棕榈酸对EA.hy926细胞炎症反应相关基因表达的影响及机制

目的观察棕榈酸(PA)对内皮细胞株EA.hy926细胞炎症反应的影响,检测相关基因表达的变化并探讨其可能的信号途径。方法体外培养内皮细胞株EA.hy926,分为白蛋白对照组和PA处理组。改良MTT法检测PA孵育对EA.hy926细胞活性的影响,实时荧光定量PCR法检测白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA法检测IL-6、IL-8和TNF-α浓度,Western blot检测磷酸化核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IκBα)水平。结果与白蛋白对照组相比,20、50、100μmol/L PA处理组的IL-1、IL-6、IL-8 mRNA水平显著升高(P0.05),50、100μmol/L PA处理组的TNF-α、MCP-1 mRNA水平显著升高(P0.05),20、50、100μmol/L PA处理组细胞培养上清液中IL-6和IL-8的浓度显著升高(P0.05),IκB蛋白水平显著降低(P0.05),NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P0.05)。结论 PA能够导致EA.hy926细胞炎症反应,其机制可能与激活NF-κB信号途径有关。     

热休克蛋白65对Jurkat细胞增殖和胆固醇流出的影响

目的探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制。方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(Con A)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-8检测细胞增殖能力,ELISA测定上清液中炎症因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)含量,液闪计数仪检测Jurkat细胞胆固醇流出率;RT-PCR检测胆固醇相关转运蛋白,包括ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)的表达。结果 5 mg/L Con A与Jurkat细胞孵育48 h后可显著促进细胞增殖,HSP65呈剂量依赖性促进Con A诱导的Jurkat细胞增殖(P0.001)。以0.5、1 mg/L HSP65分别处理Jurkat细胞后,Jurkat细胞胆固醇流出率和IL-10含量均呈浓度依赖性下降,IFN-γ含量则逐渐升高(P0.01),细胞ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的mRNA表达水平呈剂量依赖性降低(P0.01)。结论在0.5~1 mg/L浓度范围内,HSP65不仅可促进T细胞增殖、加剧细胞免疫反应,还可引起胆固醇流出率降低,其机制可能与下调胆固醇转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的基因表达相关。     

G蛋白偶联受体120激动剂促进巨噬细胞胆固醇流出的研究

目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制。方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200μmol/L的GPR120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h。NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平。结果:与对照组相比,100、150和200μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8%、10%和18%;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍, ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平。另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率。结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出。     

ox-LDL经由LOX-1受体对PPARγ-LXRα-ABCA1通路激活的作用研究

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)经由血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)受体对PPARγ-LXRα-ABCA1通路激活的作用。方法浓度梯度ox-LDL(0~40 mg/L,12 h)刺激J774A.1巨噬细胞,检测LXRα、ABCA1的表达。构建293T细胞LOX-1过表达的PPARγ双荧光素酶报告基因系统,激光共聚焦及Western blot检测LOX-1的分布与表达,双荧光素酶报告基因系统检测PPARγ的转录活化情况。对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1 siRNA和PPARγsiRNA沉默,ox-LDL(30 mg/L,12 h)孵育后检测LXRα、ABCA1蛋白的表达。结果ox-LDL可显著上调J774A.1细胞LXRα和ABCA1的表达(P0.01,n=3)。LOX-1过表达的PPARγ双荧光素酶报告基因系统检测显示ox-LDL能够通过LOX-1增加PPARγ的转录活性;对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1siRNA、PPARγsiRNA沉默后发现,LXRα和ABCA1的表达均显著降低(P0.01,n=3)。结论 ox-LDL可通过LOX-1受体激活PPARγ转录活性,从而上调LXRα、ABCA1蛋白表达,完成PPARγ-LXRα-ABCA1信号通路的激活。     

荷叶碱对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇流出的影响及机制

目的观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果荷叶碱显著减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显著降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。     

血管紧张素1-7对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子表达的影响

目的 探讨血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子ATP结合盒转运子A1(ABCA1)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)和视黄酸X受体α(RXRα)表达的影响.方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饲料组、Ang(1-7)组及Ang(1-7)+ A779组.通过植入式胶囊渗透压泵,经颈静脉插管持续给予Ang(1-7),28天后,检测各组大鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平,定量实时聚合酶链反应及Western blot检测各组大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα基因表达的变化.结果 与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所降低(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7) +A779组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05).与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7)+ A779组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05).结论 Ang(1-7)能够降低大鼠血浆中血脂水平,促进大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的基因表达,对高脂血症有一定的治疗作用.     

罗格列酮联合依折麦布对脂化后血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的影响及可能机制的研究

目的探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0μmol/L)、联合组(罗格列酮25.0μmol/L+依折麦布30.0μmol/L)。采用酶荧光法检测各组细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)的含量,并计算胆固醇酯(CE)值。RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达,Western blot检测LXRα和ABCA1蛋白表达量。结果泡沫细胞组较空白对照组LXRα和ABCA1mRNA(0.2980±0.0247 vs 1.0010±0.0554,0.3022±0.0266 vs 1.0009±0.0526)以及蛋白表达均减少(P0.05),TC、FC和CE含量显著增加(P0.05);与泡沫细胞组比较,依折麦布组3.0、10.0、30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白表达均增加,依折麦布组则呈现浓度依赖性;依折麦布组30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组TC、FC和CE含量减少(P0.05);且联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白增加更为明显(P0.05)。结论罗格列酮与依折麦布联合,显著减少细胞内胆固醇含量,增加SMC内的胆固醇逆转运效率,其机制可能与LXRα-ABCA1通路有关。     

非诺贝特对高脂模型大鼠过氧化物酶增殖物活化受体γ、肝X受体α和ABCA1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究非诺贝特对高脂模型大鼠肝脏和主动脉中过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ),肝X受体(LXRα)和ABCA1 mRNA及其蛋白表达的影响.方法 将30只雄性健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、高脂模型组、非诺贝特组,应用RT-PCR方法测量各组肝脏和血管中PPARγ mRNA,LXRα和ABCA1 mRNA的表达,应用Western印迹方法测量肝脏和血管中PPARγ,LXRα和ABCA1蛋白的表达.结果 高脂模型组肝脏、主动脉中PPARγ,LXRα和ABCA1 mRNA及蛋白表达水平与正常对照组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).非诺贝特药物干预后大鼠肝脏、主动脉的PPAR-γ mRNA与模型组比较虽有升高,但差异无统计学意义(P＞0.05)；LXRα和ABCA1 mRNA与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；它们蛋白表达变化趋势与mRNA的表达均趋势一致.结论 非诺贝特不仅降低血脂,而且能够升高LXRα的表达和促进ABCA1的释放,使ABCA1的含量升高,促进胆固醇的逆转运,发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

STZ大鼠心肌胆固醇转出相关基因mRNA表达的变化

目的 研究糖尿病大鼠心肌胆固醇转出相关基因表达的变化.方法 用STZ选择性破坏大鼠胰岛β细胞,建立实验性糖尿病大鼠模型,动态观察分析糖尿病不同病程中大鼠心肌胆固醇转出相关基因过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα),肝X受体α(LXRα),ATP结合盒转动体A1(ABCA1) mRNA表达以及胆固醇含量的变化.结果 糖尿病12～17 w时大鼠心肌PPARα激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,但心肌胆固醇含量没有变化.结论 STZ诱导的糖尿病大鼠心肌随着PPARα的激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,PPARα、LXRα共同参与了胆固醇代谢.     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。