协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用

DNA疫苗接种后抗原提呈和T细胞活化所涉及的细胞和分子成分尚不清楚,协同信号分子在其中起重要的作用。采用共传递编码协同信号分子和编码特异抗原的基因,是一种有效的增强DNA疫苗免疫效果的方法。深入了解协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用,对揭示DNA疫苗作用机制和免疫佐剂增强免疫反应的作用机制有重要意义。     

基于树突状细胞的口腔颌面头颈肿瘤免疫治疗

近年来,对肿瘤免疫机制的研究显示树突状细胞是功能最强的肿瘤抗原提呈细胞之一,连同肿瘤抗原、效应细胞如细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞以及各种相关的细胞因子在肿瘤免疫应答过程中起着重要作用.目前以树突状细胞为基础的肿瘤疫苗研究十分流行,部分研究已经进入临床Ⅰ期阶段.本文就基于树突状细胞的肿瘤免疫的研究进展及其在口腔颌面头颈肿瘤领域的应用情况作一综述.     

靶向融合防龋DNA疫苗编码蛋白靶向于人树突状细胞的体外研究

目的：体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P/VAX1编码蛋白的生物学活性,研究蛋白是否具有靶向于抗原递呈细胞如树突状细胞的能力。方法：pGJA-P/VAX1和pVAX1分别转染真核细胞COS-7,收集并浓缩细胞培养上清。利用双抗夹心法,以人的IgG为标准品,检测上清及浓缩液中pGJA-P/VAX1编码蛋白的含量。体外培养人外周血来源的树突状细胞,与两种上清浓缩液孵育一段时间后,通过流式细胞术检测树突状细胞是否结合编码蛋白。实验分A、B、C组,A组树突状细胞与VAX1浓缩液作用,B组中树突状细胞与GJA-P/VAX1浓缩液作用,C组中树突状细胞表面B7分子首先被B7-1和B7-2的单克隆抗体封闭,然后与GJA-P/VAX1浓缩液作用。结果：pGJA-P/VAX1转染细胞后,培养上清的浓缩液中蛋白浓度相当于0.22μg/mL人的IgG。而pVAX1转染上清及浓缩液均未有蛋白检出。流式结果显示B组细胞平均荧光强度及细胞表面编码蛋白阳性率明显高于A组和C组。B组相对A组和C组,细胞直方图峰向右偏移。A、C两组细胞平均荧光强度近似,且两组细胞直方图近乎重合。结论：靶向融合防龋DNA疫苗编码的融合蛋白保持了CTLA-4的活性,可通过B7分子靶向结合树突状细胞。     

靶向融合防龋DNA疫苗的构建与体外细胞表达研究

目的 构建以人细胞毒性T淋巴细胞抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen 4，CTLA4)为引导的抗变形链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)葡糖基转移酶(glucosyltransferase，GTFs)I和表面蛋白PAc的靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P，检测其在真核细胞中的表达。方法 利用RT-PCR方法从外周淋巴细胞中获得CTLA4胞外区和Igγ1恒定区基因并进行T-A克隆，获得携带CTLA4-Ig融合基因的重组质粒pGJ，选择合适的酶切位点，再克隆人融合防龋DNA疫苗pCLUA-P中，构建靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P，并转染CHO细胞系，用蛋白质免疫印迹实验检测其表达。结果 重组质粒pGJ、pGJA-P分别含有cTLA4-Igγ1融合基因和cTLA4-、Igγ1、pac、glu基因序列。蛋白质免疫印迹结果显示，pGJA-P表达的抗原可以与特异性抗PAc抗体发生免疫反应。结论 成功构建了靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P，并可在真核细胞中正确表达。     

树突状细胞及其肿瘤疫苗在肿瘤免疫治疗中的应用

树突状细胞是机体内一种专职抗原提呈细胞，并在肿瘤免疫中发挥至关重要的作用。本文综述了树突状细胞在荷瘤宿主体内的功能变化以及在肿瘤免疫治疗中的作用，重点介绍了树突状细胞肿瘤疫苗的种类及其在肿瘤免疫治疗中的应用。     

靶向融合防龄DNA疫苗研究（Ⅰ）—编码人CTLA4细外区基因的质料pGCTLA的构建

目的：构建编码人细胞毒性T淋巴细胞抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4,CTLA4）信号肽和胞外区基因的质粒，为进一步研制靶向融合防龋DNA疫苗做准备。方法：利用RT－PCR的方法从健康成人外周血分离的单个核细胞中提取细胞总RNA，扩增出CTLA4信号肽和胞外区基因序列，利用pUCm-T载体进行T－A克隆，构建编码人CTLA4胞外区基因的pGCTLA质粒，酶切电泳，并测定鉴定。结果：RT－PCR获得了CTLA4基因的目的片段，质粒pGCTLA含有信号肽和CTLA4胞外区的基因。结论：成功构建编码人细胞毒性T淋巴细胞抗原4信号肽和胞外区基因的质粒pGCTLA。     

细胞黏附分子在牙周炎中作用的研究进展

细胞黏附分子(CAM)是位于细胞表面或游离于细胞周围环境的蛋白分子,在细胞之间以及细胞与胞外基质之间的结合及信号传递过程中发挥着重要的作用.在牙周组织的炎症和免疫等病理活动中,大量细胞黏附分子参与了这个过程.本文就细胞黏附分子的结构、分布、功能及其在牙周炎发生发展过程中的作用作一综述.     

树突状细胞及其肿瘤疫苗在肿瘤免疫治疗中的应用

树突状细胞是机体内一种专职抗原提呈细胞。并在肿瘤免疫中发挥至关重要的作用。本文综述了树突状细胞在荷瘤宿主体内的功能变化以及在肿瘤免疫治疗中的作用,重点介绍了树突状细胞肿瘤疫苗的种类及其在肿瘤免疫治疗中的应用。     

树突状细胞与口腔黏膜免疫

树突状细胞是目前发现的功能最强,唯一能激活初始T细胞的抗原呈递细胞,它具有摄取、加工抗原,激活初始T细胞,诱导免疫应答和耐受的能力,在口腔黏膜免疫中扮演重要的角色.本文就树突状细胞在口腔黏膜免疫中的作用及可能机制做一综述.     

树状细胞疫苗抑制肿瘤的实验观察

目的观察经肿瘤抗原致敏的树状细胞（DC）疫苗对荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）协同诱导人外周血单核细胞成为DC。Tea8113舌癌细胞可溶性抗原体外致敏DC，将同源人T淋巴细胞与之共同培养诱导出抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs），共同接种至荷瘤裸鼠体内行免疫治疗。结果人外周血单核细胞在细胞因子协同诱导下可获得功能正常的DC，用致敏DC＋CTLs免疫治疗的荷瘤裸鼠与其他实验组相比，明显抑制肿瘤生长，肿瘤倍增时间显著提高（P〈0．05）。结论从人外周血来源的单核细胞在多种细胞因子作用下可诱导为功能正常的DC、冻融抗原体外致敏的DC，经其激活的肿瘤特异性CTLs对荷舌鳞癌裸鼠有明显的免疫治疗作用，可望成为口腔颌面部舌癌免疫治疗的新途径。     

靶向融合防龋DNA疫苗研究(Ⅰ)-编码人CTLA4胞外区基因的质粒pGCTLA的构建

目的:构建编码人细胞毒性T淋巴细胞抗原4 (cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4, CTLA4)信号肽和胞外区基因的质粒,为进一步研制靶向融合防龋DNA疫苗做准备.方法:利用RT-PCR的方法从健康成人外周血分离的单个核细胞中提取细胞总RNA,扩增出CTLA4信号肽和胞外区基因序列,利用pUCm-T载体进行T-A克隆,构建编码人CTLA4胞外区基因的pGCTLA质粒,酶切电泳,并测序鉴定.结果:RT-PCR获得了CTLA4基因的目的片段,质粒pGCTLA含有信号肽和CTLA4胞外区的基因.结论:成功构建编码人细胞毒性T淋巴细胞抗原4信号肽和胞外区基因的质粒pGCTLA.     

变形链球菌表面蛋白分子结构中T、B细胞表位的研究

T、B细胞表位是蛋白质抗原诱导机体产生免疫应答不可缺少的重要结构。含有 T、B细胞表位的防龋疫苗可激发有效的免疫应答和显著的抗龋效果。本文就表面蛋白分子结构中 T、B细胞表位的结构特点进行综述     

变形链球菌葡糖基转移酶真核表达质粒pcDNA3-gtfB的构建

目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶真核表达质粒pcDNA3-gtfB,为以其作为基因疫苗进行免疫动物实验奠定物质基础。方法:以变形链球菌GS-5全染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增获得含有多个编码变形链球菌葡糖基转移酶抗原表位的目的基因gtfB,将分离纯化的目的基因和质粒pcDNA3用KpnÑ、XhoÑ双酶切,酶切产物在 T4 DNA连接酶作用下进行体外重组,用改良Hanahan法转化感受态大肠杆菌JM109,采用氨苄青霉素抗性LB平板初步筛选阳性克隆子后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定,DNA序列测定。结果:经PCR扩增获得的目的基因分子量与预计相同,并定向插入真核表达载体pcDNA3,插入相位正确,未改变目的基因的阅读框架。结论:真核表达质粒 pcDNA3-gtfB含有多个葡糖基转移酶免疫显性抗原表位编码基因,且选用的高表达真核表达载体pcDNA3,能直接激活抗原提呈细胞,可以使重组质粒pcDNA3-gtfB具有较强的免疫原性和免疫反应性,为利用其作为基因疫苗防龋奠定了基础。     

DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的:研究以一种新型免疫策略即追加相应蛋白质抗原来加强免疫DNA疫苗的免疫效果。方法:重组质粒pCIA-P经鼻腔滴注途径免疫小鼠,并以其相应抗原rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB经鼻腔滴注加强免疫,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平。结果:以rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB加强免疫可显著提高唾液中IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体水平。并且以rPAc蛋白和黏膜佐剂rCTB加强免疫组产生了最高水平的唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体。结论:DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗可有效增强DNA防龋疫苗免疫效果。     

靶向防龋质粒转染的树突状细胞抗原提呈相关基因表达研究

目的：比较靶向和非靶向防龋质粒转染的树突状细胞抗原提呈相关基因表达差异，分析靶向防龋质粒增强抗体反应的可能机制。方法：构建绿色荧光蛋白标记的靶向防龋质粒pMGJGLU／GFP和非靶向防龋质粒pCDG—LU／GFP。pMGJGLU／GFP和pCDGLU／GFP分别转染小鼠树突状细胞，芯片分析两组树突状细胞抗原提呈相关基因的表达差异，实时荧光定量RT—PCR检验差异表达基因。结果：与pCDGLU／GFP转染的树突状细胞相比，pMGJGLU／GFP转染的树突状细胞有28个基因表达上调，6个基因表达下调，其中Cc117、Cc119和CD209a上调最为显著。结论：靶向DNA质粒转染树突状细胞一系列活化和成熟基因发生了变化，其中Cc117、Cc119和CD209a可能发挥重要的免疫增强作用。     

变形链球菌表面蛋白PAc防龋疫苗研究的进展

龋病是一种最常见的细菌性口腔疾病 ,免疫治疗是防治龋病的有效途径之一。基因工程疫苗和核酸疫苗因具备诸多优点而成为具有强大潜力的免疫防龋疫苗。变形链球菌是主要致龋菌 ,其细胞表面分子量为 185ｋＤ的表面蛋白抗原 (ＰＡｃ)介导了该菌对牙面的非蔗糖依赖性粘附 ,是变链菌的主要致龋毒力因子。ＰＡｃ是一种重要的候选疫苗抗原 ,具良好免疫原性 ,其全分子或部分片段进行主动或被动免疫均可有效控制变链菌在牙面的粘附 ,降低患龋率。ＰＡｃ的氨基酸序列和编码基因ｐａｃ的核苷酸序列已基本清楚 ,为ＰＡｃ基因工程疫苗和核酸疫苗的制备提…     

变形链球菌表面蛋白质抗原研究概况

变形链球菌细胞壁表面存在多种蛋白成分，已从变形链球菌中纯化出１０多种细胞表面蛋白质抗原，它们在防龋疫苗研究中成功地作为疫苗免疫原预防龋齿发生。本文以这类抗原Ｉ／Ⅱ、Ｂ，ＩＦ，Ｐ１，ＳＲ，ＰＡｃ的提取纯化及其在分子水平上研究状况作一概述。     

TGF-β信号通路与口腔鳞状细胞癌的研究进展

转化生长因子β（TGF-β）是一个调节上皮细胞增殖、免疫功能和新血管生成的关键分子,TGF-β及其信号通路在维持上皮细胞内环境稳态时发挥重要作用.TGF-β信号通路的失调在众多恶性肿瘤中均可见,包括口腔鳞状细胞癌（OSCC）.TGF-β信号通路的失调会导致细胞过度增殖并抑制细胞凋亡,基因组不稳定性增强,促进肿瘤上皮间质转化.而肿瘤炎症微环境中TGF-β会代偿性升高,提高肿瘤细胞的增殖及迁移能力,促进癌巢内的新血管生成,增强炎症对肿瘤的促进作用.本文就TGF-β信号通路在OSCC发生、发展中所发挥的作用做一综述.     

牙龈卟啉单胞菌相关牙周炎疫苗有效免疫原及其途径和佐剂

牙龈卟啉单胞菌细胞表面的多种抗原可诱导机体产生保护性免疫应答,阻止牙龈卟啉单胞菌定植和感染,因此选择合适的牙龈卟啉单胞菌有效免疫原作为疫苗候选抗原来防治牙周炎具有重要的研究价值。牙龈卟啉单胞菌细胞膜上的菌毛蛋白、牙龈蛋白、血凝蛋白、外膜蛋白、被膜蛋白和热休克蛋白等多种表面抗原,皆有可能成为牙龈卟啉单胞菌相关牙周炎疫苗有效免疫原。牙周炎疫苗研究常用的免疫途径有腺体免疫、黏膜免疫、皮下接种和肌肉注射等,学者们普遍认为,黏膜免疫应该成为牙周炎疫苗免疫的主要方式。另外,牙周炎疫苗中使用佐剂可刺激机体产生免疫应答,增强抗原免疫原性。在未来的牙周炎疫苗研究中,应该结合牙龈卟啉单胞菌的多种特异性抗原找到各血清型牙龈卟啉单胞菌共同的抗原决定簇,结合其他牙周致病菌的有效免疫原及选择最有效的免疫途径和使用抗原呈递和佐剂系统。     

口腔颌面部肿瘤细胞迁移机制的研究进展

口腔颌面部肿瘤细胞的迁移机制与全身肿瘤细胞的迁移机制密切相关。肿瘤细胞与细胞外基质问的相互作用可以影响肿瘤的发生、增殖、存活和转移到其他组织的能力。肿瘤细胞迁移的过程是复杂和多调节性的,是由基因、信号传导通路、细胞黏附分子和胞外基质等多方面共同参与、逐级变化、互相作用而产生的协同结果。但因其过程与内容复杂多变,肿瘤细胞迁移机制尚未定论。