骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的 :观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU- F)贴壁层的形成、体外传代培养、扩增的情况 ,研究各阶段 (CFU- F)对粒 -单核细胞集落形成单位 (CFU- GM)和红细胞集落形成单位 (CFU- E)生长及细胞因子对造血的支持作用 ,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力。方法 :利用改进的液体培养法 ,培养骨髓基质细胞并传代 ,利用甲基纤维素半固体培养法 ,培养人骨髓细胞 ,观察 CFU- GM、CFU- E集落数。结果 :人骨髓基质细胞在体外可以传代培养 4代并能扩增 2 8倍 ,其中 F3代对 CFU- GM和 CFU-E的促进增殖作用最强 ,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强。结论 :人骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长     

骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（BMMNC）体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。     

急性白血病骨髓基质细胞生物学特点的观察

目的探讨白血病骨髓基质对白血病形成的作用机制.方法白血病患者和正常人的骨髓单个核细胞行基质细胞培养,动态观察贴壁时间、小丛形成时间、集落形成时间、融合形成时间等生长特性,计数CFU-F集落,检测基质细胞VCAM-1、Fn及培养上清液中的IL-6、TNF-α含量.结果急性白血病骨髓基质细胞生长延迟,贴壁形成时间、小丛形成时间、集落形成时间和融合形成时间均明显晚于正常骨髓基质组(P<0.05);CFU-F计数和VCAM-1表达水平均明显低于正常对照组(P<0.05),Fn与正常对照组无显著性差异(P>0.05);骨髓基质细胞培养上清液中IL-6、TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05).结论急性白血病存在造血微环境异常.     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞（CFU－GM）培养法。结果 伤后3－7d，有基质细胞贴壁的CFU－GM生长明显低于无贴壁组；伤后14d贴壁层形成后，放射损伤组的CFU－GM生长明显低于正常对照组；放射损伤后3－7d，骨髓基质细胞可抑制正常CFU－GM生长，用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞，其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子（CSF）时，基质细胞贴壁层对CFU－GM生长仍显示一定刺激作用，结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤，但在放射损伤造血修复与重建过程中，骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”双重的动态平衡调控作用。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

目的 :研究正常人骨髓基质祖细胞 ( CFU- F)在体外传代培养过程中的功能变化。方法 :采用体外液体单层和半固体培养法。结果 :F1传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位 ( CFU- E)和粒系祖细胞集落形成单位 ( CFU- GM)支持能力最显著 ,F2 代对有核细胞粘附能力最显著。结论 :F1代是进行第二次接种骨髓细胞的最佳时机 ,而对有核细胞的粘附能力主要与成纤维细胞有关。     

白细胞介素2激活的外周血和脐带血及骨髓单个核细胞培养上清对骨髓造血的影响

目的：探讨用白细胞介素2（IL-2）激性的外周血（APB）和脐带血（ACB）及骨髓（ABM）单个核细胞的培养上清,对骨髓造血的影响和作用的可能机制。方法：应用MTT法,在体外同时检测APB和ACB及ABM培养上清,对骨髓和外周血单个核细胞增殖能力的影响;同时用集落培养法,检测这3种上清对骨髓粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成能力的影响。结果：加入APB和ACB及ABM培养上清,对正常骨髓和外周血单个核细胞增殖能力,以及粒-单细胞集落和成纤维细胞集落形成无显著的影响。结论：应用IL-2对自体干细胞移植物进行体外净化时,培养上清对正常造血细胞和单个核细胞无显著影响。     

低能量激光与集落刺激因子对人脐带血造血细胞的增殖作用

目的研究低能量激光对人脐带血造血细胞的增殖效应,并探讨其与集落刺激因子（ＣＳＦ）效应的关系。方法用铜蒸气激光照射人脐带血造血细胞,体外培养扩增细胞并计数集落细胞数。结果激光加ＣＳＦ对造血细胞粒细胞巨噬细胞集落形成单位（ＧＭＣＦＵｃ）有协同增殖作用,与单用激光照射组、ＣＳＦ刺激组及对照组相比,差异有非常显著意义（Ｐ＜００１）。将经激光照射与未照射脐血造血细胞在液体培养基中培养２周,前者活细胞数较培养前增加５５～１１０倍,后者增加１１～２７倍,再次软琼脂接种培养,仍有集落形成,生长的集落绝对数较液体培养前显著增加,而且激光照射组比未照射组更明显。结论低能量激光照射脐血细胞是体外扩增造血细胞的一种有效方法。     

高糖高脂致家兔糖尿病的实验模型探讨

动物心肺转流模型常用于心脏外科研究工作中。因袭临床方法建模费时费人力,且并发症与失败率较高。作者通过设计特种主动脉插管与插管持握器,改进了主动脉与右房插管技术,无需助手完成幼猪心肺转流模型的建立,极大地提高了建模的效率。     

针灸对化疗小鼠骨髓基质细胞支持造血功能的影响

目的:了解针灸对化疗后骨髓基质细胞支持造血能力的影响。方法:将40只小鼠分为对照组、针刺组、艾灸组和正常组,每组10只。除正常组外,其余3组均给予一次性腹腔注射环磷酰胺150 mg/kg。然后,针刺组每d针刺“足理”、“三阴交”,留针5min;艾灸组每d无瘢痕灸“丈椎”、“膈俞”3次,其余2组仅陪同固定。5 d后,行外周血白细胞计数,取骨髓进行体外培养,前14 d用不含集落刺激因子的培养体系Ⅰ,再用含正常小鼠骨髓细胞的培养体系Ⅱ继续培养7 d后计数产生的造血细胞集落。结果:外周血白细胞总数艾灸组高于对照组(P>0.05),低于正常组(P<0.05),但与针刺组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。集落数量:艾灸组大于对照组(P<0.05),但与正常组及针刺组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针灸可以提高化疗后骨髓基质细胞支持造血的能力。     

Inducing effects of macrophage stimulating protein on the expansion of early hematopoietic progenitor cells in liquid culture

Background Macrophage stimulating protein （MSP） is produced by human bone marrow endothelial cells. In this study we sought to observe its effects on inducing the expansion of early hematopoietic progenitor cells which were cultured in a liquid culture system in the presence of the combination of stem cell factor （SCF）, interleukin 3 （IL-3）, interleukin 6 （IL-6）, granulocyte macrophage-colony stimulating factor （GM-CSF）, erythropoietin （EPO） （Cys） and MSP or of Cys and bone marrow endothelial cell conditioned medium （EC-CM）. Methods Human bone marrow CD34^＋ cells were separated and cultured in a liquid culture system for 6 days. Granulocyte-macrophage colony forming unit （CFU-GM） and colony forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte （CFU-GEMM） were employed to assay the effects of different treatment on the proliferation of hematopoeitic stem/progenitor cells. The nitroblue tetrazolium （NBT） reductive test and hoechest 33258 staining were employed to reflect the differentiation and apoptosis of the cells respectively. Results MSP inhibited the proliferation of CFU-GM and CFU-GEMM in semi-solid culture and the inhibitory effect on CFU-GEMM was stronger than on CFU-GM. MSP inhibited the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators. Bone marrow （BM） CFU-GEMM was 2.3-fold or 1.7-fold increase or significantly decreased in either Cys＋EC-CM, Cys＋MSP or Cys compared with 0 hour control in liquid culture system after 6 days. Conclusion MSP, a hematopoietic inhibitor, inhibits the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators and makes the early hematopoietic progenitor cells expand in a liquid culture system.     

人骨髓基质细胞株培养上清对造血干细胞增殖作用的研究

应用ＳＶ－４０导入法建立了人骨髓基质细胞株ＳＣ５－７，然后收集其培养上清，测定其中三种造血因子含量，并将这种培养上清添加至造血干细胞的液体培养基内，每周一次取出培养的细胞，进行计数。同时移至甲基纤维素培养基内继续培养，１４日后，在倒置显微镜下观察并计数各种造血干细胞集落形成的数量。结果：１．人骨髓基质细胞株ＳＣ５－７的培养上清中含有较高浓度的Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和Ｍ－ＣＳＦ。２．添加ＳＣ５－７     

两种条件培养基促进鼠胚胎干细胞分化为造血干细胞

目的:从鼠胚胎干细胞获得具有造血重建功能的造血干细胞.方法:将ES-D3细胞形成4天拟胚体(4dEBs),再用骨髓内皮细胞条件培养液(mBMEC-CM)和/或胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM)诱导4dEBs生成造血干细胞.实验为mBMEC-CM FLSC-CM组、mBMEC-CM组、FLSC-CM组,对照组.检测诱导生成的细胞造血干细胞特异抗原表达、造血相关基因表达、造血集落的形成以及造血重建能力.结果:从诱导ES-D3细胞生成造血干/祖细胞的数量和生成的集落总数看,mBMEC-CM FLSC-CM组诱导效率显著高于其他3组.mBMEC-CM FLSC-CM组诱导生成的细胞能重建照射鼠的造血系统.结论:骨髓内皮细胞条件培养液联合胎肝基质细胞条件培养液可促进鼠胚胎干细胞分化为具有造血重建能力的造血干细胞.     

一株IL—11 cDNA转染的成纤维细胞体外促造血活性的鉴定

目的：为了探讨ＩＬ－１１基因修饰成纤维细胞的体外促造血活性及其在造血系统基因治疗中的应用前景。方法：将含ＩＬ－１１ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３细胞，获得了高表达ＩＬ－１１的亚克隆１Ｅ７，通过造血祖细胞集落形成实验及细胞增殖实验对１Ｅ７在体外的促造血活性做了初步的鉴定。     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。     

Clonal growth of human acute leukemia cells in serum-free methylcellulose medium

Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｓｅｍｉｓｏｌｉｄｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｅｐｒｅｓ－ｅｎｃｅｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｓｅｒｕｍ．Ｓｅｒｕｍｉｓａｍｉｘ－ｔｕｒｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｉｏ－ｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ［１］,ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏ…