肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1增强卵巢癌侵袭能力

目的:检测肿瘤相关成纤维细胞Twist1基因表达,探讨肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1对卵巢癌侵袭能力的影响。方法:CSIOVDB数据库检索Twist1基因在卵巢各种组织类型中的表达水平。分离原代正常成纤维细胞(NOF),以及卵巢癌患者的原代肿瘤相关成纤维细胞(CAF),免疫荧光实验验证Twist1基因在NOF和卵巢癌CAF细胞中的表达差异。TCGA数据库489例卵巢癌中从mRNA水平验证Twist1与CAF经典活化指标FAP的相关性,以及炎症因子IL-6的相关性。GSEA(Gene Set Enrichment Analysis)软件探究CAF高表达Twist1与IL-6通路富集的关系。Western blot法验证下调Twist1基因对IL-6表达的影响。Transwell实验探究卵巢癌CAF-肿瘤细胞共培养体系中IL-6对卵巢癌细胞系SKOV3侵袭能力的影响。结果:Twist1基因在卵巢癌CAF中的表达水平明显高于肿瘤细胞和正常成纤维细胞。TCGA数据库中Twist1基因和FAP及IL-6基因呈显著正相关(P0.0001)。GSEA软件分析结果示,卵巢癌患者中CAF高表达Twist1的同时,肿瘤上皮表现为IL-6通路明显富集(P0.05,FDR25%)。Western blot法结果表明,Twist1基因下调后,IL-6基因表达量明显降低。在共培养体系中加IL-6中和抗体,卵巢癌细胞侵袭力明显下降。结论:肿瘤相关成纤维细胞高表达Twist1,可能通过提高IL-6水平增强卵巢癌侵袭能力。     

妊娠期糖尿病孕妇胎盘中视黄醇结合蛋白4表达与胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能的相关性

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)胎盘组织中视黄醇结合蛋白4(RBP4)表达及其与胰岛素抵抗和分泌功能的关系。方法:收集胎盘组织共79例,其中正常组27例,GDM组52例。GDM组中未使用(GDMA_1组)和使用胰岛素治疗(GDMA_2组)者各26例。免疫组化(IHC)、Western blot、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RBP4在胎盘中的定位及其蛋白和mRNA水平表达。用稳态模式胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛β细胞功能指数(HBCI)分别作为胰岛素抵抗和分泌功能指标,比较3组以上指标的差异。分析RBP4表达水平与HOMA-IR和HBCI的关系。结果:RBP4表达在胎盘合体滋养细胞胞质中。GDM组的RBP4蛋白和mRNA表达均高于正常组(P0.05)。但GDMA_1组和GDMA_2组比较差异无统计学意义(P0.05)。从正常组到GDMA_1组再到GDMA_2组,HOMA-IR增加;GDM组高于正常组(P0.01),但各GDM组间比较差异无统计学意义(P0.05)。从正常组到GDMA_1组再到GDMA_2组,HBCI先升后降;GDMA_2组低于正常组、GDMA_1组(P0.01),但后两组比较差异无统计学意义(P0.05)。GDM组胎盘组织中RBP4蛋白表达水平与HOMA-IR呈正相关(r=0.819,P0.01),与HBCI无相关(r=0.179,P=0.123)。正常组胎盘组织中RBP4蛋白表达水平与HOMA-IR和HBCI均不相关。结论:RBP4由胎盘分泌,通过参与胰岛素抵抗引起GDM发生,尚无明显证据显示与胰岛素的分泌功能有关。     

人子宫内膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因和蛋白的表达

目的:探讨人子宫内膜组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)的表达。方法:30例人子宫内膜组织石蜡标本,分为增生早期组(n=7),增生中-晚期组(n=8),分泌早期组(n=6)和分泌中-晚期组(n=9),应用免疫组织化学方法检测子宫内膜HIF-1α蛋白的表达。15例子宫内膜组织,分为增生期组(n=7)和分泌期组(n=8),采用逆转录聚合酶链反应法和Western blot-ting法检测HIF-1α基因和蛋白的表达及其变化。结果:子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞和间质细胞的胞质可见HIF-1α蛋白表达。在月经周期中,增生中-晚期组HIF-1α蛋白表达水平最高,分泌中-晚期组的表达水平最低(P<0.05);但增生早期组与增生中-晚期组的比较、分泌早期组与分泌中-晚期组比较,HIF-1α蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05)。增生期上皮组织中HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著高于分泌期(P<0.01;P<0.05)。结论:人子宫内膜HIF-1αmRNA和蛋白在增生期的表达较高,其表达水平升高可能与子宫内膜的修复再生有关。     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

PCOS患者卵巢胰岛素抵抗的发生机理探讨

目的:探讨胰岛素抵抗/高胰岛素血症在PCOS生殖功能障碍中的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,行体外培养,分别用不同浓度胰岛素处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblot检测黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达。采用放射免疫法检测血清性激素及空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:①PCOS患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均明显高于对照组(P<0.05);②0mU/ml胰岛素时,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显降低(P<0.05);③10mU/ml胰岛素对二组患者黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达均无影响(P>0.05);④100mU/ml或1000mU/ml胰岛素作用后,二组患者IRS-1mRNA及蛋白的表达水平均明显增高(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症通过提高卵巢颗粒细胞IRS-1的表达,降低IRS-2的表达参与患者卵巢生殖功能障碍的发生。     

二噁英对子宫内膜异位症患者子宫内膜细胞TNF-α表达的影响

目的:探讨二噁英(TCDD)在子宫内膜异位症(EMs)发病中的作用。方法:通过预实验,加入一定浓度的TCDD分别作用于11例EMs患者离体在位子宫内膜细胞和12例离体对照组子宫内膜细胞24 h,应用Real-time RT-PCR和ELISA法检测TCDD处理前后子宫内膜细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和蛋白的表达。结果:TCDD未处理前,EMs组子宫内膜细胞分泌TNF-α蛋白和mRNA水平均显著高于对照组(P<0.05)。TCDD呈剂量依赖方式促进子宫内膜细胞TNF-α蛋白的分泌,以10 nmol/L TCDD作用最明显(P<0.01),但TCDD对子宫内膜细胞TNF-αmRNA表达均无明显影响(P>0.05)。结论:二噁英可能通过影响子宫内膜细胞TNF-α蛋白水平的表达而参与EMs的发病过程,其主要机制可能不是通过调节其转录途径。     

自然流产患者绒毛组织PAI-14G/5G多态性和uPA基因的表达及其意义

目的:探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)4G/5G多态性和纤溶酶原激活剂(uPA)与自然流产的关系及其在妊娠中的作用。方法:正常早孕(对照组)人工流产和自然流产(实验组)稽留流产的绒毛组织各30例,应用免疫组织化学PV法检测绒毛组织中PAI-1和uPA蛋白表达情况,等位基因特异性-PCR(AS-PCR)法检测PAI-1 4G/5G多态性的表达情况,RT-PCR法检测uPA mRNA表达情况。结果:①PAI-1蛋白主要在绒毛组织的滋养细胞质中表达,其表达对照组低于实验组(P<0.05)。uPA与PAI-1蛋白在细胞中分布一致,其表达水平对照组高于实验组(P<0.05)。②PAI-1 4G/4G基因型和4G等位基因表达水平对照组低于实验组(P<0.05),uPA mRNA表达水平对照组高于实验组(P<0.05)。③PAI-1和uPA蛋白在自然流产患者绒毛组织中的表达呈负相关(r=-0.639)。结论:PAI-1 4G/5G多态性和uPA异常表达可能与自然流产的发生有关。     

中药补肾调冲方对卵巢早衰大鼠激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:探讨补肾调冲方对雷公藤多苷片(GTW)致卵巢早衰(POF)的治疗作用。方法:雌性SD大鼠42只,随机分为正常组、模型组、结合雌激素片(雌激素组)和补肾调冲方治疗高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHB)水平。Western blotting法和RT-PCR法检测卵巢组织中Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达水平。结果:正常组和各给药组E_2的含量均高于模型组(P0.01)。正常组和各给药组FSH含量均低于模型组(P0.01);正常组和各给药组INHB含量均高于模型组(P0.01)。低剂量组INHB的含量与雌激素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠卵巢中Bcl-2蛋白和mRNA水平的表达显著低于正常组(P0.05);各给药组Bcl-2蛋白和mRNA水平的表达显著高于模型组(P0.01)。模型组大鼠卵巢中Bax蛋白和m RNA水平的表达显著高于正常组(P0.05);各给药组Bax蛋白和mRNA水平的表达显著低于模型组(P0.01)。低剂量组Bax蛋白的表达与雌激素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢性激素水平具有调节作用,能提高卵巢对性激素的敏感性,促进卵巢排卵;通过上调Bcl-2和下调Bax的表达,抑制卵巢中颗粒细胞的过度凋亡,减少卵泡闭锁,促进卵巢功能的恢复。     

IL-10对人早孕蜕膜基质细胞的细胞因子信号抑制因子(SOCSs)基因表达的调控作用

目的:研究细胞因子信号抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3基因在正常人早孕蜕膜基质细胞的表达及其意义。方法:体外分离培养人早孕蜕膜基质细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting法检测SOCS表达,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测细胞IL-10、IFN-γ的分泌。结果:无血清培养蜕膜基质细胞未见SOCS1表达,但表达SOCS2、SOCS3;细胞培养14h所分泌的IL-10高于细胞培养2h时的水平(P<0.05),IFN-γ分泌则无明显变化(P>0.05);IL-10(0.1ng/ml)作用蜕膜基质细胞14h内,不同程度上调SOCS2、SOCS3表达。结论:人早孕蜕膜基质细胞自分泌、旁分泌的IL-10可能诱导细胞SOCS2、SOCS3的表达。     

缩宫素受体在子宫内膜异位症子宫结合带中的表达

目的探讨缩宫素受体(OTR)在子宫内膜异位症(EMS)子宫结合带中的表达水平及临床意义。方法收集因EMS行子宫切除术的子宫结合带蜡块组织43例为EMS组,其中增生期25例,分泌期18例。收集同期因宫颈癌、卵巢癌或宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行子宫切除术的患者子宫结合带蜡块组织54例为对照组,其中增生期28例,分泌期26例。采用免疫组织化学方法检测各组子宫结合带组织中OTR的表达水平。结果对照组增生期子宫结合带OTR(0.156±0.056)表达高于分泌期子宫结合带OTR(0.126±0.030),差异有统计学意义(P=0.017)。EMS组增生期(0.205±0.106)和分泌期(0.187±0.070)子宫结合带OTR含量表达无统计学差异(P=0.523),且含量分别高于对照组(0.156±0.056,0.126±0.030)相应月经周期子宫结合带OTR的表达,差异均有统计学意义(P=0.043,P=0.002)。EMS组子宫结合带中OTR的表达水平与痛经程度呈正相关(r=0.836,P0.05)。结论 EMS子宫结合带缩宫素受体异常高表达,表明其可能和EMS的发病及引起的相关症状有关。     

Large loop excision and cold coagulation for management of cervical intraepithelial neoplasia

Objectives: To evaluate the efficacy of large loop excision of the transformation zone (LLETZ) combined with a single application of the cone probe of a Semm Cold Coagulator as a new treatment for women with cervical intraepithelial neoplasia (CIN). Methods: Retrospective case-record review of 666 women treated with large loop excision and cold coagulation (LLECC) from 1992 to 2000. Results: Of the women who had high-grade CIN at their initial consultation, 4.2% had abnormal cytologic results 6 months after treatment and 0.6% had abnormal cytologic results at 12 months. Of the women who had low-grade CIN at initial presentation, 3.8% had abnormal cytologic results 6 months after treatment and none (0%) at 12 months. Furthermore, there were no reported cases of cervical cancer in this cohort of women during the follow-up period. Short-term bleeding complications (within 24 h of the procedure) occurred in 1% of the women assessed. Conclusions: Large loop excision combined with cold coagulation is a new and effective treatment for CIN. Randomized controlled trials are required to confirm these findings and determine the long-term safety of the technique.     

甲状腺功能减退症与勃起功能障碍关系的初步探讨

甲状腺功能减退(HT)即甲状腺激素分泌不足的状态下,脂质代谢紊乱产生的高脂血症、血管内皮细胞功能障碍、血管平滑肌细胞舒张性下降等均可影响阴茎勃起功能。NO、CO、H2S及内皮素等在HT中起着重要作用。通过对高脂血症、高血糖、心血管病变的治疗及补充睾酮等,可明显改善阴茎勃起功能,因而积极治疗HT,对改善HT所致阴茎勃起功能障碍(ED)具有重要意义。内皮功能障碍被认为是ED的主要发病机制,因此治疗HT时同时改善内皮功能,也会对ED发挥治疗作用。同时HT引起的神经损伤也参与了ED。通过对这些物质、神经及其功能的深入研究,可为今后临床上治疗ED提供理论依据。     

不同助孕方式后的妊娠和子代结局分析

目的:探讨妊娠和子代结局与助孕方式的相关性。方法:回顾性统计分析2002.03～2008.07期间本中心所有ARTs助孕并妊娠的周期。按IUI、IVF-ET等助孕方式分组,比较妊娠、子代情况。结果:临床妊娠683个周期,新生儿701例,出生缺陷15例,出生缺陷率各种助孕方式间无统计学差异。早期流产率ICSI方式高于常规IVF方式;常规IVF的宫外孕率高于ICSI;出生多胎率IVF-ET组高于IUI组,P均<0.05。IVF-ET与IUI比、常规IVF与ICSI比,多胎比单胎均有更高的剖宫产率,P<0.05或P<0.01。出生婴儿男女比例为1∶1.03,单胎比多胎有更高的男孩比例,P<0.05。IVF-ET与IUI比,多胎比单胎早产率高,P<0.05或P<0.01。结论:ICSI和FET操作未明显增加新生儿出生缺陷风险,但其子代遗传风险可能偏高;常规IVF比ICSI有更高的宫外孕和剖宫产风险;IVF-ET产科风险高于IUI。     

取卵日血清脑源性神经营养因子与辅助生育结局的相关性

目的:探讨取卵日血中脑源性神经营养因子(BDNF)能否预测卵母细胞质量和其后的卵胞质内单精子注射(ICSI)的妊娠结局。方法:总共纳入57例进行ICSI患者,在取卵日清晨抽取空腹静脉血,测量BDNF,E2和P的浓度。比较妊娠组与非妊娠组的相关数据,并分析取卵日BDNF水平与E2、P、年龄和IVF相关数据之间的相关性。结果:妊娠组与非妊娠组的BNDF浓度无明显差异;取卵日BDNF浓度与E2和P呈明显正相关。BDNF与获卵数和成熟卵母细胞数成正相关。结论:尚不能用取卵日BDNF来预测ICSI的妊娠结局,但BDNF可能在卵母细胞发育成熟过程中发挥着重要作用。     

Polycystic ovary syndrome and the single nucleotide polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase: a pilot observational study

Polycystic ovary syndrome (PCOS), insulin resistance and overall mortality due to diabetes and coronary artery disease are higher in South Asians than in Caucasians. Aims: We compared the prevalence of the C677T and A1298C single nucleotide polymorphisms in the methylenetetrahydrofolate reductase gene in South Asian and Caucasian women, its association with folate and homocysteine (Hcy) metabolism, and its relevance to future atherogenic events. Methods and results: 71 women were recruited for the study: South Asian PCOS (21) plus controls (9) and Caucasian PCOS (25) plus controls (16). Anthropometric and laboratory parameters were compared. South Asian PCOS women were significantly hyperandrogenic and exhibited a greater degree of insulin resistance. Caucasian PCOS women had higher plasma Hcy concentrations with a 1.9 times higher frequency of the T allele than the South Asian PCOS group. In the presence of this variant allele, plasma Hcy levels appear to be higher in both PCOS groups. The South Asians had a 1.8 times higher frequency of the C allele than the Caucasians; however, the overall frequency was comparable in the two PCOS groups. The frequency of homozygosity, i.e. TT677 and CC1298, was 7.2% and 4.9% in the Caucasians and 0% and 16.6% in the South Asian recruits, respectively.

Dietary inadequacies in the South Asian women can influence their plasma folate and B12 concentrations resulting in hyperhomocysteinemia which, in combination with dyslipidaemia and insulin resistance, can lead to long-term atherogenic consequences. Conclusions: Current data suggests that the mechanisms of atherothrombosis have separate pathways in the two ethnic groups. Larger studies exploring the current theme need to be carried out in the PCOS groups to obtain adequate insight.     

人类白细胞抗原基因多肽性与不明原因反复流产免疫治疗妊娠结局的初步探讨

目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)基因多态性对不明原因反复流产(URSA)免疫治疗疗效的预测价值。方法:①采用酶联免疫法(ELISA)测定URSA患者免疫治疗前、免疫治疗一疗程后封闭抗体(BA),并随访阳性者与阴性者的妊娠率。②采用52例封闭抗体阴性的URSA患者进行主动免疫治疗,随机抽取32例于免疫治疗前用SSP-PCR方法测定患者免疫治疗前及妊娠后血浆内的HLA-A、B、DR及G的表达率。结果:①免疫治疗后BA阳性者及阴性者的妊娠成功率差异无统计学意义,P>0.05。②HLA-G*010401及HLA*1502的表达频率在再次流产者中明显高于成功妊娠者,组间比较差异均有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05)。结论:HLA基因的多态性与免疫治疗妊娠结局似乎有更好的相关性,其中HLA-G*010401、HlA-DRB1*1502与免疫治疗后妊娠结局关系密切,有可能成为有价值的预测指标。     

吡咯列酮对PCOS大鼠下丘脑、卵巢中瘦素受体表达的影响及其意义

目的:研究吡咯列酮对PCOS大鼠下丘脑、卵巢中瘦素受体(Lep-R)表达的影响及其意义。方法:将30只雌性SD大鼠分为3组:正常对照组、PCOS组、吡咯列酮干预组。放射免疫法测定各组大鼠血清T、LH、空腹血清血糖(fasting serum glucose,FSG)、胰岛素(insulin,Ins)、瘦素(leptin,Lep)水平,通过免疫组织化学、实时荧光相对定量PCR(Real-time RT-PCR)方法检测各组大鼠下丘脑、卵巢中Lep-R的相对表达。结果:经吡咯列酮干预后,PCOS大鼠血清T、LH、Ins、Lep水平明显降低,下丘脑Lep-R表达增强,而卵巢中Lep-R表达减弱。结论:下丘脑Lep-R表达的下调可能是PCOS大鼠瘦素抵抗的原因之一;吡咯列酮可以改善PCOS大鼠内分泌紊乱。     

Sonographic study of the relationship between gestational diabetes mellitus and fetal activity

Objective: To evaluate the relationship between gestational diabetes mellitus (GDM) and fetal activity. Materials and methods: We prospectively studied 18 pregnant patients with GDM and 20 pregnant patients with normal glucose screening test. An ultrasound equipmentwas used to perform a 30?min transabdominal sonographic recording for each patient. Each ultrasound exam was recorded using a DVD recorder. Fetal activity was analyzed using duration and number of episodes of fetal breathing and body movements. The recordings were analyzed using a stopwatch in order to accurately evaluate each recording. The data was statistically analyzed using the parametric and non-parametric t-test. Results: The results of the study indicated that there was a significant correlation (p?=?0.007) between the duration of fetal breathing movement and GDM. Fetuses of mothers suffering from GDM had a significantly longer duration of fetal breathing movements compared with fetuses of non diabetic mothers. In addition, the total duration of fetal activity (time of fetal body movements plus fetal breathing movements) was significantly higher (p?=?0.005) in GDM compared with non GDM pregnancies. The difference in fetal body movements between GDM and normal pregnancies was not statistically significant. Conclusion: The results of this study support the hypothesis that GDM has a direct influence on fetal activity. The significance of this finding should be further evaluated.