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目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)通过调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶A(Akt)信号通路影响结肠癌的发生发展。方法脂质体Lipofectamine? 3000将miR-486-5p模拟物NC(对照), miR-486-5p模拟物转入SW480结肠癌细胞中, 细胞购自上海细胞库。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-486-5p表达, 噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期, Transwell实验检测细胞侵袭, 蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关蛋白X(bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、HIF-1α、PTEN、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。组间比较采用t检验进行分析。结果 miR-486-5p模拟物组细胞miR-486-5p表达量(1.87±0.09比1.00±0.10, t=5.589... 相似文献
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背景与目的:胰腺癌是癌症相关性死亡的主要原因之一,是消化系统恶性程度最高的肿瘤,其主要的病理类型为胰腺腺癌(PAAD),预后较差。miR-486-5p在不同癌症中起重要的作用,但尚缺乏miR-486-5p在PAAD中的研究报告。本研究通过生物信息学方法探寻miR-486-5p的靶基因并分析靶基因在PAAD中的表达及意义。方法:使用PROGmiRV2数据库分析miR-486-5p与PAAD预后的相关性。综合运用多个数据平台来预测miR-486-5p的靶基因,并使用DAVID在线数据库对筛选出的靶基因进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科(KEGG)信号通路分析,再以STRING数据库构建靶基因蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并利用Cytoscape软件进行可视化编辑,筛选PPI网络中的核心基因,最后验证筛选出的核心基因,找出与PAAD预后相关的核心基因。结果:miR-486-5p低表达PAAD患者的总生存时间较miR-486-5p高表达患者明显缩短(P0.05)。得到至少被3个数据库预测到的靶基因数目共187个。GO分析显示,靶基因主要参与蛋白质稳定、蛋白质磷酸化、RNA聚合酶II启动子的转录正调节及凋亡过程的负调节等生物学过程;KEGG分析显示靶基因主要参与FOXO信号通路、p53信号通路、Ras信号通路及PI3K-Akt信号通路等。miR-486-5p潜在靶基因的蛋白网络分析发现,SIRT1、PTEN、SMAD2、CSNK2A1、SE RPINE1是PPI网络中关键靶基因;进一步通过GEPIA验证发现CSNK2A1、SERPINE1在PAAD组织中均明显上调(均P0.05),这些基因的高表达与PAAD患者的总体存活和无病生存相关(均P0.05),CSNK2A1和SERPINE1的高表达的PAAD患者有更差的预后。结论:miR-486-5p通过对靶向基因的调控,作用于PAAD患者体内多种信号通路的网络,参与PAAD的发生和发展,影响PAAD患者的预后。 相似文献
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目的探讨糖尿病肾病(DN)患者的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达及其临床意义。方法选取2018年1月至2020年12月本院收治的105例2型DN患者和60例体检正常者(对照组)。根据尿白蛋白排泄率(UAER)将105例2型DN患者分为早期DN组57例(UAER为20～200 μg/min)和临床期DN组48例(UAER>200 μg/min)。比较各组血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平, 应用多因素logistic回归分析影响DN发生的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平在诊断DN中的价值。结果 DN组的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平均明显高于对照组(均P<0.001)。临床期DN组的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平均明显高于早期DN组(均P<0.001)。多因素logistic回归分析显示, 血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平升高是影响DN发生的独立危险因素(均P<0.001)。ROC曲线分析显... 相似文献
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目的探讨miR-152-5p及miR-210-5p在儿童IgA肾病(IgAN)中的表达及其临床价值。方法选取2018年1月至2022年6月由本院收治的109例IgAN患儿(IgAN组)、100例非IgA肾病的肾炎患儿(非IgAN组)和60例体检正常者(对照组)作为研究对象。其中IgAN患儿根据牛津分型评分(MEST)分为MEST≥3分组(41例)和MEST<3分组(68例), 并根据尿蛋白量分为尿蛋白≥1.0 g/24 h组(56例)和尿蛋白<1.0 g/24 h组(53例)。比较各组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及半乳糖缺乏型IgA1分子(Gd-IgA1)水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1诊断IgAN的价值。采用Pearson相关分析miR-152-5p、miR-210-5p表达水平与IgA/C3及Gd-IgA1的相关性。结果 IgAN组的miR-152-5p、miR-210-5p、IgA/C3及Gd-IgA1水平均明显高于非IgAN组和对照组(均P<0.00... 相似文献
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目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-499-5p靶向CYLD对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法选取2020年5月至2022年5月我院收治的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-499-5p表达水平。采用对照miRNA和miR-499-5p抑制剂转染宫颈癌细胞Hela, 命名为对照miRNA组和miR-499-5p KD组, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)染色法分析肿瘤细胞增殖能力;采用划痕和Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-499-5p靶基因。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析两组细胞增殖、侵袭和靶蛋白表达水平。组间比较采用t检验。结果宫颈癌组织中miR-499-5p表达水平(1.78±0.21)明显高于癌旁组织(1.07±0.14), 差异有统计学意义(t=22.920, P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值水平(2.23±0.15)明显高于mi... 相似文献
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目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibit... 相似文献
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目的探讨微小RNA(miR)-215-5p对白细胞介素(IL)-1β诱导的骨关节软骨细胞凋亡的影响及其机制。方法将骨关节炎软骨细胞ATDC5随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)处理对照组和IL-1β处理模型组。为了分析miR-215-5p对IL-1β诱导细胞凋亡的影响, 进一步的将IL-1β组分为:模型组+miR对照组, 模型组+miR-215-5p抑制剂组。细胞转染后采用10 ng/ml IL-1β处理软骨细胞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-215-5p和锌指结构E-box同源结合框2(ZEB2)的表达水平。蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2、p65、磷酸化p65、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白水平。将野生型ZEB2的3’-非编码区(pmiR-ZEB2-WT)或者突变型ZEB2的3’-非编码区(pmiR-ZEB2-Mut)分别与miR-215-5p模拟物(miR-215-5p mimic)和对照物(miR-NC)共转染细胞, 双荧光素酶报告基因测定实验研究miR... 相似文献
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目的探讨Ago2和微小RNA(miRNA, miR)-145-5p对肝癌细胞增殖和转移的影响。方法选取2018年6月至2022年12月商丘市第一人民医院收治的98例肝癌患者肿瘤组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质免疫印迹分析miR-145-5p和Ago2表达水平。采用慢病毒在人肝癌细胞系HepG2建立miR-145-5p过表达细胞系, 分别为miRNA对照组和miR-145-5p组, 采用蛋白质印迹法(Western blot)分析Ago2表达水平;采用慢病毒构建Ago2敲降细胞系, 为对照组和Ago2组, 采用荧光定量PCR分析miR-145-5p表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析不同细胞的增殖能力;采用划痕实验和Transwell实验分析不同细胞的迁移和侵袭能力;分析Ago2和miR-145-5p表达的关系。组间比较采用t检验。结果肝癌组织中Ago2蛋白表达水平(1.99±0.18)高于癌旁组织(1.20±0.12), 差异有统计学意义(t=25.260, P<0.05)。肝癌组织中miR-145-5p表达水平(0.64±0.1... 相似文献
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目的检测膀胱癌组织中微小RNA-361-5p(miR-361-5p)、通用转录因子3(BTF3)的表达水平, 并探讨其临床意义。方法选取2015年3月至2017年6月本院收治的74例膀胱癌患者为研究对象, 所有患者均行根治性膀胱全切术, 收集癌组织及癌旁正常组织, 采用荧光定量PCR技术检测miR-361-5p、BTF3 mRNA的相对表达量, 采用免疫组化法检测BTF3蛋白的表达情况, 根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行定量分析, 将患者分为miR-361-5p高表达组和低表达组、BTF3高表达组和低表达组, 分析miR-361-5p、BTF3表达水平与膀胱癌患者临床病理参数的关系, 分析患者的3年生存情况。结果膀胱癌组织中miR-361-5p水平明显低于癌旁组织(P<0.05), BTF3 mRNA水平明显高于癌旁组织(P<0.05);膀胱癌组织中BTF3蛋白的阳性表达率为62.16%(46/74), 癌旁组织中BTF3蛋白的阳性表达率为17.57%(13/74), 差异有统计学意义(χ2=30.694, P<0.001);miR-361-5p、BTF3表达水平与... 相似文献
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目的探讨外泌体微小RNA(miR)-183-5p在肺腺癌(LUAD)中作用。方法通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证LUAD患者外周血miR-183-5p的表达, 通过5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)增殖、侵袭试验和淋巴管形成试验探讨其在LUAD中的作用。利用生物信息学预测和荧光素酶报告基因实验, 确定miR-183-5p的靶基因。采用t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果 miR-183-5p在LUAD患者血浆表达高于健康组(2.746±1.111比1.346±0.474, t=8.195, P<0.05), 且在淋巴结(LN)转移中表达高于LN阴性者(3.503±1.304比2.320±0.706, t=4.174, P<0.05), 在LUAD血浆外泌体中表达也高于健康组(2.071±0.931比0.830±0.633, t=6.039, P<0.05)。EdU增殖实验表明miR-183-5p mimic及其对照组和miR-183-5p inhibitor及其对照组个数分别为83.000±4.000、55.670±5.508、25.330±5.... 相似文献
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目的 探讨腹腔镜结直肠癌根治术前病人外周血穿透素-3(PTX-3)联合miR-486-3p预测术后复发转移的价值。方法 2018年3月～2021年5月我院收治的腹腔镜结直肠癌根治术病人157例，术前检测所有病人外周血PTX-3、miR-486-3p水平，术后随访1年，根据病人术后是否发生复发转移分为复发转移组与非复发转移组。比较两组病人临床资料，采用多因素Logistic回归分析腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的相关因素，绘制受试者工作特征曲线(ROC),以曲线下面积(AUC)评估预测价值。结果 随访1年，157例病人失访5例，随访率为96.82%,其中复发转移28例，复发转移率为18.42%,124例未复发转移。复发转移组年龄≥60岁、淋巴结转移、Ⅲ期、低分化、肿瘤直径≥5 cm、术前血小板计数、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、外周血PTX-3、miR-486-3p水平高于非复发转移组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示，淋巴结转移、Ⅲ期、低分化、术前外周血PTX-3水平、术前外周血miR-486-3p水平为腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的影响... 相似文献
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目的评价小鼠围术期神经认知障碍(PND)时海马miR-3065-5p与胰岛素样生长因子-1/磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(IGF-1/PI3K/Akt)信号通路的关系。方法清洁级健康雄性C75BL/6小鼠80只, 12～14周龄, 体质量20～30 g, 采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(C组)、PND组、miR-3065-5p激动剂组(Ag组)和miR-3065-5p激动剂阴性对照组(Ag-NC组)。采用吸入1.5%异氟烷麻醉下胫骨骨折髓内固定术制备小鼠PND模型。于术前2 d, Ag组侧脑室注射miR-3065-5p agomir 2 μl, Ag-NC组注射miR-3065-5p agomir阴性对照2 μl。于术后7 d时行Morris水迷宫实验和旷场实验, 测试结束后麻醉处死取海马组织, 采用qRT-PCR法检测miR-3065-5p、IGF-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平, 采用Western blot法检测IGF-1、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β)和Bcl-2的表达水平。结果 4组旷场实验各指... 相似文献
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目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-151-5p在骨折愈合方面的作用。方法建立标准的大鼠股骨干骨折愈合模型(郑州大学动物中心), 基因芯片分析血浆miRNA的表达。应用生物信息学方法模拟miRNA与靶基因配对, 并寻找相关的靶通路。细胞实验验证miR-151-5p对成骨细胞(大鼠颅骨提取)的影响。最后, 再次建立骨折愈合模型, 给予miR-151-5p模仿物和抑制物, 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转化生长因子-β(TGF-β)通路主要蛋白的表达。正态分布数据应用student-t检验, miRNA数据应用Benjamini & Hochberg方法进行比对。结果在大鼠骨折模型血浆结果显示miR-151-5p在骨折愈合7 d时显著高于对照组(对照比7 d为58.16±8.17比201.40±7.23, F=25.09, P<0.01), GSE93083数据集中骨折患者miRNA-151-5p表达量较健康组明显升高(骨折患者比健康人为12.25±0.17比12.00±0.19, t=2.446, P<0.01)。通过生物信息学分析, miR-151-... 相似文献
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目的观察三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中微小RNA(miRNA, miR)-9-5p对亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2(LZTS2)的调控作用, 及其对三阴性乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法收集30例2019年4月至2020年4月期间河北医科大学第四医院乳腺外科三阴性乳腺癌及癌旁标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测三阴性乳腺癌组织中miR-9-5p及LZTS2基因的表达水平;将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组及miR-9-5p模拟物组, 采用双荧光素酶报告基因实验分析LZTS2是否为miR-9-5p靶基因;再将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组及miR-9-5p抑制剂组, 采用蛋白印迹实验检测miR-9-5p对LZTS2蛋白表达的影响;采用细胞侵袭实验检测miR-9-5p抑制剂对细胞侵袭能力的影响;随后, 将MDA-MB-231细胞分为miRNA阴性对照+空载体组及miR-9-5p模拟物+LZTS2组, 利用细胞侵袭实验分析miR-9-5p对细胞侵袭能力的影响是否与LZTS2表达有关, 两组间比较采用t检验。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-9-5p在三阴性乳腺癌组织... 相似文献
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目的观察三阴性乳腺癌细胞中长链非编码RNA linc00921靶向调控微小RNA(miR)-9-5p对细胞侵袭能力的影响。方法收集2019年4月至2020年4月期间河北医科大学第四医院乳腺外科三阴性乳腺癌及癌旁标本共30例作为研究对象, 利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析linc00921与miR-9-5p表达的相关性;将MDA-MB-231细胞分为linc00921过表达组和对照组, 利用细胞侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;利用实时荧光定量PCR检测linc00921对miR-9-5p表达的影响;采用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证linc00921与miR-9-5p的关系;将细胞分为miR-9-5p mimics+ linc00921组和miR-NC+linc00921组, 观察linc00921影响细胞的侵袭能力是否与miR-9-5p有关。两组间比较采用t检验。结果过表达linc00921组侵袭细胞数[(154.50±12.06)个]低于对照组细胞[(400.50±6.36)个, t=61.500, P<0.05];生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证结... 相似文献
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目的探讨破骨细胞分化过程中微小RNA(miR)-129-5p的失调以及miR-129-5p在破骨细胞分化中的确切作用机制。方法首先建立核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导鼠源单核巨噬细胞(RAW264.7)分化的破骨细胞, 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-129-5p在破骨细胞分化前后的表达差异。然后用miR-129-5p模拟物处理RANKL诱导的RAW264.7细胞, 验证miR-129-5p对破骨细胞分化的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验用于检测破骨细胞的增殖活性, 抗酒石酸酸性磷酸酶染色确定破骨细胞数目, 蛋白质印迹法检测破骨相关标志物的蛋白表达。最后, 通过RT-qPCR或蛋白质印迹法分析miR-129-5p对成纤维细胞生长因子2(FGF2)表达的影响。组间统计学差异采用T-Test法检验。结果 miR-129-5p在RANKL组的表达水平低于对照组(0.405±0.007比0.984±0.031, t=24.070, P<0.01)。在功能上, 上调miR-129-5p可以抑制破骨细胞的分化, CCK-8实验结果显示, miR-12... 相似文献
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目的探讨前列腺癌细胞中微小RNA(miR)-20b-5p/E2F转录因子5(E2F5)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT), 从而促进前列腺癌发生发展的作用机制。方法分析数据库, 预测miR-20b-5p的靶基因, 双荧光报告基因检测miR-20b-5p对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向抑制。E2F5的野生型(WT)及突变型(Mut)的3’端非编码区(3’UTR)分别转染PC3和DU145细胞后, 再做TGF-β处理, 双荧光报告基因检测E2F5是否是TGF-β和miR-20b-5p的共同靶点。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。PC3和DU145细胞分别转染miR-20b-5p抑制剂和模拟物及其对照RNA后, Western blot检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。分别取两组前列腺增生和前列腺癌组织进行mRNA基因测序, 比较两者E2F5的表达。PC3细胞敲低miR-20b-5p的同时也敲低E2F5, Western blot检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin... 相似文献
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目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Frizzled 2(FZD2)基因激活Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立微小RNA(miR)-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA(miR-30a-5p mimics)组和空白对照组(negative control, NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-30a-5p的直接靶基因FZD2基因及Wnt/β-catenin信号通路下游关键基因c-myc的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与直接靶基因FZD2的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p i... 相似文献
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目的探讨lncRNA SNHG8对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子作用机制。方法选取本院2017年1月至2019年1月收治的30例膀胱癌患者的癌组织及相应的癌旁组织;将膀胱癌T24细胞分为si-NC组、si-SNHG8组、miR-NC组、pcDNA组、pcDNA-SNHG8组、miR-335-5p组、si-SNHG8+anti-miR-NC组及si-SNHG8+anti-miR-335-5p组。对各组细胞采用qRT-PCR、MTT、Transwell、Western blot和双荧光素酶报告实验等检测并进行比较分析。结果与癌旁组织比较, 膀胱癌组织中SNHG8的表达水平升高, miR-335-5p表达水平下降(均P<0.001)。抑制lncRNA SNHG8或过表达miR-335-5p后, T24细胞的活力、迁移和侵袭能力显著下降, CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低, p21蛋白表达水平升高(均P<0.001)。lncRNA SNHG8靶向调控miR-335-5p的表达水平。与si-SNHG8+anti-miR-NC组比较, si-S... 相似文献
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目的探讨绝经后女性非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)患者miR-122-5p及FOXO3为叉头框蛋白O3(forkhead box protein O3, FOXO3)水平与骨质疏松(osteoporosis, OP)的相关性研究。方法收集30例绝经后女性NAFLD患者与48例绝经后女性非NAFLD患者的临床资料及血清。qRT-PCR检测血清中miR-122-5p、FOXO3水平。生化自动分析仪检测甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白。骨密度分析仪检测第1～4腰椎、Wards三角骨、股骨颈、大转子、全髋5个部位的骨密度。分析以上临床指标与骨质疏松的相关性。结果 miR-122-5p在绝经后女性NAFLD患者中表达为0.76±0.28, 较非NAFLD患者的1.00±0.31表达低(t=3.43, P=0.001)。借助生物信息学网站分析得出miR-122-5p的下游靶基因FOXO3。FOXO3在绝经后女性NAFLD患者中表达为1.31±0.30, 较非NAFLD患者的1.00±0.27表达升高(t=4.73, P<0... 相似文献