从黑线姬鼠肝组织分离流行性出血热病毒J28B株的初步鉴定

继Lee HW 等(1978)采用非疫区黑线姬鼠传代及用间接免疫荧光技术(IFAT)作指标,分离到朝鲜出血热(KHF)病毒后,French 等(1981)又成功地将其适应到人肺癌传代细胞A549细胞系。近年来,我国学者应用上述方法已从EHF 疫区的黑线姬鼠及褐家鼠肺脏和病人血中分离到EHF 相关病毒或有关因子。但迄今,从本病宿主动物肝脏、特别是用细胞培养直接从肝脏分离EHF 病毒,尚未见报导。最近,我们用     

流行性出血热病原体在A-549细胞中的繁殖及其特性检查

从黑线姬鼠肺分离并传至第8代的EHF相关抗原A9和A10,能在A-549细胞中繁殖、传代。用A-549细胞抗原检查160份血清,76份EHF恢复期血清中72份免疫荧光反应阳性,57份正常人和非EHF病人血清56份阴性,27例EHF病人双份血清抗体滴度均有4倍以上升高;KHF病毒抗血清显若阻断EHF相关抗原同EHF病人血清的阳性反应,呼肠孤病毒多价抗血清和类似环状病毒抗血清均无此阻断作用;编码血清双盲法检查获得可重复的预期结果。结果表明,EHF的A-549细胞抗原和鼠肺抗原血清学特性一致,同为EHF病毒,并与KHF病毒相近或相同。汉坦病毒在形态学上与我们分离的类似环状病毒相似,但后者与EHF病人血清无明显关系。     

用大白鼠乳鼠原代肺细胞直接从病人血清中分离流行性出血热病毒

我国用A-549和VeroE6细胞从啮齿类动物和病人血清中分离流行性出血热(EHF)病毒,相继获得成功。但上述分离到的毒株均已通过传代细胞不同代次的传代,不宜作为EHF疫苗的筛选毒株。1983年EHF流行季节,我们在流行区采集了急性期(发病2～5天以內)病人血清用大白鼠乳鼠原代肺细胞(RL)同样分离到EHF病毒。典型EHF病人急性期血液按常规方法     

流行性出血热病毒在细胞培养中的传代适应

作者以非疫区黑线姬鼠为实验动物,自疫区黑线姬鼠肺组织分离出三株流行性出血热(EHF)病毒,并使之在绿猴肾传代细胞(Vero,E6纯化系)及人肺癌细胞(A549) 中进行传代,均于第2～3代开始查见对EHF恢复期患者血清的免疫荧光反应,至第5代基本稳定适应。实验结果表明,E6细胞及 A549细胞对 EHF病毒的传代适应均比较敏感。E6适应株的病毒滴度均在10~5(TCID_(50)/ml)以上。用感染E6细胞及A549细胞病毒抗原检查EHF     

流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

流行性出血热病原学和宿主动物的研究

流行性出血热(EHF)是对我国人民健康和生产危害较大的急性传染病,涉及20余省市,全国约一半人口受其威胁,一些非疫区的省市近年也相继出现病例,有的大城市还发生过暴发流行。为加强这项研究,1980年中国医学科学院成立了出血热研究领导小组,加强了院内外大协作,经过两年的努力在病原学研究上取得了突破性的进展。 1.EHF病毒在A_(549)细胞中适应传代成功。用黑线姬鼠分离并传至第8代EHF病毒(A_(809,A_(8010)已在A_(549)细胞中适应传代成功,这是我国首次证实的EHF     

传染病的现状与展望(下)

三、流行性出血热(EHF) 主要流行于欧、亚洲。我国为流行区之一,且疫区有逐渐扩大的趋势,值得注意。病原学自1978年南朝鲜李镐汪从黑线姬鼠分离到EHF病毒以后,不少国家均分离成功。1981年以来,我国学者也从疫区黑线姬鼠肺组织分离到几株能稳定传代的EHF病毒,并在A_(549)人肺癌传代细胞和Vero、E_6非洲绿猴肾传代细胞中适应成功。以后又有人用A_(549)、Vero、E_6细胞从病人血清分离到EHF病毒。国内并有人用免疫电镜技术首次观察到病毒形态,并提出此病毒可能属布尼亚病毒科的一个新属。本病毒为RNA病毒,约100～200nm,不耐酸和乙醚,不耐热,甲醛、戊二醛及紫外线均可将其灭活。流行病学本病的宿主动物属于总鼠科的鼠科和仓鼠科中的一些种类。鼠科中主要是姬线属、家鼠     

人内皮细胞体外培养及感染流行性出血热病毒的初步观察

用酶消化法自人脐带静脉分离内皮细胞,进行体外传代培养。观察EHI病毒在该细胞中的增殖和复制。结果表明,从第一代培养第7日起,在感染内皮细胞胞浆内可检出EHF病毒抗原;阳性细胞数及胞浆内病毒抗原含量随培养时间的延长和传代次数的增加而增多,而感染细胞未见明显病变。提示EHF病毒可侵入人血管内皮细胞增殖复制,参与EHF的发病过程。     

流行性出血热病原学研究——Ⅰ、用非疫区黑线姬鼠分离病毒及其特异性检查

在用非疫区黑线姬鼠分离EHF病毒的传代中,发现感染鼠鼠肺中存在一种可传代的EHF相关因子。用间接免疫荧光法对其特异性作了检查:101份EHF患者血清96％阳性,175份正常人及其他疾病患者血清全部阴性;20例EHF患者双份血清,18例的恢复期有4倍以上抗体滴度升高;12例EHF患者血清对KHF抗原及EHF相关因子的阴、阳性反应基本一致;抗呼肠孤病毒血清和抗类呼肠孤病毒血清等全部阴性;血清编码双盲法检查和预期结果一致;抗KHF血清对EHF患者血清的免疫荧光反应有显著阻断作用,抗呼肠孤病毒Ⅰ～Ⅲ型多价血清无此作用。上述结果可初步确定,此相关因子是流行性出血热病毒。     

流行性出血热的传播途径

流行性出血热(EHF)是由一属新的布尼雅病毒引起的急性、自然疫源性疾病。国外称为肾综合征出血热(HFRS)半个世纪以来,本病在欧洲、亚洲等17个国家流行。EHF在我国流行分布很广,除台湾外,其余省区有本病存在和流行。发病逐年增多,病死率高,是我国重点防治疾病之一。广西1982年发现和证实有EHF流行。1978年朝鲜李镐汪应用非疫区黑线姬鼠首先分离出朝鲜出血热(KHF)病毒1981年我国用非疫区黑线姬鼠和人肺癌传代细胞(A-549)分离出EHF病毒.从此EHF研究才取得重大突破。研究出特异性诊     

流行性出血热白细胞病毒抗原与细胞免疫功能的关系

用淋巴细胞促凝血活性法(LPCA)动态观察流行性出血热(EHF)患者淋巴细胞对灭活EHF病毒及PHA的细胞免疫反应,同时用EHF25-1McAb-FITC检测患者白细胞病毒抗原,探讨细胞免疫功能与病毒侵犯免疫细胞间的关系。     

流行性出血热病毒在MA-104和Vero-E_6传代细胞上繁殖动态的比较

<正> 流行性出血热病毒(EHFV)在某些原代及传代细胞上能适应增殖,国内外已有过报道。但用对轮状病毒十分敏感的恒河猴胚肾MA-104细胞培养和增殖EHFV并与通常使用分离该病毒的Vero-E_θ细胞进行繁殖动态观察,尚未有过报道。本文用间接免疫荧光法(IFA)比较观察EHF病毒在两种细胞上的增殖动态,为MA-104细胞代替常规Vero—E_θ细胞用于该病毒的分离、传代等研究以及抗原片的制备提供依据。材料与方法一、EHFV:陈株,采用A549人肺癌细胞系     

应用疫区鼠肺抗原检测流行性出血热特异性抗体的初步报告

<正> 目前,诊断流行性出血热(EHF)的方法仍然仪凭临床资料。如能同时检测特异性抗体,无疑对EHE的确诊更为有利。国内外均报告可用感染出血热病毒的A_(549)细胞涂片检测特异性抗体。宋氏报告过用非疫区黑线姬鼠感染EHF病毒的传代鼠肺抗原检测特异性抗体的方法。但是将疫区野生鼠肺进行组织切片,用作血清学诊断尚未见报道。本文报道用此法检测30例经临床确诊的EHF病人血清结果,初步证明该方法有一定的实用价值。     

我省首次从长尾鼩鼱、褐家鼠、黄胸鼠以及流行性出血热(EHF)患者血清中分离出EHF病毒

1984年10月至85年4月,作者等在达县地区采集各种鼠肺标本共646份,用 Vero E—6细胞,从长尾鼩鼱肺中分离 EHF 病毒1株,褐家鼠肺中分离2株,黄胸鼠肺中分离1株;在南充地区采集 EHF 急性期患者血清中分离5株。已稳定传代4～5代,用 EHF 单克隆抗体(McAb25—1),A_9家兔免疫血清及患者恢复期血     

黄芪对流行性出血热病毒感染的抑制作用

观察了黄芪注射液对流行性出血热病毒(EHF.V)的抑制作用。动物及传代细胞实验结果显示:黄芪注射液对小白鼠乳鼠体内EHF.V的感染过程具有一定的阻断作用;其机制可能主要是通过宿主的免疫调节而发挥作用。     

从病人血清中分离的一株流行性出血热病毒的鉴定

<正> 从流行性出血热(EHF)患者急性期血清中,分离出一株能传代的相关病原因子.可通过除菌滤膜,在A—549细胞中不产生病变,以感染细胞作抗原,用朝鲜出血热(KHF)抗原检查为阳性的EHF患者血清,以间接免疫荧光法作效价滴定,两种抗原测定的结果基本一致.12例EHF患者双份血清测定的结果,11例     

四川省流行性出血热病毒的首次分离与鉴定

一九六○年,四川省南充地区经临床和病理学证实有流行性出血热(EHF)流行,二十余年来,疫区不断扩大,故对 EHF 病毒株的分离工作已刻不容缓。国内外学者先后用黑线姬鼠、大自鼠和细胞培养方法分离和适应传代病毒获得成功,为我省EHF 防治工作提供了经验。我们采用间接荧光抗体法(IFAT)检查了疫区黑线姬鼠     

应用EHF-A549细胞抗原片检测流行性出血热抗体的初步报告

以往检测流行性出血热(EHF)抗体采用的间接兔疫荧光试验是以KHF-A549细胞作为底物的。最近,我国已分离成功流行性出血热病毒,并可在A549细胞中传代。本文应用国产EHF-A549细胞涂片检查本地区EHF病人血清特异性抗体。检测结果与临床诊断符合率较高,急性期测IgM,阳性率为84.4％;恢复期测定IgG,阳性率为90.6％。由此认为国产抗原片更适宜于检测本国EHF患者的血清抗体。     

中国流行性出血热病毒宿主动物六种鼠肺抗原的特异性鉴定

从中国EHF疫区经初步筛选所获自然携带EHF病毒的6种鼠肺抗原,用IFAT、EHF 病人双份血清、免疫荧光阻断试验、单份EHF恢复期血清、非EHF病人及正常人血清鉴定其特异性,结果证明它们都是 EHF病毒抗原。     

流行性出血热病毒抗原组份的分析

用免疫转印技术对流行性出血热(EHF)病毒的抗原组份进行了初步分析。发现两种不同来源的兔抗EHF兔疫血清和20份4～21病日的EHF病人血清,均可与分子量在68,000和66,000道尔顿左右的两种病毒多肽成份发生反应,正常人和非EHF病人血清以及正常兔血清则否,表明这两种多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成份。