日本血吸虫未成熟虫卵26/28kDa抗原诱导抗雌虫生殖和抗卵胚发育免疫的研究

目的 :探讨日本血吸虫未成熟虫卵的 2 6/ 2 8k Da抗原 ( SIEA2 6/ 2 8k Da)诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法 :采用纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原以及 SIEA- I抗原 ,分别免疫BAL B/ c小鼠 ,于攻击感染后 4 6d进行粪卵、组织内虫卵定量。结果 :证明 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较 ,SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫鼠减虫虽不明显 ,但肝组织内总卵数、成熟卵数和粪卵数 ( EPG)分别减少 4 8.1%、83.6%、87.3% ,死亡卵数明显增加 ( P<0 .0 0 1)。此外 ,未纯化的 SIEA和纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫组均见雌虫子宫内虫卵数下降 ,分别达 4 0 .9%、54.8% ,而 SEA和 SIEA- I抗原免疫未见上述效应。结论 :提示抗雌虫生殖免疫和抗卵胚发育的效应 ,主要与 SIEA2 6/ 2 8k Da蛋白组分有关。     

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.     

抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26-28kDa单链抗体与EGFP的融合表达及靶向性研究

目的 体外观察抗日本血吸虫生殖功能分子SIEA26～28kDa单链抗体与日本血吸虫各阶段的靶向部位,探讨单链抗体在抗血吸虫病疫苗研究中的应用价值.方法 扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,克隆至PET32a/SIEA26～28kDa-scFv质粒,构建PET32a/EGFP-scFv质粒.转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,并诱导表达单链抗体融合蛋白,分析单链抗体融合蛋白与SIEA26～28kDa的结合特异性.单链抗体融合蛋白与日本血吸虫成虫、虫卵切片孵育,荧光显微镜下观测GFP信号,确定特异性单链抗体的靶向性.结果 重组质粒PET32a/EGFP-scFv构建成功,Trx-EGFP-scFv融合蛋白高效表达,与SIEA26～28kDa特异性结合.GFP信号主要集中在未成熟卵卵胚,雌虫卵巢、卵黄腺及与生殖系统邻近的肠腔组织.结论 SIEA26～28kDa单链抗体与血吸虫未成熟卵胚胎及雌虫生殖系统具有较强的靶向性,具有潜在抗卵胚发育、抗雌虫生殖作用,为SIEA26～28kDa单链抗体在抗日本血吸虫病疫苗免疫靶向方面的研究奠定了基础.     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的研究

目的探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）和成虫抗原（SA）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法采用SIEA与SA分别与联合免疫小鼠,于攻击感染后48天剖杀,统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果与对照组比较,SIEA单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力,肝组织成熟卵数下降37,3％,成熟卵比例下降24．0％;SA单独免疫产生显著抗感染免疫力,减虫率为34．5％;SIEA与SA联合免疫,产生显著抗感染免疫力和最佳抗卵胚胎发育免疫力,减虫率33．5％,成熟卵数和成熟卵比例分别下降73．8％和45．0％,抗卵胚胎发育免疫力显著高于SIEA单独免疫组。结论提示来源于成虫的抗感染抗原与来源于未成熟虫卵的抗卵胚胎发育抗原联合应用是血吸虫疫苗研制中有希望的发展方向。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34．45％,23．69％（P〈0．05）;肝表面虫卵结节密度下降29．03％（P〈0．05）;肝组织内虫卵减少29．07％（P〈0．05）,成熟虫卵减少48．41％（P〈0．05）。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加（P〈0．05）。结论日本血吸虫（云南品系）未成熟卵可溶性抗原（SIEA）的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

SIEA对感染了日本血吸虫尾蚴的小鼠诱导的免疫力研究

目的　采用尾蚴攻击感染小鼠后免疫的方式 ,研究日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原 (SIEA)诱导抗卵胚胎发育和抗虫免疫的效果。方法　感染日本血吸虫尾蚴之后的第 2天用 SIEA免疫小鼠 ,每周 1次 ,共 5次 ,于第 48天剖杀小鼠 ,统计肝脏各期虫卵数、雌虫子宫虫卵数及每鼠成虫数。结果　与对照组比较 ,SIEA免疫诱导显著抗卵胚胎发育效果 ,肝组织成熟卵数下降 2 7.5 % ,成熟卵比例下降 11.0 % ,但 SIEA未诱导显著抗虫和抗雌虫生殖效果。结论　采取在尾蚴感染之后免疫 ,SIEA能诱导显著抗卵胚胎发育 ,但比尾蚴感染小鼠之前免疫的抗卵胚胎发育效果低     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用(英文)

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法 20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46 d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果 SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34.45%,23.69%(P<0.05);肝表面虫卵结节密度下降29.03%(P<0.05);肝组织内虫卵减少29.07%(P<0.05),成熟虫卵减少48.41%(P<0.05)。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加(P<0.05)。结论日本血吸虫(云南品系)未成熟卵可溶性抗原(SIEA)的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究是血吸虫疫苗研究的重要策略之一。本研究探讨了未成熟卵等不同抗原免疫诱导宿主生产抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的效果。研究证明ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖和卵胚发育成熟的免疫力。与对照组比较，ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内每雌产卵数、成熟卵数和粪卵数（ＥＰＧ）分别减少４８．１％、８３．６％、８７．３％，死亡卵数     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导小鼠抗雌虫生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫云南株未成熟卵可溶性抗原（SIEA）免疫小鼠产生的抗雌虫生殖效果及作用机制。 方法 3 000条日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤感染家兔,第34天收集兔肝中的未成熟卵制备SIEA。20只ICR小鼠随机分为两组,免疫组（11只）每鼠背部皮下多点注射SIEA（100 μg/只）,对照组（9只）给予等量生理盐水,每2周免疫1次,共5次。末次免疫后1周,用（30±2）条血吸虫尾蚴攻击感染每只鼠。第45天收集小鼠粪便,第46天剖杀小鼠,心脏灌注法收集成虫,比较成虫数及粪便、肝组织、雌虫子宫内虫卵数和肝表面虫卵结节密度;透射电镜观察雌虫卵黄腺及雄虫睾丸组织。 结果 免疫组与对照组检获成虫数差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组小鼠每克粪便每条雌虫虫卵数、每克肝组织每条雌虫虫卵数、每条雌虫子宫内虫卵数及肝表面虫卵结节密度分别为（56.68±24.78）个、 （5 826±437）个、 （49.94±12.53）个和（10.04±1.13）个/0.25 cm2; 对照组分别为（89.93±32.18）个、 （10 016±3 541）个、（76.54±19.77）个和（19.22±2.45） 个/0.25 cm2,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜观察显示,与对照组相比,免疫组小鼠体内雌虫卵黄腺内成熟卵黄细胞和脂滴减少,雄虫睾丸组织内支持细胞多见而精细胞较少,且卵黄细胞和支持细胞胞质内出现空泡。 结论 SIEA可能通过抑制日本血吸虫生殖细胞的成熟而产生抗雌虫生殖免疫效应。     

日本血吸虫未成熟虫卵26／28kDa抗原诱导抗雌虫生…

目的：探讨日本血吸虫未成熟虫的２６／２８ｋＤａ抗原（ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ）诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法：采用纯化的ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原以及ＳＩＥＡ－Ｉ抗原，分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于攻击感染后４６ｄ进行粪卵，组织内虫卵定量。结果：证明ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较，ＳＩＥ２６／２８ｋＤａ抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内总卵数、     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,连续３次,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天,ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％,雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天,ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％,死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效,为一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子     

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。     

日本血吸虫未成熟卵抗血清对日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选

目的为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血吸虫基因。方法通过采用抗日本血吸虫未成熟卵SIEA26—28kDa免疫血清对日本血吸虫成虫cDNA文库进行筛选。结果共获得阳性克隆23个,经重复筛选之后,随机挑取其中的5个阳性克隆,分别进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示获得单一扩增条带,其大小位于150bp～1.5kb之间。结论从SjcDNA文库中筛选出抗卵相关阳性克隆,有关分析鉴定在进一步进行中。     

日本血吸虫成虫38kDa天然分子抗原的分离纯化与免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫成虫可溶性抗原38kDa（SjAWA38kDa）的动物保护作用，并对SjAWA38kDa作为抗日本血吸虫病分子疫苗的可行性进行评估。方法用SDS-PAGE电泳、切胶、电洗脱、超滤等方法分离纯化SjAWA38kDa．继而用SjAWA38kDa免疫昆明小鼠，然后进行尾蚴攻击感染（40尾／只），进行减虫率和减卵率研究。结果SjAWA38kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用，其减虫率为33．8％，减卵率为51．7％，有统计学意义（P〈0．05）。结论SjAWA38kDa分子抗原具有刺激机体产生抗日本血吸虫病的免疫保护作用，可以作为抗日本血吸虫病分子疫苗研究的靶标。     

SjR47组分抗原诱导抗日本血吸虫卵肉芽肿病变免疫效应的进一步研究

进一步确定SjR47和SjR12组分抗原的分子基础和性质及其SjR47免疫小鼠后的抗病变免疫效应。方法用SDS—PAGE电泳和酶联免疫印迹试验（ELIB）鉴定SjR47和SjR12两种组分抗原的分子基础和特性；用凝胶大柱制备电泳大量纯化、收集SjR47组分抗原并免疫BALB／c小鼠，攻击感染后6～8wk，取肝组织计算虫卵数并观察肉芽肿病变大小。结果进一步证明从日本血吸虫感染兔红细胞上分离、纯化的47kDa和12kDa组分抗原，前者主要属卵源性抗原，后者主要为虫源性抗原。用纯种小鼠进行抗病免疫实验结果表明，在感染后6～8Wk时，SjR47免疫小鼠肝内总减卵率和成熟卵减少率分别为52。57％～57.25％和50.73％～74．70％；肝内虫卵肉芽肿病变平均体积（101.57士11．51～87．95士19．55，1X105um3）显著小于佐剂对照组（143．54 10．77～110．96 15．34）及感染对照组（173．31 37．24～124．40 54．82）（P均<0．01）。结论进一步证明从日本血吸虫感染兔红细胞上可分离出SjR47（卵源性）和SjR12（虫源性）两种组分抗原，SjR47能诱导感染宿主产生明显的抗血吸虫卵肉芽肿病变保护性免疫力。     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的 …

目的 探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）和成虫抗原（ＳＡ）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法 采用ＳＩＥＡ与ＳＡ分别与联合免疫小鼠，于攻击感染后４８天剖杀，统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果 与对照组比较，ＳＩＥＡ单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力，肝组织成熟卵数下降３７．３％，成熟卵比例下降２４．０％；ＳＡ单独免疫产生显著抗感染免疫力，减虫率为３４．５％；ＳＩＥＡ     

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

不同免疫方案对日本血吸虫22.6 kDa重组蛋白保护性免疫力的影响

目的比较福氏完全佐剂(FCA)、福氏不完全佐剂(FIA)与氢氧化铝(Al(OH)3)的免疫增强作用,探讨不同免疫方案对日本血吸虫22．6 kDa蛋白保护性免疫力的影响。方法通过基因工程技术获得rSj22．6／26GST重组抗原的大量表达,用亲和层析法制备rSj22．6／26GST融合蛋白并以凝血酶酶切获得纯化重组日本血吸虫22．6 kDa抗原(rSj22．6)。将纯化rSj22．6抗原分别与FCA、 FIA和Al(OH)3混合后,按照不同的免疫程序分别免疫BALB／c小鼠后进行日本血吸虫尾蚴攻击感染试验。用减虫率及减卵率表示免疫保护效果。结果 Western blot结果证实纯化的酶切产物是日本血吸虫22．6 kDa抗原。rSj22．6抗原与不同佐剂的免疫保护性实验结果提示:与PBS对照组相比．rSj22．6与FCA、FIA的协同作用均能诱导较高的成虫减虫率和总体减卵率(P均<0．01); rSj22．6与Al(OH)3的协同作用虽能诱导产生一定的总体减卵率(P<0．01),但未见有统计学意义的成虫减虫率(P>0．05)。各佐剂干预组所诱导的小鼠抗日本血吸虫感染的保护作用差异均无显著性(P均>0．05)。rSj22．6抗原诱导的保护作用在福氏佐剂的辅助下强于在Al(OH)3作用下的保护作用。结论福氏佐剂和Al(OH)3均可在一定程度上增强rSj22．6免疫小鼠的抗感染保护性免疫力,但福氏佐剂的增效作用强于Al(OH)3。