冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

雌激素影响卵巢癌细胞系COC1顺铂耐药的相关机制

目的研究雌激素对顺铂诱导卵巢癌细胞系COC1和COC1／DDP凋亡的影响。方法运用细胞培养、MTT、原位标记法、流式细胞术和免疫组化等方法，采取雌激素预先作用卵巢癌COC1和COC1／DDP细胞16h，随后与顺铂共同培养诱导凋亡方式，动态地观察雌激素对顺铂诱导这两个细胞系凋亡影响和此过程中细胞周期分布和p53蛋白表达的改变。结果雌激素促进顺铂诱导的COC1和COC1／DDP细胞凋亡．引起细胞周期由G2到S期的转变，p53蛋白对雌激素作用无明显影响。结论处于细胞周期顺铂不敏感期的卵巢癌细胞可能与其耐药有关，雌激素可增加耐药的COC1／DDP细胞顺铂敏感性。     

褪黑素联合顺铂、甲氨蝶呤对骨肉瘤SaOS-2细胞增殖的影响

目的探讨褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)、甲氨蝶呤(MTX)对骨肉瘤细胞系Sa OS-2增殖的影响,以及Mel与DDP、MTX是否具有协同抗肿瘤作用。方法 Mel、DDP、MTX、Mel+DDP、Mel+MTX作用于Sa OS-2细胞后,CCK-8法检测药物对细胞活性的影响,应用Compusyn软件分析药物的合并效应,流式细胞术分析细胞周期分布及细胞凋亡率。结果与对照组相比,Mel、DDP、MTX单独均能显著降低Sa OS-2细胞活性(P均<0.05),且呈剂量-效应关系。与单用DDP或MTX相比,Mel与DDP或MTX联合应用能显著降低Sa OS-2细胞的活性(P均<0.05)。1 mmol/L的Mel与6.67、16.67、33.33、66.66μmol/L的DDP合用时,联合用药指数(CI)分别为1.18、1.21、1.09、0.84,与0.1、0.5、1、2、4 mmol/L MTX合用后,CI分别为0.88、0.88、0.83、0.78、0.81。与对照组相比,Mel组与Mel+MTX组的G1期细胞比例显著增多(P均<0.05),S期细胞比例显著减少(P均<0.05);MTX组的S期细胞比例显著增多(P均<0.05)。药物作用组的细胞凋亡率均显著高于对照组(P均<0.05),联合用药组的细胞凋亡率显著高于单药组(P均<0.05)。结论 Mel在体外能抑制Sa OS-2细胞的活性,阻滞细胞周期于G1期,诱导凋亡,发挥抗肿瘤效应,与较低浓度DDP呈拮抗效应,而与MTX、较高浓度DDP联合应用时呈协同抗肿瘤效应。     

不同剂量的顺铂-紫杉醇对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响

目的：探讨不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1／DDP细胞的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法：培养细胞,加入不同剂量的紫杉醇和顺铂,采取四唑盐（MTT）比色法、倒置显微镜观察法、Annexin法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪（FCM）检测不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1／DDP细胞对细胞生长周期和凋亡的百分率的影响。结果：紫杉醇和顺铂显著抑制卵巢癌COC1／DDP细胞生长,能够显著阻滞细胞于S期,细胞核浓缩,DNA断裂片段增加,细胞凋亡明显。结论：通过对卵巢癌COC1／DDP细胞生长实验研究和形态学观察,证明紫杉酶和顺铂对卵巢癌COC1／DDP细胞的影响细胞具有毒性作用,可通过相关途径诱导DU145细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长。     

顺铂诱导的人卵巢癌多药耐药细胞系基因表达谱分析

目的卵巢癌多药耐药性的产生是导致其化疗失败的主要原因,为研究卵巢癌耐药机制,本研究建立了人卵巢癌细胞多药耐药模型COC1/DDP,并进行了基因表达谱分析。方法以顺铂为诱导剂,采用中等剂量、间歇作用法建立多药耐药细胞系COC1/DDP,然后以其亲本细胞COC1为对照,应用cDNA微阵列检测COC1/DDP细胞的基因表达。结果与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞对顺铂有6.2倍耐药性,细胞倍增时间延长了8.9h,S期细胞减少了(27.4±2.13)%,而G1和G2期细胞则分别增加了(19.6±3.71)%和(8.3±1.95)%,对阿霉素、5-氟脲嘧啶和长春新碱也有明显的交叉耐药性。较之COC1亲本细胞,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,表达上调的有71个基因,表达下调的有72个基因,包括大量的凋亡和抗凋亡基因、信号转导和细胞周期调节基因、DNA转录与修复基因以及蛋白激酶和磷酸酶基因。结论COC1/DDP细胞具有多药耐药的特性,耐药性的产生与其特异的基因表达谱有关。     

不同剂量顺铂对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡影响的研究

目的 检测不同剂量顺铂(DDP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及周期的影响,探讨DDP治疗宫颈癌的作用机制. 方法 采用WST-8方法 检测DDP对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态;用流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡和周期变化. 结果 DDP对SiHa细胞增殖的抑制作用,一定程度上呈浓度依赖性和时间依赖性,但0.01～1.00 μg/ml的DDP作用24 h和0.01～0.10 μg/ml的DDP作用48 h对细胞的抑制增殖作用不明显(P＞0.05).5.00 μg/ml 的DDP作用24 h时,Hoechst 33258荧光染色可见典型的凋亡细胞形态;1 μg/ml 的DDP作用SiHa细胞24 h时,使SiHa细胞产生明显的S期阻滞,S期细胞比率为(53.17±7.50)%,与对照组、DDP 5.00 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),致凋亡作用不明显(P＞0.05);而5.00 μg/ml DDP作用24 h时,细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率分别为(5.88±1.64)%和(5.18±1.26)%,与对照组、DDP1 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 DDP抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,但对小剂量DDP存在一定的耐药,其耐药机制可能与S期阻滞有关;高剂量DDP抗宫颈癌细胞作用机制主要表现为致凋亡作用.     

Egr-1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及其对细胞凋亡的作用

目的　研究不同剂量60 Co射线照射后Egr 1基因在人宫颈癌Hela细胞中的表达及与细胞凋亡的关系。方法　将人宫颈癌Hela细胞株进行体外培养 ,用不同剂量的60 Co射线照射 ,流式细胞仪记录细胞周期的分布和凋亡率 ,电子显微镜观察细胞形态 ,半定量RT PCR法检测Hela细胞Egr 1基因的表达。结果　放射线可抑制人宫颈癌Hela细胞的生长 ,诱导其凋亡。照射后细胞凋亡率随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达高峰值 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Hela细胞出现G0 /G1期阻滞 ,S期明显减少 ,且呈剂量依赖性 ,与对照组相比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;照射后Egr 1基因表达随照射剂量增加而增加 ,至 12 0 0cGy时达峰值 ,与对照组比均有极显著性差异 (P <0 .0 1) ,Egr 1基因表达与凋亡率相关 (r=0 .96 9,P <0 .0 1)。结论　60 Co射线可引起人宫颈癌Hela细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡 ,Egr 1基因为促凋亡基因 ,可能与宫颈癌的发生、发展及预后有关     

TRAIL联合顺铂诱导卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制的研究

目的:研究TRAIL联合顺铂对卵巢癌耐药细胞COC1/DDP生长的影响,以及联合用药对TRAIL死亡受体(DR4、DR5)、凋亡相关基因Smac、Survivin表达的影响,揭示TRAIL联合顺铂可能逆转COC1/DDP细胞耐药性的机制。方法:采用MTT法检测不同浓度TRAIL蛋白与DDP联合用药对COC1/DDP细胞生长的影响,用Annexin V-FITC法检测COC1/DDP细胞凋亡,用RT-PCR方法检测DDP对TRAIL受体(DR4、DR5)、凋亡相关基因Smac、Survivin表达。结果:TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,DDP与TRAIL蛋白联合作用后细胞生长抑制率显著升高(P0.05)。DDP使COC1/DDP细胞的DR5表达水平显著增强,为正常对照组的3.45倍(P0.001);Smac表达为对照组的2.82倍(P0.001);DR4水平无明显变化;Survivin表达较对照组显著减少(P0.001)。结论:TRAIL蛋白对COC1/DDP细胞生长有抑制作用,DDP与TRAIL联合增强了对COC1/DDP细胞生长抑制;TRAIL逆转COC1/DDP细胞对DDP的耐药性可能与DDP导致TRAIL受体DR5水平升高、Smac表达增加,通过线粒体途径促进了肿瘤细胞的凋亡有关。     

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。     

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的 观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthoeyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72 h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变.流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高.Western blot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加.结论 原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COCl/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

顺铂诱导人卵巢癌COC_1、COC_1/DDP细胞凋亡的研究

目的：探讨顺铂作用于卵巢癌细胞的作用机理。方法：通过电镜、光镜、流式细胞仪等方法观察顺铂诱导人亲代和耐药卵巢癌细胞ＣＯＣ１ 、ＣＯＣ１／ＤＤＰ凋亡,进行细胞周期分析及计算凋亡率。结果：顺铂引起细胞Ｓ期增多、Ｓ期细胞凋亡,ＣＯＣ１ 、ＣＯＣ１／ＤＤＰ细胞凋亡率不同。结论：顺铂药理机制之一是诱导细胞凋亡,耐药与凋亡减少有关。     

顺铂诱导人卵巢癌COC1、COC1/DDP 细胞凋亡的研究

目的探讨顺铂作用于卵巢癌细胞的作用机理。方法通过电镜、光镜、流式细胞仪等方法观察顺铂诱导人亲代和耐药卵巢癌细胞COC     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoCl/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理.方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoCl/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析.结果MPA明显抑制CoCl/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P＜0.01);MPA与DDP合用对CoCl/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P＜0.01).结论MPA能明显抑制CoCl/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性.     

Mifepristone对卵巢癌细胞的单己糖神经酰胺表达及耐药性的影响

目的研究单己糖神经酰胺在卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂耐药性中的作用,探索mifepristone对COC1/DDP细胞耐药性逆转的机制.方法将耐药细胞分为顺铂组、顺铂+mifepristone组,MTT方法检测各组细胞抑制率;采用改良的Hahomori方法分别提取、纯化耐药细胞COC1/DDP(用mifepristone处理前后)和敏感细胞COC1的中性鞘糖脂,高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析各组CMH的差异将耐药细胞分为三组顺铂组、mifepristone组、顺铂+mifepristone组,用透射电镜观察各组细胞的超微形态结构变化.结果mifepristone可以逆转COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,1.25μmol/L的mifepristone与浓度为(0.1～1.25)μg/ml的顺铂联合应用,使细胞的抑制率从单用上述浓度顺铂时的(8.84±6.29)%～(17..71±8.00)%上升为(15.26±6.75)%～(27.15±7.69)%(P＜0.001),且有剂量依赖性.耐药细胞的CMH表达率为(37.14±3.34)%,明显高于敏感细胞的(14.05±1.44)%(P＜0.001),耐药细胞经1.25μmol/L、5μmol/L mifepristone处理后,CMH分别下降到(26.62±2.63)%(P＜0.05)和(17.50±0.67)%(P＜0.001).顺铂和mifepristone联合作用,透射电镜观察到耐药细胞出现异染色质浓缩、边聚,产生了凋亡小体.结论mifepristone在较低浓度即可逆转卵巢癌细胞COC1/DDP对顺铂的耐药性,其增敏机制可能与抑制单己糖神经酰胺的表达、促进细胞凋亡相关.     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

二十碳五烯酸抑制肺腺癌A-549细胞株增殖

目的在体外细胞实验中,观察二十碳五烯酸（EPA）联合顺铂（DDP）对肺腺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法选用A-549细胞株进行体外培养,用MTT比色法测定EPA对A-549细胞株的抗增殖作用。应用倒置显微镜、光学显微镜观察细胞凋亡形态学变化。应用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数（AI）。结果实验结果表明,EPA在（60～120）μg／mL浓度范围内,于24、48、72、96h四个时间段对肺腺癌A-549细胞株均有抑制生长作用,且EPA与顺铂有协同抗癌作用,并表现出浓度、时间依赖性关系。当EPA浓度为60、80、100、120μg／mL时,细胞凋亡指数（AI）依次升高,分别为（81．52±1．96）％、（83．74±2．21）％、（85．30±2．38）％、（86．26±2．44）％,不同浓度组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外实验中,EPA对A-549细胞生长有抑制作用,呈明显的量效和时效关系,且与顺铂有协同作用。     

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1／cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。     

顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株细胞毒性的实验研究

目的：研究顺铂热化疗对骨肉瘤细胞株(OS-732)细胞毒性的影响，探讨热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机理。方法：OS-732细胞株分别经不同温度的热疗、不同浓度顺铂化疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h，采用体外细胞毒性试验(MTT法)、流式细胞仪(FCM)分析及电子显微镜观察其对细胞毒性和细胞周期的影响，以及诱导细胞凋亡的情况。结果：41℃、43℃、45℃热疗对OS-732细胞株有明显的细胞毒性作用。在37℃恒温条件下，细胞株单独与不同浓度的顺铂作用1h，随着顺铂浓度的升高，其细胞毒性作用明显增加。43℃热疗 顺铂共同作用1h，其细胞毒性作用进一步增加，细胞毒性指数最高达72．37％；FCM分析显示对细胞周期有明显的影响，S期细胞比例明显增加，G2与M期细胞比例明显减少。43℃热疗、43℃热疗 顺铂联合作用各1h均出现凋亡细胞峰(亚G1峰)，细胞凋亡比例最高达56．47％；透射电镜观察有典型的细胞凋亡特征性变化。结论：顺铂热化疗有明显的增强OS-732细胞株的细胞毒性作用。43℃热疗、43℃热疗 顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡。43℃热疗诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是热疗在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

bcl-2基因表达在人卵巢癌多药耐药现象中的作用

为探讨凋亡抑制基因bcl-2的表达在人卵巢癌顺铂耐药现象中的作用,采用DNA电泳,流式细胞仪技术及逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,分别对顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株COC1及耐药株COC1/DDP的细胞凋亡及其bcl-2基因表达进行研究.结果发现①不同浓度顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中均见凋亡梯度,且随顺铂浓度的增加凋亡梯度增大.②不同浓度顺铂作用下流式细胞仪分析结果显示耐药细胞株中凋亡率明显低于敏感细胞株(P＜0.05).③耐药细胞株中bcl-2基因表达明显强于敏感细胞株.在顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中bcl-2基因表达下调.结果表明顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡;凋亡抑制基因bcl-2在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因.