乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB＼FSHRmRNA及分泌功能的影响

[目的】运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素（INHB）、促卵泡激素受体（FSHR）mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素（FSH）及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法（ELISA）,逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇（E2）含量。【结果】各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论1乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量。[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化GSK-3β、p38MAPK及ERK1/2蛋白的影响

目的:观察补肾活血复方含药血清对大鼠成骨细胞磷酸化糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的作用。方法:3月龄SD雌性大鼠灌胃制备空白血清和含药血清,并分离培养1日龄新生鼠颅骨成骨细胞。实验分为空白血清组和含药血清组,分别采用MTT、ELISA、Western-blot等方法检测两组成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌及磷酸化GSK-3β、p38 MAPK和ERK1/2蛋白的变化。结果:与空白血清组相比,含药血清组可明显促进成骨细胞的增殖、ALP和BGP的分泌,并促进胞内磷酸化p38 MAPK和ERK1/2蛋白的表达,对磷酸化GSK-3β蛋白的表达未见明显影响。结论:补肾活血复方含药血清可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,提高p38 MAPK和ERK1/2蛋白磷酸化水平。     

高静水压下益气活血汤通过p38MAPK信号通路对兔椎体终板软骨细胞的调控作用

目的观察益气活血汤含药血清在高静水压下对兔终板软骨细胞p38MAPK信号通路的调控作用,探讨益气活血汤治疗椎间盘退行性病变的可能作用机制。方法选用3月龄新西兰白兔制备益气活血汤含药血清,体外分离培养第3代兔椎体终板软骨细胞,建立体外高静水压加载干预模型,确定益气活血汤含药血清最佳干预条件。将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分为空白组、模型组及含药血清组,空白组无任何干预,其余2组分别施加1 MPa静水压干预24 h后收集终板软骨细胞,运用Western Blot法检测各组终板软骨细胞p38、磷酸化p38蛋白表达情况。结果持续高静水压干预下,1μg/μL含药血清促终板软骨细胞增殖作用最明显。各组终板软骨细胞p38蛋白表达量比较差异无统计学意义;模型组磷酸化p38蛋白表达量显著高于空白组,而含药血清组磷酸化p38蛋白表达量显著低于模型组(P0.05)。结论益气活血汤可以提高持续高静水压下终板软骨细胞增殖率,抑制软骨细胞凋亡,可能与其降低磷酸化p38蛋白表达水平,抑制p38MAPK信号通路的激活有关,推测益气活血汤可能通过调控p38MAPK信号通路发挥延缓椎间盘退行性病变的作用。     

杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响

目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。     

基于MAPK/ERK信号通路探讨加味芍药甘草汤对AM病灶细胞的干预机制

目的 通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路,探讨加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病(Adenomyosis, AM)的可能机制。方法 临床收集因AM和宫颈病变行全子宫切除术患者的组织标本,分别作为病例组和对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测AM组异位病灶与对照组正常肌层及两组间在位内膜中MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。对AM病灶细胞分别用加味芍药甘草汤含药血清、正常血清、MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126、米非司酮进行干预,采用qRT-PCR、Western blot检测不同干预方法对病灶细胞MAPK/ERK信号通路因子蛋白表达水平的差异。结果 AM组异位病灶ERK2 mRNA、MEK-2蛋白的表达量高于对照组正常肌层,差异有统计学意义(P<0.05)。筛选10%含药血清组为药物血清浓度。U0126组与空白对照组相比,ERK1 mRNA表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);10%含药血清组、米非司酮组、U0126组与10%正常大鼠血清组、空白对照组相比...     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。     

复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型E6,E7,p53,Rb蛋白表达的影响

目的采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)研究中药复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6,E7,p53,pRb蛋白表达的影响。探讨复方排毒止带汤对人乳头瘤病毒的影响。方法将大鼠随机分为空白对照组、25%含药血清组及50%含药血清组。空白对照组口服生理盐水,25%含药血清组及50%含药血清组口服复方排毒止带汤煎剂,将复方排毒止带汤25%含药血清和50%含药血清分别作用于SiHa细胞72,120 h后,采用Western Blot法检测HPV16 E6,E7,p53,pRb蛋白表达,采集数据。统计学分析采用独立样本t检验。结果复方排毒止带汤50%含药血清作用72 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,pRb蛋白表达水平升高,复方排毒止带汤50%含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平较作用72 h明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均<0.05,差异有统计学意义。复方排毒止带汤25%含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,Rb蛋白表达水平上升,复方排毒止带汤50%含药血清作用120 h HPV16 E6,E7蛋白表达水平较25%含药血清明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均<0.05,差异有统计学意义。结论复方排毒止带汤含药血清对HPV16 E6,E7,p53,Rb蛋白表达具有明显调控作用,复方排毒止带汤的活性具有一定的时效性。     

芍药甘草汤含药血清对哮喘大鼠T淋巴细胞凋亡及p-Akt磷酸化表达水平的影响

目的:观察芍药甘草汤含药血清对哮喘大鼠T淋巴细胞凋亡及p-Akt磷酸化表达水平的影响,探讨芍药甘草汤防治支气管哮喘的作用机制。方法:哮喘大鼠脾脏原代T细胞培养后分为6组:空白对照组、阴性对照组、5%、10%、20%芍药甘草汤含药血清组和PI3K抑制剂LY294002组。MTT法检测各组细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞周期;Western Blot法检测各组细胞p-Akt表达水平。结果:与空白对照组比较,PI3K抑制剂LY294002组显著抑制大鼠T淋巴细胞生长(P0.01),促进T淋巴细胞凋亡(P0.01),并显著降低其p-Akt磷酸化水平(P0.01);与空白对照组比较,5%、10%和20%含药血清组能显著抑制大鼠T淋巴细胞生长(P0.01),促进T淋巴细胞凋亡(P0.01),显著增加G0/G1期细胞比例(P0.01),同时显著降低G2/M细胞比例和T淋巴细胞p-Akt磷酸化水平(P0.01)。结论:芍药甘草汤防治支气管哮喘的作用机制可能通过抑制T淋巴细胞生长、促进其凋亡及降低T淋巴细胞p-Akt磷酸化水平有关。     

独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响

目的:检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞0PG/RANKL蛋白表达的影响,从分子生物学层面探究独活寄生汤治疗骨质疏松症的机理,为独活寄生汤治疗骨质疏松症提供理论及实验依据.方法:体外培养原代SD新生24h大鼠成骨细胞,分别用生理盐水血清对照组、独活寄生汤含药血清低浓度,中浓度,高浓度作用于成骨细胞,采用MIT法检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞生长的影响,Western Blot检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的影响.结果:独活寄生汤含药血清以浓度及时间的依赖方式促进成骨细胞生长;Western Blot结果显示不同浓度的独活寄生汤含药血清能促进成骨细胞OPG蛋白的表达,并且抑制成骨细胞RANKL蛋白的表达.结论:独活寄生汤含药血清可以通过OPG、RANKL系统促进成骨细胞的增殖并且影响成骨细胞的分化.     

基于MEK/ERK信号通路探讨阳和汤含药血清对乳腺癌4T1细胞的影响

目的 通过阳和汤含药血清干预小鼠乳腺癌4T1细胞,探索阳和汤对乳腺癌4T1细胞及其内丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路的影响。方法 制备阳和汤SD大鼠含药血清。将其随机分组为空白组、阳和汤低、中、高剂量组（5.8、11.6、23.2 g·kg^-1）,空白组用生理盐水代替。各组按10%含药血清和90% RMPI 1640完全培养基均匀混合,干预细胞。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法分别在24、48、72 h检测阳和汤含药血清对4T1细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测4T1细胞的凋亡情况;采用划痕实验检测4T1细胞迁移情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MEK1/2、磷酸化（p）-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、大鼠肉瘤病毒（RAS）蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,阳和汤干预24、48、72 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组对4T1细胞增殖具有明显抑制作用（P<0.05,P<0.01）;阳和汤干预48 h,阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组在24、48 h的细胞划痕愈合能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞侵袭能力显著降低（P<0.01）;阳和汤含药血清低、中、高剂量组细胞内MEK1/2、ERK1/2表达差异无统计学意义,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 阳和汤可抑制乳腺癌细胞4T1增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。其凋亡机制与MEK/ERK信号通路受抑制,p-MEK1/2、p-ERK1/2、RAS蛋白表达下调有关。     

HMGB1对人肺成纤维细胞ERK1/2-NF-κB信号通路的影响及补阳还五汤含药血清的干预作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)刺激人肺成纤维细胞(HFL1)后细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2),核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的活化情况,以及补阳还五汤含药血清对HMGB1刺激HFL1后以上信号通路的干预作用。方法:采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的HFL1细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞总蛋白中ERK1/2,胞浆胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果:与空白组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05,P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05);与HMGB1刺激组比较,补阳还五汤含药血清各组能够降低ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达,其中15%和20%补阳还五汤含药血清组降低ERK1/2的表达(P0.05);胞浆10%补阳还五汤含药血清组和胞核20%补阳还五汤含药血清组降低NF-κB p65蛋白的表达(P0.05);15%补阳还五汤含药血清组降低IL-1β的含量(P0.05)。结论:补阳还五汤含药血清在体外实验中,可抑制HMGB1引起的人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路的活化,减少IL-1β等炎症因子分泌。提示补阳还五汤可能通过调控人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路,防治肺纤维化的发生发展。     

乌萸汤对高龄小鼠卵母细胞的能量代谢相关影响

目的 通过卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术,探讨乌萸汤对体外培养的高龄小鼠卵母细胞能量代谢相关影响。方法 6周龄C57BL/6J雌性小鼠促排后取卵母细胞培养于M2培养基为青年组,24周龄C57BL/6J雌性小鼠卵母细胞为实验组,将实验组卵母细胞分别培养于基础培养基、乌萸汤含药血清培养基、山茱萸环烯醚萜苷类提取物培养基中,并称其为高龄组、乌萸汤组、山茱萸提取物组。各组培养24小时后分别检测各组卵母细胞的第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量及膜电位变化、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPKα)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPKα)、线粒体增生有关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferators-activated receptor gamma coactivator-1α,PCG-1α)蛋白的表达。结果 (1)与青年组相比,高龄组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量及膜电位变化、SOD酶活性均有所降低,ROS含量升高,AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α蛋白的表达降低(P 0. 05)。(2)与高龄组相比,乌萸汤组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量、SOD酶活性均有所升高,AMPKα、PGC-1α蛋白表达量有所增多(P 0. 05),但线粒体膜电位变化、ROS及p-AMPKα含量均无明显差异(P 0. 05)。(3)与高龄组相比,山茱萸提取物组第一极体排出率、ATP含量、线粒体数量、SOD酶活性、p-AMPKα蛋白含量有明显升高(P 0. 05),线粒体膜电位变化、ROS、AMPKα、PGC-1α蛋白表达量无明显差异(P0. 05)。结论 乌萸汤能够通过影响高龄小鼠卵母细胞的线粒体功能,从而改善其能量代谢和氧化应激状态,促进卵母细胞培养。     

从雌激素受体探讨解毒祛瘀滋阴药对SLE的治疗机制

目的观察解毒祛瘀滋阴药含药血清对雌激素受体α和β及其相关通路的调节作用,从而探讨解毒祛瘀滋阴药治疗系统性红斑狼疮(SLE)的机制。方法 CCK-8法检测研究解毒祛瘀滋阴药含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;以FITC-Annexin V/PI双染法流式细胞术检测10%解毒祛瘀滋阴药含药血清诱导MCF-7细胞的凋亡率;Realtime-PCR法检测ERα和PI3KmRNA的表达;Western blot法检测雌激素受体相关信号通路蛋白ERα、p-ERα、ERβ、ERK、p-ERK的表达。结果 10%和15%的解毒祛瘀滋阴药含药血清与空白血清相比均能较轻的抑制MCF-7细胞的增殖(P0.01)。与空白血清相比,10%的解毒祛瘀滋阴药含药血清:使MCF-7细胞的早期凋亡较多;使ERα和PI3K的mRNA相对表达量明显降低(P0.05或P0.01);使ERα的蛋白表达和磷酸化水平降低;使ERβ的蛋白表达水平升高;使ERK的蛋白表达和磷酸化水平降低。结论下调ERα的表达和其磷酸化水平,促进ERβ的表达,下调ERK及其磷酸化进而影响MAPK/ERK信号通路也许是解毒祛瘀滋阴药治疗SLE的部分机制。     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病的影响

目的?观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响，基于磷酸腺甙活化蛋白激酶（AMPK）-雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病（GD）的影响。方法?M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株（Nthy-ori-3-1）建立GD细胞模型，设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率；ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量；流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况；qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2-相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达；Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果?甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高（P<0.05），且随着药物浓度升高，细胞凋亡率越高（P<0.05）。与对照组比较，模型组的cAMP释放量升高，Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达量及蛋白表达升高，p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP 释放量减低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高， Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；同时，甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高（P<0.01）。结论?甲亢宁含药血清促进细胞凋亡，对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。     

芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导的人肾小球系膜细胞增殖及ERK1/2、p-ERK1/2的影响

目的:观察芪蓟肾康汤含药血清对人肾小球系膜细胞的增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响,探讨芪蓟肾康汤延缓肾小球硬化的作用机制。方法:采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人肾小球系膜细胞增殖,采用血清药理学方法制备芪蓟肾康汤和替米沙坦含药血清。将人肾小球系膜细胞分为正常组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组六组,培养24、48、72 h后用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;培养48、72 h后用ELISA法检测的ERK1/2、pERK1/2含量。结果:与正常组相比,AngⅡ组能显著促进系膜细胞增殖,替米沙坦组和各浓度中药含药血清组均可不同程度抑制AngⅡ引起的系膜细胞增殖。AngⅡ刺激后系膜细胞中ERK1/2蛋白表达明显降低,pERK1/2蛋白的表达明显增高,替米沙坦和不同浓度中药含药血清干预后,ERK1/2蛋白水平显著升高、pERK1/2蛋白水平显著下降,其中中药高剂量组最为显著。结论:芪蓟肾汤可能通过抑制人肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,从而达到延缓肾小球硬化的目的。     

补肺汤对HMGB1诱导的特发性肺纤维化相关细胞TLR2/NF-κB信号通路的影响

目的?观察补肺汤对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）诱导的人非小细胞肺癌细胞（A549）和人肺成纤维细胞（HFL1）形态损伤、炎症反应和Toll样受体2/髓样分化蛋白88/核因子-κB（TLR2/MyD88/NF-κB）信号通路的影响。方法?使用冷冻技术制备补肺汤冻干粉，大鼠补肺汤灌胃4周后取含药血清。将A549细胞和HFL1细胞随机分为空白组、HMGB1组（HMGB1诱导）、补肺汤冻干粉预培养加HMGB1组（冻干粉组，冻干粉浓度分别为0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%）、补肺汤含药血清预培养加HMGB1组（含药血清组，含药血清浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%）、阳性药物组（甲泼尼松龙）及空白血清组，按照分组处理细胞。电镜下观察各组细胞形态和超微变化，ELISA法检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，Western Blot法检测细胞中TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果?电镜显示HMGB1组细胞形态和超微结构损伤明显，补肺汤冻干粉和含药血清能有效恢复细胞形态和超微结构损伤，且浓度越高，恢复效果越显著。与空白组比较，HMGB1组细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量均升高（P<0.01），TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达升高（P<0.01）；与HMGB1组比较，冻干粉组和含药血清组能浓度依赖性地降低细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，且0.25%和0.30%冻干粉组及15%、20%和25%含药血清组含量降低（P<0.05，P<0.01）；浓度依赖性抑制TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达，且0.30%冻干粉组和25%含药血清组抑制作用明显（P<0.01）；补肺汤冻干粉与含药血清各浓度组间各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论?补肺汤冻干粉及含药血清对HMGB1 诱导的A549和HFL1细胞损伤有保护作用，并能减轻炎性因子的释放，机制可能与下调TLR2/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的：探讨益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：分离大鼠卵巢颗粒细胞,使用不同含量的肾疏肝汤含药血清以及不同浓度的雷公藤多苷含药血清处理细胞48 h后,使用CCK-8法检测细胞存活率,筛选益肾疏肝汤含药血清和雷公藤多苷含药血清剂量。并将细胞分为正常组（正常培养的细胞）、损伤组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组（雌二醇）。分别采用CCK-8法、TUNEL法、蛋白质印迹法检测细胞增殖、细胞凋亡、凋亡及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果：与正常组比较,损伤组细胞增殖、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达均显著受到抑制（P<0.05）,而细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、裂解胱天蛋白酶-3（cl-caspase-3）蛋白水平均显著增加（P<0.05）;与损伤组比较,阳性对照组及中药低、中药中剂量组、中药高剂量组细胞增殖、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）,而细胞凋亡率、Bax、cl-caspase-3蛋白水平均显著抑制（P<0.05）;且中药组呈剂量依赖。结论：益肾疏肝汤含药血清可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。     

Experimental research of electroacupuncture on ERK phosphorylation in rats of hepatofibrosis

目的：探讨电针肝俞、足三里对肝纤维化模型大鼠ERK蛋白激酶磷酸化的干预作用，从分子水平研究电针防治肝纤维化的作用机制。方法：将40只wistar雄性大鼠随机分为4组，正常组、模型组、电针组和药物组。采用30％的四氯化碳橄榄油皮下注射复合含10％乙醇的自来水饮用诱导大鼠肝纤维化模型，电针组选取肝俞、足三里进行电针刺激，药物组采用秋水仙碱灌胃治疗；采用天狼猩红染色方法观察大鼠肝组织胶原增生情况；应用Western—blotting方法检测肝组织细胞外信号调节激酶（ERK）和磷酸化ERK的表达。结果：与正常组比较，模型组肝组织胶原沉积明显增加，磷酸化ERK蛋白的表达量明显上升（P〈0．01）；与模型组比较，电针组和药物组大鼠肝组织胶原沉积明显减少，磷酸化ERK蛋白的表达量明显下降（P〈0．01）；电针组和药物组比较，上述指标差异均无统计学意义。结论：电针可能通过下调肝组织ERK蛋白的磷酸化，进而阻抑MAPK／ERK信号转导通路，抑制细胞外基质的合成，减少胶原沉积，从而起到防治肝纤维化的作用。     

益肺汤调控TGF-β1/Smad2通路抗肺纤维化机制研究

目的:研究益肺汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肺成纤维细胞(NIH-3T3)的影响,探讨其抑制肺纤维化的作用机制。方法:采用SPF级C57小鼠灌胃益肺汤,1次/d,连续给药3 d制备含药血清。实验分为正常对照组、模型组、模型+正常血清组、模型+含药血清组,给药48 h后0.1%FBS的培养基饥饿处理24 h, 100 ng/μl的AngⅡ诱导造模24 h。免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);免疫荧光检测Smad2;Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α-SMA、纤维连接蛋白(FN)、Smad2;ELISA检测细胞上清转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:Western blot和免疫荧光显示,造模后,α-SMA、FN、ColⅠ、Smad2的蛋白相对表达显著升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。益肺汤含药血清干预48 h后造模,α-SMA、FN、Smad2、ColⅠ的相对量较模型组下降(均P<0.05)。ELISA结果显示,造模后,TGF-β1的相对表达显著升高(P<0.05),益肺汤含药血清干预48 h后,TG...