胃肠安联合替加氟对结肠癌HT29细胞体内外抑制作用的研究

目的研究胃肠安联合替加氟对结肠癌HT29细胞的体内外抑制作用。方法采用MTT法测定胃肠安联合替加氟对结肠癌HT29细胞的抑制作用,并采用流式细胞仪检测结肠癌HT29细胞中CD133+的表达情况。建立结肠癌HT29细胞裸鼠模型,对照组尾静脉注射生理盐水,0.2 mL/次,2次/周。替加氟组尾iv替加氟注射液,36 mg/kg,1次/周;胃肠安丸组,用纯净水将按胃肠安丸配成4 mg/kg,ig 0.2 mL/d;胃肠安+替加氟组尾iv替加氟注射液,36 mg/kg,1次/周;同时,用纯净水将按胃肠安丸配成4 mg/kg,ig 0.2 mL/d。观察胃肠安联合替加氟对荷瘤裸鼠生存状况和结肠癌HT-29细胞的影响。结果与对照组比较,替加氟组、胃肠安组、胃肠安+替加氟组抑制结肠癌HT-29细胞的增殖能力明升高,差异有统计学意义(P0.05);胃肠安+替加氟组明显高于单独使用替加氟组、胃肠安组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,替加氟组、胃肠安组、胃肠安+替加氟组的CD133+细胞比例明显降低,差异有统计学意义(P0.05);胃肠安+替加氟组明显低于单独使用替加氟组、胃肠安组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,胃肠安组、替加氟组、胃肠安+替加氟组的实体瘤质量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);胃肠安+替加氟组的实体瘤质量明显低于胃肠安组和替加氟组,差异有统计学意义(P0.05)。结论胃肠安联合替加氟对结肠癌HT29细胞及其干细胞的增殖有抑制作用。     

山药提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗作用研究

目的 研究山药Dioscorea opposita提取物联合树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠的治疗效果。方法 制备荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞Balb/c裸鼠模型,随机分为4组,每组8只：对照组裸鼠尾iv生理盐水,0.2 mL/次,2次/周;DC-CIK组裸鼠在肿瘤干细胞接种4 d后尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周;山药提取物组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,给药3周;山药提取物联合DC-CIK组裸鼠ig山药提取物125 mg/kg,0.2 mL/d,同时尾iv 1×10⁶个DC-CIK细胞,2次/周,给药3周。各组裸鼠在治疗3周期间每2天测量瘤体大小及裸鼠体质量,治疗结束后处死裸鼠,取出瘤体称质量;qRT-PCR法检测瘤组织中Akt信号通路中关键原癌基因c-Myc表达水平。结果 治疗结束后,各组裸鼠瘤体生长速率为山药提取物联合DC-CIK组结论 对荷MDA-MB-231乳腺癌干细胞瘤裸鼠治疗效果中,各给药组裸鼠肿瘤生长均受到明显抑制,其中以山药提取物联合DC-CIK组效果最佳。     

扶正解毒祛瘀方联合奥沙利铂对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制研究

目的:研究扶正解毒祛瘀方(简称"扶正方")联合奥沙利铂(L-OHP)对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法:将HT-29细胞分为空白对照组(不加药物)、扶正方组(1 000 mg/L)、L-OHP组(31.25 mg/L)和联合用药组(1 000 mg/L扶正方+31.25 mg/L L-OHP)。加入相应药物作用48 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法检测细胞中促凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2 m RNA的表达,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,L-OHP组和联合用药组细胞增殖均受到抑制、S期和G_2/M期细胞比例升高、G_0/G_1期细胞比例降低(P<0.05),L-OHP组、扶正方组和联合用药组细胞凋亡率升高、细胞中Bax m RNA及蛋白的表达上调、细胞中Bcl-2 m RNA的表达下调(P<0.05),且联合用组变化较两药单用组更明显(P<0.05)。结论:扶正方与L-OHP联合应用可抑制HT-29细胞的增殖、促进细胞凋亡,且作用优于两药单用;其机制可能与上调细胞中Bax基因与蛋白表达、下调细胞中Bcl-2基因表达有关。     

CpGODN结合CD28/CD80单抗活化T细胞对结肠癌细胞的杀伤作用

目的研究联合应用CpGODN和CD28/CD80单抗共刺激健康人外周血T淋巴细胞(PBLs)在体外对结肠癌细胞株HT-29的杀伤作用,为结直肠癌的过继免疫治疗可能性提供参考。方法PBLs的分离与体外培养;CD28/CD80共刺激活化PBLs;用含共刺激活化PBMC或/和CpGODN的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线。MTT法检测活化细胞的体外淋巴细胞毒作用,并用电镜观察效应细胞杀伤的结肠癌细胞超微结构及用流式细胞仪检测结肠癌细胞的相关凋亡情况。结果CpGODN本身对HT-29细胞有一定的杀伤作用(P<0.05),CD28/CD80共刺激活化PBLs在体外对结肠癌细胞株HT-29杀伤作用明显(P<0.01),CpGODN与CD28/CD80共刺激活化PBLs合用,对HT-29的杀伤作用显著大于CpGODN单独对HT-29细胞杀伤作用(抑制率92.31%vs68.00%,P<0.01),亦大于单独应用CD28/CD80共刺激活化PBMC对HT-29细胞的杀伤作用(P<0.05),CpGODN增加了HT-29细胞对共刺激活化PBMC的敏感性。电镜结果显示,效应细胞作用24h肿瘤细胞就部分发生坏死,部分肿瘤细胞可见凋亡。流式细胞仪检测效应细胞HT-29细胞72h明显凋亡。结论联合应用CpGODN可以提高单抗协同诱导的效应细胞对结肠癌细胞株HT-29杀伤作用,而坏死细胞进一步增多说明效应细胞是通过诱导肿瘤细胞坏死及细胞凋亡两条途径来实现抑制杀伤作用从而说明活化的淋巴细胞杀伤结肠癌细胞是通过坏死及凋亡实现的。     

小白菊内酯对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察小白菊内酯（PN）对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响并分析其可能机制。方法不同浓度PN作用于结肠癌HT-29细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Western Blot法检测核转录因子（NF）-B亚单位pso、环氧化酶（cox-2）蛋白表达的改变;ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）浓度。结果PN能诱导结肠癌细胞的凋亡,且随PN浓度的增加,结肠癌HT-29细胞的凋亡率增加;而NF-κB亚单位p50、COX-2蛋白表达减少,同时PGE2浓度降低。结论PN可诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,其机制可能与其能下调NF-κB、COX-2蛋白表达并减少PGE2生成有关。     

阿司匹林对结肠癌细胞肿瘤干性标记物CD44蛋白表达的影响

目的研究人结肠癌细胞系SW-480、HT-29中肿瘤干细胞干性标记物CD44蛋白受阿司匹林不同药物浓度的影响变化,从而探讨阿司匹林是如何预防结直肠癌的发生。方法采用激光扫描共聚焦显微技术:免疫荧光双标染色法检测结肠癌细胞系SW-480、HT-29中CD44的表达;用Western blotting检测不同浓度阿司匹林(0、2.5、5.0、10.0 mmol/L,即分别为空白对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组)作用下,CD44在COX-2阴性表达的SW-480细胞及COX-2高表达的HT-29细胞表达影响。结果 SW-480、HT-29中存在CD44阳性细胞,2种细胞表达的CD44荧光值比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western blotting结果显示阿司匹林能抑制结肠癌细胞系SW-480、HT-29中CD44的表达,且具有明显的量-效关系(P<0.05),2种细胞组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结肠癌细胞系SW-480、HT-29中存在CD44阳性细胞,阿司匹林能抑制肿瘤干细胞干性标记物CD44的表达,其抑制可能是通过COX-2及非COX-2途径,该抑制作用可能是阿司匹林能预防结肠癌的原因之一。     

缺氧诱导因子-1α对结直肠癌细胞上皮间质转化及 侵袭迁移的影响

摘要： 目的 探讨缺氧是否能促进不同分化程度结直肠癌细胞上皮间质转化 （EMT）, 并分析缺氧对结直肠癌细 胞侵袭、 迁移的影响。方法 分别选取 HCT116（低度分化）和 HT-29（高度分化）结直肠腺癌细胞。观察 0、 10、 25、 50、 100 及 150 mg/L 氯化钴 （CoCl2） 诱导 2 种细胞 48 h 后的形态变化。分析 0、 10、 25、 50 及 100 mg/L CoCl2 处理 48 h 后缺氧诱导因子 （HIF） -1α蛋白表达变化, 筛选出 CoCl2诱导细胞缺氧的最适合浓度。MTT 实验检测不同时间点 （0 、 24 、 48 、 72 及 96 h） CoCl2诱导 2 种结直肠癌细胞的增殖情况, 筛选出 CoCl2诱导缺氧的最佳时间。最佳浓度和时间 条件下, 对 HCT116 和 HT-29 细胞分别进行缺氧 （缺氧组） 和常氧 （常氧组） 处理, Transwell 侵袭和划痕实验检测 2 组 2 种细胞的侵袭、 迁移情况; Western blot 实验和 RT-PCR 实验检测 2 组 HIF-1α、 E-cadherin 及 Vimentin 的蛋白及 mRNA 表达水平。结果 50 mg/L CoCl2作用 48 h 时 2 种细胞均出现明显的形态改变。2 组 HCT116、 HT-29 细胞的 HIF-1α蛋白表达水平随 CoCl2浓度增加均呈先增后减趋势, 50 mg/L 为最适宜浓度 （P < 0.05）。0~96 h 时 2 种细胞不 论有无缺氧, 细胞增殖能力均呈先增后减趋势 （P＜0.05）, 48 h 为最佳作用时间。HCT116 和 HT-29 细胞系中缺氧组 穿膜细胞数和细胞迁移率均明显高于常氧组 （P＜0.05）。HCT116、 HT-29 细胞系中缺氧组 HIF-1α、 Vimentin 的蛋白 和 mRNA 表达水平均高于常氧组, 而 E-cadherin 的蛋白和 mRNA 表达水平低于常氧组（均 P＜0.05）。结论 缺氧 能诱导不同分化程度结直肠癌细胞均发生 EMT, 并能增强 2 种结直肠癌细胞的侵袭、 迁移能力。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HT-29细胞MMP-9表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法:应用RT-PCR法和Western blot法检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白表达.结果:EGCG 25、50、100 mg/L作用于结肠癌细胞株HT-29 48 h后,与对照组比较,MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达量随着EGCG浓度的增加而下降,且各浓度组间差异也有统计学意义(P<0.05).结论:EGCG可显著抑制HT-29细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达,呈剂量依赖性,可能是其抗癌机制之一.     

洛铂与替加氟联合贝伐单抗治疗晚期大肠癌的临床研究

目的探讨洛铂与替加氟注射液（方克）联合贝伐单抗治疗晚期大肠癌的临床疗效及毒副反应。方法64例晚期大肠癌患者分别接受方案A（32例）、方案B（32例）治疗。方案A组：替加氟800 mg/m2,CIV（24 h）,d1-d5;LV200 mg/m2,静脉滴注（2 h）,d1~d5;洛铂35 mg/m2,静脉滴注,d1。方案B组：替加氟800 mg/m2,CIV（24 h）d1~d5;LV200 mg/m2,静脉滴注（2 h）,d1~d5,洛铂35 mg/m2;静脉滴注,d1;贝伐单抗15 mg/kg,静脉滴注,d1。结果方案A组：CR 3例,PR 7例,有效率31.3%;方案B组：CR 6例,PR 12例,有效率为56.3%,静脉滴注,2组有效率比较,差异有显著性（χ2=4.0635,P=0.044）。2组均未出现明显肝、肾功能及心脏毒性反应。不良反应发生率比较,2组无统计学意义（P〉0.05）。结论洛铂与替加氟联合贝伐单抗是治疗晚期大肠癌安全有效的方案之一,能显著提高晚期患者的有效率,毒副作用可以耐受。     

高良姜素通过PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路增强胃癌SGC-7901细胞对阿帕替尼的敏感性

摘要：目的 探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌SGC-7901细胞, 3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓 度。将胃癌细胞分为4组：空白对照组、高良姜素组、阿帕替尼组和高良姜素+阿帕替尼组。MTT法检测细胞增殖活 力;流式细胞术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检 测细胞凋亡及PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路相关蛋白表达。结果 阿帕替尼和高良姜素均显著抑制胃癌SGC- 7901细胞的增殖,并呈浓度依赖性（P＜0.05）,20 mg/L阿帕替尼和300 mg/L高良姜素是最佳的干预浓度。与20 mg/L 阿帕替尼组相比,高良姜素+阿帕替尼组可以明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05）。流式细 胞术结果显示,高良姜素+阿帕替尼组对胃癌SGC-7901细胞促凋亡作用明显优于20 mg/L阿帕替尼组（P＜0.05）。 Western blot结果显示,高良姜素+阿帕替尼组Bcl-2相关X蛋白（Bax）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化丝裂原活 化蛋白激酶（p-p38）蛋白表达明显高于20 mg/L阿帕替尼组,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白明显低于20 mg/L阿帕替尼 组（P＜0.05）。结论 高良姜素可能通过抑制PI3K/Akt和激活p38-MAPK信号通路增强阿帕替尼抗胃癌SGC-7901 细胞的作用。     

p-JNK在结肠癌组织中的表达及抑制JNK通路后HT-29细胞增殖和凋亡变化

目的研究p-JNK在结肠癌组织中的表达以及抑制JNK信号通路后人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的变化。方法使用免疫组织化学方法检测50例结肠癌组织标本和50例正常结肠组织标本中p-JNK的表达情况并和临床资料进行比较分析;在人结肠癌细胞株HT-29中使用SP600125抑制JNK信号通路后,MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测凋亡。结果 p-JNK在结肠癌组织中的表达水平明显高于正常对照组织(P<0.05);并和淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤的侵犯深度相关(P<0.05);而与肿瘤部位无关。抑制JNK信号通路后,HT-29细胞中的p-JNK表达降低(P<0.05);增殖减少,凋亡增加(P<0.05)。结论在结肠癌组织中存在p-JNK的高表达,抑制JNK信号通路能降低人结肠癌细胞株HT-29细胞的增殖,并促进凋亡;JNK信号通路和结肠癌的发生发展有关。     

Inhibition of self-renewal and differentiation of HT-29 cells-derived cancer stem-like cells by scutellarin via Hedgehog signaling pathway

OBJECTIVE To investigate the inhibitory effect of scutellarin on the self-renewal and differentiation of HT-29 cells-derived cancer stem-like cells(HT-29 CSC) in vitro and in vivo, and to explore its mechanism. METHODS The effect of scutellarin on the growth of HT-29 CSC was determined by 3 D Culture assay. The effect of scutellarin on growth and transformation of HT-29 CSC was probed by soft agar colony formation assay. The effect of scutellarin on the differentiation of HT-29 CSC was determined by serum induction differentiation assay in vitro. The effects of scutellarin on the expressions of marker gene Lgr5, target gene c-Myc, proliferation gene CK20 and Nanog gene were measured by quantitative real-time RT-PCR. Investigate the effect of scutellarin on the expression of c-Myc, Gli1, and Lgr5 protein by Western blotting. A subcutaneous xenograft model of colon cancer in nude mice was established and administered by intraperitoneal injection. The change of body weight and tumor size of nude mice were observed every two days. Investigate the effects of scutellarin on the growth of xenograft tumors in nude mice. The expression of CD133, Lgr5, Gli1,Ptch1, c-Myc, Ki67, CK20, Nanog gene in tumors were measured by quantitative real-time RT-PCR. The expression of c-Myc, Gli1, Lgr5, CD133, Ki67 protein were measured by Western blotting. RESULTS Scutellarin can inhibit the growth of HT-29 CSC in 3 D culture. Compared with the solvent control group, scutellarin can significantly inhibit the growth and transformation and differentiation of HT-29 CSC in vitro(P<0.01). The expression levels of marker genes Lgr5, target gene c-Myc, proliferation gene CK20 and Nanog in HT-29 CSC were down-regulated by scutellarin. Scutellarin can reduce the expression of c-Myc, Gli1, and Lgr5 protein in HT-29 CSC.Scutellarin can inhibit the growth of colon cancer xenografts, lower CD133, Lgr5, Gli1, Ptch1, c-Myc, Ki67, CK20, and Nanog mRNA level of xenograft tumors, reduce the expression of c-Myc, Gli1, Lgr5, CD133, and Ki67 protein of xenograft tumors in nude mice. CONCLUSION Scutellarin,which is the main component of scutellaria barbata, can inhibit the differentiation of HT-29 CSC and the mechanism is to inhibit the activity of Hedgehog signaling pathway.     

Novel prodrugs of tegafur that display improved anticancer activity and antiangiogenic properties

New and more potent prodrugs of the 5-fluorouracyl family derived by hydroxymethylation or acyloxymethylation of 5-fluoro-1-(tetrahydro-2-furanyl)-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione (tegafur, 1) are described. The anticancer activity of the butyroyloxymethyl-tegafur derivative 3 and not that of tegafur was attenuated by the antioxidant N-acetylcysteine, suggesting that the increased activity of the prodrug is in part mediated by an increase of reactive oxygen species. Compound 3 in an in vitro matrigel assay was found to be a more potent antiangiogenic agent than tegafur. In vivo 3 was significantly more potent than tegafur in inhibiting 4T1 breast carcinoma lung metastases and growth of HT-29 human colon carcinoma tumors in a mouse xenograft. In summary, the multifunctional prodrugs of tegafur display selectivity toward cancer cells, antiangiogenic activity, and anticancer activities in vitro and in vivo, superior to those of tegafur. 5-fluoro-1-(tetrahydro-2-furanyl)-2,4(1 H,3 H)-pyrimidinedione (tegafur, 1), the oral prodrug of 5-FU, has been widely used for treatment of gastrointestinal malignancies with modest efficacy. The aim of this study was to develop and characterize new and more potent prodrugs of the 5-FU family derived by hydroxymethylation or acyloxymethylation of tegafur. Comparison between the effect of tegafur and the new prodrugs on the viability of a variety of cancer cell lines showed that the IC50 and IC90 values of the novel prodrugs were 5-10-fold lower than those of tegafur. While significant differences between the IC50 values of tegafur were observed between the sensitive HT-29 and the resistant LS-1034 colon cancer cell lines, the prodrugs affected them to a similar degree, suggesting that they overcame drug resistance. The increased potency of the prodrugs could be attributed to the antiproliferative contribution imparted by formaldehyde and butyric acid, released upon metabolic degradation. The anticancer activity of the butyroyloxymethyl-tegafur derivative 3 and not that of tegafur was attenuated by the antioxidant N-acetylcysteine, suggesting that the increased activity of the prodrug is in part mediated by an increase of reactive oxygen species. Compound 3 in an in vitro matrigel assay was found to be a more potent antiangiogenic agent than tegafur. In vivo 3 was significantly more potent than tegafur in inhibiting 4T1 breast carcinoma lung metastases and growth of HT-29 human colon carcinoma tumors in a mouse xenograft. In summary, the multifunctional prodrugs of tegafur display selectivity toward cancer cells, antiangiogenic activity and anticancer activities in vitro and in vivo, superior to those of tegafur.     

异叶败酱总苷片对人大肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的：研究异叶败酱总苷片对人大肠癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法：建立人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型，设立异叶败酱总苷片低、中、高剂量组和空白组、5-氟脲嘧啶（5-FU）＋甲酰四氢叶酸钙（CF）对照组，给药8周后处死裸鼠，瘤体称重,末端原位标记染色法（TUEL）检测凋亡指数，分别行半胱天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3），Bax和Bcl-2免疫组化染色，图象分析系统定量检测并比较该3种物质表达情况。结果：异叶败酱总苷片各组瘤重小于空白对照组，而凋亡指数均高于空白对照组和5-FU＋CF组，其中高剂量组与空白对照组和5-FU＋CF组比较差异有极显著性（P＜0．01）。异叶败酱总苷片各组移植瘤caspase-3表达及Bax、Bcl-2表达的相对比率（Bax／Bcl-2）均高于空白对照组。结论：异叶败酱总苷片具有诱导人大肠癌HT-29裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用，其机制可能与促进移植瘤caspase-3表达及增大Bax／Bcl-2表达比率有关。     

Rb反义寡核苷酸对人结肠癌细胞凋亡及化疗药敏的影响

目的　观察Rb反义寡核苷酸 (AS ODN)对人结肠癌(HT 2 9)细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响。方法　人工合成RbAS ODN经脂质体 (Lip)包裹后作用HT 2 9细胞。采用免疫组化、WesternBlot检测转染前后Rb蛋白表达状况 ,流式细胞术测定HT 2 9细胞转染前后 5 Fu诱导凋亡程度 ,MTT法观察化疗药敏的变化。结果　经RbAS ODN处理的HT 2 9细胞Rb蛋白表达量明显下降 ,RbAS ODN处理的HT 2 9细胞加 5 Fu作用后与对照组比较 ,细胞凋亡率明显下降 ,化疗药物敏感性降低。结论　RbAS ODN阳离子脂质体转染具有抑制化疗药诱导大肠癌HT 2 9细胞凋亡的作用及降低化疗药物敏感性作用。     

力达霉素对钾离子通道HERG高表达肿瘤细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用

探讨力达霉素(LDM)对钾离子通道HERG高表达肿瘤细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用。用MTT法观察LDM和多种抗癌药的联合应用对人A549和HT-29细胞以及转染HERG钾通道A549细胞的抑制作用;用人结肠癌HT-29裸鼠模型,观察LDM和HCPT联合的抑瘤作用,用药物相互作用指数评价药物联合作用。LDM显著抑制A549细胞和HT-29细胞的增殖,其IC50值分别为2.14和4.64 ng.mL-1,其对HERG钾通道高表达的HT-29细胞的增殖抑制作用弱于对HERG钾通道低表达A549细胞的作用;从IC50值来看,LDM也能抑制HERG钾通道稳定转染的A549细胞的增殖,但这种抑制作用明显弱于稳定转染了空白质粒的A549细胞;LDM分别与氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星(DOX)、羟喜树碱(HCPT)联用,能协同抑制HERG钾通道高表达的HT-29细胞的增殖。LDM与5-FU联用,CDI值均大于0.75;LDM与DOX联用,CDI值均大于0.70;LDM与HCPT联用,CDI值小于0.70;其中,与HCPT联用的协同作用效果最强。5-FU对肿瘤细胞的生长抑制作用不受HERG钾通道的调节,DOX的化疗...     

岩大戟内酯B通过阻断PI3K/Akt/NF-κB通路抑制结肠癌细胞的增殖和转移

目的:研究岩大戟内酯B(JB)对结肠癌HT-29细胞增殖和转移的抑制作用及其作用机制。方法:用不同浓度JB处理HT-29细胞,采用MTT法检测细胞增殖率;平板克隆实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞周期变化;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;免疫荧光法和Western blotting法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白vimentin、锌指蛋白(Snail)1、Snail2、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达;Western blotting法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达水平。100μg/L IGF-1组和100μg/L IGF-1+20μmol/L JB组分别处理HT-29细胞,Western blotting法检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达变化。结果:JB抑制HT-29细胞增殖作用浓度依赖性,其作用24 h的IC 50为52.68μmol/L;JB呈浓度依赖性地降低HT-29细胞的克隆形成率(P<0.05);与对照组相比,JB处理后的HT-29细胞G0/G1期比例显著增高,S期细胞比例明显下降;JB可显著抑制HT-29细胞的体外迁移、侵袭能力(P<0.05);JB作用后的HT-29细胞E-cadherin蛋白水平升高,vimentin、Snail1、Snail2、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05);IGF-1+JB组p-PI3K、p-Akt、与p-NF-κB P65蛋白的表达水平较IGF-1组显著下降(P<0.05)。结论:JB在体外能抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,抑制HT-29迁移和侵袭,调控上皮-间质转化(EMT)及MMPs,其机制可能与阻断PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

恩度联合放疗对鼻咽癌裸鼠成瘤的抑制作用及机制

目的:观察恩度联合放疗对鼻咽癌裸鼠成瘤的抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)和生存素SurvivinmRNA表达的影响.方法:建立鼻咽癌裸鼠成瘤模型,成瘤后随机分为对照组、恩度组、放疗组和恩度+放疗联合组(联合组),观察各组移植瘤的生长速度和瘤体大小的变化.4周后处死裸鼠摘取瘤体,电镜观察各组肿瘤凋亡情况,应用实时荧光定量PCR检测各组瘤体组织中的VEGF和Survivin mRNA的表达水平.结果:联合组肿瘤体积增长受到明显抑制,对照组生长迅速,恩度组与放疗组居中.恩度组、放疗组和联合组的VEGF表达水平均低于对照组,联合组低于放疗组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01),放疗组和联合组的Survivin表达水平均低于对照组,联合组低于放疗组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01).成瘤组织中VECF与Survivin的表达呈正相关(r=0.679,P＜0.01).结论:恩度联合放疗能明显抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,这种作用可能与VEGF和Survivin表达下调有关.     

微小RNA-210与胃癌患者治疗的相关性及对胃癌BGC823细胞化疗敏感的影响

目的分析microRNA-210与中晚期胃癌患者治疗疗效的关系,并探讨其对胃癌BGC823细胞化疗敏感的影响。方法于86例中晚期胃癌患者作为研究对象,所有研究对象均给予放化疗治疗(6 MV X射线50~60Gy/30 f,5次/周;第1天:奥沙利铂85 mg·m^-2、静脉滴注2 h;第1~14天:替吉奥胶囊80 mg·m^-2、早晚餐后口服,后停药7 d),21 d为1个周期,共治疗4个周期。用RECIST1.1作为疗效评价,根据疗效不同将其分为敏感组和非敏感组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测治疗前2组血浆和胃癌活检组织microRNA-210水平。针对microRNA-210序列设计microRNA-210-siRNA,将其转染胃癌BGC823细胞,为microRNA-210-siRNA组,并设置NC-siRNA组(转染NC-siRNA)和空白对照组(转染等量生理盐水),用qRT-PCR检测各组microRNA-210鉴定转染效率;用CCK-8法和平板细胞克隆形成实验检测沉默microRNA-210对胃癌BGC823细胞增殖及生长的影响。结果治疗后,敏感组(CR+PR)47例,非敏感组(SD+PD)39例。敏感组血浆和组织microRNA-210分别为2.15±0.33和2.71±0.46;非敏感组血浆和组织microRNA-210分别为4.11±1.07和5.82±1.32,差异均有统计学意义(均P<0.05)。microRNA-210-siRNA组、NC-siRNA组和空白对照组细胞克隆形成率分别为(2.10±0.17)%,(4.35±0.37)%和(4.29±0.34)%,microRNA-210-siRNA组明显低于NC-siRNA组和空白对照组(P<0.05);NC-siRNA组和空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论低水平microRNA-210中晚期胃癌患者对化疗敏感;沉默microRNA-210可明显提高奥沙利铂-替吉奥抑制胃癌细胞增殖和生长的能力。