缺氧对瘢痕成纤维细胞缺氧诱导因子1α表达的影响

目的:探讨缺氧程度与瘢痕成纤维细胞缺氧诱导因子1α表达的关系。方法:实验于2004-01/03在湘雅医学院中心实验室完成。选择烧伤患者创面愈合后3～6个月的瘢痕为取材对象。取体外分离培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在体积分数为0.2,0.1,0.05,0.015的氧浓度下培养24h后,采用免疫组织化学染色和WesternBlot方法检测缺氧诱导因子1α的表达。结果:①免疫组织化学染色:细胞核和细胞质均有缺氧诱导因子1α表达,体积分数为0.2,0.1,0.05,0.015的氧浓度下缺氧诱导因子1α表达的信号强度分别为47.50±9.29,96.00±18.29,209.17±19.64,263.83±13.24,各浓度比较差异显著(F=261.01,P<0.01)。体积分数为0.2的氧浓度下缺氧诱导因子1α部分为弱阳性,体积分数为0.1的氧浓度下缺氧诱导因子1α基本弱阳性,体积分数为0.05的氧浓度下缺氧诱导因子1α以阳性表达为主,体积分数为0.015的氧浓度下缺氧诱导因子1α基本为阳性。②WesternBlot印迹检测:体积分数为0.2,0.1,0.05,0.015的氧浓度下缺氧诱导因子1α蛋白表达相对含量分别为0.02,0.26,0.39,0.97,呈逐渐增高趋势,均明显高于体积分数为0.2的氧浓度条件下的缺氧诱导因子1α蛋白表达。结论:随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞的缺氧诱导因子1α表达强度逐渐增强。缺氧诱导因子1α的表达强度可间接反映瘢痕组织内的氧浓度。     

缺氧预适应小鼠缺氧耐受性、运动耐力及肺功能的改变

目的：观察缺氧预适应对小鼠缺氧耐受性、运动耐力及缺氧条件下小鼠肺功能的影响。 方法：实验于2003—12／2004—12在解放军第四军医大学病理生理学实验室进行。①常压耐缺氧时间的测定：取昆明小鼠20只随机分为2组（n=10），正常对照组在正常氧环境（体积分数为0．21的氧）中，缺氧预适应组小鼠在低压低氧条件下（体积分数为0．21的O2与体积分数为0．08的O2交替循环4次，每种氧浓度下持续15min）复制缺氧预适应模型，将两组小鼠置于正常氧环境下1h后，观察其在缺氧中存活时间。②负重游泳实验：分组和处理同前，将两组小鼠置于正常氧环境下1h后，小鼠尾根部负荷7％体质量的铅丝，置游泳箱中游泳，观察小鼠游泳至力竭时间。③耐寒实验：分组和处理同前，将两组小鼠置于正常氧环境下1h后，记录小鼠在一8℃的条件下的存活时间。④肺水含量测定：取昆明小鼠20只随机分为4组（n=5），正常对照组和缺氧预适应组处理同前，单纯缺氧组小鼠置于体积分数为0．07的O2缺氧6h，缺氧预适应＋缺氧组：缺氧预适应后1h，置于体积分数为0．07的O2缺氧6h。测定各组小鼠肺组织湿重／干重比值。⑤肺血管通透性测定：分组和处理同肺水含量测定实验，检测各组小鼠的肺灌洗液／血清吸光度比值。 结果：经补充后100只小鼠进入结果分析。①常压缺氧耐受时间：缺氧预适应组长于正常对照组[（20．5&;#177;2．4），（14．6&;#177;3．7）min，P〈0．05]。②负重游泳时间：缺氧预适应组长于正常对照组[（173．9&;#177;37），（112．3&;#177;41）min，P〈0．05]。③耐寒时间：缺氧预适应组长于对照组[（63．4&;#177;7．2），（50．1&;#177;4．8）min．P〈0．05]。④肺水含量和肺血管通透性：单纯缺氧组小鼠肺组织湿重／干重和肺灌洗液／血清吸光度比值高于正常对照组（P〈0．05）：缺氧预适应组和缺氧预适应＋缺氧组小鼠明显低于单纯缺氧组（P〈0．05）。 结论：缺氧预适应可提高小鼠缺氧耐受性、运动耐力及耐寒能力，增强缺氢小鼠肺功能。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。     

缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响

背景：缺氧诱导因子1α是一种转录因子，缺氧环境下对哺乳动物细胞起重要的调控作用。然而缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株的放疗和化疗感受性的作用有待研究。目的：观察缺氧诱导因子1α对口腔鳞状上皮癌细胞株接受放射和化学药物治疗感受性的影响。设计：观察对比实验。单位：首都医科大学附属北京朝阳医院。材料：口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5，和口腔鳞状上皮癌细胞株-6来自人口腔鳞状上皮癌细胞（由日本高知大学医学部口腔外科建株）。方法：本实验于2004—09／2006-08于首都医科大学附属北京朝阳医院完成。将口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5，和口腔鳞状E皮癌细胞株-6采用含小牛血清，左旋谷酰胺，青霉素，链霉素的改良DMEM培养液中培养。①从未处理和用30Gyγ射线，100μmol／L顺铂或100μmol／L5-氟脲嘧啶处理后的口腔鳞状上皮癌细胞株中提取细胞核蛋白。采用免疫印迹法检测缺氧诱导因子1α蛋白表达水平，同时采用定量PCR检测缺氧诱导因子1αmRNA的表达。②不同干预条件下细胞增殖抑制情况：将口腔鳞状上皮癌细胞株单细胞悬液以1&;#215;10^4／孔接种于96孔板中，每孔分别加入终浓度为100μmol／L的顺铂或5-氟尿嘧啶，或用30Gyγ射线处理细胞，培养48h后，采用用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制情况。③不同干预条件下细胞凋亡分析：口腔鳞状上皮癌细胞株细胞用30Gyγ射线，100μmol／L顺铂或100μmol／L5-氟脲嘧啶处理24h后，用Propidium iodide和Annexin V—FITC染色，用流式细胞仪测定凋亡细胞数（仅分析γ射线，顺铂处理组）。④质粒构建和转染：将人缺氧诱导因子1α cDNA克隆至pcDNA3．1／V5-His TOPO表达载体。用脂质转染法将缺氧诱导因子1α cDNA暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞。将缺氧诱导因子1α siRNA（有义序列为5’CUGAUGACCAGCAACUUGAtt3’）暂时转染口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞，设立空白对照，同时给于细胞增殖抑制情况观察，以及细胞凋亡分析（仅分析顺铂处理组），方法同前。主要观察指标：①不同口腔鳞状上皮癌细胞株缺氧诱导因子1α的mRNA和蛋白表达情况。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株增殖抑制及细胞凋亡情况。⑧缺氧诱导因子1α过表达或缺氧诱导因子1α基因敲除的转染细胞的蛋白水平检测。㈤转染细胞和对照口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制情况和细胞凋亡分析结果。结果：①不同口腔鳞状上皮癌细胞株间缺氧诱导因子1αmRNA和蛋白表达结果：口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞缺氧诱导因子1αmRNA的相对表达水平分别为1、0，2．2，4.3和4．0。缺氧诱导因子1α的细胞总蛋白和细胞核蛋白的表达在口腔鳞状上皮癌细胞株-2和口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞中较弱，而在口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞中较强。②不同干预条件下口腔鳞状上皮癌细胞株细胞增殖抑制及被诱导凋亡情况：经γ射线，顺铂及5-氟脲嘧啶处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数分别下降至（39．5&;#177;3．2）％，（39．2&;#177;1．2）％和（47．9&;#177;3．6）％，口腔鳞状上皮癌细胞株-4细胞数分别下降至（53．9&;#177;6．6）％，（54.3&;#177;1.4）％，（54．8＋3．8）％。口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数分别下降至（74．1&;#177;3．8）％，（76．5&;#177;9．1）％，（69．6&;#177;7．7）％，口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞数分别下降至（71.4&;#177;7．4）％，（84．4&;#177;8．8）％，（82．0&;#177;4．5）％。顺铂处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为（50．9&;#177;1.3）％，（67.3&;#177;2．2）％，（12．2&;#177;0．8）％和（38．6&;#177;0．9）％。γ射线处理后，口腔鳞状上皮癌细胞株-2，口腔鳞状上皮癌细胞株-4，口腔鳞状上皮癌细胞株-5和口腔鳞状上皮癌细胞株-6细胞的凋亡细胞数分别为（21．2&;#177;1．1）％，（14．6&;#177;O．9）％，（9．7&;#177;1．0）％和（10．4&;#177;0．8）％。⑧不同干预条件下转染细胞增殖抑制及凋亡情况：经γ射线，顺铂及5-氟脲嘧啶处理后，转染了缺氧诱导因子1α表达载体的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞数高于对照组（t=-4．693，-8．617，-6．721，P〈0．01）；转染了缺氧诱导因子1α siRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞数低于对照组细胞（t=5．800，5．595，4．253，P〈0．05～0．011。用顺铂处理24h后，转染缺氧诱导因子-1α的口腔鳞状上皮癌细胞株-2细胞凋亡数为（34．0&;#177;1．9）％，低于空白对照[（49．6&;#177;3．4）％，t=6．937，P〈0．01]。转染缺氧诱导因子1α siRNA的口腔鳞状上皮癌细胞株-5细胞凋亡数为（27．7&;#177;2.3）％。高于空白对照[（11．4&;#177;2．1）％，t=-8．941，P〈0．01]。结论：缺氧诱导因子1α表达与口腔鳞癌细胞对放、化疗感受性之间有负相关性。抑制癌细胞的缺氧诱导因子1α表达能增强癌细胞对放疗、化疗的感受性．     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子表达及胶原合成的作用

目的：观察结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子mRNA、蛋白的表达和胶原合成的影响。 方法：实验于2005—03／12在哈尔滨医科大学免疫教研室完成。选取哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容中心手术标本，包括正常皮肤和增生性瘢痕。将手术中切下的正常皮肤、增生性瘢痕组织在无菌条件下去除表皮后采用组织块贴壁法培养于含体积分数为0．1的胎牛血清的RPM11640培养液中，置37℃，体积分数为0．05的CO2条件下原代培养。经2．5g/L胰蛋白酶消化传代，传代至3～5代时进行实验。实验分4组：①正常皮肤成纤维细胞组。②增生性瘢痕成纤维细胞组。③增生性瘢痕成纤维细胞＋5，0mg／L转化生长因子β1组（简称转化生长因子β1组）。④增生性瘢痕成纤维细胞＋5．0mg／L转化生长因子β1＋结缔组织生长因子反义寡核苷酸组（简称反义寡核苷酸组）。用5．0mg／L转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞后，以脂质体介导方法将结缔组织生长因子反义寡核苷酸转染增生性瘢痕成纤维细胞中，用反转录一聚合酶链反应方法和Western Blot方法检测细胞中结缔组织生长因子mRNA和蛋白质的表达；采用^3H-脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。 结果：①反转录-聚合酶链反应结果：结缔组织生长因子mRNA在正常皮肤成纤维细胞中无表达，在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强，转化生长因子β1刺激后表达量0．64&;#177;0．32明显高于增生性瘢痕成纤维细胞0．31&;#177;0．14，差异显著（P〈0．01）；反义寡核苷酸组可以大部分抑制结缔组织生长因子mRNA的表达，表达量0．12&;#177;0．62明显低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组，差异显著（P〈0．01）。②Western印迹结果：蛋白水平趋势与mRNA水平相一致。结缔组织生长因子蛋白在正常皮肤成纤维细胞中无表达，在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强84．63&;#177;11．49，转化生长因子β1刺激后表达量102．89&;#177;14．35明显高于增生性瘢痕成纤维细胞组，差异显著（P〈0．01）；反义寡核苷酸组可以大部分抑制转化生长因子β1的作用，结缔组织生长因子蛋白表达量41．75&;#177;10．56低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组（P〈0．01）。③结缔组织生长因子反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的作用：增生性瘢痕成纤维细胞组、转化生长因子β1组、反义寡核苷酸组的^3H-脯氨酸掺入率分别为5381&;#177;185．8273&;#177;357．2475&;#177;859，转化生长因子β1可以显著增加成纤维细胞胶原的合成（P〈0．01）；而结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1刺激后的成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用，差异显著（P〈0．01）。 结论：结缔组织生长因子反义寡核苷酸能够抑制转化生长因子β1引起的结缔组织生长因子mRNA、蛋白质表达的增高和胶原合成的增多，表明阻断结缔组织生长因子可能是延缓瘢痕纤维化的有效手段。     

缺氧复氧后小鼠缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的变化

目的：观察缺氧复氧对小鼠肺组织中缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响，探讨缺氧与血管新生的关系及复氧的作用。方法：实验于2005-05／06在哈尔滨医科大学附属第二医院动物室进行。实验用雄性昆明小鼠48只，随机分为4组，缺氧3d组、缺氧6d组、缺氧复氧组和对照组，每组12只。在3个体积分数为0．1的低氧舱内分别放入缺氧3d组小鼠，缺氧6d组小鼠、缺氧复氧组（缺氧3d复氧3d）小鼠。对照组小鼠在常温常氧环境下饲养6d。各组小鼠实验结束后麻醉状态下取材。用免疫组织化学技术检测小鼠在肺组织中的缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子蛋白表达的变化。缺氧诱导因子1α表达的阳性及血管内皮生长因子根据阳性细胞判断标准分为（-），（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）。结果：①缺氧时间与缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子表达的关系：小鼠肺组织中的缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子在缺氧3d，6d时的表达呈现递增趋势，随缺氧时间的延长而表达增强（缺氧诱导因子1α阳性率：缺氧3d组为67％，缺氧6d组为75％；血管内皮生长因子阳性率：缺氧3d和6d组均为83％）。②缺氧与缺氧复氧对缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的表达的影响：缺氧复氧组与缺氧组比较缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子蛋白表达有显著下降（缺氧诱导因子1α阳性率：缺氧3d组为67％，缺氧复氧组为58％；血管内皮生长因子阳性率：缺氧3d组为83％，缺氧复氧组为75％）③缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子的关系：缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子表达呈正相关（r=0．730，P=-0．007）。结论：缺氧可以上调小鼠肺组织中的血管内皮生长因子，引起血管新生，但它可能是可逆的。     

缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mRNA表达及金雀异黄素的抑制作用

目的：观察缺氧对人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mRNA表达的诱导作用，以及金雀异黄素对其血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用。方法：实验于2004—02／12在南京医科大学生理学实验室完成。视网膜色素上皮细胞缺氧(体积分数为0．05的CO2／体积分数为0．95的N2)2，12，24，36h后，用反转录聚合酶链反应检测该区域血管内皮生长因子mRNA表达；细胞用50，100，200μmol／L金雀异黄素和50μmol／L PD98059预处理后缺氧2和24h，用反转录聚合酶链反应检测人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子mRNA表达，用酶联免疫吸附分析检测细胞培养液上清中血管内皮生长因子蛋白表达。结果：①缺氧2，12，24，36h人视网膜色素上皮细胞19细胞血管内皮生长因子mRNA表达是正常组的2．6，3．1，8．4，2．9倍(P&;lt;0．05，n=8)。②缺氧2h：50，100，200μmol／L金雀异黄素和50μmol／LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的51．1％，71．6％．79．7％和55％(P=0．01，n=10)，蛋白表达分别为(97．00&;#177;12．79)，(58．85&;#177;20．21)．(37．93&;#177;14．41)，(57．83&;#177;9．66)ng／L。③缺氧24h：50，100，200μmol／L金雀异黄素和50μmol／LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的55．0％，78．7％，90．7％和67．2％(P=0．000，n=10)，蛋白表达分别为(189．60&;#177;20．20)，(117．70&;#177;21．97)，(49．7&;#177;13．17)，(86．33&;#177;12．47)ng／L。结论：缺氧对血管内皮生长因子mRNA表达的诱导呈时间依赖性；金雀异黄素可以在转录及转录后水平抑制缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子表达的上调。金雀异黄素对血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用也呈浓度依赖性。     

应用成纤维细胞胶原网格体外三维培养模型观察重组核心蛋白多糖固相态时对转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的应答

目的：模拟体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1接触方式，研究核心蛋白多糖在固相抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用。 方法：实验于2005-01／09在广州市创伤研究所完成。①实验成纤维细胞的组织来源：取材于广州市红十字会医院，患者自愿，正常皮肤为包皮。取新鲜包皮，修除表皮和皮下组织，加入含体积分数0．02的胎牛血清的DMEM培养，实验用第4-8代细胞。②采用醋酸法从鼠尾腱中提取Ⅰ型胶原，使用浓度为2g/L，网格胶原终浓度为1g／L，成纤维细胞密度为1&;#215;10^9L^-1将胶原细胞混悬液按2mL／皿均匀加入直径35min的培养皿内，37℃培养10min，混悬液便形成凝胶即成纤维细胞胶原网格，再加入相应的培养液。分为4组：对照组、核心蛋白多糖组、转化生长因子β1组、转化生长因子β1＋心蛋白多糖组。③观察成纤维细胞胶原网格的收缩，Western blot法检测成纤维细胞胶原网格中成纤维细胞纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的表达，反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达。 结果：①成纤维细胞胶原网格收缩的变化：对照组成纤维细胞胶原网格培养12h，收缩到起始面积的（81．2&;#177;4．9）％，12-24h收缩加剧，在24h收缩到起始面积的（47．4&;#177;4．7）%，以后收缩减慢，在48h收缩到起始面积的（37．3&;#177;3．6）％，72h收缩到起始面积的（29．6&;#177;3．6）％，96h收缩到起始面积的（28．7&;#177;2．8）％，以后不再收缩；核心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在12，24，48，72，96h均高于对照组（P〈0．05）：转化生长因子β1组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均低于对照组（P〈0．01）；转化生长因子β1＋心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均高于转化生长因子β1组（P〈0．05），与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。 ②成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的变化：核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（1391．61&;#177;126．27，525．97&;#177;60．10），与对照组（1474．52&;#177;133．84，569．41&;#177;62．55）比较无显著差异（P〉0．05），转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（2909．77&;#177;264．04，2725．46&;#177;150．54）显著高于对照组（P〈0．01），转化生长因子β1＋核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达（1775．25&;#177;161．09，926．34&;#177;51．16）显著低于转化生长因子β1组（P〈0．05），且与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。③成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的变化：核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．19&;#177;0．05，0．07&;#177;0．02），与对照组（0．2l&;#177;0．06，0．08&;#177;0．03）比较无显著差异（P〉0．05），转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．86&;#177;0．15。0．36&;#177;0．10）显著高于对照组（P〈0．01），转化生长因子β1＋核心蛋白多糖组纤渣酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达（0．34&;#177;0．09，0．13&;#177;0．04）显著低于转化生长因子β1组（P〈0．05），且与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。 结论：重组核心蛋白多糖融入胶原凝胶，能显著抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用，表明在体内核心蛋白多糖具有拮抗转化生长因子β1的作用。     

Na^＋／H^＋交换抑制剂HMA抑制低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的：观察低氧培养对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。以及Na^＋／H^＋交换抑制剂HMA对此增殖效应的抑制作用。 方法：实验于2004-12／2005-06在第四军医大学病理生理学教研室完成。健康SD大鼠2只，分离培养肺动脉平滑肌细胞，选择3-6代生长良好的细胞在常氧（O2的体积分数为0．21）或低氧（O2的体积分数为0．02）条件下培养，并分别给予0．3，1，3和10μmol／L等不同浓度的HMA（n=8），采用噻唑蓝比色实验和测定细胞总蛋白含量的方法观察细胞增殖情况，同时光镜观察细胞形态并测定培养液上清乳酸脱氢酶活力以反映药物的非特异性细胞毒作用。 结果：实验所用细胞样本均进入结果分析。①体积分数为0．02氧浓度较体积分数为0．05氧浓度下培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞生长曲线抬高，低氧刺激24h增殖达到高峰。②体积分数为0．05血清培养使此增殖效应更为显著[噻唑蓝光吸收值无血清常氧组（0．238&;#177;0．011），无血清低氧组（0．280&;#177;0加9），体积分数为0．05血清常氧组（0．313&;#177;0．013），体积分数为0．05血清低氧组（0．389&;#177;0．011）]。③HMA可以抑制增殖，显著降低噻唑蓝吸光度值[对照组（0．391&;#177;0．011），0．3μmol／L组（0．377&;#177;0．010），1μmol／L组（0．328&;#177;0．012），3μmol／L组（0．289&;#177;0．006），10μmol／L组（0．246&;#177;0．007）]。④细胞总蛋白含量也显著降低[对照组、0．3μmol／L组、1μmol／L组、3μmol／L组、10μmol／L组分别为（193．30&;#177;8．51）．（177．63&;#177;821），（166．84&;#177;9．48），（155．72&;#177;10.46）和（135．13&;#177;10．30）mnol／L]。⑤各浓度处理组细胞形态无改变，培养液上清乳酸脱氢酶活力也无明显变化[对照组、0．3μmol／L组、1μmol／L组、3μmol／L组、10μmol／L组分别为（212．23&;#177;8．44），（208．80&;#177;6．37），（209．79&;#177;7．12），（208．77&;#177;7．33），（215．42&;#177;7．81）U／L]，细胞无明显损伤。 结论：0．3-10μmol／L浓度的Na^＋／H^＋交换抑制剂HMA可以有效抑制低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌增殖，此作用不是非特异的细胞毒作用所致。     

高压氧治疗前后缺氧缺血性脑病新生儿心肌酶的变化

目的：监测高压氧治疗前后新生儿缺氧缺血性脑病心肌酶谱的动态变化，以评价高压氧对新生儿缺氧缺血性脑病的应用价值。方法：①选择2001-12／2004-12解放军总医院第三○九临床部小儿内科足月缺氧缺血性脑病患儿76例。监护人同意参加。将患儿随机分为2组．每组38例，分别为高压氧治疗组和对照组。②两组全部给予常规治疗。高压氧治疗组在此基础上于入院24h内应用高压氧治疗，1次／d、共10次，高压氧舱为单人高压氧舱，以纯氧加压，压力为0．04～0．05MPa，加压10min，稳压40min，减压10min，稳压时舱内氧浓度72％～76％；两组患儿分别于治疗前及治疗后5和10d取股静脉血2mL，采用OLYMPUS AU 600生化分析仪测定患儿5种心肌酶(谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶)。③计量资料差异性测定采用τ检验。结果：缺氧缺血性脑病患儿72例均进入结果分析。①高压氧治疗组治疗前缺氧缺血性脑病患儿5种心肌酶谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶：与对照组治疗前接近(P&;gt;0．05)。②高压氧治疗组治疗后5和10d缺氧缺血性脑病患儿5种心肌酶水平明显低于对照组治疗后5和10d[高压氧治疗组治疗后5d：(2．50&;#177;0．58)，(3．98&;#177;0．60)，(4．80&;#177;0．58)，(9．01&;#177;1．14)，(1．71&;#177;0.27)μkat／L；高压氧治疗组治疗后10d(0．62&;#177;0．20)，(2．80&;#177;0.41)，(2．52&;#177;0．42)，(2．60&;#177;0.38)，(0．35&;#177;0．11)μkat/L；对照组治疗后5d：(4．76&;#177;0．54)，(5．43&;#177;0．42)，(7.38&;#177;0．64)，(19．74&;#177;1．64)，(3.43&;#177;0.54)μkat/L；对照组治疗后10d：(2．81&;#177;0.40)，(4．27&;#177;0.70)，(5．44&;#177;0.71)，(13．11&;#177;1．08)，(1．00&;#177;0．22)μkat／L，τ=11．15～56．73,P&;lt;0．05)]。结论：①谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶升高对心肌损害的诊断最有意义，而缺氧缺血性脑病的轻重与心肌损害的轻重相一致，亦与缺氧轻重相一致，故测定血清心肌酶对判断缺氧缺血性脑病病情非常重要。②高压氧0．04～0．05 MPa可阻断缺氧所致脑组织的一系列病理过程，促使受损脑细胞尽快恢复。③常规治疗配合高压氧治疗可改善缺氧缺血性脑病患儿心肌酶。     

低氧诱导因子在低氧应答及运动时的表达

目的:低氧诱导因子1是细胞在缺氧条件产生的核蛋白,它与靶基因结合,促进靶基因的转录,使机体产生一系列缺氧适应反应。对低氧诱导因子1的结构作用途径以及低氧诱导因子在低氧应答以及在运动时骨骼肌中的表达作一综述,以能够找到提高训练质量乃至运动水平的方法。资料来源:应用计算机检索PubMed1996-01/2003-06的相关文章,同时根据相关的参考文献检索了部分文章,检索词“hypoxiainduciblefactor-1,sport,hypoxia,skeletalmuscle”,限定语言种类为English。同时计算机检索http://www.cnki.net/index.htm1994/2003的相关文章,限定文章种类为中文,检索词“低氧诱导因子,运动,低氧,骨骼肌”。另外参考了2003香山科学会议———低氧与健康研究应受生物学和医学界关注(摘要汇编)。资料选择:对资料进行初审,选取实验包括低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面的文献,查找相关文献的全文,判断是否确实是相关研究。纳入条件:①随机对照实验研究。②实验包括对照组与干预组。排除条件:①综述文献。②重复的同一研究。资料提炼:共查找到26篇相关研究文章,18篇符合纳入标准。排除的8篇系为同一研究和综述文献。资料综合:通过18个实验对低氧运动模型中关于低氧诱导因子在骨骼肌中的表达、作用及其含量的变化方面作了相关的研究。结论:低氧诱导因子在低氧应答以及运动的骨骼肌中起着承上启下的作用,通过干预因素诱导/影响低氧因子的合成,乃至加强/减弱其链的作用。     

缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:取SD新生大鼠(1～3 d)分离培养成心肌细胞;在培养的第3 d将心肌细胞随机分为3组(每组重复6次):正常对照组、H/R组、DMOG+H/R组;建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂甲基异二酰基甘氨酸进行干预;采用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清液中的肌钙蛋白I含量,采用RT-PCR法检测各组缺氧诱导因子-1α及下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1 mRNA水平。结果:培养4～6 h的乳鼠心肌细胞开始贴壁生长,12～24 h明显增殖,3～4 d后细胞融合成片;心肌细胞由圆形变为梭形、星形、多角形,并出现自发性节律性搏动;与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的肌钙蛋白I含量明显增高(P<0.01),且缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高(P<0.01,P<0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高而肌钙蛋白I含量明显降低(P<0.05)。结论:本...     

Concepts in hypoxia reborn

The human fetus develops in a profoundly hypoxic environment. Thus, the foundations of our physiology are built in the most hypoxic conditions that we are ever likely to experience: the womb. This magnitude of exposure to hypoxia in utero is rarely experienced in adult life, with few exceptions, including severe pathophysiology in critical illness and environmental hypobaric hypoxia at high altitude. Indeed, the lowest recorded levels of arterial oxygen in adult humans are similar to those of a fetus and were recorded just below the highest attainable elevation on the Earth's surface: the summit of Mount Everest. We propose that the hypoxic intrauterine environment exerts a profound effect on human tolerance to hypoxia. Cellular mechanisms that facilitate fetal well-being may be amenable to manipulation in adults to promote survival advantage in severe hypoxemic stress. Many of these mechanisms act to modify the process of oxygen consumption rather than oxygen delivery in order to maintain adequate tissue oxygenation. The successful activation of such processes may provide a new chapter in the clinical management of hypoxemia. Thus, strategies employed to endure the relative hypoxia in utero may provide insights for the management of severe hypoxemia in adult life and ventures to high altitude may yield clues to the means by which to investigate those strategies.     

Exploiting the hypoxia response

Hypoxia (low oxygen) is a defining physiological feature of a number of diseases, including cancer, cardiovascular disease and retinopathy. Hypoxia plays an active role in the pathology of these diseases through its impact on gene expression, thereby making the hypoxia-signaling pathway a key target for the development of novel molecular therapies. This review focuses on how the elucidation of this pathway has led to the development of novel therapeutic strategies, including physiologically targeted gene therapy and the identification of novel therapeutic targets within the hypoxia-signaling pathway.     

Managing hypoxia and hypercapnia

The main objective when treating hypoxia (a deficiency of oxygen in the tissues) and hypercapnia (a high concentration of carbon dioxide in the blood) is to give sufficient oxygen to ensure that the patient is safe and his or her condition does not deteriorate. However, while giving too little oxygen can result in hypoxia, which can result in death, excessive oxygen therapy can also be dangerous for some patients.