肾气丸“阴中求阳”配伍对方中乌头碱和次乌头碱含量的影响

目的测定肾气丸各拆方组水煎液中乌头碱、次乌头碱的含量,分析肾气丸“阴中求阳”配伍对方中乌头碱、次乌头碱含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2（即肾气丸全方）,采用高效液相色谱法测定肾气丸各拆方组水煎液中乌头碱、次乌头碱的含量。结果各组水煎液中均未检测出乌头碱含量,阴阳双补组-2、阴阳双补组-1中次乌头碱含量均低于补阳组-1、补阳组-2,阴阳双补组-2中次乌头碱含量低于阴阳双补组-1,且都具有统计学意义。结论肾气丸“阴中求阳”配伍能减小水煎液中次乌头碱的含量从而有降低毒性的作用。     

肾气丸"阴中求阳"配伍对丹皮酚含量的影响

目的 测定丹皮酚在肾气丸各拆方组水煎液中的含量,分析肾气丸"阴中求阳"配伍对丹皮酚含量的影响.方法 将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2(即肾气丸全方),采用高效液相色谱法测定各肾气丸拆方组水煎液中丹皮酚的含量.结果 阴阳双补组-2水煎液中丹皮酚含量高于补阳组-2和阴阳双补组-1;阴阳双补组-1和补阳组-2水煎液中丹皮酚含量高于补阳组-1,且都具有统计学意义.结论 肾气丸"阴中求阳"配伍能增大水煎液中丹皮酚的含量,且肾气丸中的"三泻"药物(茯苓、泽泻、丹皮)也有增强此作用的趋势.     

肾气丸“阴中求阳”配伍对桂皮醛含量的影响

目的测定桂皮醛在肾气丸各拆方组水煎液中的含量,分析肾气丸"阴中求阳"配伍对桂皮醛含量的影响。方法将肾气丸组方药物拆方分为补阳组-1、补阳组-2、补阴组-1、补阴组-2、阴阳双补组-1和阴阳双补组-2(即肾气丸全方),采用高效液相色谱法测定各肾气丸拆方组水煎液中桂皮醛的含量。结果阴阳双补组-2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组-2和阴阳双补组-1,阴阳双补组-1和补阳组-2水煎液中桂皮醛含量高于补阳组-1,且都具有统计学意义。结论肾气丸"阴中求阳"配伍能增大水煎液中桂皮醛的含量,且肾气丸中的"三泻"药物(茯苓、泽泻、丹皮)也有增强此作用的趋势。     

肾气丸"阴中求阳"配伍对肾阳虚大鼠下丘脑多巴胺及五羟色胺含量的影响

目的 用肾气丸各拆方组水煎液灌胃肾阳虚大鼠,测定灌胃后各组大鼠下丘脑中多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)的含量,分析肾气丸"阴中求阳"治疗肾阳虚证的机理.方法 以氢化可的松25 mg/(kg·d)注射大鼠,连续12 d,同时以各肾气丸拆方组水煎液灌胃,于灌胃第21天,麻醉大鼠,取出下丘脑,称重,以5%高氯酸匀浆,高速低温离心后分取上清液,用高效液相色谱法检测DA,5-HT的含量.结果 与正常组比较,模型组大鼠下丘脑中DA、5-HT含量升高,经灌胃给药后,各拆方组大鼠下丘脑中DA,5-HT的含量均有不同程度的降低,以阴阳双补组含量最低,而补阳组降低不明显,其中阴阳双补1组含量低于补阳1组,阴阳双补2组含量低于补阳2组,具有统计学意义.结论 降低下丘脑中多巴胺、五羟色胺的含量,可能是肾气丸"阴中求阳"配伍治疗肾阳虚证的机理之一.     

肾气丸"阴中求阳"配伍对肾阳虚大鼠细胞因子含量的影响

目的 用各拆方肾气丸灌胃肾阳虚大鼠,测定灌胃后各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,分析肾气丸"阴中求阳"的配伍治疗肾阳虚证的机理.方法 以氢化可的松25 mg/(kg·d)注射大鼠,连续12 d,同时以各肾气丸拆方组水煎液灌胃,于灌胃第21天,麻醉大鼠,心脏取血,离心取上清液,用ELISA法检测大鼠血清中IL-1β,IL-2,IFN-γ,TNF-α的含量.结果 与正常组比较,模型组IL-1β、IL-2的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者的含量均有不同程度增加,其中阴阳双补2组含量高于补阳2组,阴阳双补1组含量高于补阳1组,且阴阳双补1组中IL-1β含量高于补阴1组,具有统计学意义.与正常组比较,模型组大鼠血浆中IFN-γ、TNF-α的含量降低,经灌胃后,各拆方组大鼠血浆中二者含量均有不同程度的增加,但增加并不显著.结论 肾气丸"阴中求阳"的配伍可能是通过增加血浆中IL-1β、IL-2的含量治疗肾阳虚证,故增加血浆中IL-1β、IL-2的含量,可能是肾气丸"阴中求阳"配伍治疗肾阳虚证的机理之一.     

电针联合乌头碱改善大鼠心力衰竭的增效减毒作用观察

目的:观察电针联合乌头碱对心力衰竭大鼠血流动力学、超声心动图及心律失常情况的影响,探讨其增效减毒效应。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、乌头碱组及乌头碱+电针组,每组6只。采用股静脉注射盐酸普萘洛尔复制心力衰竭大鼠模型。造模成功10 min后,乌头碱组予以乌头碱持续给药治疗1 h(40μg/kg);乌头碱+电针组在乌头碱组治疗的基础上同时给予电针"内关"治疗(3 mA,2 Hz/15 Hz, 30 min)。采用左心室导管、小动物超声成像系统观察造模前、造模后、给药即刻和给药后15、30、60 min时左室内压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))、左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)的变化;通过心电图观察比较各组大鼠心律失常情况。结果:与对照组比较,造模后模型组大鼠LVSP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、EF、FS均明显下降且能维持至实验结束(P0.01)。乌头碱组大鼠给药15 min时,LVSP高于模型组(P0.05);给药15、60 min时,+dp/dt_(max)高于模型组(P0.05);给药15 min起,各时点EF、FS均明显高于模型组(P0.05,P0.01)。与乌头碱组比较,在给药各个时间点,乌头碱+电针组LVSP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)均明显升高(P0.01,P0.05),EF、FS在给药即刻、30 min、 60 min时明显升高(P0.01,P0.05)。乌头碱+电针组大鼠心律失常发生率为50.0%,明显低于乌头碱组(100%,P0.05);乌头碱+电针组大鼠心律失常评分明显低于乌头碱组(P0.05)。结论:乌头碱具有一定的强心作用,但易导致心律失常的发生。而电针与乌头碱联用,不仅可以更明显地改善心力衰竭大鼠心脏收缩功能,且可以减小乌头碱的毒性反应。     

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。     

HPLC法测定嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量

目的建立测定嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的方法。方法采用HPLC法测定,色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为甲醇-水-氯仿-冰醋酸-三乙胺(50∶50∶2∶1∶0.6);柱温为25℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm。结果乌头碱、中乌头碱和次乌头碱在30～150 mg/L范围内呈良好的线性关系,RSD分别为0.73%,0.84%和0.92%。结论本方法简便、快速、准确,适应于嘎日迪五味丸中的乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的含量测定。     

附子总生物碱中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱在大鼠体内的药动学研究

目的:研究口服附子总生物碱后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱在大鼠体内的药动学特征.方法:口服给予大鼠附子总生物碱后,断尾取血,采用甲醇沉淀冷冻干燥法处理血浆样品.采用HPLC-MS/MS分析方法检测乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度.药时数据用中国药理学会3p97药代动力学程序计算主要药动学参数.结果:本实验建立的用于检测大鼠血浆的HPLC-MS/MS分析方法,其灵敏度高、专属性强、稳定性好,能很好的符合生物样品分析的要求.乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学曲线经拟合均符合口服给药的二室模型.乌头碱主要药动参数:T1/2α=3.32±1.56 min,T1/2β=886.61±242.14 min,AUC=86.558±9.462 mg·L-1·min-1,Tpeak=6.989±1.546 min,Cmax=83.549±10.459 ng·mL-1.新乌头碱主要药动参数:T1/2α=15.498 9±4.871 2 min,T1/2β=1 255.808±684.891 min,AUC=297.212±74.642 ng·mL-1·min,Tpeak=15.782±7.541 min,Cmax=202.983±30.781 ng·mL-1.次乌头碱主要药动参数:T1/2α=125.482±51.654 min,T1/2β=1007.757±349.485 min,AUC=241.206±9.147 ng·mL-1·min,Tpeak=16.765±5.478 min,Cmax=164.302±20.891 ng·mL-1.结论:灌胃给予附子总生物碱后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱在大鼠体内的过程符合口服二室模型.     

LC-MS/MS 比较研究附子配伍甘草对大鼠体内次乌头碱药动学影响

目的:建立大鼠血浆中次乌头碱的LC-MS/MS检测方法,用于研究附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学的变化。方法:大鼠分别灌服附子单煎液、附子甘草合煎液,其中次乌头碱含量分别为73.29μg.kg-1、34.85μg.kg-1,LC-MS/MS测定次乌头碱血药浓度,采用3P97药动学软件分别计算其药动学参数。结果:血浆中次乌头碱在1.98～198 ng.mL-1范围内呈现良好的线性关系。附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内Tmax显著延长,CL显著减小,AUC/dosage显著增大(P<0.05)。结论:附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学行为发生显著改变。     

从拆方肾气丸对肾阳虚模型大鼠HPA轴的影响初探"阴中求阳"配伍机理

目的:从拆方肾气丸对肾阳虚模型大鼠下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴(HPA轴)的影响初步探讨“阴中求阳”的配伍机理。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,补阳组1、2,补阴组1、2,阴阳双补组1、2。臀部肌肉注射氢化可的松12天复制肾阳虚模型。成模后各组灌胃治疗20天,第21天上午8时取血,测血浆ACTH、COR含量,取下丘脑、垂体、肾上腺组织称重。结果:阴阳双补组能增加肾阳虚模型大鼠体重,抑制下丘脑、垂体、肾上腺组织萎缩,提高血浆ACTH、COR含量,其作用显著优于补阳组或补阴组。补阳组与补阴组比较,在增加模型大鼠体重,抑制下丘脑、垂体、肾上腺组织萎缩方面,补阴组作用优于补阳组。各治疗组中,补阳组1疗效最差。结论:对于肾阳虚证,单一补阳效果不好,阴阳双补可提高疗效。初步阐释了“阴阳互根”之中医理论及“阴中求阳”之配伍机理。     

从拆方肾气丸对肾阳虚模型大鼠HPA轴的影响初探“阴中求阳”配伍机理

目的:从拆方肾气丸对肾阳虚模型大鼠下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴(HPA轴)的影响初步探讨“阴中求阳”的配伍机理。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,补阳组1、2,补阴组1、2,阴阳双补组1、2。臀部肌肉注射氢化可的松12天复制肾阳虚模型。成模后各组灌胃治疗20天,第21天上午8时取血,测血浆ACTH、COR含量,取下丘脑、垂体、肾上腺组织称重。结果:阴阳双补组能增加肾阳虚模型大鼠体重,抑制下丘脑、垂体、肾上腺组织萎缩,提高血浆ACTH、COR含量,其作用显著优于补阳组或补阴组。补阳组与补阴组比较,在增加模型大鼠体重,抑制下丘脑、垂体、肾上腺组织萎缩方面,补阴组作用优于补阳组。各治疗组中,补阳组1疗效最差。结论:对于肾阳虚证,单一补阳效果不好,阴阳双补可提高疗效。初步阐释了“阴阳互根”之中医理论及“阴中求阳”之配伍机理。     

中药制剂乌头碱含量测定

目的:观察超高效液相色谱-质谱法测定中药制剂乌头碱的含量。方法:以参附注射液为例,采用超高效液相色谱-质谱法测定乌头碱含量,确定样品溶液p H值等最佳提取时间。精确程度定量乌头碱对照品储备液,制备成1μg·L~(-1)乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,然后依次稀释,将乌头碱浓度分别稀释到100 ng·L~(-1)、10 ng·L~(-1)、2.5 ng·L~(-1)、1.0 ng·L~(-1)、0.25 ng·L~(-1)、0.1 ng·L~(-1)。按照设定色谱参数条件进行检测,记录峰值面积。结果:在0.1~100 ng·L~(-1)内,乌头碱线性回归方程为y=492.1x+122.3(r=0.999 2),线性关系良好;新乌头碱线性回归方程为y=117.1x+218.3(r=0.999 2),线性关系良好;次乌头碱线性回归方程为y=355.9x+98.34(r=0.999 6),线性关系良好。乌头碱、新乌头碱、次乌头碱加样回收率分别为100.3%、97.7%、97.4%,乌头碱峰面积RSD为1.6%,新乌头碱峰面积RSD为1.6%,次乌头碱峰面积RSD为2.9%。结论:超高效液相色谱-质谱法测定中药制剂乌头碱含量稳定性好,能够保证用药安全,为正确评价药学作用提供科学依据。     

高效液相色谱法测定巴特日丸中乌头碱及没食子酸含量

目的:高效液相色谱法测定巴特日丸中乌头碱和没食子酸的含量,为其质量控制提供依据。方法:采用高效液相色谱仪对巴特日丸中的乌头碱和没食子酸进行含量测定,分析相关性、稳定性、重复性和回收率。结果:采用高效液相色谱法测定巴特日丸中的乌头碱和没食子酸相关性、稳定性、重复性均理想,乌头碱的回收率为98.53%,RSD=0.75%;没食子酸的回收率为99.12,RSD=1.43%。结论:高效液相色谱法可以精密测定巴特日丸中的乌头碱和没食子酸,为巴特日丸的质量控制提供有效标准。     

液质联用技术分析次乌头碱在大鼠尿液中的代谢产物

目的:检测次乌头碱在大鼠体内的代谢产物及代谢途径。方法:采用液-液萃取法对灌胃给予次乌头碱的大鼠尿液样品进行纯化,利用高效液相色谱-离子阱串联质谱检测纯化样品,根据各保留时间对应化合物的多级串联质谱数据,并与文献对照,推断次乌头碱在大鼠尿液中代谢产物的结构。结果:与空白组大鼠尿液相比,在次乌头碱给药大鼠的尿液中共检测到4个乌头类生物碱,分别为次乌头碱原型化合物,18-O-去甲基次乌头碱,N-去甲基次乌头碱,被标识为羟基化的代谢物(结构有待确证)。结论:次乌头碱在大鼠体内可能发生了去甲基、羟基化代谢反应,为该成分的药效作用研究提供参考。     

流感丸中乌头碱的限量检查及HPLC含量测定方法的建立

目的:建立流感丸中乌头碱的限量检查及HPLC含量测定方法。方法:采用薄层色谱法对流感丸中乌头碱进行限量检查;采用高效液相色谱法测定流感丸中乌头碱的含量。结果:薄层色谱方法简便、专属性强,乌头碱在8.0~20μg/m L范围内呈良好线性关系,平均加样回收率为98.85%(RSD%=1.43%)。结论:该法稳定、快速、简便,结果准确、可靠,可用于流感丸中乌头碱的限量检查及含量测定。     

HPLC法测定草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量

目的:建立测定草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。应用INSTRU LLC Plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-0.3 mol/m L三乙胺(65:35)为流动相;流速为0.8 m L·min-1;检测波长为235 nm;柱温为40℃。结果:新乌头碱在0.3515~2.1090μg(r=0.9998),乌头碱在0.1500~0.9000μg(r=0.9995),次乌头碱在0.0705~0.4230μg(r=0.9997)范围内,与峰面积具有良好的线性关系;平均回收率为98.80%,97.84%,99.63%,RSD为1.54%,1.15%,1.60%(n=6)。结论:该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于草乌芽中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量测定。     

乌头碱上消化道吸收实验研究

以心电图改变,主要是房宣传导阻滞作为乌头碱吸收的明确指标,对乌头碱经口给药的吸收部位进行研究。实验表明,乌头碱可在大鼠的食道、胃内吸收,大鼠食道吸收乌头碱的能力明显强于胃。     

甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱对慢性心衰大鼠细胞凋亡通路的影响

目的探讨甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱对慢性心衰大鼠的抗心衰作用及可能机制。方法 60只SD大鼠通过主动脉弓缩窄术造成慢性心衰模型,4周后随机分为假手术组(6只)、模型组(7只)、地高辛组(8只)、次乌头碱组(次乌组,9只)、甘草次酸+次乌头碱组(甘次+次乌组,9只)、甘草苷+次乌头碱组(甘苷+次乌组,9只)、甘草次酸+甘草苷+次乌头碱组(甘次+甘苷+次乌组,9只)。连续给药1周后,于第7天处死大鼠,处死前取血并行超声心动图,测得射血分数(EF)及缩短分数(FS)情况;并应用ELISA法检测血清B型钠尿肽(BNP)改变;应用免疫组化法检测心肌细胞凋亡通路Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达情况;并应用Western blot法检测Fas、Fas-L蛋白表达情况。结果与模型组相比,除次乌组外,其它各药物配伍组的Bcl-2表达均高于模型组,同时Bax、Caspase-3、Fas与Fas-L表达及EF、FS及BNP值均低于模型组;其中以甘次+甘苷+次乌组作用效果最明显。结论甘草次酸、甘草苷配伍次乌头碱可下调EF、FS及BNP的水平及促凋亡蛋白表达,上调抑制凋亡蛋白表达,其可能是甘草配伍附子对慢性心衰的抗凋亡作用机制之一。     

HPLC测定麝香乌龙丸中乌头碱含量

目的:建立麝香乌龙丸中乌头碱的含最测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法测定麝香乌龙丸中乌头碱的含量.色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动卡甘为甲醇-水-乙腈(67:33:2)内含6 mmol/L十二烷基硫酸钠和20 mmol/L磷酸二氢钠;检测波长为235 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为室温.结果:麝香乌龙丸中乌头碱的含量线性范围为0.10～5.0 μg/mL,r=0.999 6,最低检测限为0.05 μg/mL,平均回收率为98.33%.结论:所建方法具有快速、简便、灵敏、准确的优点,适合麝香乌龙丸中乌头碱的含量测定.