脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能，消除AML1-ETO的转录抑制，诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用。方法 应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达，Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡。结果 ①PB明显抑制Kasumi—1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为2．3mmol/L；②经PB作用后细胞阻滞于G0／G1期，伴有S期细胞减少；③PB可诱导Kasumi—1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加，并呈剂量和时间依赖性；④PB诱导Kasumi-1细胞凋亡，呈时间剂量依赖性，PB3mmol/L培养2d早期凋亡细胞增加，培养3d晚期凋亡细胞增加，培养5d出现明显DNA梯形条带；⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi—1细胞生长，使细胞阻滞于G0／Gl期；诱导细胞部分分化和凋亡。     

体外定向诱导鹿茸间充质干细胞向软骨细胞的分化

目的：间充质干细胞的诱导分化的研究多见于骨髓、脐血等组织，而在鹿茸组织中分离的间充质干细胞是否能诱导为软骨细胞目前尚不清楚。实验拟建立梅花鹿鹿茸生长中心间充质干细胞体外培养方法，观察转化生长因子β1体外诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞的可行性。 方法：实验于2006—03／2007—06在吉林大学畜牧兽医学院基础兽医研究室完成。①实验材料：4岁龄健康雄性梅花鹿由中国农科院左家特产研究所提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：于生长早期锯取梅花鹿鹿茸，在解剖显微镜下定位和切取间质层（突起部），即为鹿茸间充质干细胞所在的组织层。Ⅰ型胶原酶消化法原代分离培养鹿茸生长中心间充质干细胞，锥虫蓝染色显示细胞活性达90％以上，将活性确定后的细胞液氮冻存。取第3代细胞，用含10％胎牛血清以及10μg／L转化生长因子β1的条件培养基诱导培养。③实验评估：培养12d后于倒置显微镜下观察细胞形态，采用细胞化学及免疫细胞化学鉴定细胞。 结果：①鹿茸生长中心间充质干细胞的分离与培养：Ⅰ型胶原酶消化法培养可以获得均一的间充质干细胞，贴壁的间充质干细胞形态均匀，呈长梭形，克隆样生长，增殖迅速。②转化生长因子β1体外定向诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞：转化生长因子β1诱导分化的鹿茸间充质细胞生长迅速，诱导后细胞形态明显改变，呈典型的软骨细胞形态，甲苯胺蓝染色阳性，Ⅱ型胶原表达阳性。 结论：采用酶消化法可以从鹿茸生长中心间充质层中分离出间充质干细胞，在体外转化生长因子β1具有促进鹿茸生长中心间充质干细胞分化为软骨细胞的能力。     

壳寡糖对体外培养软骨细胞增殖的影响及对IL-1β诱导凋亡的保护作用

目的 体外实验研究不同浓度壳寡糖对软骨细胞增殖及IL-Iβ诱导细胞凋亡的保护作用.方法 从8周龄SD大鼠乳鼠膝关节分离、培养原代软骨细胞,鉴定后选用第2代软骨细胞进行实验.分别加入不同浓度壳寡糖培养48 h,通过CCK-8细胞计数法检测软骨细胞的增殖情况;采用IL-1β诱导软骨细胞凋亡,同时加入不同浓度的壳寡糖处理,倒置相差显微镜下观察软骨细胞形态及核分裂象的变化,通过流式细胞仪检测细胞早期凋亡比例,并通过Hoechst33258荧光染色检测软骨细胞凋亡细胞核的形态学变化.结果 CCK-8检测结果表明壳寡糖作用软骨细胞不同浓度、不同时间的软骨细胞增殖率比较均无显著性差异（P＞0.05）;流式细胞检测结果表明壳寡糖不仅扭转了细胞活力和增殖活性的下降,而且改善了IL-1β诱导的软骨细胞核染色质的损害,同时对软骨细胞凋亡率也有不同程度的降低.结论 一定浓度的壳寡糖对软骨细胞增殖无明显影响;壳寡糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,且呈剂量依赖性.     

5—氮胞苷对培养大鼠骨髓基质细胞β肌球蛋白重链表达的影响——骨髓干细胞移植与心肌修复的相关效应

目的 研究5—氮胞苷(5-AZ)对体外培养大鼠骨髓基质细胞(BMSC)中心肌特异性β肌球蛋白重链(β-MHC)表达的影响，探讨骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的条件。方法 体外分离培养大鼠BMSC，用不同浓度5-AZ诱导培养，以RT—PCR方法测定诱导前后β-MHC的表达。结果 正常培养大鼠BMSC不表达β-MHC。经5—AZ诱导24h并继续培养后，BMSC表达β-MHC，第1—4周内由1．89&;#177;0．37增至16．41&;#177;3．63（t＝0．495-5．446，P＜0．01＝；(1&;#215;10^-7)。(1&;#215;10^-5)mol/L 5-AZ使β-MHC的表达由7.30&;#177;1．77增至16．28&;#177;3．72(t＝0．442-2．669，P＜0．01)。结论 5-AZ诱导体外培养大鼠BMSC表达心肌特异性β—MHC，与诱导时间及浓度呈正相关，提示可诱导大鼠BSC向心肌样细胞分化。     

胰高血糖素样肽-1对胰岛β细胞的作用

目的:探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对第三丁基过氧化氢(tBHP)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6凋亡作用的机制.方法:体外培养胰岛β细胞株MIN6,分为对照组、tBHP(25μmol/L)组、GLP-1(10nmol/L)组和GLP-I+tBHP组.Annexin V-F ITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率:Griess法检测各实验组细胞内NO水平.结果:25μmol/L tBHP作用1h可诱导MIN6细胞凋亡,并使细胞内NO含量明显增加.预先经过10nmol/L GLP-1作用24h后,tBHP诱导的MIN6细胞凋亡明显减少,同时细胞内NO含量亦显著降低.结论:GLP-1可以抑制tBHP诱导的胰岛β细胞株MIN6凋亡,其机制可能与GLP-1减少tBHP诱导的NO合成有关.     

IL-1β对小鼠软骨细胞中 c-myc 蛋白表达的影响

目的：通过观察不同浓度IL-1β对软骨细胞c-myc蛋白表达的影响,探讨IL-1β在骨关节炎软骨损伤中的作用及机制并寻找有效治疗骨关节炎的方法。方法选用20只C57BL/6小鼠,体外进行关节软骨细胞的分离及原代培养;将原代培养的软骨细胞分为4组：A 组为空白对照组,采用含10% FBS 的RPMI-1640常规培养基培养;B、C、D组为IL-1β处理组,分别用含有1、10和100 ng/ml IL-1β的常规培养基培养,12 h后进行实验分析。采用Western blot和流式细胞仪检测法,观察各组c-myc蛋白表达情况及细胞凋亡情况。结果原代培养细胞24 h后开始贴壁,呈圆形或多角形,传至第4代、第5代细胞体积变大,逐渐成为梭形,甲苯胺蓝染色为软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒。与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞 c-myc 蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）;与对照组相比较,不同浓度 IL-1β处理组软骨细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论实验体外分离小鼠关节软骨,可成功获得高纯度,且传至3代以内活性率超过90%的软骨细胞;IL-1β可以按照剂量依赖方式上调软骨细胞c-myc蛋白的表达,同时增加软骨细胞凋亡率,说明IL-1β可能通过c-myc蛋白诱导软骨细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对体外培养Ins-1细胞作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ对体外培养的Ins-1细胞增殖及凋亡的作用。方法 :将血管紧张素Ⅱ和体外培养的Ins-1细胞共培养后,应用细胞增殖试验方法测定Ins-1细胞的增殖率,用流式细胞检测方法检测Ins-1细胞的早期凋亡率。结果血管紧张素Ⅱ在和体外培养的Ins-1细胞共培养12 h后,Ins-1细胞的增殖率明显下降,凋亡率明显增高,且与血管紧张素Ⅱ浓度相关。结论血管紧张素Ⅱ对体外培养的Ins-1细胞在特定浓度和时间的条件下有抑制细胞增殖,诱导凋亡增加的作用。     

血管紧张素Ⅱ对体外培养Ins-1细胞作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ对体外培养的Ins-1细胞增殖及凋亡的作用。方法：将血管紧张素Ⅱ和体外培养的Ins-1细胞共培养后,应用细胞增殖试验方法测定Ins-1细胞的增殖率,用流式细胞检测方法检测Ins-1细胞的早期凋亡率。结果血管紧张素Ⅱ在和体外培养的Ins-1细胞共培养12h后,Ins-1细胞的增殖率明显下降,凋亡率明显增高,且与血管紧张素Ⅱ浓度相关。结论血管紧张素Ⅱ对体外培养的Ins-1细胞在特定浓度和时间的条件下有抑制细胞增殖,诱导凋亡增加的作用。     

环孢霉素A对威猛诱导HL—60细胞凋亡的增强作用

我们在拓扑异构酶Ⅱ抑制剂威猛（Ｖｍ２６）体外诱导ＨＬ６０细胞凋亡的实验中加环孢霉素Ａ（ＣｓＡ），观察ＣｓＡ对Ｖｍ２６诱导ＨＬ６０细胞凋亡的调节作用。材料和方法１细胞培养ＨＬ６０细胞用含体积分数为１０％的小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基，在３７℃...     

99mTc-AnnexinB1的制备及其探测细胞凋亡的实验研究

目的 制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价.方法 应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1.采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性.在正常小鼠体内进行生物分布研究.采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti-Fas单抗诱导小鼠肝脏凋亡的动物模型检测99mTc-Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力,并用TUNEL染色证实细胞凋亡.结果 直接标记法制备的99mTc-Annexin B1具有很高的放射化学纯度和很好体外稳定性.与活化人血小板的结合实验表明,99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性.99mTc-Annexin B1在体内具有较快的清除特性,主要聚集于肾脏.地塞米松诱导18 h后,小鼠胸腺对99mTc-Annexin B1的摄取显著高于对照小鼠胸腺的摄取.Anti-Fas诱导后2 h时后,小鼠肝脏对99mTc-AnnexinB1的摄取显著高于为对照动物的肝脏摄取.结论 99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力,是一种新的细胞凋亡显像剂.     

猪骨髓间质干细胞的分离培养及分化潜能的鉴定

目的：建立猪骨髓间质干细胞(MSCs)的体外分离培养和鉴定的方法，探讨体外培养的间充质干细胞的一些生物学特点，为利用猪的实验研究提供实验基础。方法：猪的髂嵴穿刺吸取骨髓，经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞，接种后形成单层贴壁的成纤维样的细胞。检测细胞周期，多向诱导分化鉴定分离的细胞。结果：体外培养的原代MSCs12～14d达到融合，传代后仍具有分化成骨的能力，细胞周期显示有80％的细胞处于GO／G1期。结论：体外培养猪的MSCs具有分化成骨的潜能，生长稳定，传代后仍保持未分化状态．猪骨髓间充质干细胞分离培养体系的建立为基础研究和组织工程提供了一个有价值的动物模型。     

骨髓间充质干细胞向甲状腺细胞的分化

背景：特定环境下体外可定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向甲状腺细胞分化。目的：建立大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为甲状腺细胞的实验方法。方法：采用密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,应用促甲状腺素和胰岛素诱导,以未诱导组为平行对照。利用倒置光学显微镜、透射电镜观察细胞分化过程的形态学变化,免疫荧光等检测方法研究成人骨髓间充质干细胞的分化情况。结果与结论：诱导培养第7天可见分化细胞中有甲状腺细胞的特有基因如TSHr的表达,第9天检测到分化细胞中甲状腺细胞标记物TTF-1的表达;对照组未见变化。形态学与生物学证实了骨髓间充质干细胞可诱导培养为甲状腺细胞。     

转化生长因子β与细胞凋亡

转化生长因子β是一大类对许多细胞与组织都有作用的多功能细胞因子，包括调控细胞分裂周期、早期发育、分化、细胞外基质产生、造血、血管生成、细胞趋化、免疫功能及诱导凋亡。转化生长因子β介导的细胞生长抑制和凋亡的能力已在多种类型细胞中被发现。体外细胞培养和体内实验说明在转化生长因子β诱导细胞凋亡过程中，有多种细胞因子协同参与并有多种效应分子发挥作用。本文主要就转化生长因子β诱导细胞凋亡的机制、效应分子的作用以及与其他细胞因子的协同作用进行综述。     

神经生长因子对β—淀粉样蛋白25—35诱导海马细胞毒性的防治作用

目的 研究神经生长因子（NGF）对Aβ25－35诱导海马细胞毒性的防治作用。方法 取新生3d内大鼠海马细胞行体外培养7d，分别在加入Aβ25－35前后加入NGF和等体积培养液，采用MTT和β－tublin、ChAT免疫组化检测。结果 β－tublin免疫组化证实所培养的为特异性结构完整的海马神经元。MTT及免疫组化显示Aβ25－35导致细胞活力显降低及ChAT免疫阳性细胞明显减少。结论 NGF能有效地阻止和轻度地修复Aβ25－35诱导的海马细胞损伤，对阿尔茨海默病的防治提供了一定的实验依据。     

紫杉醇对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的观察紫杉醇体外抑制人白血病细胞SHI-1细胞的增殖活性及诱导细胞分化和凋亡的作用,并探讨其凋亡机制。方法以不同质量浓度（5、0．5、0．05、0．005mg／L）的紫杉醇与SHI-1细胞在体外共同培养,分别作用0、12、24、36、48h,通过细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态学、DNA含量测定、AnnexinV／PI、细胞线粒体跨膜电位（△φm）等分析细胞的凋亡。结果紫杉醇能促进SHI-1细胞的凋亡;0．05mg,／L紫杉醇处理对SHI-1细胞株增殖抑制及诱导凋亡作用最为显著。结论紫杉醇能抑制SHI-1细胞增殖活性,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,使SHI-1细胞停留在G2／M期。     

骨髓间充质干细胞向甲状腺细胞的分化

背景:特定环境下体外可定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向甲状腺细胞分化.目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为甲状腺细胞的实验方法.方法:采用密度梯度法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,应用促甲状腺素和胰岛素诱导,以未诱导组为平行对照.利用倒置光学显微镜、透射电镜观察细胞分化过程的形态学变化,免疫荧光等检测方法研究成人骨髓间充质干细胞的分化情况.结果与结论:诱导培养第7天可见分化细胞中有甲状腺细胞的特有基因如TSHr的表达,第9天检测到分化细胞中甲状腺细胞标记物TTF-1的表达;对照组未见变化.形态学与生物学证实了骨髓间充质干细胞可诱导培养为甲状腺细胞.     

As2O3和／或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27^Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义

本研究探讨三氧化二砷（As2O3）和／或转化生长因子-β1（TGF-β1）作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27^Kip1、cyclin E及内源性TGF—β1 mRNA水平的变化及其意义。用MTT法检测As2O3对NB4细胞的细胞毒性及IC50用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT—PCR检测P27^Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平。结果表明：As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡;As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系,24小时的IC50约为12μmol／L,48小时的IC50约为5μmol／L,72小时的IC50约为3μmol／L。As2O3和／或TGF—β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞,5μmol／L As2O3使NB4细胞阻滞在G2／M期,5ng／ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期,两者联合处理组主要使S期阻滞。As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27^Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调,而cyclin E的mRNA表达下调;联合处理组结果显示TGF—β1可增强As2O3上述作用。结论：As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;As2O3及外源性TGF—β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27^Kip1高表达以诱导细胞凋亡;TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达,或者通过上调P27^Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性,从而导致NB4细胞周期阻滞。     

阻断转化生长因子β1自分泌环基因治疗骨肉瘤的机制研究

目的 阻断骨肉瘤细胞TGF—β1自分组环能抑制肿瘤细胞的增殖活性，从而达到基因治疗骨肉瘤的目的，探讨巴断TGF—β1自分组环基因治疗骨肉瘤的机制。方法 将反义TGF—β1基因转染骨肉瘤细胞MG—63后，采用RT—PCR的方法检测肿瘤细胞BMP—2、IGF—1、bFGF基因表达的变化。结果 阻断TGF—β1自分组环后，骨肉瘤细胞BMP-2、IGF—1、bFGF基因表达明显降低或消失。结论 通过阻断自分组环以降低骨肉瘤细胞表达的TGF—β1后，肿瘤细胞其他各种细胞因子的表达明显抑制，肿瘤细胞生物学活性降低。研究阻断TGF—β1自分组环抑制肿瘤生长和发展的机制，将为开辟骨肉瘤基因治疗的新方向奠定基础。     

转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1与髓核细胞诱导脂肪间充质干细胞向髓核样软骨细胞分化的比较

背景:以往研究脂肪间充质干细胞培养方式多为单层培养,诱导方式主要集中于细胞因子的方法,而椎间盘体内微环境,除细胞因子对细胞影响外,在其三维环境中细胞间的相互作用还值得进一步研究.目的:在体外分别通过髓核细胞和转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1两种条件诱导,观察脂肪间充质干细胞向髓核细胞分化的差异.方法:分别单层培养兔的脂肪间充质干细胞与髓核细胞细胞,脂肪间充质干细胞培养至3代经鉴定后,按5×106个细胞制成微球,置于Transwell培养板中培养,分别通过髓核细胞微球及转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1诱导;于诱导前、诱导7,14 d,观察细胞形态变化,并通过RT-PCR对Ⅱ型胶原、蛋白多糖水平进行测定.结果与结论:在体外诱导7,14 d,两组脂肪间充质干细胞微团体积、形态无明显区别.RT-PCR检测结果显示7 d两组与髓核诱导组均有Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达,但转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1组表达更强;诱导14 d髓核诱导组Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达明显增高,优于转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1组.结果表明,在体外髓核细胞和转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1对脂肪间充质干细胞进行诱导均有促进其向髓核细胞分化作用,而转化生长因子β1、胰岛素样生长因子1为正常髓核细胞分泌重要因子,说明髓核细胞对脂肪间充质干细胞的诱导之间除细胞因子作用外,尚存在相互促进增殖分化作用.     

完全脱钙骨基质与骨髓间充质干细胞体外诱导构建组织工程纤维软骨

背景：含有骨形态发生蛋白的完全脱钙骨基质可使骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化并维持其软骨细胞的特性,在软骨发生过程中发挥重要作用。目的：将骨髓间充质干细胞与完全脱钙骨基质在体外诱导培养成纤维软骨组织以及观察培养体系与支架材料对细胞凋亡的影响。方法：采用全骨髓培养法分离培养猪骨髓间充质干细胞,取第1代骨髓间充质干细胞均匀接种到完全脱钙骨基质上,以含有转化生长因子β1、胰岛素样生长因子、地塞米松、抗坏血酸及体积分数10%FBS的高糖DMEM诱导培养液培养作为实验组,将单层诱导培养、单层基础培养的骨髓间充质干细胞、空白完全脱钙骨基质作为对照,于培养第1,2,3,4周进行大体形态观察以及Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的RT-PCR定性检测;培养4周进行细胞凋亡检测。结果与结论：实验组可检测到Ⅰ型胶原的持续表达,Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖表达逐渐增加。单层诱导培养组可检测到Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达及Ⅰ型胶原的持续表达,但表达量远低于实验组;实验组细胞凋亡率高于单层诱导培养组、单层基础培养组。说明转化生长因子β1、胰岛素样生长因子1体外诱导培养的骨髓间充质干细胞-完全脱钙骨基质可以表达特异性软骨基质,三维环境培养细胞外基质的表达量明显高于单层诱导培养;静态培养系统对三维培养的细胞凋亡有影响。