丙型肝炎病毒NS5B在Huh-7细胞中的转染与表达

目的 建立丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂ表达的人肝系。方法 以脂质体共转染ＮＳ５Ｂ基因人Ｈｕｈ－７细胞,以ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ在ＤＮＡ水平检测转染的结果,以ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了Ｈｕｈ－７细胞中有ＮＳ５Ｂ的蛋白表达。结果 在转这ＮＳ５Ｂ质粒的细胞系中有ＮＳ５Ｂ基因的存在和ＨＣＶ－ＲＡＮ多聚酶的表达。     

糖皮质激素对哮喘患者白细胞介素—5mRNA表达与嗜酸性粒细胞激活作…

为了观察糖皮质激素对哮喘患者白细胞介素（ＩＬ）－５ｍＲＮＡ表达与嗜酸性粒细胞激活作用的影响，本研究用逆转录（ＲＴ）－聚合酶链反应（ＰＣＲ）法半定量分析了哮喘患者用糖皮质激素治疗前后外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达水平的变化，检测了血清嗜酸细胞阳离子蛋白（ＥＣＰ）浓度、一秒钟用力呼气容积（ＥＦＶ１）下降２０％时的乙酰甲胆碱（ＭＣＨ）激发浓度（ＭＣＨ－ＰＣ２０值）和基础ＦＥＶ１占用力     

丙型肝炎病毒NS_5B在Hub-7细胞中的转染与表达

目的建立丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂ表达的人肝细胞系。方法以脂质体共转染ＮＳ５ＳＢ基因人Ｈｕｂ－７细胞,以ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ在ＤＮＡ水平检测转染的结果,以ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实了Ｈｕｂ－７细胞中有ＮＳｕＢ的蛋白表达。结累在转染过ＮＳＳＢ质粒的细胞系中有ＮＳＳＢ基因的存在和ＨＣＶ－ＲＮＡ多聚酶的表达。结论我们在Ｈｕｂ－７细胞中建立了ＨＣＶ－ＲＮＡ多聚酶表达系统,它有助于研究ＨＣＶ复制机制和为基因治疗丙型肝炎打下基础。     

血清雌激素与肝细胞癌转移的关系

目的了解血清雌激素升高与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）转移的关系．方法应用放射免疫分析法（ＲＩＡ）对ＨＣＣ患者血清雌二醇（Ｅ２）含量进行了检测，并应用原位杂交研究外源性Ｅ２对肝癌细胞系ＣＢＲＨ７９１９血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）和层粘蛋白受体（ＬＮＲ）表达的影响．结果ＨＣＣ患者血清Ｅ２水平较正常者显著升高，且ＨＣＣ有转移者血清Ｅ２水平较无转移者亦显著升高；原位杂交结果显示，外源性Ｅ２能够增加ＣＢＲＨ７９１９细胞表达ＶＥＧＦ和ＬＮＲｍＲＮＡ．结论血清Ｅ２水平增高与ＨＣＣ转移密切相关，它有可能通过促进ＶＥＧＦ和ＬＮＲ的合成而影响肿瘤的转移过程．     

乙型肝炎病毒X蛋白对NFкB启动子和增强子反式激活作用

应用杆状病毒穿梭质粒载体与ＨＢＶＸ表达质粒共转染ＨｅＰＧ２细胞,研究ＨＢＶＸ蛋白对杆状病毒载体中的ＮＦкＢ启动子和增强子反式激活作用,作为进一步杆状病毒载体应用研究的基础。 １．材料与方法：（１）为构建ＮＦкＢ启动子和增强子驱动的氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）报告基因质粒,合成寡核苷酸引物 Ｆ１含ＮＦкＢ启动子、增强子序列（３０ ｂｐ）及 ＣＡＴ启动于 ５’末端序列（２０ｂｐ）,引物 Ｆ２含 ＣＡＴ基因 ３’端序列,以ｐｃＤＮＡ ３．１／ＣＡＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）质粒为模板, ＰＣＲ扩增获得ＮＦкＢ启动子…     

丙型肝炎患者外周B淋巴细胞系及HCV的形态学研究

研究ＨＣＶ对人Ｂ淋巴细胞的感染 ,建立ＨＣＶ感染的丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞模型 (ＣＢＣＬ) ,并进行ＨＣＶ的形态学研究 ,观察ＨＣＶ在其中的复制及ＨＣＶ形态学及超微结构。用ＥＢ病毒转化Ｂ细胞建立Ｂ细胞系 ,以逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)、免疫组织化学、原位杂交方法检测Ｂ细胞系上清液及细胞内的ＨＣＶ抗原及ＨＣＶＲＮＡ ,并通过电镜对ＨＣＶ进行形态学研究。用ＥＢ病毒转化丙型肝炎患者Ｂ淋巴细胞传代培养 ,使其成为永生细胞系。用抗ＨＣＶ ＮＳ3、ＮＳ5、ＣＯＲＥ单克隆抗体检测ＣＢＣＬ中ＨＣＶ抗原 ,发现阳性颗粒主要见于…     

丙型肝炎病毒RNA聚合酶可溶性和抗原性的研究

目的在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达ＨＣＶ ＲＮＡ聚合酶,研究其可溶性的条件,进一步研究它的抗原性,为研究其活性打下基础。方法构建表达载体 ｐＱＥ－５Ｂ－ＦＬ和 ｐＱＥ－５Ｂ－△Ｃ２１。在 Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｍ１５）菌株中表达。在不同诱导条件下分析其可溶性,在获得ｐＱＥ－５Ｂ－△Ｃ２１可溶性蛋白后,通过Ｎｉ－ＮＴＡ柱纯化。纯化后得到的目的蛋白进行ＥＬＩＳＡ和 ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果在 Ｅ．ｃｏｌｉ中表达了 ｐＱＥ－５Ｂ－ＦＬ和 ｐＱＥ－５Ｂ－△ Ｃ２１重组蛋白,二者在 ３７℃诱导条件下均以包涵体形式存在,ｐＱＥ－５Ｂ－△２１重组蛋白在１８℃诱导条件下５０％以可溶形式存在,通过ＥＬＩＳＡ和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表明该蛋白具有抗原性。结论在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达的ＨＣＶ ＲＮＡ聚合酶有良好的可溶性及抗原性。     

TGF—β1表达与小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡的关系

本实验通过给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种柯萨奇Ｂ－３ｍ病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱发病毒性心肌炎（ＶＭＣ）感染病毒９ｄ后，ＶＭＣ检出率９３．３３％，应用原位末端标记法（Ｔ／ＶＮＥＬ）及免疫组化技术检测发现，７６．６７％感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞，７３．３３％，有ＴＧＦ－β１的表达，二者之间分布区域一致，提示细胞凋亡可能参与ＣＶＢ３ｍ诱导的ＶＭＣ的发生，发展，而ＴＧＦ－β１可能参与ＶＭＣ细胞凋亡的调控。     

丙型肝炎病毒E1,E2／NS1,NS5蛋白基因在大肠杆菌内的表达及其产物的？…

目的 在体外表达及纯化ＨＣＶ不同功能区的病毒蛋白，用于研究ＨＣＶ各功能区抗体的临床意义。方法 将ＨＣＶ Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１，ＮＳ５区的部分基因片段克隆到表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲ１中ＭＢＰ编码基因的下游，在大肠杆菌中进行表达。     

网上快讯

美国糖尿病协会 (ＡＤＡ) 2 0 0 2年第 6 2届年会消息β细胞凋亡机制1.白细胞介素 1β介导 β细胞中ＣＲＥＢ诱导的ｂｃｌ 2表达下调 (2 1 ＯＲ)研究人员发现 ,当ＭＩＮ 6细胞暴露于白细胞介素 1(ＩＬ 1) β时 ,培养液中Ｂｃｌ 2蛋白含量显著下降 ,进一步研究显示ＩＬ 1β使Ｂｃｌ 2启动子活性下降。另外 ,以ＩＬ 1β长期处理ＭＩＮ 6可使转录因子ＣＲＥＢ磷酸化下降 (45 % )且ＣＲＥＢ蛋白含量显著降低。如将ＣＲＥＢ基因腺病毒转染ＭＩＮ 6细胞可防止细胞因子诱导的细胞凋亡。因此研究人员认为通过下调ＣＲＥＢ的功能以降低ｂｃｌ 2表达…     

HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达

探索ＨＢＶ信号肽区热点变异对ＨＢｅＡｇ表达和基因组复制的影响。采用分子生物学方法 ,设计引入ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切位点的引物扩增ＨＢＶ的前Ｃ/Ｃ片段 ( 1814 2 4 52 ) ,经ＫｐｎⅠ和ＨｉｎⅢ酶切后连于ＥＢＯ真核表达载体 ,利用定点突变技术对连接载体进行Ａ1896 Ａ1899点的定点诱变。将突变前后的质粒以脂质体介导法转染Ｃｏｓ 7细胞 ,检测突变前后ＨＢｅＡｇ表达的改变。经错配ＰＣＲ ＲＦＬＰ和测序分析 ,确定突变的克隆。突变前后的质粒转染Ｃｏｓ 7细胞经稳定表达 ,结果未突变的ＥＢ0 前Ｃ/Ｃ重组质粒ＨＢｅＡｇ表达为强阳性 …     

完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究

目的　研究Ｂａｘ 蛋白和热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ 在完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）预防ＮＯＤ 鼠胰岛炎和糖尿病中作用及意义。方法　给４ 周龄雌性ＮＯＤ 鼠后脚板注射５０ μｌ ＣＦＡ 和生理盐水（ＮＳ组） ，于３０ 周龄或糖尿病发生时处死，胰腺组织置１０ ％ 中性福尔马林固定后常规制成石蜡切片，ＨＥ染色后行光镜下胰岛炎评分，ＡＢＣ免疫组化染色Ｂａｘ 蛋白和ＨＳＰ７０ 并光镜下计数。结果　ＣＦＡ 组鼠胰岛内炎计数和胰岛炎评分均数均明显低于ＮＳ组鼠（Ｐ＜ ０．０１）；ＣＦＡ 组鼠无１ 只发生糖尿病，ＮＳ组鼠中有３ 只（６０％ ）发生糖尿病；ＣＦＡ 组鼠胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白阳性率明显低于ＮＳ组鼠，而ＨＳＰ７０ 阳性率明显高于ＮＳ组鼠，均有极显著性差异（Ｐ＜ ０．０１） ； 胰岛炎分值与Ｂａｘ 蛋白阳性率呈正相关（ｒ＝０．６１３） ，与ＨＳＰ７０ 阳性率呈负相关（ｒ＝ － ０．９１３）。结论　ＣＦＡ 能减轻ＮＯＤ 鼠胰岛炎发生程度和预防糖尿病发生，ＣＦＡ能抑制胰岛细胞Ｂａｘ 蛋白表达和诱导胰岛细胞ＨＳＰ７０ 表达。     

恶性疟原FCC-1 HN株EBA-175和HRP-II基因片段在HeLa细胞中的表达及鉴定

目的　在 Ｈｅ Ｌａ 细胞中表达恶性疟原虫红细胞结合蛋白 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和富组氨酸蛋白 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ, 进一步研究其生物学功能和免疫学特性。方法　将 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ 部分基因串接插入 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 真核表达载体, 获得重组表达质粒 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ Ｅ Ｂ Ａ１７５ － Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ。采用磷酸钙－ Ｄ Ｎ Ａ 共沉淀法将重组质粒转染 Ｈｅ Ｌａ 细胞进行体外表达, 对表达产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、 Ｄｏｔ－ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔ 鉴定。结果　表达产物占表达蛋白总量的１６４ ％ , 相对分子量与预设计的４８ｋ Ｄａ 基本相符。表达产物与鼠抗恶性疟原虫血清及构建的重组质粒免疫鼠血清产生特异免疫反应。结论　表达载体 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 在 Ｈｅ Ｌａ 细胞内可表达出具有一定免疫学活性的恶性疟原虫重组抗原蛋白。     

脂质体干扰素的体外抗乙型肝炎病毒效应

本文采用２．２．１５细胞进行脂质体干扰素与干扰素的体外抗乙型肝炎病毒实验，用ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｅＡｇ，用反向血凝法及ＥＬＩＳＡ法测ＨＢｓＡｇ，用斑 交法测ＨＢＶ ＤＮＡ，结果证实，脂质体ＩＦＮ体外对ＨＢｅＡｇ的抑制率较ＩＦＮ高，能较好地抑制ＨＢＶ ＤＮＡ，但与ＩＦＮ一样，对ＨＢｓＡｇ无抑制作用。     

慢性HBV感染时血清可溶性Fas浓度的变化及临床意义

目的 观察ＨＢＶ复制状态对肝细胞Ｆａｓ分子表达的影响。探讨慢性ＨＢＶ感染时血清可溶性Ｆａｓ分子浓度的变化及可能的临床意义。方法 ８１便来慢性肝炎患者肝穿刺标本（慢性活动性肝炎１９例,慢性迁延性肝炎６２例）,患者血清标本于－７０℃冷藏。肝组织本Ｆａｓ分子用免疫组化ＬＳＡＢ法检测,肝细胞凋亡的检测用ＤＮＡ末产示记法（ＴＵＮＥＬ法）。血清ＨＢＶＤＮＡ用ＰＣＲ法检测,血清ｓＦａｓ浓度用ＥＬＩＳＡ法检测。结     

福建肝癌细胞EBV感染与HBV及P53蛋白表达的关系

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）中ＥＢＶ与ＨＢＶ感染的相关性及ＥＢＶ与Ｐ５３蛋白表达的关系．方法采用原位杂交技术以地高辛标记的单链ｃＤＮＡ探针、生物素标记的双链ｃＤＮＡ探针及免疫组化ＳＰ法检测ＨＣＣ５９例（含癌旁肝组织）和９例肝硬变组织中高拷贝数ＥＢＥＲ１（ＥＢＶ编码的小ＲＮＡ）、ＨＢＶＤＮＡ和Ｐ５３蛋白．结果肝癌细胞核内ＥＢＥＲ１阳性率为２０３％,显著高于癌旁肝组织（Ｐ＜００１）．肝癌组织内ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５９３％,ＥＢＶ存在与ＨＢＶ感染无明显相关性（Ｐ＞００５）．肝癌组织内Ｐ５３蛋白表达率为３３９％,Ｐ５３表达与ＥＢＥＲ１无显著关系（Ｐ＞００５）．结论肝癌细胞内ＥＢＶ感染与ＨＢＶ存在无明显关系,肝癌中Ｐ５３表达与ＥＢＥＲ１无关     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达及临床意义

我们应用逆转录 ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,对 37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达进行检测 ,初步探讨其在活化诱导慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法一、病例收集我院 1998～ 1999年间收住的 37例慢性乙型肝炎患者 ,男 2 6例 ,女 11例。年龄 16～ 6 0岁 ,平均 ( 35± 12 )岁。诊断按 1995年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准。ＡＬＴ >10 0Ｕ/Ｌ ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性。排除ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＥＶ感染 ,以及近 3个月应…     

恶性疟原虫疫苗研究X.MSP1中类表皮生长因子1与PfCMR基因？…

目的 克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原，为疟疾疫苗研究奠定基础。方法 将恶性疟原虫ＭＳＰ１中类表皮生长因子１（ＥＧＦ－１）基因与人工化学合成的抗原复合基因ＰｆＣＭＲ串接，插入高效非融合型蛋白表达载体ｐＢＶ２２０，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，转化菌经４２℃热诱导表达，表达产物用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ分析。结果 构建成功重组质粒ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＥＧＦ－１，经热诱导后表达出含外     

丙型肝炎病毒E1，E2/NS1，NS5蛋白基因在大肠杆菌内的表达及其产物的初步应用

目的在体外表达及纯化ＨＣＶ不同功能区的病毒蛋白，用于研究ＨＣＶ各功能区抗体的临床意义。方法将ＨＣＶＥ１，Ｅ２／ＮＳ１，ＮＳ５区的部分基因片段克隆到表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中ＭＢＰ编码基因的下游，在大肠杆菌中进行表达。结果表达的融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，ＭＢＰ－ＮＳ５的分子量分别为５７０００、６５０００、６２０００，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明这些融合蛋白具有ＨＣＶ的抗原活性。将这三种融合蛋白纯化后作为抗原检测了丙型肝炎患者血清９５份，其中抗－ＨＣＶＥ１阳性率为１０．５％，抗－ＨＣＶＥ２／ＮＳ１为６３．２％，抗－ＨＣＶＮＳ５为５３．７％。结论本实验表达的ＨＣＶ融合蛋白在ＨＣＶ感染的血清学诊断中具有一定的价值。     

丙型肝炎病毒及乙型肝炎病毒联合基因免疫实验研究

为ＨＣＶ/ＨＢＶ重叠或混合感染的防治寻求新的高效联合基因免疫策略 ,分别将与ＨＣＶ核心区基因互补的ｃＤＮＡ和ＨＢＶ核心区基因克隆于具有两套独立表达单元的真核表达载体 ｐＲＳＣ的巨细胞病毒启动子和ＲＳＶ启动子下游 ,称为ｐＲＳＣ ＨＢＶ/ＨＣＶ ,转染ＳＰ2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法观测蛋白的表达 ,免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ;用酶联免疫法、ＭＴＴ法及荷瘤试验观察小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果表明 ,ｐＲＳＣ ＨＢＶ/ＨＣＶ转染ＳＰ2 / 0细胞可见ＨＢｃＡｇ及ＨＣＶ核蛋白染色阳性荧光细胞 ,相对分子质…