常规免疫联合脾内免疫制备单克隆抗体

目的探索一种新的简便有效的应用微量抗原使脾细胞产生免疫反应,制备单克隆抗体的实用方法.方法在常规方法初次免疫后,用脾内直接注射法进行冲击免疫,只用微量的抗原就使Balb/c小鼠的脾细胞在短时间内产生免疫反应.结果经细胞融合和ELISA筛选后,成功获得一株抗人PF4单克隆抗体(SZ-95),抗体亚型为IgG1,Westernblot证实其特异性识别人血小板第4因子.结论常规免疫结合脾内免疫是制备抗低分子量保守蛋白质单抗的有效方法.     

直接在小鼠脾内注射免疫原免疫产生MCAb

用可溶性抗原直接注入小鼠脾脏免疫,第4天取脾与SP2/0融合,用ELISA和间接血凝法(PHA)检测杂交瘤上清,测到阳性克隆。利用双亲细胞杂交产生单克隆抗体(MCAb),其中之一的脾细胞要求有大量增殖状态的特异性B细胞,才能分泌特异性抗体,这与免疫的关系极大。常见的方法要福氏完全佐剂加可溶性抗原首次免疫,间隔2-4周加或不加不完全佐剂的抗原加强一次,隔合前应连续以50～500ug不加佐剂的抗原进行静脉或腹腔加强。Spitz用直接脾内免疫产生MCAb的方法获得比较高的分泌MCAb的杂交瘤我们应用此法免疫人IgG、马钤薯病毒,轮状病毒获得抗人IgG MCAb并在融合后的培养板杂交瘤上清测到了抗马铃薯病毒阳性克隆。现将实验报告如下:     

环孢霉素A合成抗原的单抗制备技术探讨

目的：研究利用自制的合成抗原制备环孢霉素A单克隆抗体的方法。方法：利用光化学反应将环孢霉素A与聚-L-赖氨酸偶联为合成抗原,免疫BALB／e小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行细胞融合,经反复筛选亚克隆获得抗CsA抗体的杂交瘤细胞株,以间接ELISA法进行抗体鉴定。结果：获得4株分泌抗CsA抗体的杂交瘤细胞株,其中2株分泌的抗体效价高,有一定特异性。结论：该抗原合成和免疫的方法切实可行,但单克隆抗体制备及保存方法有待进一步改进。     

抗蛋白S单克隆抗体的制备

目的 制备抗蛋白S(protein S)单克隆抗体.方法 用微量蛋白S抗原对Balb/c小鼠脾内包埋免疫,取小鼠脾细胞与SP2/O细胞融合,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养,建立了10株稳定分泌抗蛋白s单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结景对其中的一株2E3进行研究,其分泌的抗体为IgG1亚类.腹水效价1:106阳性,采用饱和硫酸铵盐析法纯化腹水,Western blot测定显示单克隆抗体2E3可特异性地识别分子量为69,000的抗原分子.此杂交瘤细胞株体外传代培养6个月以上,ELISA检测抗体滴度无明显降低.结论脾内包埋法成功制备抗蛋白S单克隆抗体,使蛋白S的临床深入研究和应用成为可能.     

杂交瘤单克隆抗体技术中的脾内免疫法

<正> 杂交瘤单克隆抗体制备中的常规免疫方案是采用腹腔或皮下注射法进行基础免疫和末次尾静脉注射作为加强免疫。该方法不仅费时,而且要消耗较多的抗原。我们根据国外近几年报道的脾脏内直接注射抗原的免疫方法,并结合实际情况,用流行性出血热病毒(EHFV)B_5株对Balb/c小鼠进行脾内一次性免疫,三天后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选结果抗体阳性孔率为3％,通过克隆化建立两     

抗食管癌核基质单克隆抗体免疫特异性的检测

利用ＥＬＩＳＡ方法检测抗食管鳞状细胞癌核基质单克隆抗体的活性及其特异性，结果表明：该抗体在稀释度为１：１６００时应用，其免疫反应性较强；经过对不同类型的肿瘤核基质抗原进行测定比较，提示１－１－８Ｃ抗食管鳞状细胞癌核基质单抗是一种活性较高和免疫特异性较强的单克隆抗体。     

用脾内一次注射免疫法制备抗布鲁氏菌单克隆抗体的初步研究

单克隆抗体的制备与应用是当前免疫学的一项重要研究工作。制备过程中,所用的常规免疫方法是:两次基础免疫和一次静脉或腹腔内加强免疫,共需时间1～2个月。1984年Spitz曾报道小鼠开腹脾内一次注射的新免疫方法。最近我们建立了只切开皮肤,不切开腹膜的脾内一次注射免疫法,用于制备抗羊种布鲁氏菌16M单克隆抗体,取得了良好的结果。这种方法只需注射一次,第4天便可取脾脏融合,大大简化了免疫程序,现将结果报告如下。先制备经超声波处理的羊种布鲁氏菌     

基因免疫制备抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体

目的通过基因免疫方法，制备抗SAILS病毒N蛋白的单克隆抗体并对单抗进行初步鉴定。方法将含有N蛋白的编码基因的真核重组质粒pSecTagB／N免疫BALB／c小鼠，然后取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，用原核表达的SARS病毒N蛋白筛选阳性克隆。然后通过免疫印迹法进一步证明抗体对N蛋白的特异性，用ELISA方法检测抗体对灭活SARS全病毒的免疫反应。结果筛选得到10株抗N蛋白的单克隆抗体，ELISA和免疫印迹结果表明这些抗体特异性针对N蛋白上的抗原决定簇，且有7株抗体对SARS灭活病毒有阳性反应。结论所得的单克隆抗体特异针对N蛋白。     

利用单克隆抗体技术及金标免疫分析法制备吗啡快速检测试纸

吗啡是主要毒品之一,在反毒禁毒斗争中,需要一种适合于查禁人员现场使用的快速准确检测吸毒者体内微量吗啡的检测用品,本研究利用单克隆抗体(简称单抗)技术和胶体金标记免疫分析技术研制出吗啡快速检测试纸。吗啡分子量很小,是半抗原,为了制备单抗必须将吗啡与载体蛋白连接形成抗原,本研究采用混合酸酐法制备吗啡抗原获得成功。然后用合成的吗啡抗原免疫小鼠,免疫5次。细胞融合按常规方法进行,融合后的细胞接种于甲基纤维素半固体培养基上,经过转移克隆、筛选等步骤,最终获得8株抗吗啡单克隆抗体细胞株。经鉴定,这8株单抗均为IgG1类,亲和常…     

近交系小鼠H-2抗原单克隆抗体的对比研究

目的 对比研究进口抗近交系小鼠H-2抗原单克隆抗体和国产抗近交系小鼠H-2单克隆抗体的免疫反应是否一致，以尽快推广国产抗体的使用。方法 利用微量细胞毒法，通过倒置显微镜观察死亡细胞（阳性细胞）的百分比来判定国外抗近交系小鼠H-2抗原单克隆抗体和国产抗近交系小鼠H-2单克隆抗体的免疫反应结果。结果 进口抗体：H-2D^b（27-11-13）、H-2D^d（34-5-8S）、H-2D^k（15-5-5．3）、H-2K^k（16-3．22．4）与相应品系抗原反应，脾细胞死亡数达到60％以上。国产抗体：H-2D^b（2）、H-2D^d（4）、H-2D^k（32）、H-2K^b（33）、H-2K^d（31）、H-2K^k（23）分别与相应品系抗原反应，致脾细胞死亡数达60％以上。国产和进口单抗最终免疫反应结果一致。结论 国产抗近交系小鼠H-2抗原单克隆抗体可以用于检测小鼠H-2D区和H-2K区。     

微量抗原免疫法制备孕血清中早孕因子抗体及其鉴定

将210名妊娠3～8wk妇女静脉混合血清经DE_(52)、ConA—Sepharose CL-4B和Sephadex G-100 3次柱层析后获得的微量纯化的具有早孕因子(EPF)活性的孕G-Ⅳ组分,采用微量抗原免疫法免疫小鼠制备鼠抗人EPF免疫血清。间接ELISA测其抗体效价在1:800以上,且为有效阳性。花抑实验亦证明,所制备的免疫血清能中和孕血清及其提取物中EPF活性(与阴性对照比,P>0.05)。该实验方法简便、抗原用量少,适用于微量纯化抗原抗血清及(或)单克隆抗体的制备。     

人CTLA4单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :制备人的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA4 )的单克隆抗体。　方法 :利用蛋白纯化技术获得人CTLA4Ig蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞NS1融合 ,用ELISA法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用Western印迹和流式细胞检测仪鉴定所制备的单克隆抗体。　结果 :获得一个稳定的分泌抗人CTLA4的杂交瘤细胞株。该细胞克隆培养上清中所含的单抗能和经过PHA刺激后的人T细胞结合 ,但不能和经过PHA刺激后的小鼠T细胞结合。　结论 :利用重组人CTLA4Ig制备获得高特异性的抗人CTLA4单克隆抗体。     

小鼠脾内免疫法制备重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体

 目的 制备小鼠抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体,用于早期弓形虫感染的抗原检测。方法 用弓形虫RH株重组抗原SAG1进行常规免疫结合小鼠脾内免疫,杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA法筛选阳性克隆,经亚克隆建株。诱生腹水法制备抗体,protein-G亲合层析法进行纯化,测定其亚类、效价;Western blot法分析其特异性;夹心-ELISA法检测抗体的敏感性及特异性;检测弓形虫感染小鼠血液循环抗原,同时用PCR法检测弓形虫B1基因并比较结果。结果 获得2株抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体3B6、10C4,抗体均为IgG1,轻链均为κ链,Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫天然的和重组的SAG1抗原。3B6、10C4敏感度分别为31.3 ng和62.5 ng,与血吸虫病、钩虫病及疟疾患者血清均无交叉反应。弓形虫早期感染检测PCR及ELISA法阳性检出率分别为63.2%、47.4%。结论 成功制备小鼠抗重组弓形虫SAG1抗原单克隆抗体,初步用于早期弓形虫感染诊断。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备抗人甲状腺球蛋白（Ｔｇ）单克隆抗体，为建立高灵敏度的Ｔｇ检测方法做准备。方法：从人的甲状腺组织中提取Ｔｇ做抗原，经腹腔免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／ｏ融合，筛选及克隆化。结果：获得２株分泌抗人Ｔｇ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。鼠腹水抗体效价达１．０２×１０６。经免疫球蛋白类别及亚类的鉴定，２株单克隆抗体均为ＩｇＧ１亚类，轻链为Ｋ型。结论：我们制备的抗Ｔｇ单克隆抗体具有良好的免疫反应特性，符合Ｔｇ酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）的要求     

Monoclonal anti-idiotype antibody bearing the internal image of nasopharyngeal carcinoma associated antigen

目的　制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法　用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果　选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论　抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

癌细胞体外致敏脾细胞条件的探讨

本世纪初Carrel等企图用体外培养体系研究免疫反应机制。60年代后期用小鼠,人淋巴细胞体外致敏相继获得成功。近年来用体外致敏方法产生了针对某些抗原的单克隆抗体。但未见用细胞为抗原进行体外致敏的系统报道。本文以肝癌细胞系(PLC/PRF/5)为抗原于体外致敏小鼠脾细胞使之产生抗体及建立检测微量抗体产生的方法。对胸腺细胞、腹腔细胞、脾脏贴壁细胞在致敏过程中的作用等进行了初步探讨。     

抗乳腺癌单抗的制备及应用

目的：制备抗人乳腺癌单克隆抗体（McAb),用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究,为药物导向诊断和治疗奠定基础。方法：以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。用免疫荧光、免疫组化和免疫印迹法研究其识别抗原特性。结果：获得恒定分泌抗ZR75的杂交瘤细胞系BM109。单抗BM109属IgC1类型,其识别抗原是分子量为37KD的蛋白性抗原,主要表达在靶细胞膜上。在乳腺癌的免疫反应率为86.7%（26/30）,与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9.5%（4/42）,而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应。结论：获得1株较特异的抗乳腺癌单克隆抗体,该McAb对乳腺癌特异性高,对其他肿瘤交叉反应较小,可望进一步用于乳癌的诊断治疗以及发生发展的研究。     

脾内微量注射免疫法制备抗重组可溶性组织因子单克隆抗体

目的制备抗重组可溶性组织因子(r-sTF)单克隆抗体并建立检测组织因子(TF)含量的夹心ELISA法,以期为TF的深入研究及临床应用提供参考依据。方法取微量TF对Balb/c小鼠直接进行脾内注射免疫,分离小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞,融合后对杂交瘤细胞进行筛选克隆化培养;建立了3株稳定分泌TF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-C3、2-G9、3-H9;进而在小鼠体内诱生腹水,并用rprotein A亲合层析法纯化;经鉴定后用过碘酸钠法将辣根过氧化物酶标记于其中一株单抗上,建立夹心ELISA法测定正常人血浆中的TF含量。结果纯化的单抗用SDS-PAGE测定纯度,在Mr为150 000左右呈现一条带;Western blot测定显示1-C3、2-G9、3-H9分泌的单抗可特异地识别Mr为47 000的TF,经免疫球蛋白(Ig)类和亚类鉴定实验证实3株单抗均为IgG1;用夹心ELISA法检测正常人血浆中的TF含量为(130±80)pg/mL。结论用脾内微量注射法成功制备抗TF单克隆抗体及ELISA测定TF含量方法的建立,为TF的制备纯化和检测奠定了基础,也使TF的临床深入化研究成为可能。     

抗MUC-1抗体通过独特型免疫网络抗肿瘤生长

目的 探讨应用单克隆抗体于小鼠肿瘤模型，通过诱发产生抗独特型免疫应答而获取的抗肿瘤作用。方法 用经微球包裹识别MUC-1抗原的小鼠单克隆抗体CS20免疫小鼠，观察其诱导的体液及细胞免疫反应，并通过小鼠乳腺癌模型，验证CS20的抗肿瘤作用。结果 CS20治疗组可激活小鼠体内的抗独特型免疫网，产生高水平的Ab2和Ab3，且肿瘤的生长速度明显减慢，甚至消失。结论 抗体CS20可以诱导抗独特型抗体以及抗一抗独特型抗体的产生，增强体液免疫应答。CS20抗体对荷MUC-1阳性乳腺癌小鼠有一定治疗作用，为肿瘤免疫治疗提供一条可能途径。     

鼠痘病毒单克隆抗体杂交瘤细胞的建株及初步鉴定

目的：制备1株分泌高效价抗新分离的鼠疫病毒单克隆抗体的杂交细胞，提高早期检测病毒的敏感性。方法：从可疑病鼠分离出的1株鼠痘病毒，并以此株制备抗鼠痘病毒为抗原，免疫BALB／C小鼠，取脾细胞与SP2／0骨瘤细胞融合，获1株稳定分泌抗鼠痘病毒（EV）单克隆抗体的杂交瘤细胞株（NB－4）。结果：经初步鉴定证明，NB－4免疫球蛋白为IgG，针对的靶抗原分子质量为67ku，并对184份小鼠血清鼠痘病毒抗原进行检测，结论：NB－4有可能成为检测鼠痘病毒抗原较敏感的工具。