淫羊藿多糖免疫调节作用的研究

本文报告了朝鲜淫羊藿提取物—多糖成分对正常Balb/C小鼠体内体外NK细胞活性的影响及对IL_2产生能力的影响。结果表明:淫羊藿多糖在100～1000μg/ml时对小鼠体外NK细胞活性呈双向调节作用,在体内体外对IL_2产生均有促进作用,其有效剂量在体内作用时为100mg/kg、体外作用为100μg/ml。     

微量元素锌对人TH细胞IL2产生的增强作用

本文报道了应用改进的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测不同浓度微量元素锌对人 T_细胞 IL_3产生能力的影响。结果表明,微量元素锌在0.153～765μmol/L 浓度范围均有显著增强 IL_2产生的作用。1.53μmol/L 的锌浓度的增强作用非常显著(P<0.01)。本研究证明,锌制剂增强 IL_2产生的作用并非该制剂的直接作用所致。     

肉苁蓉多糖的免疫活性作用及机制

目的：研究肉苁蓉多糖（CDPS）的免疫活性作用及其体外免疫调节作用的机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT）观察CDPS体外对ISO、DEX、TNF－β抑制小鼠胸腺淋巴细胞增殖的调节作用；采用流式细胞仪进行了CDPS对细胞周期及其胞内Ca^2 的测定。结果：CDPS在较高浓度能对ISO、DEX对淋巴细胞增殖的抑制作用，及对抗高浓度TNF－β对淋巴细胞增殖的抑制作用，协同低浓度TNF－β对淋巴细胞的增殖促进作用；100μg／ml、200μg/mlCDPS均能使分裂期的细胞明显增加；较高浓度（100μg/ml）的CDPS对小鼠胸腺细胞内Ca离子浓度有明显的促进升高作用。结论：CDPS能促进细胞进入分裂期，并推断其对小鼠胸腺淋巴细胞增殖的促进作用与其促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放有关。     

淫羊藿多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究淫羊藿多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：淫羊藿多糖12．5，25．0，50．0mg／kg连续皮下给药(sc)8d。结果：淫羊藿多糖可显提高小鼠因荷瘤所导致的胸腺指数下降，溶血素形成减少，溶血空斑值降低及迟发性超敏反应低下；对荷瘤鼠的脾指数也显升高。结论：淫羊藿多糖可显提高荷瘤小鼠的免疫功能。     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的：观察不同浓度淫羊藿苷对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及功能的影响。方法：利用酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞;用组织化学染色和矿化结节法进行细胞鉴定;用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同淫羊藿苷浓度对大鼠成骨细胞的增殖、分化作用;同时通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性,以观察淫羊藿苷对成骨细胞功能的影响。结果：与各浓度组比较,10μg/L淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖、分化均有促进作用,且作用最强,最为持久。结论：浓度为10μg/L的淫羊藿苷能显著促进成骨细胞增殖,并增强其成骨活性。     

淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的影响

目的：观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的作用。方法：取新生1－3d SD大鼠头盖骨用酶消化法分离成骨细胞。第3代细胞经MTT法、茜素红染色法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞增殖、矿化结节形成的影响。结果：淫羊藿总黄酮1－10μg/ml浓度具有显著的促进成骨细胞增殖及提高矿化结节形成数量的作用。结论：淫羊藿总黄酮具有促进体外成骨细胞增殖及分化成熟的作用。     

猪苓多糖对白细胞介素—1产生的影响

本文应用小鼠胸腺细胞ＭＴＴ比色分析法测定了猪苓多糖作用小鼠腹腔巨噬细胞的培养上清中ＩＬ－１的活性，并对ＩＬ－１的产生过程做了动态观察，结果表明，猪苓多糖１００ｕｇ／ｍｌ，２００ｕｇ／ｍｌ，５００ｕｇ／ｍｌ在休外作用上鼠腹腔巨噬细胞后，可诱导ＩＬ－１的产生，其培养上清在１２小时即可表现ＩＬ－１活性，４８小时达高峰，此后即开始下降。     

猪苓多糖对白细胞介素─1产生的影响

本文应用小鼠胸腺细胞ＭＴＴ比色分析法测定了猪苓多糖作用小鼠腹腔巨噬细胞的培养上清中ＩＬ－１的活性，并对ＩＬ－１的产生过程做了动态观察。结果表明，猪苓多糖１００ｕｇ／ｍｌ，２００ｕｇ／ｍｌ，５００ｕｇ／ｍｌ在体外作用小鼠腹腔巨噬细胞后，可诱导ＩＬ－１的产生。其培养上清在１２小时即可表现ＩＬ－１活性，４８小时达高峰，此后即开始下降。     

淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂作用

目的研究探讨淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂活性。方法淫羊藿多糖G1和G4,生理盐水分别与流感病毒裂解疫苗配伍免疫小鼠,初次免疫后2周收集小鼠血清,ELISA法检测血清中抗体的滴度;MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应;ELISA测定IFN-γ和IL-4的水平,流式细胞术测定脾淋巴细胞CD4+、CD8+、CD3+和CD19+亚群。结果初次免疫后,淫羊藿多糖G1和G4能显著提高免疫小鼠血清的抗体滴度;能明显增强脾T淋巴细胞的增殖反应,可以显著提高脾淋巴细胞CD4+、CD8+和CD3+的含量及CD3+/CD19+的比值,诱导分泌IFN-γ的水平升高。结论淫羊藿多糖可增强小鼠对H1N1的免疫应答,可以作为甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的一种新型免疫佐剂。     

人IL_2活性测定及其影响因素的探讨

作者建立了小鼠胸腺细胞MTT比色分析法并检测了33份正常人的IL_2活性。探讨了影响人IL_2活性测定的因素并与~3H-TdR掺入法进行比较。结果表明,该法简便,稳定,可行,与~3H-TdR掺入法比较二者有较好的一致性,认为本法可用于临床IL_2样本的检测。     

PAOA对小鼠脾细胞IL2产生的影响

本文报道了PAOA水提物对小鼠脾细胞IL_2产生的显著抑制作用(P<0.01)。以10μg/ml的PAOA浓度对Con-A诱导的IL_2广生的抑制效应最为明显(IP=116％),1000和100μg/ml的浓度也有显著的抑制作用,而1μg/ml的浓度未发现有抑制作用。采用Con-A-and-PAOA-free方法,四种浓度对IL_2对的产生均有显著的抑制作用(P<0.01),其中也是以10μg/ml的浓度作用最强(IP=72％)。PAO人为扶正固本、养阴润燥类中草药,它对机体免疤功能的作用尚未确定,实验初步表明该药可能是一种新型免疫抑制剂。     

四种中药抗心室颤动作用的实验研究

采用氯仿致小鼠室颤模型,在250只小鼠上比较了淫羊藿、桑寄生、苦参、葛根对抗心室颤动的作用,结果表明:淫羊藿(10g/ml)、桑寄生(5,10g/ml)水煎剂有显著的防颤作用,而苦参(10g/ml)、葛根(10,20,40g/ml)无明显防颤作用。实验还结合离体心脏灌流方法对其防颤机理作了初步分析。     

羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤药效学研究

目的探讨羧甲基茯苓多糖的制备方法及其抗肿瘤活性。方法在卤代酸存在下一步法简便制备羧甲基茯苓多糖,并分别研究其体内、体外抗肿瘤活性。结果同对照组相比,羧甲基茯苓多糖在抑制昆明种小鼠H22肝癌细胞及小鼠肿瘤U-14细胞活性方面具有显著效果。结论通过简便方法制备得到了可显著提高荷瘤小鼠免疫力的羧甲基茯苓多糖,适当剂量的羧甲基茯苓多糖具有良好的抗肿瘤活性。     

淫羊藿对小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响

目的:观察淫羊藿提取液对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响.方法:利用序列酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞,用组织化学和免疫组化染色进行细胞鉴定.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测淫羊藿对成骨细胞增殖的影响,通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性反映淫羊藿对细胞功能的作用.建立地塞米松诱导的成骨细胞凋亡体系,并利用流式细胞仪观察淫羊藿对这一凋亡体系的影响.结果:分离和获得的大量单一多角形细胞,经碱性磷酸酶组织化学染色呈强阳性,经Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、骨涎蛋白免疫组化染色呈阳性,证实获得的细胞为成骨细胞.淫羊藿提取液不影响成骨细胞的增殖,但可以显著提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性,其中相当于生药1 g/L组的作用最明显.100 nmol/L和1 000 nmol/L地塞米松可以显著增加成骨细胞凋亡率,但同时加入相当于生药1 g/L的淫羊藿提取液,并不引起细胞凋亡率的明显变化.结论:淫羊藿对成骨细胞的增殖和凋亡没有明显作用,但却显著增加了成骨细胞碱性磷酸酶的活性.淫羊藿防治骨质疏松症的重要机制之一可能是促进成骨细胞的成骨功能.     

猪苓多糖抗肿瘤作用的机制研究

通过猪苓多糖对小鼠移植性肿瘤生长的影响，研究了猎苓多糖的抑瘤机制，实验结果表明，１０ｍｇ／ｋｇ的猪苓多糖对小鼠Ｓ１８０肉瘤细胞的生长具有显著抑制作用，抑制率为３２．９０％，与ＩＬ－２联合应用具有协同抑瘤作用，抑瘤率为５７．１２％。猪苓多糖明显增强荷瘤小鼠脾ＬＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞的活性，提高红细胞Ｃ３ｂ受体的活性。     

朝鲜淫羊藿多糖的含量测定

淫羊藿为小檗科植物朝鲜淫羊藿 Epimediumkoreanum Nakai的干燥地上部分。可补肾壮阳 ,祛风湿 ,并有镇咳、祛痰、平喘、抑菌等作用 [1 ]。药理实验显示淫羊藿多糖具有明显的促免疫作用 ,是一种很有发展前途的生物调节剂。本实验采用苯酚 -硫酸法、蒽酮 -硫酸法对淫羊藿多糖进行含量测定。1　试剂与仪器淫羊藿药材由本所植物室张永升研究员鉴定为朝鲜淫羊藿 E.koreanum Nakai的干燥地上部分 ;透析袋 (华美生物工程公司 ) ,其余试剂均为分析纯。岛津 UV— 2 60型紫外分光光度计。2　实验部分2 .1　多糖的分离与纯化 :取淫羊藿药材 1 kg,加…     

灰树花多糖治疗卵巢癌体外实验观察

目的体外实验探讨灰树花多糖治疗卵巢癌的作用。方法以不同浓度灰树花多糖(终浓度为100、250和500μg/ml)处理人SKOV3细胞,台盼蓝染色和MTT检测对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测与荧光显微镜观察检测细胞凋亡。另设阴性对照组,仅用培养液;10μg/ml顺铂(DDP)作为阳性对照。结果台盼蓝排染和MTT检测证实,灰树花多糖明显抑制SKOV3细胞增殖;Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示,灰树花多糖100、250、500μg/ml作用细胞24、48、72 h均能诱导细胞凋亡,凋亡率与时间、剂量存在依赖关系;Annexin V/PI双染荧光显微镜观察检查细胞凋亡率显示了与流式细胞术检测类似结果。结论灰树花多糖显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

淫羊藿苷通过调节PI3K/AKT/mTOR通路对小鼠黑色素瘤B16细胞生物学行为及作用机制研究

目的:研究淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响及作用机制。方法:小鼠黑色素瘤B16细胞经过不同浓度淫羊藿苷(0、10、20、50μmol/L)处理后,培养24 h,检测细胞增殖、形态、凋亡、迁移能力情况,并采用Western blot法检测细胞磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Ak/mTOR)通路相关蛋白的表达情况。结果:小鼠黑色素瘤B16细胞经过淫羊藿苷处理后,随着给药浓度的增加,抑制率、凋亡率均显著增加(P<0.05)。经Hoechst 33258染色发现空白对照组(0μmol/L)细胞染色均匀且颜色较淡,而含有淫羊藿苷细胞细胞则颜色较浓,且淫羊藿苷浓度越高,染色质凝集程度越明显。B16细胞划痕愈合率、Transwell膜底面的细胞计数随着淫羊藿苷浓度增加均显著降低(P<0.05)。蛋白检测结果显示随着给药浓度的增加,基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-9, MMP-2)、mTOR表达量显著降低,而PI3K/pPI3K、AKT/pAKT比值显著增加,组间比较差异显著(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可有效抑制小鼠黑色素瘤B16细胞PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞迁移功能,最终发挥抗肿瘤效果。     

羧甲基茯苓多糖对健康人外周血自然杀伤(NK)细胞活性的影响(酶释放法研究)

羧甲基茯苓多糖(CMPM)是茯苓多糖的一种衍生物,具有明显抑制肿瘤生长的作用。本文报道了用酶释放法观察CMPM对健康人外周血NK细胞活性的影响,发现100μg/ml的CMPM对NK细胞活性育促进作用,提示这可能是其增强免疫功能从而抑制肿瘤的机制之一。同时,本文对酶释放法测定NK细胞活性可靠性的研究表明,本法稳定性较好。     

淫羊藿苷对基因转染PC12细胞α-突触核蛋白过表达和泛素-蛋白酶体系统的影响

目的观察淫羊藿苷在体外试验中对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)及相关蛋白表达的影响及其作用机制。方法 不同浓度的淫羊藿苷与转染α-Syn基因PC12细胞共孵育24h,应用RT-PCR法检测各组细胞α-Syn mRNA含量,Western免疫印迹法检测细胞中α-Syn、泛素化蛋白羧基端水解酶(Ubiquitin C-terminal hydrolase protein,UCH-L1)和Parkin蛋白的表达,观察淫羊藿苷对它们的影响。结果 淫羊藿苷浓度40～80μmol/L与转染α-Syn基因细胞孵育24h,能够明显减少模型细胞中α-SynmRNA含量,抑制Syn蛋白表达和聚集,增强UCH-L1和Parkin蛋白表达。结论 淫羊藿苷在体外对基因转染细胞的α-Syn过表达和聚集有明显抑制作用,其作用机制与抑制α-Syn合成和增强α-Syn降解有关。