华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及凋亡的影响

目的初步探讨华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖、细胞周期分布及凋亡的影响机制。方法利用MTT法、流式细胞仪检测华蟾素对人脑胶质瘤细胞SHG44增殖及细胞周期变化的影响。AO／EB染色、透射电镜观察人脑胶质瘤细胞SHG44凋亡细胞形态学的变化。Westernblot检测Bcl-2与Caspase8蛋白的表达。结果华蟾素（1μg／ml、10μg／ml）对细胞株增殖具有显著抑制作用（P〈0．05）,并呈时间和浓度依赖性。沆式细胞仪检测可见凋亡峰,Go／G。期细胞明显增多（P〈0．05）;华蟾素作用后可使Bcl-2蛋白表达降低．Caspase8蛋白表达升高。结论华蟾素可调控人脑胶质瘤细胞SHG44的周期进程,诱导Bcl-2及Caspase8差异性表达,且具有抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡的作用。     

2-甲氧基雌二醇对C6脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用

目的 探讨2-甲氧基雌二醇对C6脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法 以不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别作用C6胶质瘤细胞不同时间,采用甲基噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并用光镜及电镜观察细胞形态学变化。结果 经2-甲氧基雌二醇作用后,C6胶质瘤细胞活性受抑制,且呈时间依赖性,作用组与对照组之间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。此外,2-甲氧基雌二醇还可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在作用组与对照组之间存在显著差异（P〈0.05）;细胞周期检测发现作用组G1及S期细胞减少,G2期细胞增多,与对照组存在显著差异（P〈0.05）。结论 2-甲氧基雌二醇可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

NF2基因对细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察Ⅱ型神经纤维瘤（neurofibromatosisⅡ，NF2）基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用脂质体介导法将携带野生型NF2的真核表达载体导入大鼠神经鞘瘤RT4细胞，质粒转染成功后实验细胞分为pEGFP-N1组、pEGFP-NF2组和对照组（未转染质粒组），以Western blot分析目的基因的表达，并采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期。结果pEGFP-NF2组细胞merlin蛋白出现明显高表达。pEGFP-NF2组细胞生长的抑制率高达37．7％，与对照组相比较，差异具有统计学意义（P〈0.05）；而pEGFP-N1组细胞生长的抑制率与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞仪检测显示NF2可以阻断细胞周期，使其处于G1-G0期。结论野生型NF2可抑制大鼠神经鞘瘤RT4细胞的增殖，阻断细胞周期，使其处于G1-G0期。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度塞来昔布分别作用于C6胶质瘤细胞不同时间段,采用甲基噻唑蓝比色法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,并用光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化。结果经不同浓度塞来昔布作用后,C6胶质瘤细胞活性受到抑制,且呈剂量时间依赖性,实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异（P〈0.05）。细胞周期检测发现实验组S期细胞减少,G2期细胞显著增加,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）;同时,塞来昔布还可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在实验组与对照组之间有显著性差异（P〈0.05）。结论选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布可抑制C6胶质瘤细胞增殖,诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

载脂蛋白E在神经母细胞瘤细胞内表达对细胞生长的影响

目的观察人载脂蛋白E(apoE)在神经母细胞瘤细胞SK-N-SH内表达的分布情况及对细胞生长的影响。方法构建含apoEcDNA和绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体,转染至SK-N-SH细胞,经G418结合荧光动态监测筛选稳定表达人apoE基因的细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP-apoE融合蛋白在SK-N-SH细胞中的表达。采用MTT法和流式细胞术观察apoE3、apoE4对细胞增殖和细胞周期的影响。结果经酶切和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,经G418筛选得到的SK-N-SH细胞克隆中存在apoE基因表达,其表达分布与GFP不同,呈点状分布。转染apoE3的细胞增殖速度加快,G0G1期细胞比例降低,S期细胞增加;而转染apoE4的细胞则相反,表现为增殖速度减缓,G0G1期细胞比例增加,S期细胞减少。结论神经母细胞SK-N-SH细胞内apoE的表达对其生长具有表型特异性。通过建立稳定表达不同多态性的apoE的细胞克隆,为进一步研究apoE在神经细胞中的生物学功能以及apoE在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础。     

MSP58基因小干扰RNA对胶质瘤细胞系U251增殖的影响

目的观察核微球蛋白58（MSP58）基因特异性siRNA（small interfering RNA）对神经胶质瘤U251细胞的体外增殖的影响。方法体外化学合成针对MSP58基因的siRNA,脂质体法转染神经胶质瘤细胞系U251,荧光显微镜观察转染效率,逆转录酶-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测MSP58基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑法（MTT法）绘制细胞生长曲线,流式细胞仪（FCM）分析细胞周期。结果MSP58基因的特异性siRNA转染U251细胞后,MSP58的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖受到明显抑制;流式细胞仪检测显示转染后的U251细胞G2/M期细胞明显减少（P〈0.01）,S期细胞略有减少,G1期细胞明显增加（P〈0.01）,G1期发生明显阻滞。结论MSP58基因的特异性siRNA可明显抑制神经胶质瘤细胞U251的增殖,并引起G1期细胞阻滞。     

Bcl-2反义核酸对SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响

目的研究Bcl-2反义核酸对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的增殖和凋亡的作用。方法设Bcl-2反义核酸ASODN组、正义核酸SODN组、脂质体组及空白对照组。MTT法检测Bcl-2反义核酸对SK-N-SH细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果 ASODN组72h细胞增殖抑制率达(68.24±2.41)%,较空白对照组差异显著(P<0.01);ASODN可使SK-N-SH细胞周期阻滞于G2/M期,72h细胞凋亡率达(23.25±2.34)%。结论 Bcl-2反义核酸可抑制SK-N-SH细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

雷公藤红素对C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响

目的 探讨雷公藤红素对体外C6胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的影响及机制.方法 雷公藤红素处理体外培养的C6胶质瘤细胞,MTT法检测细胞增殖,Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期改变.蛋白印迹分析检测凋亡相关蛋白及细胞周期调控蛋白的表达变化.结果 雷公藤红素对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;2.56 μmol/L雷公藤红素处理C6胶质瘤细胞24h后,荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术检查显示,凋亡细胞比例由1.32％升高到19.34％;并且,处于G0/G1期的细胞比例由76.42％降低到54.52％,G2/M期细胞比例由9.29％升高到30.50％.蛋白印迹分析显示,雷公藤红素降低了Bcl -2及XIAP蛋白表达,促进了Bax及Caspase -3的表达以及PARP的剪切;雷公藤红素在诱导细胞周期调控蛋白p21、p27及cyclin B1蛋白表达增加的同时抑制了cdk2蛋白的表达.结论 雷公藤红素能够通过调节凋亡相关蛋白及细胞周期相关因子的表达影响C6胶质瘤细胞的凋亡及细胞周期阻滞.     

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的 探讨姜黄素通过Fas/FasL信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响.方法 以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、FasL mRNA和蛋白的表达水平.结果 随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P＜0.05),24 h的IC50为14.28 μmol/L.流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G舢压期.姜黄素作用胶质瘤后Fas和FasL在mRNA和蛋白表达水平上升(P＜0.05).姜黄索对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).结论 姜黄素可能通过上调Fas/FasL通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡.     

FoxM1抑制剂硫链丝菌素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨FoxM1抑制剂硫链丝菌素对髓母细胞瘤Daoy细胞株增殖及凋亡的影响. 方法 体外常规培养髓母细胞瘤Daoy细胞株,CCK-8法检测0、1、1.5、2、3、5μmol/L硫链丝菌素作用24、48、72 h后细胞存活率的变化;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法分别检测0、1、1.5、2μmol/L硫链丝菌素作用48 h后细胞FxoMl mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达. 结果 CCK-8检测显示不同浓度硫链丝菌素作用后Doay细胞存活率下降,且呈浓度和时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).24、48、72 h的IC50分别为(2.1±0.15)、(1.69±0.11)、(1.39±0.1)μmol/L; RT-PCR和免疫印迹实验显示,与0 μmol/L硫链丝菌素组比较,1、1.5、2μmol/L硫链丝菌素组细胞FoxMl mRNA及蛋白水平下降,G2/M期细胞细胞比例和凋亡率升高,凋亡蛋白bax表达增加,抗凋亡蛋白bcl-2表达减少,且均呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 FoxM1抑制剂硫链丝菌素可明显抑制Daoy细胞增殖,可能与阻滞细胞周期于G2/M期、改变bcl-2/bax表达诱发凋亡有关.     

蒿甲醚对人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响

目的研究蒿甲醚对体外培养的人胶质瘤细胞系U251细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法不同浓度蒿甲醚（25、50、100、200、400、800μmol／L）作用U251胶质瘤细胞,四甲基偶氮唑盐法测定药物抑制率和半抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测细胞周期的变化和细胞凋亡情况;Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡情况。结果蒿甲醚对U251细胞生长抑制率随药物浓度增加而显著增加（P〈O．05）,同时随药物作用时间延长而显著增加（P〈O．05）。药物作用24、48和72h,其IC50分别为849．28±25．89、518．93±32．83和172．99±6．06μmol／L,三者之间均差异显著（P〈0．05）。经400μmol／L蒿甲醚作用48h,Hochest33258荧光染色可观察到凋亡小体。经400μmol／L蒿甲醚作用24、48、72h,细胞凋亡率分别为（4．55±0．24）％、（12．82±1．88）％和（24．22±2．17）％,三者之间均差异显著（P〈0．05）;细胞周期分析显示,随着蒿甲醚作用时间的延长,G0/G1期细胞比例显著增加（P〈0．05）,S期和G2/M期细胞比例显著减少（P〈O．05）。结论蒿甲醚能抑制U251细胞生长,呈剂量和时间依赖性;其机制可能为将细胞阻滞在G0/G1期并诱导其凋亡。     

土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养人胶质瘤U251细胞，取对数期生长的U251细胞分为空白对照组和土木香内酯（浓度分别为2.5、5.0、10.0 μmol/L）组，每组各10个复孔。使用MTT法检测U251细胞的增殖抑制率，采用流式细胞术检测U251细胞的凋亡率，免疫印迹法检测PDK1/Akt/GSK3β蛋白表达，使用RT-PCR检测c-Myc, Cyclin D1 mRNA的表达水平。结果 随土木香内酯浓度增加，U251细胞增殖抑制率明显增高（P<0.05），细胞调亡率明显增高（P<0.05）。与空白对照组相比，木香内酯组U251细胞PDK1、Akt和GSK3β蛋白表达水平均无明显差异（P>0.05），但PDK1、Akt和GSK3β蛋白的磷酸化水平均显著降低（P<0.05）。随着土木香内酯浓度的增加，U251细胞c-Myc、CyclinD1 mRNA的表达水平明显降低（P<0.05）。结论 土木香内酯抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能是通过调节PDK1/Akt/GSK3β信号通路有关，且在一定范围内呈浓度依赖性。     

土贝母苷甲通过上调FADD/caspase-8/caspase-3的表达促进人胶质瘤U251细胞凋亡

目的研究土贝母苷甲(TBMSⅠ)诱导人胶质瘤U251细胞凋亡及其可能的内在机制。方法四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度的土贝母苷甲对U251细胞增殖的影响。Hoechst 33258荧光染色观察不同浓度土贝母苷甲处理U251细胞后细胞核形态的变化。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。Western blot分析土贝母苷甲对FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达水平的影响。结果土贝母苷甲以剂量依赖方式抑制U251细胞的增殖。土贝母苷甲处理后,U251细胞的细胞核表现出固缩浓染等凋亡特征,且随着药物浓度的增加,细胞数目逐渐减少。与对照组相比较,土贝母处理组(10、20、25μg/ml)的早期和晚期凋亡率均显著增加,差异有统计学意义(P﹤0.05)。10、20、25μg/ml土贝母苷甲处理组上调了FADD、caspase-8和caspase-3蛋白的表达水平,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论土贝母苷甲在体外能够明显的抑制U251细胞的增殖,其机制可能与上调FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。     

人脑胶质母细胞瘤在不同周期时相中P16和P21的表达

目的 探讨人脑胶质母细胞瘤细胞株U-251MG在不同周期时相中P16和P21的表达。方法 采用高同步率、高收获率的细胞周期同步化方法,把U-251MG细胞同步在不同的时期,利用免疫组织化学方法检测在不同周期时相中P16、P21的表达。结果 P16在所有周期时相均有表达,而且在G_1期表达最强烈;P21在除S期以外其它周期时相均有表达,同样在G_1期表达最强烈。结论 U—251MG的细胞增殖受细胞周期负性调控因子P16和P21的影响,但它们有各不相同的作用时相和机制。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞系U251细胞增殖的影响。方法应用不同浓度的MS-275作用于U251细胞,分别培养24、48和72h,采用细胞计数试剂盒检测其对U251细胞增殖的抑制作用,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态变化,碘化丙啶单染法检测细胞周期变化,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法经流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)经天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)3作用后的裂解产物。结果 MS-275对U251细胞增殖的抑制作用在相同作用时间下随药物浓度的增加而增大,在同一浓度作用下随作用时间延长而增大,其最佳浓度为10nmol/L。MS-275作用后U251细胞呈现凋亡,胞质和胞核浓缩或碎裂。10nmol/mlMS-275分别作用24、48和72h后细胞凋亡率分别为(2.1±0.4)%、(11.7±0.5)%和(29.0±2.3)%,三者差异显著(P<0.05);随作用时间延长,G1期细胞所占比例逐渐减少,G2期细胞所占比例先增多后减少,药物作用24h所占比例最高,S期细胞所占比例变化不明显,作用48h后开始出现亚G0凋亡峰,且逐渐增大,而对照组没有出现该峰;PARP被caspase3剪切。结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间双重依赖性;这种作用是通过激活caspase3信号通路诱导细胞凋亡实现的。     

氧化铁磁流体热疗对人良性脑膜瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察氧化铁磁流体热疗(MFH)对人良性脑膜瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法15例人脑膜瘤细胞短期原代培养,进行氧化铁磁流体单次加热或3次加热,加热温度42～44℃,持续30min。流式细胞仪检测细胞凋亡,四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖的变化。结果MFH(44℃,30min)单次加热和3次加热组中,人脑膜瘤细胞增殖抑制率分别为(12.62±0.78)%和(12.78±1.56)%,与对照组相比差异显著(P0.05)。MFH引起部分脑膜瘤细胞裂解坏死,散在细胞凋亡,但各组细胞凋亡率无明显差异。结论在人良性脑膜瘤体外实验中,氧化铁MFH(44℃,30min)可以明显抑制细胞增殖,但不能有效诱发细胞凋亡。