肺癌新生血管生成机制研究进展

肺癌的生长和转移都需要新生血管的支持,新生血管生成在肺癌的发生、发展中扮演关键角色。新生血管生成由肿瘤微环境所决定,多种信号分子共同参与其调控。肺癌新生血管生成的主要过程可归纳为:(1)肿瘤不断生长促使其微环境内部发生"血管生成转换"而启动促血管程序;(2)基质金属蛋白酶诱导细胞外基质(ECM)降解与重构;(3)内皮细胞在血小板源性生长因子和趋化因子的诱导下通过重构的ECM发生定向迁移;(4)在血管内皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子的作用下,内皮细胞大量增殖;(5)在Dll4-Notch通路的诱导下,最终形成血管管腔结构并具有完善的供血功能。目前,抑制血管生成已成为肺癌治疗的重要方向,新生血管生成全过程中的每个阶段均可能成为抑制肺癌的靶点。深入了解肺癌新生血管生成机制,对寻找有效的抗血管、抗肺癌治疗方法具有重要临床意义。     

VEGF相关信号通路在血管新生中的研究进展

组织器官在生理或病理状态下,受到促血管生成因子的刺激,引发生血管新生。VEGF、Notch、Wnt/β-catenin、Ang1(2)/tie2、PI3K-AKT等多个信号通路参与到该过程,对血管新生的各个阶段产生影响。其中VEGF联系众多信号通路,对血管新生整个过程进行调节,发挥了无可替代的作用。近年来国内外对VEGF及相关信号通路调节血管新生机制的研究取得了一定的进展,对多种疾病发病机制的阐明及临床药物的研发提供了新的理论依据。我们总结了近年来相关研究成果,希望为血管新生相关疾病的治疗提供新的可能性。     

PFKFB3在缺氧条件下调节血管新生的作用

 病理性血管新生是癌症和各种缺血性和炎性疾病的标志，尤其是眼部疾病，如年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）、增生性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy，PDR）等。目前抗血管新生的药物治疗主要是针对血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等促血管生成因子，但是长期局部抑制VEGF或与神经元毒性和一些眼部并发症有关，因此需要寻找其他治疗靶点。内皮细胞代谢在血管新生过程中具有重要调节作用，可独立于VEGF等促血管生成分子的调节过程，有望成为抗血管新生的另一个治疗靶点。目前在一些疾病的血管新生过程中发现了糖酵解的重要调节剂6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-双磷酸酶3（6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-biphosphatase 3，PFKFB3），本文将介绍PFKFB3的作用，并探讨其作为抗血管新生治疗的内皮细胞代谢靶点的潜力。     

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路与肿瘤血管新生的关系

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路参与调控肿瘤的生长和转移,而肿瘤的生长需要新生血管的维持,肿瘤血管的生成需要血管内皮细胞的参与,包括内皮细胞的增殖、迁移、侵袭。作为Ras/Raf/MEK/ERK途径是该网络信号的核心,本文就MAPK/ERK信号通路中各环节与肿瘤血管新生的联系做一综述,进一步研究其在抑制肿瘤生长方面做出推论。     

VEGF-A/VEGFR-2信号通路对胃黏膜癌变过程新生血管的调控作用

目的研究新生血管在胃病发展不同时期胃黏膜中的生成情况及血管内皮生长因子（VEGF）-A/血管内皮生长因子受体（VEGFR）-2的调控作用。方法选择2012年1-12月上海长征医院胃镜室收集非癌变胃黏膜组织（包括慢性胃炎、胃息肉、胃溃疡、肠腺化生）及病理科收集胃癌组织（包括癌组织、癌旁近端、癌旁远端）各20例。采用免疫组化SP法检测微血管密度（MVD）;Western Blot及RT-PCR法检测VEGF-A/VEGFR-2的表达。结果新生血管在慢性胃炎、胃息肉、胃溃疡、胃黏膜肠腺化生、胃癌不同区域的表达存在差异,其中,在胃炎胃黏膜中新生血管相对稀疏,而胃息肉、胃溃疡和胃黏膜肠腺化生新生血管稍密集,胃癌新生血管明显密集,有形成血管腔形状。总体上,MVD随着组织恶性转化倾向存在递增趋势,胃炎低于胃息肉、胃溃疡、胃黏膜肠腺化生、癌旁远端,低于癌旁近端,低于胃癌（P〈0.05）。VEGF-A/VEGFR-2对新生血管存在明显的调控作用,其表达和MVD变化高度一致。结论微血管生成贯穿在胃黏膜病变不同时期,VEGF-A/VEGFR-2信号通路对新生血管具有调控作用,抑制微血管生成可能具有阻断胃黏膜恶性病变的意义。     

血管新生与肿瘤生长的研究进展

肿瘤血管新生对于肿瘤的生长、转移具有重要作用。血管新生是一个由多因素参与调控的复杂过程。肿瘤内促进血管新生因子活性离子抑制血管新生因子活性，两者处于失衡状态，从而启动并促进血管新生。肿瘤血管网系乱，管腔不规则且基底膜不完整，有利于肿瘤转移。深入对肿瘤血管新生的研究有助于肿瘤临床治疗和预后。     

血管新生的生物学：最重要的分子机制

已经确定了许多血管新生的诱导物，包括血管内皮生长因子家族、血管生成素、转化生长因子、血小板衍生生长因子、肿瘤坏死因子-α、白介素和成纤维细胞生长因子家族。较好理解血管新生的生物学，可揭示治疗若干与这些复杂过程有关的疾病的新靶标。不同血管新生抑制剂可能的用途，目前正在临床加紧研究。本文对介导血管新生的最重要分子机制作了总结。     

丹参多种活性成分调节血管新生机制的研究概述

[目的]探讨丹参多种活性成分对血管新生的调节机制,为丹参防治肿瘤、动脉粥样硬化、缺血性心脏病等血管新生异常引起的相关疾病奠定基础。[方法]从血管新生的相关机制出发,查阅近10年国内外文献,分析总结多种丹参活性成分对内皮细胞、离体肿瘤细胞以及体内移植瘤的血管新生的调节机制。[结果]丹参的众多活性成分中,丹参酮IIA、丹酚酸B、隐丹参酮、二氢丹参酮I能促进或抑制血管新生。但调节血管新生的机制研究主要集中在丹参酮IIA、丹酚酸B,表现在调节VEGF、bFGF等促血管新生因子、MMPs、HIF-α、PI3K/AKT/eNOS通路等几方面。并且,丹酚酸B和丹参酮IIA对血管新生的调节具有双向性。[结论]丹参的多种活性成分,可作为一种血管新生调节剂,为防治血管新生异常引起的相关疾病提供新的思路。     

血管内皮生长因子在牙周组织再生中作用的研究进展Research progress in effect of vascular endothelial growth factor in periodontal tissue regeneration

血管内皮生长因子（VEGF）是重要的促血管生成因子，对血管内皮细胞具有促分裂、抗凋亡、增加血管通透性和促进细胞迁移等作用。在骨折或骨缺损区域，VEGF通过参与新生血管的形成，趋化间充质干细胞（MSCs）向损伤区域集合并产生成骨分化。当处在牙周炎导致的牙槽骨丧失的缺氧环境中，VEGF通过调节与牙周组织再生相关的细胞增殖、迁移和分化等功能，促进牙周组织的新生与整合。借由调节有关信号分子或通路、与其他细胞因子联合使用，或是参与牙周支架共同作用，VEGF在牙周组织再生方面的应用研究受到关注。现从VEGF在牙周组织再生中的作用、机制和应用等方面进行综述，为发掘VEGF在牙周组织再生中的应用提供思路。     

周细胞在视网膜新生血管疾病中的研究现状

周细胞包裹血管内皮细胞形成血管腔,具有重要的功能,周细胞减少导致出现血管扩张、渗血,导致水肿、新生血管等病变。近年研究发现周细胞通过多种信号通路对于视网膜血管调节、代谢等方面起着重要的作用,具有调节内皮细胞增殖、分化,调控新生血管生长及稳定性等多种功能。现就周细胞在视网膜新生血管疾病中的研究现状予以综述。     

血小板在血管生成中的作用

血管生成(angiogenesis)是指在原有微血管的基础上通过出芽或其它方式形成新血管的过程,在机体的生理或病理过程中起着重要的作用.研究发现,血小板也参与了血管生成.文中就血小板在血管生成中的作用方式及与肿瘤血管生成的关系作一综述.     

Effect of DLL4 siRNA on proliferation, migration and tube formation of choroid-retinal endothelial cells under hypoxic conditions

Background  Delta-like 4 (DLL4) is an endothelium specific Notch ligand and has been shown to function as a regulating factor during physiological and pathological angiogenesis. It has been reported that the DLL4-Notch signaling pathway is regulated by hypoxia and may prevent excessive angiogenesis through the inhibition of angiogenic branching and by triggering vessel maturation. Choroidal neovascularization (CNV) is a pathological form of angiogenesis in which hypoxia is thought to play an important role. This study was aimed to evaluate the role of DLL4 in the development of CNV.

Methods  We utilized chemical hypoxia induced by 200 μmol/L CoCl₂ to observe the expression of DLL4 in choroid-retinal endothelial cells (RF/6A cells), which are the primary cells involved in CNV. After transfection of a DLL4 small interfering RNA (siRNA), mRNA and protein expression of DLL4 and key downstream genes, including HES1 and HEY1, in hypoxic RF/6A cells were investigated by RT-PCR, real-time PCR, and Western blotting analysis. Three controls were used: one without transfection, one with transfection reagent, and one with scrambled negative control siRNA. The effects of the DLL4 siRNA on the biological function of hypoxic RF/6A cells during angiogenesis, including cell proliferation, migration and tube formation, were investigated.

Results  The results showed that hypoxic conditions led to upregulation of DLL4 expression in RF/6A cells in vitro. After transfection, siRNA-duplex1 targeting DLL4 depleted the DLL4 mRNA levels by as much as 91.4% compared with the scrambled siRNA control, and DLL4 protein expression was similarly effected. There was no significant difference in DLL4 expression among the blank control, transfection reagent control, and scrambled siRNA groups. In addition, after transfection of hypoxic RF/6A cells with the DLL4 siRNA-duplex1, the mRNA levels of HES1 and HEY1, which function downstream of DLL4-Notch signaling, were lowered by 75.1% and 86.3%, respectively, compared with the scrambled siRNA control. Furthermore, knockdown of DLL4 expression significantly promoted the proliferation of hypoxic RF/6A cells and led to their arrest in the S phase of the cell cycle. Migration and tube formation of hypoxic RF/6A cells were significantly induced by the DLL4 siRNA, with the number of migrated cells increased by 1.6-fold and total tube length increased by 82.3%, compared with the scrambled siRNA (P <0.05).

Conclusions  DLL4 functions as a negative regulator of angiogenic branching and sprouting. Based on our results, DLL4 signaling appears to play an essential role in the biological behavior of choroid vascular endothelial cells under hypoxia. Therefore, DLL4 may represent a novel target for CNV therapy in the future.

     

口腔鳞癌巨噬细胞侵入与肿瘤血管生成的关系

目的 :比较口腔正常、炎症及鳞癌组织内巨噬细胞和微血管数 ,鳞癌组织侵入的巨噬细胞和血管生成的相互关系。方法 :采用免疫组织化学的方法观察巨噬细胞及微血管。结果 :巨噬细胞记数在鳞癌组织内、正常黏膜及炎症组织内均有差别 (P <0 .0 0 1) ,炎症组织内最多 ,鳞癌次之 ,正常黏膜内最少。微血管记数在鳞癌和炎症组织内较正常黏膜内均有增加 (P <0 .0 0 1) ,但在鳞癌内与炎症组织内两者差别无统计学意义 (P >0 .0 5 )。在鳞癌中随病理分级的增加 ,巨噬细胞的侵入增加 (P <0 .0 5 ) ,微血管记数虽稍有增加但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;巨噬细胞记数与微血管记数呈直线相关关系 ,呈正相关 (P <0 .0 1) ,巨噬细胞侵入在肿瘤坏死区域明显增多。结论 :在口腔鳞癌中侵入的巨噬细胞与肿瘤的血管生成有关 ,其在口腔鳞癌中的具体作用仍需进一步研究 ,阻止巨噬细胞侵入可以作为口腔鳞癌治疗的新靶点。     

TGFβ1在乳腺癌间质新生血管周细胞中的表达

目的：研究转化生长因子β(TGFβ₁)在乳腺癌周细胞中的表达情况。 方法：取50例手术切除乳腺癌新鲜标本,通过免疫组织化学染色、原位杂交技术,同时采用Western印迹法、RT-PCR进行蛋白和mRNA半定量分析,观察TGFβ₁在乳腺癌中的表达情况。 结果：TGFβ₁蛋白质可表达在新生血管周细胞的胞浆中,同时也可表达于乳腺癌癌细胞及新生血管内皮细胞;TGFβ₁ mRNA主要表达在血管周细胞的胞浆中,极少数癌细胞呈弱阳性表达。通过Western印迹法进行蛋白定量分析发现,随着血管密度的提高,TGFβ₁的蛋白增高（P<0.01）。RT-PCR结果显示,随着血管密度的提高,TGFβ₁的mRNA增高（P<0.01）。结论：TGFβ₁通过周细胞参与血管生成。     

Ghrelin对食源性肥胖小鼠血液中血管生成标志物影响

目的 探讨Ghrelin对食源性肥胖小鼠血清血管生成标志物瘦素、一氧化氮（N O）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其可溶性受体VEGF受体1及sFlt-1表达的影响。方法 24只雄性小鼠随机分为生理盐水＋普通饮食（NS＋ND）组、Ghrelin＋普通饮食（Ghrelin＋ND）组、生理盐水＋高脂饮食（NS＋HFD）组和Ghrelin＋高脂饮食（Ghrelin＋HFD）组,每组6只。NS＋HFD组和Ghrelin＋HFD组小鼠给予高脂饮食15周,NS＋ND组和Ghr elin＋ND组小鼠给予正常饮食15周,随后Ghr eli n＋ND组和Ghr eli n＋HFD组小鼠皮下注射Ghrelin（100 Lg/kg）,每日2次持续10 d;NS＋HF D组和NS＋ND组皮下注射等量NS。实验结束后取血,检测并比较各组血糖、血清胰岛素、VEGF、sFlt-1、NO以及瘦素的浓度。结果 与NS＋ND组相比,NS＋HFD组小鼠血糖、血清胰岛素、瘦素以及NO水平明显升高,差异有显著性（F=5.35～18 0.6,q=3.57～9.71,P〈0 0.5）,VEGF以及sFlt-1浓度差异无显著性（P〉0 0.5）;Ghrelin＋ND组小鼠血清胰岛素浓度差异无显著性（P〉0.05）;Ghrelin＋HFD组小鼠血清胰岛素、瘦素以及NO水平明显降低,VEGF含量显著升高,差异有显著性（q=3.63～6.99,P〈0.05）,sFlt-1浓度差异无显著性（P〉0 0.5）。结论 Ghrelin可通过改变血清中与血管生成有关标记物表达参与血管生成调控。     

肾细胞癌MMP-9、VEGF表达与MVD的相关性

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与血管内皮生长因子（VEGF）在肾癌组织中的表达及其与血管生成、肿瘤侵袭和转移的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测75例肾细胞癌、12例正常肾组织中MMP-9与VEGF的表达情况;CD34免疫组化染色方法标记微血管内皮计数微血管密度（MVD）。结果肾癌组织MMP-9与VEGF表达均明显高于正常肾组织（F=13.12、9.76;q=4.568～9.333;P〈0.05）,不同病理类型的肾癌组织中MMP-9与VEGF表达差异均无显著性（q=0.035～2.209,P〉0.05）,不同临床分期肾癌组织MMP-9与VEGF表达差异均有显著性（F=24.95,3.54;q=3.086-11.846;P〈0.05）。MVD与VEGF、MMP-9蛋白表达之间均呈显著正相关（r=0.381、0.375,P〈0.05）,VEGF与MMP-9蛋白表达之间也有显著相关性（r=0.507,P〈0.05）。结论MMP-9、VEGF与肾细胞癌的血管生成有关,MMP-9与VEGF表达检测可作为反映肾细胞癌侵袭和转移潜能的生物学指标。     

心肌成纤维细胞诱导体外血管新生的实验研究

目的探讨心肌成纤维细胞在血管新生中的作用。方法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF),并收集其条件培养液(cardiacfibroblastconditionedmedium,CF CM)作为ECV304[人脐静脉内皮细胞株(humanumbilicalveinendothelialcellstrain)]细胞的培养液,用3H TdR掺入法检测CF CM对ECV304细胞增殖活性的影响;采用体外血管新生三维模型,检测其是否能诱导ECV304细胞向凝胶内侵入。结果乳鼠心肌成纤维细胞的条件培养液明显促进ECV304细胞增殖(P<0.01),诱导ECV304细胞向凝胶内侵入迁移生长,形成树枝样发芽结构。结论心肌成纤维细胞的条件培养液可促进ECV304细胞增殖和迁移,即有促血管新生作用。     

微小RNA对血管新生的调控机制研究进展

微小RNA（miRNA）是一类重要调控因子,在转录后水平调控细胞增殖分化、凋亡、分裂以及器官的发育.据估计,miRNA调节着人类细胞大约1/3的蛋白质表达,进而参与几乎所有生命体的生理及病理过程.大量研究证实,内皮特异miRNA参与调控血管新生过程各个环节,在血管新生的调控方面发挥着非常关键的作用.miR-126、miR-210、miR-424、Let-7等具有促进血管新生作用;miR-221/miR-222、miR-34a、miR-217等则具有抑制血管新生作用.并且miRNA合成过程中两个关键性酶Dicer和aDrosha也在血管新生中占居重要地位.因此,miRNA可能成为一种新的心血管疾病诊断和靶向治疗的生物学标志物.     

肝癌组织中CD105与Nestin表达的比较

目的寻找肝癌新生血管标记物。②方法采用免疫组织化学双染技术及免疫荧光技术，检测34例肝癌标本CD105和Nestin的表达。③结果肝癌组织中CD105和Nestin均表达于血管内皮细胞上，肝癌组织中CD105、Nestin的表达均明显高于癌旁组织，差异有显著性（t=27．022、63．438，P〈0．001）；有包膜浸润、门脉癌栓及肝内转移病人CD105的表达明显增强（t=2．768～6．371，P〈0．01）；而Nestin的表达与上述3种临床指标无明显相关性。④结论CD105可以作为新生血管的标记物用于抗肿瘤血管形成的研究和治疗。     

Molecular mechanism of limbs’ postischemic revascularization improved by perindopril in diabetic rats

Background Currently, there are still divergent opinions about the mechanisms of the impaired neovascularization in diabetic subjects. Due to the remarkable therapeutic effect of angiotensin-converting enzyme inhibititors （ACEIs） on the reduction of blood pressure and the protection of target organs, the clinical application of this kind of drugs is very widespread. However, it is still not clear about the role and related molecular pathway of this kind of drugs in the limbs＇ postischemic revascularization. It is of major therapeutic importance to resolve these questions. This study aimed to investigate the reasons of the impaired angiogenesis in the hind limbs of rats with diabetic ischemia, the role and related molecular mechanisms of ACEI in postischemic revascularization.
Methods Hind limbs ischemia was induced in diabetic rats by right femoral artery excision. Diabetic rats were randomly allocated to one of the following treatments for 4 weeks： ACEI by perindopril; perindopril in combination with a nitric oxide synthase （NOS） inhibitor; perindopril in combination with bradykinin （BK）-B1 receptor （BIR） antagonist or saline. The differences of angiogenesis, the mRNA and protein expression of endothelial nitric oxide synthase （eNOS）, vascular endothelial growth factor （VEGF） and basic fibroblast （bFGF）, constitutive nitric oxide synthase （cNOS） activity and nitric oxide （NO） content were observed after treatment.
Results In non-ischemic hind limbs, no significant changes in capillary density, or the mRNA and protein expression of eNOS, VEGF and bFGF, or the NO content and the cNOS activity were observed among all groups. On the contrary, in ischemic hind limbs, the capillary density in diabetic rats decreased by 27% when compared with the control rats, so did the mRNA and protein expression of eNOS, VEGF and bFGF, or the NO content and the cNOS activity （P 〈0.05）. The capillary density was increased by 1.65-fold in the perindopril treatment group in reference to