水通道蛋白1在高氧肺损伤中的表达变化

目的：探讨AQP1在高氧肺损伤中的表达变化及其在肺水肿中的作用机制。方法：将2周左右Wistar大鼠32只随机分为空气对照组和高氧暴露不同时间组,分别置于常压高氧仓中（氧体积分数〉1．95）和常压空气中,采用RT—PCR和免疫组化方法观察AQP1的分布和表达变化,并对支气管肺泡灌洗液（BALF）中的蛋白含量、肺通透系数、肺湿／干重比（W／D）及肺组织病理学改变也进行了对比分析。结果：高氧组3天时肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,7天时炎性改变进一步加重,14天时开始出现肺纤维化的倾向。W／D值、BALF蛋白含量和肺通透系数在3、7、14天时均高于空气组。肺组织AQP1mRNA的表达在高氧3、7和14天时均明显低于空气组（P〈0．05）,随暴露时间延长持续下降,在14天时有所恢复;免疫组化显示AQP1主要分布在支气管和肺泡壁的毛细血管内皮细胞及间质细胞,高氧损伤后肺AQP1的表达部位未发生改变。AQP1的蛋白表达变化与其mRNA表达变化结果是一致的。结论：高氧性肺损伤可能存在AQPs的基因表达调控失衡,这可能是高氧性肺损伤肺水肿形成的原因之一。     

高氧暴露早产大鼠肺组织线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达

目的 初步分析高氧暴露下早产大鼠肺组织线粒体蛋白质表达谱的改变,并对还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4(ND4)的动态表达进行研究.方法 建立高氧暴露早产大鼠动物模型,采用双向电泳检测线粒体蛋白质差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达.结果 与空气组比较,高氧暴露4 d导致46种肺组织线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露1、4和7 d,早产大鼠肺组织ND4 mRNA和蛋白表达均较空气对照组显著降低(均P＜0.01),10 d时,差异则无显著性意义(P＞0.05).结论 高氧暴露导致肺细胞线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素.     

MMP-9和TIMP-1在新生大鼠持续高氧暴露后肺组织中的动态表达

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织中的动态变化和意义。方法:足月新生大鼠生后12h分别持续吸入0.90～0.95的高氧和空气,于1,3,7,14,21d应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测肺组织MMP-9和TIMP-1蛋白及mRNA表达。结果:MMP-9在高氧3d时蛋白和mRNA表达均较空气组增强(P<0.05,P<0.01);TIMP-1蛋白在高氧组表达高于空气组,3d和7d比较P<0.05,14d和21d比较P<0.01;TIMP-1 mRNA水平高氧组高于空气组,3d和7d比较P<0.05,和14d比较P<0.01,和21d比较无差异。结论:高氧暴露后MMP-9和TIMP-1的表达在不同阶段的变化不一致,MMP-9/TIMP-1平衡状态遭到破坏,可能是高氧后胶原异常沉积以及正常肺泡化过程受阻的重要因素。     

高氧致新生大鼠慢性肺损伤肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达的变化

目的观察血管紧张素II1型受体(AT1R)在高氧致慢性肺疾病演变过程中的变化。方法足月新生大鼠生后24h内分别置在85%～90%玻璃氧舱和空气中持续暴露,实验开始后的第1,3,7,14,21d留取肺组织,HE染色观察肺组织病理改变、免疫组化和RT-PCR方法检测肺组织AT1R蛋白和mRNA表达。结果新生大鼠肺组织AT1R主要定位在肺泡上皮细胞、间质细胞、间质巨噬细胞、支气管和毛细血管外膜;空气组3d后表达逐渐下降,21d仅在肺泡上皮细胞及血管外膜弱表达;高氧组21d在损伤部位的间质巨噬细胞、成纤维细胞仍有较强的免疫染色。高氧组1,3,7dAT1R蛋白及mRNA表达与空气组无明显差别,14d和21d时较空气组表达显著增强(P<0.01)。结论血管紧张素II作为AT1R配体可能参与高氧慢性肺损伤的发生。     

E2F1蛋白在高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织的动态表达及意义

目的:通过检测E2F1 蛋白在高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织中的动态表达, 初步探讨E2F1 蛋白与慢性肺疾病肺间质纤维化发生发展的关系。方法:剖宫术取出孕21 d Wistar 大鼠作为早产鼠, 生后12 h 随机分为高氧组和对照组, 高氧组持续暴露于90% 氧气中, 空气组置于同一室内常压空气中。分别于暴露3, 7, 14 d 时, 每组取动物10 只, 留取其肺组织标本。应用HE 染色观察不同时间点其肺组织病理改变, 在光镜下进行肺组织纤维化评分, 并采用免疫组织化学法及Western 印迹检测不同时间点肺组织E2F1 蛋白的表达。结果:早产鼠高氧暴露3 d 后未出现纤维化改变, 7 d 后出现少许纤维化改变, 14 d 后纤维化改变明显;E2F1 在高氧暴露3 d 在肺组织中E1F1 蛋白表达虽较同时间点空气组有所升高, 但差异无统计学意义(P>0.05), 高氧暴露7 d 及14 d E2F1 蛋白表达明显高于同时间点空气组(P<0.05, P<0.01)。结论:高氧导致早产鼠肺组织E2F1 表达持续性增高, 其异常表达可能是导致肺成纤维细胞过度增殖, 最终发生肺间质纤维化的重要原因。     

高氧对发育期肺细胞凋亡和Notch1信号通路的影响

目的 观察高氧暴露下发育期肺组织细胞凋亡和Notch1的表达变化,探讨其在新生大鼠高氧肺损伤机制中的作用。 方法 将120只足月SD 新生大鼠随机分为空气组 (N组) 和高氧组 (O组),每组60只。O组出生后立即置入氧气（体积分数）>95%的持续高氧环境中饲养,N组则在空气中饲养。两组分别于暴露高氧或空气4、7、14 d 时随机抽取8只,麻醉后取肺组织, 比较两组肺组织病理学改变、凋亡指数;检测Notch1在发育期肺组织中的表达变化。结果 O组死亡率高于N组,且O组各时间点肺组织出现典型的急慢性肺损伤病理学改变;TUNEL细胞凋亡检测发现O组各时点细胞凋亡高于N组 (P<0.05);O组各时间点肺组织Notch1表达低于N组 (P<0.05)。结论 持续高浓度氧可致肺损伤、凋亡增加和发育受阻。高氧暴露可能通过下调Notch1信号表达调控肺细胞分化发育,利于肺损伤修复。     

Temporal Expression of Notch in Preterm Rat Lungs Exposed to Hyperoxia

Notch signaling is essential in tissue and organdevelopment. Signals transmitted through theNotch receptor, in combination with other factorsinfluence cell differentiation, proliferation and ap optotic events at all stages of development and re habilitation or remolding of tissues[1]. Previous re searches revealed that Notch receptor/ligand per sistently exists over the whole period of fetal lungdevelopment[2], but it is still unknown how theywork during the chronic lun…     

氧化苦参碱对新生鼠高氧性肺损伤的保护作用及机制探讨

目的观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织转化生长因子β1（TGF？β1）、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子（CTGF）水平的动态变化,以探讨氧化苦参碱对高氧性肺损伤的保护作用及机制。方法新生Wistar大鼠128只随机分为空气对照组、氧化苦参碱治疗组、盐水对照组和高氧组,每组各32只,高氧组、盐水对照组和氧化苦参碱治疗组的新生Wistar大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内,持续吸入高浓度氧（FiO2=0.90）21 d,造成高氧性肺损伤模型;空气对照组吸入空气。氧化苦参碱治疗组于生后当日始每日腹腔注射氧化苦参碱（100 mg/kg）,盐水对照组每日腹腔注射等量生理盐水。每组分别于实验开始后第3、7、14、21天随机选取8只麻醉后处死。肺组织采用免疫组化方法检测TGF？β1、Smad3、Smad7及CTGF蛋白的表达并同时观察肺组织形态学变化。结果与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰（P〈0.05或P〈0.01）,氧化苦参碱治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低（P〈0.05或P〈0.01）,Smad7蛋白表达明显增多（P〈0.01）。高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。氧化苦参碱治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论氧化苦参碱干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织TGF？β1、Smad3、CTGF蛋白表达,增加Smad7蛋白表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是氧化苦参碱对高氧性肺损伤具有保护作用的机制之一。     

重组人红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察重组人红细胞生成素(rhEPO)对新型支气管肺发育不良(BPD)早产鼠模型肺组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响.方法 60只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖(LPS)或磷酸盐缓冲液(PBS),孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6h内分为5组:PBS+空气组、PBS+高氧组、LPS+高氧组、PBS+高氧+rhE-PO组、LPS+高氧+rhEPO组.rhEPO(1 200 IU/kg)干预组于高氧暴露6h后开始第1次背部皮下注射,隔天1次,共7次.分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察各组生存率、体质量、肺质量并计算肺质量/体质量比值,观察肺组织病理变化,采用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录PCR(RT-PCR)法检测肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平.结果 与PBS+空气组比较,经高氧干预后早产鼠生存率降低、体质量减轻、肺质量增加,病理损伤加重,肺组织VEGF蛋白及mRNA表达水平降低,并且以LPS+高氧组更明显(P＜0.05),肺质量/体质量比值增加(P＞0.05);rhEPO干预后上述指标得到相应改善(P＜0.05).结论 rhEPO可能通过参与调解VEGF相关通路,对BPD模型早产鼠起到一定的干预和治疗作用,提高了生存率.     

Relationship between Notch Receptors and Hyperoxia-induced Lung Injury in Newborn Rats

Alveolar epithelia are the target cells of thehyperoxia lung injury. The repair of lung injuryentirely depends on the proliferation/differentia tion of Type Ⅱ alveolar epithelial cells (AECⅡ),which are stem cells of lung tissues and are in volved in the alveolization so as to form the alveo lar blood barrier. Currently, the regulating mecha nisms of the proliferation/differentiation of AECⅡhave become a hotpot. The Notch signaling, as anevolutionary cell i…     

高氧致新生鼠肺结构及VEGF的变化及相关分析

目的探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织结构,血管密度及VEGF蛋白的表达变化及相关性。方法新生Sprague-Dawley大鼠72只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧组吸入95%高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用HE染色和免疫组化法观察新生大鼠3d、7d、14d肺组织形态改变并作肺泡辐射状记数(Radial alveolar countsRAC),检测Ⅷ因子及VEGF蛋白表达。结果对照组大鼠生后随着肺发育,肺泡化逐渐完善,RAC计数、VEGF蛋白及Ⅷ因子表达逐渐增加。高氧组随着吸氧时间延长RAC计数、肺组织VEGF蛋白及Ⅷ因子表达均出现降低,并出现肺泡化阻滞,VEGF与Ⅷ因子始终具有相关性。结论 VEGF促进新生大鼠肺发育,新生大鼠高氧可抑制VEGF及Ⅷ因子在鼠肺内的表达,致肺泡化阻滞,出现类似早产儿支气管肺发育不良的肺组织形态学特征,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤机制中起重要作用。     

Nrf2激活对新生大鼠高氧致肺损伤的保护作用

目的 观察NF-E2相关因子2（Nrf2）激动剂对高氧致新生大鼠肺组织细胞凋亡的影响,探讨Nrf2激活是否对高氧致新生大鼠肺损伤具有保护作用。方法 将足月顺产SD 新生大鼠90只随机分为空气对照组( N组)、高氧组( O 组)和Nrf2组,每组各30只。O 组和Nrf2组新生鼠于出生后第1 d、第2 d分别腹腔注射生理盐水0.2 mL或Nrf2激动剂莱菔硫烷0.2 mL（30 mg/kg）,N组不予任何干预。O组和Nrf2组新生大鼠于第1次注射后置入氧体积分数>95%的高氧环境中持续饲养4 d,N组则持续于空气中饲养。3组新生大鼠麻醉后取肺组织,采用TUNEL染色比较3组新生大鼠肺泡细胞的凋亡指数(AI),采用免疫组化染色检测Nfr2在肺组织中的表达。结果 O组新生大鼠肺泡细胞AI值〔(28.8±3.0)%〕高于N组〔(0.7±0.6)%〕和Nrf2组〔(7.2±0.8)%〕,差异有统计学意义（P<0.01）。O组(926.80±130.51)和Nrf2组(1 038.40±151.12)肺组织Nrf2表达差异无统计学意义（P>0.05),但与N组(30.03±9.99)比较均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 Nrf2激动剂可减少高氧致新生大鼠肺泡细胞凋亡,对高氧引起的肺损伤具有一定的保护作用。     

Effects of hyperoxia on cytoplasmic thioredoxin system in alveolar type epithelial cells of premature rats

This study investigated the effects of hyperoxia on dynamic changes of thioredoxin-1 (Trx1) and thioredoxin reductase-1 (TrxR1) in alveolar type Ⅱ epithelial cells (AECⅡ) of premature rats. Pregnant Sprague-Dawley rats were sacrificed on day 19 of gestation. AECⅡ were isolated and purified from the lungs of premature rats. When cultured to 80% confluence, in vitro cells were randomly divided into air group and hyperoxia group. Cells in the hyperoxia group were continuously exposed to 95% O2/5% CO2 and those in the air group to 95% air/5% CO2. After 12, 24 and 48 h, cells in the two groups were harvested to detect their reactive oxygen species (ROS), apoptosis, TrxR1 activity and the expressions of Trx1 and TrxR1 by corresponding protocols, respectively. The results showed that AECⅡ exposed to hyperoxia generated excessive ROS and the apoptosis percentage in the hyperoxia group was increased significantly at each time points as compared with that in the air group (P<0.001). Moreover, TrxR1 activity was found to be markedly depressed in the hyperoxia group in comparison to that in the air group (P<0.001). RT-PCR showed the expressions of both Trx1 and TrxR1 mRNA were significantly increased in AECⅡ exposed to hyperoxia for 12 and 24 h (P<0.01), respectively. At 48 h, the level of Trx1 mRNA as well as that of TrxR1 mRNA in the hyperoxia group was reduced and showed no significant difference from that in the air group (P>0.05). Western blotting showed the changes of Trx1 protein expressions in the hyperoxia group paralleled those of Trx1 mRNA expressions revealed by RT-PCR. It was concluded that hyperoxia can up-regulate the protective Trx1/TrxR1 expressed by AECⅡ in a certain period, however, also cause dysfunction of the cytoplasmic thioredoxin system by decreasing TrxR1 activity, which may contribute to the progression of oxidative stress and cell apoptosis and finally result in lung injury.     

高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.     

卡托普利对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及机制探讨

目的 观察高氧致CLD新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及Ⅰ型胶原含量的动态变化及卡托普利的保护机制.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为模型组、空气对照组、卡托普利治疗组和盐水对照组,每组各60只.模型组、盐水对照组和卡托普利治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO20.9),21 d造成高氧肺损伤模型;空气对照组吸入空气;卡托普利治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利30mg/(kg·d),盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1、3、7、14及21天随机选取6只麻醉后处死.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织的Ⅰ型胶原的含量,用日产7170全自动生化分析仪测定其ACE活性,用放免法测定其AngⅡ的含量.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原mRNA表达的动态变化并同时观察肺组织的形态学变化.结果 模型组、盐水对照组及卡托普利治疗组的肺组织ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原的含量及mRNA的表达在实验后第1、3和7天与空气对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组、盐水对照组第14天明显升高,第21天达高峰(P＜0.05或P＜0.01);卡托普利治疗组肺组织AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达第14天、第21天与模型组、盐水对照组比较明显降低(P＜0.05或P＜0.01),但仍高于空气对照组(P＜0.05).肺组织形态学改变模型组、盐水对照组第1天同空气对照组,第3～7天肺泡壁毛细血管扩张,肺间隔水肿,肺间隔及肺泡腔内有中性粒细胞浸润,第14天部分肺泡腔变狭长,肺间隔增宽,肺间质细胞增多,出现肺组织纤维化改变.第21天正常肺泡结构消失,残留肺泡直径明显缩小,肺组织出现严重的纤维化.卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织的ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达在高氧后第14天、第21天明显增高,同时肺组织出现纤维化改变.而应用卡托普利干预后ACE、AngⅡ、Ⅰ型胶原含量及mRNA表达明显低于模型组及盐水对照组.肺组织形态学显示肺组织纤维化病变明显减轻,表明卡托普利对高氧肺损伤具有一定的保护作用.     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

高氧暴露下新生大鼠肺组织Smo和Gli1蛋白的表达和意义

目的 探讨Sonic hedgehog信号通路中Smo和Gli1蛋白在高氧诱导的急性肺损伤中的表达及意义.方法 通过持续吸入高浓度氧气建立新生大鼠高氧肺损伤模型.实验组吸入95％的医用氧气,对照组吸入空气.分别留取第3、7和14 d的肺组织,HE染色观察肺脏病理改变,应用免疫组织化学和Western blot检测肺组织中Smo和Gli1蛋白的动态表达情况.结果 高氧暴露3d肺毛细血管开始充血、渗出;7d时肺结构紊乱,炎性细胞浸润;14 d时肺泡融合,纤维增生,间隔增宽.高氧组Smo和Gli1蛋白主要分布于支气管上皮、肺泡上皮、血管内皮细胞及部分纤维组织.与对照组相比,Smo于高氧第7天表达显著增加,第14天达高峰;Gli1蛋白表达于14 d显著增加.结论 高浓度氧可致新生大鼠肺损伤和肺发育停滞.Smo和Gli1蛋白的高表达可能与高氧诱导的肺损伤和支气管肺发育不良的发生发展有关.