Th17 and CD4+CD25+Treg was increased in sepsis patients and was positively correlated with severity of sepsis,suggesting that they may play an important role in pathogenesis of sepsis.Xuebijing injection could decrease the abnormal expression of Th17 and CD4+CD25+Treg and tend to decrease the fatality rate of sepsis.     

急性冠脉综合征患者不同部位血Th17细胞和IL-17对比分析

目的 比较急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者周围血和冠状动脉罪犯血管病变处血辅助性T细胞17 (helper T cells,Th17)占CD4+T细胞的比例以及IL-17水平,分析其临床意义.方法 序贯入选2012年2月15 日至2012年10月15日杭州师范大学附属医院接受冠状动脉造影(CAG)的冠心病(coronary heart disease,CHD)及疑诊冠心病患者76例.分为ACS组、稳定性心绞痛(stable angina,SA)组和对照组.所有患者均在做完冠状动脉造影后即刻采集肘静脉血5 mL.ACS患者同时采集罪犯血管病变处血5 mL.采用流式细胞术检测不同部位血 Th17的百分率.用ELISA法检测不同部位血血清白细胞介素(interleukin,IL)-17的质量浓度.结果 ACS患者周围血Th17细胞占CD4+T细胞的比例和冠状动脉罪犯血管病变处血 Th17细胞占CD4+T细胞的比例分别是(3.18±0.29)％和(3.17±0.30)％,差异无统计学意义(P =0.919).ACS组、SA组和对照组外周血 Th17细胞占CD4+T细胞的比例分别是(3.18±0.29)％、(1.32±0.31)％和(1.28±0.33)％,ACS组与另外两组相比差异均有统计学意义(P＜0.01),但SA组和对照组比较,差异无统计学意义.ACS外周血和冠状动脉罪犯血管病变处血血清IL-17质量浓度分别是(81.23±18.63) pg/mL和(82.37 ±20.51) pg/mL,差异无统计学意义(P =0.573).ACS组外周血IL-17水平分别与SA组和对照组相比,差异均有统计学意义.但SA组和对照组比较差异无统计学意义.结论 ACS患者周围血 Th17细胞百分比以及IL-17水平与冠状动脉罪犯血管病变处相似,原因可能是多方面的.ACS患者外周血 Th17细胞比例增加、IL-17水平升高,这可能参与动脉粥样硬化斑块不稳定的形成,这个过程导致ACS发病.     

56例中年女性尿失禁患者的尿流动力学分析

目的 研究中年女性(35～55岁)尿失禁患者的尿流动力学变化,提高相应诊治水平.方法 对56例尿失禁的中年女性患者进行尿流动力学研究,并与正常对照组(17例)比较.结果 56例患者中压力性(SUI)尿失禁患者为33例(58.93％)(SUI组)、急迫性(UUI)尿失禁患者为9例(16.07％)(UUI组)、混合性(SUI/UUI)尿失禁患者为14例(25.00％)(SUI/UUI组).SUI组患者最大尿流率(Qmax)(27.72±5.21)ml/s高于正常对照组(20.45±7.15)ml/s,差异有统计学意义(P＜0.05);UUI组的膀胱初感容量(FS)、正常排尿感觉(ND)、强烈排尿感觉(SD)、急迫排尿感觉(UD)与正常对照组[(135.65±42.73)ml与(132.70±40.65)ml、(166.24±51.42)ml与(160.70±50.44)ml、(315.75±42.34)ml与(320.75±42.34)ml、(320.24±45.03)ml与(335.75±51.98)ml]比较差异均有统计学意义(P均＜0.05);SUI组及SUI/UUI组患者测得Valsalva漏尿点压力(ALPP)[(62.29±25.40)cm H2O与(88.30±28.54)cm H2O]比较差异有统计学意义(t=13.041,P＜0.05);SUI组患者的最大尿流率时逼尿肌压(Pdet-Qmax)、最大尿道压(MUP)及最大尿道闭合压(MUCP)明显低于正常对照组[(24.29±6.24)cm H2O与(34.45±8.20)cm H2O、(68.20±18.27)cm H2O与(87.14±17.26)cm H2O、(74.24±35.75)cm H2O与(90.66±30.10)cm H2O]差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 中年女性尿失禁患者具有较大患者群体,其分类较为复杂,尿流动力学检查对于明确其诊断及选择正确治疗方法,提高疗效具有重要指导意义.     

C反应蛋白与白蛋白比值在急性A型主动脉夹层手术患者预后预测中的价值

目的 探讨急性A型主动脉夹层患者术前C反应蛋白(CRP)与白蛋白(ALB)比值(CRP/ALB)在手术后预后预测中的价值,进一步分析其住院期间的死亡危险因素.方法 回顾性分析广东省人民医院2015年2月至2015年11月连续收治的104例Stanford A型主动脉夹层手术患者的病例资料.本观察排除标准:术前未检测CRP、白蛋白,术前感染,肝硬化、低蛋白血症.共83例患者符合入选条件.根据住院期间是否死亡,分为存活组和死亡组;对CRP/ALB、术前及手术相关因素进行住院期间死亡的单因素和多因素Logistic回归分析.结果 存活组与死亡组患者术前血清CRP、ALB浓度比较差异无统计学意义(均P＞0.05),死亡组CRP/ALB [(5.63±4.47)vs.(3.16±2.58),P=0.010]、APACHEⅡ评分[(26.45±4.08) minvs.(20.10±3.74) min,P＜0.01]和体外循环时间[(302.64±89.26) min vs.(234.23±53.80)分,P=0.031]显著高于存活组,起病24h内急诊手术者死亡率(63.64％ vs.5.56％,P＜0.01)明显高于延期手术患者.多因素Logistic回归分析显示:术前CRP/ALB增大[比值比(OR) =1.322,95％可信区间(CI)1.035 ～1.689,P=0.025]、24 h内急诊手术(OR=31.595,95％ CI5.655-176.52,P＜0.01)是手术患者住院期间死亡的独立危险因素.结论 急性A型主动脉夹层术前CRP与白蛋白比值增大、24 h内急诊手术与住院死亡相关,是手术患者住院期间死亡的独立危险因素.