趋化因子受体CCR1、CCR5在多发性骨髓瘤中的表达及对瘤细胞与基质细胞黏附的影响

目的:观察趋化因子受体CCR1、CCR5在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞、骨髓基质细胞、人多发性骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6中的表达及介导巨噬细胞炎症蛋白-1α对瘤细胞与基质细胞的黏附。方法:选择2004-08/2006-07在桂林医学院附属医院血液科住院的患者16例,男10例,女6例,中位年龄56岁,经国内统一标准确诊为多发性骨髓瘤患者。患者知情同意,并经医院伦理委员会批准。①实验方法:取样本进行骨髓单个核细胞与骨髓基质细胞的分离培养。人多发性骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6从外室传代引进后,在含体积分数为0.10胎牛血清的RPMI1640培养液中培养,每3天更换1次培养液,本实验用的细胞均处于对数生长期。②实验评估:半定量RT-PCR及Western-blot技术检测骨髓瘤骨髓单个核细胞、骨髓基质细胞及骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6中的CCR1、CCR5表达;MTT微量酶反应比色法定量检测瘤细胞与基质细胞的黏附。结果:①约43.8%的多发性骨髓瘤患者骨髓及2/3的多发性骨髓瘤细胞系均表达CCR1、CCR5两种受体,约6.25%的多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞仅表达CCR1受体,且大部分能在蛋白质水平上进一步得到鉴定。②加巨噬细胞炎症蛋白1α单抗、CCR1和/或CCR5单抗组,KM3、SKO007、XG-6细胞与基质细胞的黏附作用较对照组明显下降(P<0.05),而单抗组间无明显差异(P>0.05)。结论:大部分多发性骨髓瘤患者及多发性骨髓瘤细胞系表达CCR1、CCR5两种受体,巨噬细胞炎症蛋白1α可能是运用CCR1、CCR5两种受体来介导瘤细胞与基质细胞的黏附。     

《中华血液学杂志》2004年第25卷关键词索引

关键词基本按照中国医学科学院医学信息研究所 1998年出版的《医学主题词表 (英汉对照 )》标引 ,按照汉语拼音字母及论文发表的先后顺序排列。A阿糖胞苷　含有大剂量阿糖胞苷的联合化疗治疗难治和复发急性白血病 (吴德沛 ,傅 ,唐晓文 ,等 ) (11) :696癌基因　癌基因iASPP在急性白血病细胞中的表达及其临床意义 (张新伟 ,王敏 ,田征 ,等 ) (7) :43 3癌基因蛋白质类　K5 62细胞定向分化时Bcl 6的表达 (张永清 ,黄高 ,陈协群 ,等 ) (9) :5 69B白细胞介素 6　巨细胞病毒对多发性骨髓瘤细胞系KM3细胞的感染及其对IL 6mRNA表达的影响 (…     

抗原肽对人多发性骨髓瘤细胞HLA-E的表达调控及对NK细胞抗肿瘤活性的影响

目的研究HLA-I类基因抗原肽(B7)、巨细胞病毒(CMV)抗原肽对人多发性骨髓瘤细胞系U266表面HLA-E分子表达水平的调控及其表达水平的改变对NK细胞抗肿瘤活性的影响。方法将体外合成的B7及CMV抗原肽与U266共同孵育,流式细胞术检测这些抗原肽孵育前后U266细胞表面的HLA-E分子表达水平。分离健康人NK细胞,利用CD107a表达检测法研究U266细胞表面HLA-E表达水平改变后,NK细胞对其杀伤活性的变化。结果 HLA-B7抗原肽,CMV抗原肽,均可显著上调人多发性骨髓瘤细胞U266表面的HLA-E分子表达水平,且HLA-E表达上调后,可明显特异性抑制NK细胞杀伤肿瘤细胞活性。结论在肿瘤微环境中,细胞表面HLA-E表达上调可能是肿瘤细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的一个重要手段之一。     

EGCG对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的抑制效应及机制初探

本研究探讨绿茶茶多酚成分之一表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对多发性骨髓瘤细胞KM3促血管新生作用的影响及其机制。体外培养多发性骨髓瘤细胞KM3,观察不同浓度EGCG作用后的培养上清对血管内皮细胞株HUVEC迁移和形成血管能力的影响。ELISA法检测KM3细胞培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)分泌水平;RT-PCR方法检测KM3细胞VEGF mRNA表达水平。结果表明:EGCG以浓度依赖方式抑制KM3细胞培养上清促内皮细胞迁移的作用,5,25,50和100μmol/L的EGCG迁移细胞数目分别为414±27,299±70,202±42及116±13个,且EGCG的浓度与内皮细胞的迁移数目呈负相关(r=-0.952,p<0.05)。同时,内皮细胞形成小管的面积随EGCG浓度的升高而减少,25及50μmol/L时的面积分别是88343.9±3231.1和60897.5±914.1μm2,均明显低于对照组(p<0.01),小管面积与EGCG浓度呈负相关(r=-0.888,p<0.05)。5、25、50、100μmol/L的EGCG作用于KM3细胞48小时后培养上清中VEGF的含量分别为1399.0±47.4pg/ml,660.1±5.7pg/ml,108.5±5.8pg/ml和26.2±18.6pg/ml,与对照组比较,25、50、100μmol/L组均有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示EGCG抑制KM3细胞VEGF的mRNA水平表达,且呈浓度依赖性。结论:EGCG能显著抑制多发性骨髓瘤细胞KM3的促血管新生作用;下调VEGF转录水平的表达,减少VEGF的分泌可能是其药理作用机制之一。     

体外沙利度胺抑制骨髓瘤细胞生长及其机制的研究

为了解沙利度胺对初治和复发难治多发性骨髓瘤患者离体瘤细胞生长的影响及其机制 ,用甲基纤维素集落培养法观察不同浓度沙利度胺对初治、复发难治多发性骨髓瘤患者瘤细胞集落形成的影响 ,用IL 6依赖性细胞系和流式细胞术检测 2 0 0 μg/ml沙利度胺作用下骨髓瘤细胞自分泌IL 6和瘤细胞表面IL 6受体的变化。结果表明 ,当沙利度胺浓度分别为 75和 10 0 μg/ml以上时对初治骨髓瘤细胞和复发难治的多发性骨髓瘤细胞集落形成有抑制作用 ,这种抑制作用随着沙利度胺浓度的增加而增强。沙利度胺浓度为 2 0 0 μg/ml时 ,骨髓瘤细胞自分泌IL 6的浓度在初治组和复发难治组分别为 (14 8.5± 96 .7)ng/ml和 (2 86 .2± 189.1)ng/ml,明显低于沙利度胺作用前的水平 (P <0 .0 0 1和 <0 .0 5 )。沙利度胺浓度为 2 0 0 μg/ml时骨髓瘤细胞表面IL 6受体水平在初治组和复发难治组分别为 16 .7%和 2 0 .2 % ,明显低于沙利度胺作用前的水平 (P <0 .0 0 1和 <0 .0 5 )。结论提示 ,沙利度胺不仅对复发难治患者的多发性骨髓瘤细胞体外生长有抑制作用 ,对初治患者也有作用。此外 ,体外沙利度胺可以抑制瘤细胞IL 6分泌和减少瘤细胞表面IL 6受体表达 ,这可能是沙利度胺治疗多发性骨髓瘤有效的机制之一。     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞及KM3细胞TRAIL受体表达的研究

目的　了解多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)及骨髓瘤细胞系(KM3细胞)中4种TRAIL受体的表达情况,探讨TRAIL的选择性杀瘤机制及化疗药物对TRAIL受体的影响。方法　应用半定量RT PCR和流式细胞术检测23例MM患者、15名正常对照者BMMNC和KM3细胞中4种TRAIL受体的表达,并比较了12例MM患者化疗前后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育前后4种TRAIL受体表达的变化。结果　MM患者BMMNC死亡受体DR4、DR5的表达均高于正常对照组(P<0. 05),DR5的表达高于DR4(P<0. 05);诱捕受体DcR1、DcR2在MM组中的表达明显低于正常对照组(P<0. 05);KM3细胞死亡受体DR4、DR5强表达,未检测到诱捕受体DcR1、DcR2的表达; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后DR5的表达均上调(P<0. 05)。结论　死亡受体DR4、DR5和诱捕受体DcR1、DcR2在MM患者BMMNC和正常人BMMNC中表达有差异,这可能是TRAIL可以选择性杀死MM细胞而对正常细胞无毒性作用的机制之一; MM患者化疗后BMMNC及KM3细胞与阿霉素共孵育后死亡受体DR5表达上调,提示化疗药物可能通过上调死亡受体DR5的表达而促使细胞凋亡。     

重组人红细胞生成素对人多发性骨髓瘤患者铁调节蛋白Hepcidin mRNA表达的影响

本研究探讨人多发性骨髓瘤血清对肝腺瘤细胞系Hep-3b细胞铁调节蛋白hepcidin表达的影响,及白介素-6(IL-6)单克隆抗体或重组人红细胞生成素(rhEPO)对其的抑制作用。在Hep-3b细胞培养液中按10%终浓度加入人多发性骨髓瘤患者血清,共培养后用逆转录聚合酶链式反应半定量方法检测Hep-3b细胞hepcidin mRNA的表达水平。在上述培养体系中,加入人IL-6单克隆抗体或rhEPO观察hepcidin mRNA表达的变化。结果表明,未治疗的多发性骨髓瘤组hepcidin mRNA表达量高于正常对照组及缺铁性贫血组,这种升高作用能被IL-6单克隆抗体或rhEPO完全抑制。对多发性骨髓瘤患者短期随访中,规律治疗能稳定血红蛋白,降低患者血清对Hep-3b细胞hepcidin mRNA的影响。结论:未治疗的多发性骨髓瘤患者血清能促进肝腺瘤细胞系Hep-3b细胞hepcidin表达,这种促进作用可被人IL-6单克隆抗体拮抗,提示IL-6可能导致Hep-3b细胞hepcidin表达量升高,从而造成慢性病性贫血(anemia of chronic disease,ACD)。这种促进作用也能被rhEPO抑制,提示rhEPO可能对ACD有治疗作用。在多发性骨髓瘤患者短期随访中,血红蛋白水平稳定,患者血清对Hep-3b细胞hepcidin mRNA的影响减小,这表明治疗使病情稳定,改善了ACD。     

三氧化二砷与硼替佐米联合应用对多发性骨髓瘤KM3细胞凋亡的作用及其机制研究(英文)

本研究探讨硼替佐米(Bor)单用及与三氧化二砷(As2O3)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞凋亡的影响及其相关机制。采用MTT法检测Bor单用及与As2O3联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC50值。采用AnnexinⅤ-FITC凋亡试剂盒检测各药物组KM3细胞早期及晚期凋亡率,流式细胞术测定各药物组KM3细胞跨膜电位的变化。采用RT-PCR检测各药物组KM3细胞Caspase-3、Bim、Bcl-xL mRNA水平的变化。结果表明,Bor联合As2O3对KM3细胞生长抑制明显高于Bor单用,处理72 h作用最明显〔(27.64±0.81)%vs(21.67±2.20)%,P<0.05〕。联合用药组KM3细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均较Bor单药组明显增多,前者在作用48 h时效果最明显〔(53.20±3.70)%vs(35.40±2.58)%,P<0.01〕,后者在作用72 h时效果最明显〔(63.96±2.97)%vs(54.08±3.76)%,P<0.01〕。联合用药组KM3细胞线粒体跨膜电位较Bor单药组明显下降,作用48 h时下降最明显。与Bor单药组比较,联合用药组KM3细胞Caspase-3 mRNA、Bim mRNA均升高,Bcl-xLmRNA下降。结论:在体外As2O3可增强Bor对KM3细胞增殖的抑制,增加KM3细胞的凋亡,并且可能通过抑制Bcl-xL mRNA表达,诱导Caspase-3和BIM mRNA表达的途径增强凋亡作用。     

可溶性抗CD47单抗对人树突细胞分化与功能的影响

目的探讨抗CD4 7可溶性单抗B6H12对树突细胞分化及功能的影响。方法利用rhGM CSF、IL 4、细菌脂多糖 (LPS)组合在体外诱导人外周血单核细胞为树突细胞 ,并在培养体系中添加单抗B6H12。以透射电镜观察树突细胞形态 ,流式细胞术分析树突细胞膜表面分子表达。半定量RT PCR法及ELISA法分别检测树突细胞IL 12mRNA表达水平及蛋白质含量。Brdu ELISA法检测树突细胞刺激同种异型淋巴细胞增殖能力。结果树突细胞膜表面有CD4 7高表达 (94 %～ 98% )。B6H12单抗处理的树突细胞组与未加B6H12单抗组比较 ,CD80 细胞为 (6 8.14± 7.4 1) %vs(89.17± 8.5 9) % ;CD86 细胞为 (6 7.33± 4 .71) %vs(87.2 7± 3.5 6 ) % ;CD83 细胞为 (40 .0 8± 14 .80 ) %vs(72 .77± 8.6 8) % ;CD1a 细胞为 (6 6 .4 5± 4 .0 6 ) %vs(95 .93± 3.0 3) % ,HLA DR 细胞为 (40 .6 7± 13.4 8) %vs(98.97± 1.0 1) %。B6H12单抗显著地下调树突细胞IL 12mRNA及IL 12 P70 表达水平 (P <0 .0 5 ) ,且Brdu掺入量也显著的降低 (P <0 .0 1)。结论　可溶性CD4 7单抗能影响人树突细胞向成熟分化 ,并抑制其功能。     

G蛋白偶联受体激酶6对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤细胞系U266、NCI H929为体外试验细胞组。分别用Western blot和quantitative real-time PCR检测GRK6的蛋白表达和mRNA表达。用Brd U试剂盒测定骨髓瘤细胞在GRK6抑制剂CX-4945的处理条件下的增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测其凋亡水平。结果:多发性骨髓瘤组中GRK6的表达明显高于对照组(P0.05),在Ⅰ期的表达高于对照组,Ⅱ期高于Ⅰ期,Ⅲ期高于Ⅱ期(P0.05)。GRK6在多发性骨髓瘤患者标本中蛋白和mRNA的表达均显著高于健康对照组。U266和MM细胞对抑制剂CX-4945呈现高敏性,而NCI H929对其敏感性低。GRK6 siRNA处理细胞后,GRK6在3组骨髓瘤细胞中的表达均显著下调。在细胞增殖检测实验中,CX-4945处理组U266、NCI H929和MM细胞增殖率分别为(58.25±18.24)%、(64.32±20.03)%和(45.42±25.01)%;凋亡检测中,U266、NCI H929和MM细胞凋亡率为(62.82±53.21)%、(43.25±47.05)%和(85.67±40.32)%。结论:多发性骨髓瘤GRK6的表达增强。GRK6抑制剂CX-4945能调节Rac1分子并抑制骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡。GRK6参与骨髓瘤细胞的增殖和凋亡通路。     

巨细胞病毒感染的细胞微丝骨架重组异常

本研究探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。用显微镜观察细胞形态,采用RT-PCR检测β-actin表达,Western-blot检测胞内肌动蛋白质含量,间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE)与微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果表明CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。感染后72、96小时,受染细胞内β-actin表达呈渐进性下调,差异显著(P<0.05);96小时后胞内β-actin含量则为未感染组的(74.2±13.4)%,差异显著(P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论CMV引起细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。     

Uptake of pp65 in in vitro generated pp65-positive polymorphonuclear cells mediated by phagocytosis and cell fusion?

OBJECTIVE: The cytomegalovirus (CMV) antigenemia consists of the detection of CMV pp65 in the nucleus of polymorphonuclear granulocytes (PMN), but it is unclear where and how PMN pick up virus particles or proteins. In an in vitro model for CMV antigenemia we investigated the mechanism of pp65 uptake by PMN that results in its expression in the nucleus. METHODS: A series of inhibitors of different mechanisms was used to study the uptake of pp65 by PMN during coculture with CMV-infected endothelial cells and we performed a morphological analysis by light and transmission electron microscopy. RESULTS: Nocodazole and cytochalasin B inhibited uptake of pp65 by PMN with 59.4 +/- 14.1 and 73.3 +/- 12.7%, respectively. The presence of anti-CMV hyperimmune globulin or lactoferrin during coculture reduced the number of pp65-positive PMN with 45.8 +/- 7.0 or 40.6 +/- 3.2%. Furthermore, a small number of the pp65-positive PMN obtained after coculture had fused to large cells with multilobed nuclei. PMN were observed that enclosed viral particles as well as free viral particles containing PMN in the cytoplasm. CONCLUSION: Fusion of viral particles with PMN and phagocytosis are both involved in the uptake of pp65.     

Proinflammatory potential of cytomegalovirus infection. specific inhibition of cytomegalovirus immediate-early expression in combination with antioxidants as a novel treatment strategy?

We observed the effects of antiviral therapy on CMV and/or oxidative-stress-induced stimulation of proinflammatory molecules including interleukin-8 (IL-8), melanoma growth stimulatory activity-alpha (GRO-alpha) and intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) using human foreskin fibroblasts. Ganciclovir, foscarnet or cidofovir completely suppressed virus replication, as demonstrated by CMV late (L) antigen production. These drugs did not influence CMV immediate-early (IE) antigen expression and had no effects on CMV-induced cellular changes in IL-8, GRO-alpha and ICAM-1 levels. Phosphorothioate oligonucleotide (ISIS 2922) suppressed both CMV IE and L antigen by 99%. ISIS 2922 completely suppressed CMV-induced upregulation of both chemokines and ICAM-1. Induction of oxidative stress by H(2)O(2) upregulated IL-8 expression. Oxidative stress and CMV infection showed synergistic effects on IL-8 expression. ISIS 2922 only partially inhibited the upregulation of IL-8 in infected cells treated with H(2)O(2), whereas cotreatment with ISIS 2922 and antioxidants inhibited the upregulation almost completely. The results showed that inhibition of CMV IE expression alone or in combination with antioxidants is promising for the treatment of CMV disease.     

多发性骨髓瘤特异APE1siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建多发性骨髓瘤(MM)特异的 APE1siRNA 表达载体 pSilencer K-IE-IgP-APE1siRNA,观察其对 MM 细胞 APE1蛋白表达的特异性敲除作用。方法设计合成的 APE1siRNAcDNA 序列与线性化 pSilencer2.0-U6母本质粒连接后,用 BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切,插入 IgP 寡核苷酸片段;随后用 EcoR Ⅰ酶切 pSilencer IgP-APE1siRNA,将线性化载体与回收 IEcDNA 片段用 T4 DNA 连接酶连接;再用 Xho Ⅰ酶切,与回收 Kappa cDNA 片段连接,克隆出 MM 特异表达载体 pSilencer K-IE-IgPAPE1siRNA,每次连接后均经酶切鉴定和测序确认。用脂质体转染法将重组质粒转染 KM3、HOS 和MDA-231细胞,Western blot 分析其对 KM3细胞 APE1的特异性敲除作用。结果 pSilencer K-IE-IgP-APE1siRNA 能特异且有效地敲除 KM3细胞 APE1蛋白表达,转染 siRNA 后培养2d 的 KM_3细胞 APE1相对表达水平为0.118±0.047,而单独脂质体转染组,APE1相对表达水平为0.988±0.029,基因缄默效率为90%。结论成功构建了针对 MM 的 APE1siRNA 表达载体。     

Protection from cytomegalovirus after transplantation is correlated with immediate early 1-specific CD8 T cells

T cells are crucial for the control of cytomegalovirus (CMV) in infected individuals. Although CMV-specific T cells can be quantified by various methods, clear correlates of protection from CMV disease have not been defined. However, responses to the pp65 protein are believed to play an important role. Here, the proportions of interferon gamma-producing T cells following ex vivo activation with pools of overlapping peptides representing the pp65 and immediate early (IE)-1 proteins were determined at multiple time points and related to the development of CMV disease in 27 heart and lung transplant recipients. Frequencies of IE-1-specific CD8 T cells above 0.2 and 0.4% at day 0 and 2 wk, respectively, or 0.4% at any time during the first months discriminated patients who did not develop CMV disease from patients at risk, 50-60% of whom developed CMV disease. No similar distinction between risk groups was possible based on pp65-specific CD8 or CD4 T cell responses. Remarkably, CMV disease developed exclusively in patients with a dominant pp65-specific CD8 T cell response. In conclusion, high frequencies of IE-1 but not pp65-specific CD8 T cells correlate with protection from CMV disease. These results have important implications for monitoring T cell responses, adoptive cell therapy, and vaccine design.     

Rapid generation of CMV pp65-specific T cells for immunotherapy

Adoptive immunotherapy with cytomegalovirus (CMV)-specific cytotoxic T lymphocytes (CTL) has been shown to be an effective means of restoring cellular immunity to this virus and preventing CMV infection after allogeneic stem cell transplantation. Problems with current strategies include requirements for generating dendritic cells or other antigen presenting cells for stimulating CTL and the time needed for cell culture. The adherent cell fraction of peripheral blood mononuclear cells from 6 CMV seropositive donors were pulsed with pooled CMV pp65 peptides and incubated with nonadherent peripheral blood lymphocytes. CTL lacking specific cytotoxicity to pp65 were restimulated at day 10 of culture using peptide pulsed adherent cells. Of the 6 CMV seropositive donors tested, 5 had specific cytotoxicity to CMV pp65 (range 31% to 75%), with no alloreactivity. The resulting pp65-specific CTL consisted of a mixture of CD4 and CD8 cells, with 1% to 29% of CD8 cells and 0.5% to 10% CD4 cells making interferon-gamma (IFN-gamma) in response to pp65. The donor from whom we could not detect CMV-specific cytotoxicity had detectable CD4 and CD8 CMV pp65 CTL by intracellular cytokine analysis for IFN-gamma. Using this simplified strategy for expanding CMV pp65 CTL, adoptive immunotherapy with pp65-specific CTL could be made available in a more timely manner for patients who have persistent or therapy refractory CMV infections.     

骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞均参与多发性骨髓瘤白细胞介素6过？…

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）在多发性骨髓瘤（ＭＭ）中过度表达的机制。方法：采用多聚甲醛分别固定骨髓瘤细胞ＫＭ３和骨髓基质细胞，再将其置于同一体系中共同培养，用Ｂ９细胞增殖试验测量培养上清中ＩＬ－６活性。结果：骨髓基质细胞及骨髓瘤细胞均能自发分泌ＩＬ－６，两种细胞经固定后几乎均不能分泌ＩＬ－６。固定的骨髓瘤细胞与未经固定的骨髓基质细胞共培养后，可使共培养上清中的ＩＬ－６活性明显增加，同时固定后     

CMVpp65基因修饰的树突状细胞刺激自身T细胞活化

巨细胞病毒（CMV）感染易发生于慢性移植物抗宿主病（cGVHD）患者，其特异性免疫依赖于T细胞活性。本研究探讨CMVpp65基因修饰的树突状细胞（DC）对自身T细胞的活化作用。采用具有高效转染非分裂细胞的慢病毒系统将CMV全长pp65基因导入鼠源性DC；采用CpG—DNA诱导DC细胞成熟；采用流式细胞术及免疫荧光方法测定T淋巴细胞抗原及IFNγ表达。结果表明：慢病毒感染DC的感染复数（multiplicity of infection，MOI）为50，最佳感染效率可达30％-40％；表达pp65基因的成熟DC能刺激自身naiveT细胞表达CD69；表达PP65蛋白的成熟DC能够刺激自身CD4^＋或CD8^＋T细胞分泌IFNγ。结论：pp65基因修饰、CpG—DNA诱导成熟的DC能体外激活CMV特异性T淋巴细胞。