煤焦沥青烟雾提取物的细胞毒性和遗传毒性研究

采用人外周血淋巴细胞非程序DNA合成(UDS)试验和人胚肺成纤维细胞转化试验,测试了煤焦沥青烟雾提取物(ECTPF)对人体细胞的细胞毒性和遗传毒性。UDS试验结果表明,ECTPF可使淋巴细胞UDS值明显增加,并有剂量一反应关系。引起半数淋巴细胞死亡的浓度(LC50)为33.8μg/ml。细胞转化试验表明,ECTPF能诱发人胚肺成纤维细胞明显的形态学转化,且转化细胞具有部分恶性转化细胞的特性。引起半数人胚肺成纤维细胞生长抑制的浓度为41.3μg/ml。实验结果提示,ECTPF是一种具有细胞毒性和遗传毒性的物质。     

顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞毒作用的实验研究

目的 :通过半量顺铂和卡铂联合与单一顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的细胞毒性的对比研究 ,为顺铂联合卡铂治疗骨肉瘤提供实验依据。方法 :用IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的作用 4 8、 72h后计算各组的细胞毒性指数值 (CI)。结果 :IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )的作用 4 8h后CI值分别为 5 5 8%、 5 7 4 %、 5 8 1% ,三组比较无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;IC50 的顺铂、IC50 的卡铂、 1/2IC50 的顺铂 +卡 1/2IC50 的卡铂与骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )作用 72h后CI值分别为 6 4 4 %、 6 9 8%、 6 8 5 % ,IC50 的顺铂组与 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50 的卡铂组和IC50 的卡铂组比较均有统计学意义 (P <0 0 5 )。IC50 的卡铂组与 1/2IC50 的顺铂 +1/2IC50 的卡铂组比较无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :半量顺铂、卡铂联合能产生与单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株 (OS - 732 )相似的细胞毒性作用。     

顺铂联合卡铂对骨肉瘤细胞株毒性的实验研究

目的探讨半量顺铂、卡铂联合对骨肉瘤细胞株(OS-732)的细胞毒性强度,为临床应用提供实验依据.方法采用MTT法细胞毒性试验,先分别获取顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50),再分别用IC50的顺铂、IC50的卡铂、1/2IC50的顺铂 1/2IC50的卡铂作用骨肉瘤细胞株48h和72h,比较3组药物对骨肉瘤细胞株的细胞毒性.结果根据相应实验结果制作生长曲线求得顺铂、卡铂对骨肉瘤细胞株的IC50分别为7.6μg/ml和199.0μg/ml.分别用8.0μg/ml顺铂、200.0μg/ml卡铂、4.0μg/ml顺铂 100.0μg/ml卡铂作用48h时,对骨肉瘤细胞株的细胞毒性指数(CI)值依次为(54.7±5.3)%、(56.9±6 3)%、(57.5±5.7)%,3组比较差别无显著性意义(P＞0.05);作用72h时CI值依次为(65.7±4.5)%、(69.4±2.2)%、(68.4±3.6)%,含卡铂的两组与单独顺铂组比较差别均有显著性意义(均P＜0.05).结论半量顺铂、卡铂联合应用能产生单独顺铂或卡铂对骨肉瘤细胞株相似的细胞毒性作用.     

SNK-6细胞对铂类药物的体外敏感性及多药耐药基因mdr-1表达情况的研究

目的观察顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂对人结外鼻型NK细胞淋巴瘤细胞系SNK-6细胞增殖的影响及多药耐药基因mdr-1的表达情况。方法将SNK-6细胞分别加入不同浓度的四种铂类药物中进行培养,CCK-8法检测SNK-6细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,计算半数抑制浓度IC50值,采用反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达。结果不同浓度的四类药物对SNK-6细胞增殖均有不同程度抑制作用,并呈剂量依赖性,顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂,其各自的半数抑制浓度IC50值依次为：（5．7±0．5）肛g／mi、（39．7±3．8）μg/ml、（11．2±1．4）μg/ml、（1．5±0．3）μg/ml;RT—PCR方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达呈阳性。结论四种铂类药物对SNK-6细胞有不同程度抑制作用,但SNK-6细胞mdr-1呈阳性表达,我们推测铂类药物可能为不依赖mdr-1表达的且可用于NK细胞淋巴瘤治疗的药物。     

百草枯对人胚肺成纤维细胞CTGF表达的影响

目的：探讨百草枯中毒对人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响,进一步阐明百草枯致中毒性肺纤维化的发病机理。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）,通过ELISA法检测经过百草枯处理后的细胞CTGF的表达情况。结果：正常MRC-5细胞分泌少量CTGF ,经过不同浓度百草枯处理后的人胚肺成纤维细胞48～72h细胞CTGF浓度随时间变化而明显增加（P＜0．05）,在72h CTGF浓度有大幅度的提高。结论：百草枯中毒后人胚肺成纤维细胞表达CTGF明显上调,明显高于正常细胞,提示在百草枯中毒后肺成纤维细胞CTGF表达增加,进而导致肺纤维化。     

黄芪抗衰老药理研究概况

通过进行黄芪多糖对小鼠寿命试验和应激反应，镜检下观察黄芪对脂褐素作用情况，体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料的研究结果表明，黄芪在抗衰老方面的作用明显。     

茯苓蜂皇浆对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF 2BS株)为材料。当细胞培养至25代时,将细胞分为加茯苓蜂皇浆的给药组和不加茯苓蜂皇浆的对照组。2组在相同条件下传代培养,直至细胞停止增殖。结果表明:给药组细胞能生长到65代,而对照组细胞仅存活至55代。实验组细胞寿命比对照组提高18％。提示茯苓蜂皇浆对人胚肺二倍体成纤维细胞有一定的抗衰老作用。     

CIK对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP杀伤效应及耐药逆转作用

目的探讨CIK细胞对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP体外杀伤效应及逆转作用。方法用MTT法分别检测顺铂、CIK细胞、CIK联合顺铂对人肺腺癌细胞A549及人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的杀伤活性,计算耐药倍数,逆转倍数。结果①顺铂对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP的50%杀伤浓度(IC50)分别为1.823g/mL、6.392 g/mL,差异有统计学意义(P<0.05),人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂的耐药倍数(IR)为3.506。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,其IC50分别7.657×105个细胞/mL、7.955×105个细胞/mL,差异无统计学意义(P>0.05)。③不同浓度的CIK细胞(1×105,2×105and3×105个/mL)与人肺腺癌细胞共培养后,再加顺铂,其IC50值分别降至1.743g/mL、1.336g/mL、0.883g/mL,差异有统计学意义(P<0.05);计算逆转倍数(FR)分别为(2.369、3.091、4.677)。结论①人肺腺癌细胞A549/DDP较A549对顺铂有明显的耐药性。②CIK对人肺腺癌细胞A549及A549/DDP均有杀伤作用,杀伤效果在两种细胞中无明显差异。③无毒剂量CIK联合顺铂作用于人肺腺癌细胞A549/DDP,可以增加顺铂对耐药细胞的杀伤活性。逆转倍数随着CIK密度的增加而增大,说明CIK细胞能部分逆转耐药细胞A549/DDP对顺铂的耐药性。     

环孢素影响化疗药物对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用

[目的]评价不同浓度环孢素(cyclosporin,GSA)影响化疗药物卡铂与足叶乙甙抑制视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞的促效作用.[方法]实验分为卡铂组(G1)、卡铂 0.5 mg/L CSA组(G2)、卡铂 1.0mg/L CSA组(G3)及足叶乙甙组(G4)、足叶乙甙 0.5 mg/L CSA组(G5)、足叶乙甙 1.0 mg/L CSA组(G6),每组各加样5孔.G7组为不同浓度CSA单独作用于Rb细胞.用从0.004至1.00mg/L倍数增加的9个不同浓度含量化疗药物卡铂和足叶乙甙及加入0.5 mg/L和1.0 mg/L浓度的环孢素作用于体外培养的SO-Rb50细胞.采用MTT法比较各组Rb细胞的生长抑制情况,通过计算Rb细胞抑瘤率、半数细胞抑制所需药物浓度IC50值及倒置显微镜下Rb细胞形态学检查,观察环孢素影响化疗药物抑制Rb细胞的作用.[结果]卡铂及足叶乙甙加入CSA作用于SO-Rb50细胞,其细胞抑瘤率较单独应用卡铂及足叶乙甙时增高,G1～G6组的IC50值(mg/L)分别为:0.335、0.183、0.130、0.113、0.099、0.077,随着CSA的加用及浓度的增加,IC50值逐渐降低.G1与G2、G3组及G4与G5、G6组的抑瘤率分别作t检验,统计学分析均有显著性差异(P＜0.01).G1与G2、G3组及G4与G5、G6组IC50的分别作方差分析检验,统计学分析均有显著性差异(P=0.005).单纯CSA组抑瘤率与药物浓度无相关关系(P>0.1).倒置显微镜观察显示加用环孢素后随药物浓度增加Rb细胞坏死变形较卡铂组及足叶乙甙组明显.[结论]CSA单独作用于SO-Rb50细胞无抑制杀灭作用,但CSA能促进卡铂及足叶乙甙对SO-Rb50细胞的抑制杀灭作用.随着CSA浓度增加,卡铂及足叶乙甙对Rb细胞的抑制作用越明显.     

呼吸道合胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞细胞间黏附分子1表达的影响

目的 探讨呼吸道合胞病毒感染对体外培养的人胚肺成纤维细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 以呼吸道合胞病毒A亚型Long株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,另设正常细胞组.采用实时PCR及流式细胞仪检测两组细胞ICAM-1 mRNA及其蛋白表达.结果 (1)正常细胞组24 h ICAM-1 mRNA表达为1,病毒组为2.51(P<0.05).(2)病毒组12、24、48、72和96 h后ICAM-1蛋白表达均高于正常细胞组[1.25±0.09比0.21±0.06,1.87±0.18比0.30±0.06,4.78±0.52比0.29±0.07,13.34±0.64比0.35±0.17,1.58±0.37比0.35±0.14,均P<0.01].病毒组在48～72 h维持较长时间的表达,72 h达峰值,96 h明显下降.结论 肺成纤维细胞和ICAM-1可能参与呼吸道合胞病毒肺炎的发病机制.     

乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂乳胞素（LAC）对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,采用0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞48 h,5μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞0、24、48和72 h;将细胞分为对照组（细胞不经药物干预）、LAC组（加入5μmol·L^-1 LAC）、卡铂组（加入10、20、40及80μmol·L^-1卡铂）和LAC联合卡铂组（加入5μmol·L^-1 LAC和10、20、40、80μmol·L^-1卡铂）。采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果：MTT检测,随着LAC作用时间的延长和浓度的升高,SKOV3细胞的增殖受到明显抑制,48 h时LAC的半数抑制浓度（IC₅₀）为5.36μmol·L^-1;LAC联合卡铂组细胞的增殖抑制率较相同浓度卡铂组明显升高（P<0.05）,卡铂的IC₅₀由58.08μmol·L^-1下降至18.37μmol·L^-1。FCM检测,随着LAC作用时间的延长,SKOV3细胞凋亡率呈升高趋势;与卡铂组和LAC组比较,LAC联合卡铂组SKOV3细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。结论：LAC可有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖且能诱导其凋亡,并可以明显增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞株的增殖抑制作用。     

比较卡铂对乳腺癌细胞及血小板生成素作用下巨核细胞的影响

目的 研究化疗药物卡铂对乳腺癌细胞和使用血小板生成素(thrombopoietin,TPO) 的巨核细胞(MO7e) 的影响.方法 MTT 法测定不同浓度的TPO 对巨核细胞株MO7e 作用24h、48h、72h 的影响,作出增殖曲线.测定不同浓度卡铂对乳腺癌MDA-MB-453 细胞和使用TPO 的MO7e 细胞作用24h、48h 的抑制率,求出半数抑制浓度(IC50),比较两者的IC50.结果 MO7e 细胞增殖率随TPO 浓度增大而增大,TPO 浓度为256ng/ml 时进入平台期.卡铂对MO7e 细胞的IC50 约为对乳腺癌细胞IC50 的10 倍.结论 TPO 可促进巨核细胞增殖,卡铂对乳腺癌细胞的抑制作用明显高于对使用TPO 的巨核细胞的抑制作用.     

人体内肺癌细胞Ku80蛋白含量与顺铂化疗敏感性的关系研究

目的探讨患者体内肺癌细胞Ku80蛋白含量与其对顺铂敏感性的相关性。方法收集肺癌患者胸腔积液中的肺癌细胞进行体外原代培养,通过传代进行纯化和扩增后进行实验。体外药敏试验采用CCK-8法测定肺癌细胞对顺铂的敏感性,获得各样本的半数抑制浓度(IC50)。利用Western blot法测定各样本细胞内Ku80蛋白含量。分析Ku80蛋白含量与顺铂敏感性的相关性。结果非小细胞肺癌(NSCLC)组IC50为(4.40±3.39)mg/L,小细胞肺癌(SCLC)组IC50为(1.02±0.54)mg/L,二者比较差异有统计学意义(P0.001)。NSCLC组Ku80蛋白相对含量为0.80±0.45,而SCLC组为0.48±0.25,二组之间比较差异有统计学意义(P0.05)。通过相关性分析得到肺癌患者Ku80含量与IC50呈正相关(r=0.618,P0.001)。结论 NSCLC患者Ku80基因表达高于SCLC患者,可能与NSCLC对化疗敏感性差有关。肺癌细胞Ku80蛋白含量与其对顺铂敏感性呈负相关。Ku80蛋白含量可作为预测肺癌患者以铂类为基础的化疗敏感性的候选指标。     

吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的色胺酮类抑制剂筛选及其体外抗肿瘤作用

 目的  评价色胺酮衍生物吲哚胺2,3-双加氧酶 (indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的抑制活性,并研究其作为 IDO 抑制剂的抗肿瘤作用。方法  采用基因工程手段表达、纯化重组人 IDO (rhIDO),建立 IDO 活性检测体系;以色胺酮衍生物作为对象,进行 IDO 抑制活性初筛,对抑制类型、半数抑制浓度以及抑制常数进行测定;构建高表达人 IDO 的 pcDNA3.1(+) hIDO 转染 HEK 293 细胞,评价色胺酮衍生物在细胞水平上的 IDO 抑制活性;采用 MTT 比色法考察色胺酮衍生物3对人非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制作用。结果  6个被测色胺酮衍生物均具有IDO抑制活性,且细胞水平上的抑制效力高于酶活水平,抑制效力均优于目前通用的IDO抑制剂1 甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)。色胺酮衍生物 3 作为最强的 IDO 抑制剂,其Ki值为 0.161 μmol/L。MTT 实验结果显示,色胺酮衍生物3 显著抑制 A549 细胞生长,IC50 为 8.77 μmol/L。结论  色胺酮衍生物是一类新型高效的 IDO 抑制剂,在体外对 A549 细胞具有较强的抗肿瘤活性。     

靶向Livin反义寡核苷酸对结肠癌LoVo细胞增殖及对卡铂敏感性的影响

目的探讨靶向Livin反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌LoVo细胞增殖及Livin基因表达的影响,并观察其对卡铂敏感性的变化。方法 (1)用靶向Livin ASODN、随机寡核苷酸(RODN)分别转染LoVo细胞,反转录-聚合酶链式扩增反应检测Livin mRNA表达量变化;(2)流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;(3)采用CCK-8法检测卡铂联合靶向Livin ASODN作用对肿瘤细胞的增殖抑制率。结果 Livin ASODN转染LoVo细胞明显抑制Livin mRNA表达,与空白对照组、RODN组比较差异均有统计学意义(P<0.01);流式细胞术碘化丙锭单染色显示,空白对照组、RODN组均未出现细胞亚二倍体峰;Livin ASODN组存在LoVo早期凋亡细胞,200、400 nmol.L-1的Livin ASODN组细胞亚二倍体百分率分别为(10.59±1.05)%、(11.63±1.27)%;卡铂单药半数抑制浓度(IC50)为3.33 mg.L-1,卡铂与Livin ASODN(100 nmol.L-1)联合,IC50为0.22 mg.L-1,表现为协同作用(Q≥1.15),增敏倍数15.14。结论靶向Livin ASODN下调Livin mRNA表达,诱导LoVo细胞凋亡并提高其对卡铂的敏感性。     

芹菜素选择性抑制人胃癌细胞活力和诱导细胞凋亡

目的:对比研究芹菜素对人胃癌BGC-823细胞和永生化人胃粘膜上皮GES-1细胞活力和细胞凋亡的影响。方法:体外培养BGC-823和GES-1细胞。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:芹菜素对BGC-823细胞活力有显著抑制作用(P<0.05),呈浓度依赖性,其IC50是22μmol/L;然而,对GES-1细胞活力抑制作用弱,其IC50达到77μmol/L;选择指数是3.5(77/22)。芹菜素选择性诱导BGC-823细胞Sub G1百分率增高(P<0.05),同时,活化BGC-823细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:芹菜素具有选择性抑制人胃癌BGC-823细胞活力和诱导细胞凋亡作用。     

125Ⅰ粒子对体外培养的A549细胞系和人胚肺二倍体细胞系2BS细胞生长的影响及临床安全使用剂量评估

目的：观察不同剂量¹²⁵I粒子照射A549细胞系及人胚肺二倍体细胞系2BS后细胞计数的变化,探讨¹²⁵I粒子对此2种细胞生长的抑制作用,确定125I粒子治疗非小细胞肺癌的临床安全剂量。方法： 体外培养的A549细胞系及人胚肺二倍体细胞系2BS,分别置入低、中、高剂量(0.2、0.4和0.8 mCi）125I粒子,同时设立阴性对照组（无粒子）及空白组（空粒子）,于照射后第2、4、6和8天收集细胞,通过细胞排染实验计数存活细胞,分别绘制细胞生长曲线并计算¹²⁵I粒子对2种细胞系的半数抑制浓度（IC₅₀）。 结果： 与空白组和对照组比较,低剂量组A549细胞增殖趋势未受明显影响（P＞0.05）;中、高剂量组A549细胞生长受到显著抑制,并呈时间依赖性,于第6天时最明显,与阴性对照组及空白组比较差异有统计学意义(P＜0. 05) ;125I粒子对A549细胞的IC50值约为0.4 mCi。各剂量组¹²⁵I粒子对2BS细胞生长的抑制作用比较差异无统计学意义（P＞0.05）,¹²⁵I粒子对2BS细胞的IC50值约为1.65 mCi。 结论：放射性¹²⁵I粒子的活度为0.4 mCi时已对A549细胞具有明显的杀伤效应,0.8 mCi时杀伤效应更强。放射性125I粒子对2BS细胞的IC50值为1.65 mCi,故临床安全使用剂量应为0.4～0.8 mCi。     

吲哚美辛对人结肠癌细胞BfL-1、WISP-1及PCNA表达的影响

目的本研究对我们前期利用功能蛋白质组学技术发现的吲哚美辛（Indomethacin，IN）抗结肠癌的非COX-2途径相关蛋白Bfl-1、WISP-1和PCNA的表达差异进行验证，并探讨IN抑制肿瘤的相关机制。方法应用荧光定量PCR技术检测IN处理组和未处理组HCT116细胞Bfl-1、WISP-1和PCNAmRNA的表达。结果吲哚美辛下调Bfl-1,WISP-1和PCNAmRNA的表达。结论吲哚美辛通过Bfl-1、WISP-1和PCNA等非COX-2依赖途径诱导HCT116细胞的凋亡并抑制其增殖     

AFMC选择性增强TRAIL对肺癌A549细胞毒性

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素(AFMC)选择性增强肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)对人肺癌A549细胞毒性作用.方法:体外培养人肺癌A549细胞和人胚肺WI-38细胞.全自动生化分析仪测定细胞上清液乳酸脱氢酶活性.碘化丙啶(pI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率.结果:AFMC与TRAIL合用...     

多西环素对体外人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨多西环素对体外人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法 不同浓度的多西环素作用于体外培养的人小细胞肺癌H446细胞24、48、72或96 h,采用CCK-8法检测多西环素对H446细胞增殖的影响;采用Bliss法计算半数抑制浓度(IC50);采用TUNEL法检测多西环素对H446细胞凋亡的影响;采用Western印迹法检测多西环素对Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白表达的影响;采用实时定量-PCR法检测多西环素对Bcl-2、Bax等凋亡相关基因mRNA表达的影响.结果 多西环素可浓度-时间依赖性地抑制人小细胞肺癌H446细胞的体外增殖,作用24、48、72和96 h对应的IC50值分别为24.10、10.98、8.20和8.03 mg/L;多西环素作用后H446细胞的凋亡指数显著增加(P<0.05);Bax的蛋白及mRNA表达水平上调,Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 多西环素可通过上调促凋亡相关蛋白Bax的表达,下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,诱导人小细胞肺癌H446细胞凋亡,进而抑制人小细胞肺癌H446细胞的体外增殖,是一种有开发前景的小细胞肺癌治疗药物.