P,P''''-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响

[目的]研究雄激素结合蛋白在P,P'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制。[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4-5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100 μmol／L的P,P'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50 μmol/LP,P’-DDE作用于支持细胞24h, 运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平。[结果]P,P'-DDE在50μmol／L及以下浓度作用 24 h后,支持细胞存活率>90％,而80μmol/L组仅45％;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的P,P’-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0．3140±0．1020、0．3920±0．0949、0．5837±0．1221、0．6490±0．1718,随 p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0．05),呈剂量依赖关系。[结论] p,p'-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究

[目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升     

p，p＇-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响

[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物（p，p＇-DDE）和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞（sertoli cell）FasL mRNA表达及NF—κB活性的影响。[方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d，以DMSO为溶剂对照，分别以终浓度为10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h，应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测NF—κB的转位激活状况。[结果]10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后，FasL mRNA表达升高，50μmol／L剂量组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）；NF-κB活性明显增强。[结论]支持细胞经p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒后，FasL mRNA表达明显升高，NF—κB的活性随染毒剂量的增加而增强，且联合作用比单独作用更加明显。     

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响

[目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。     

c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。分别用q RT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达。结果 100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势。结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,最终导致生精细胞凋亡。     

纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞的细胞毒性研究

目的 探讨纳米二氧化钛对小鼠睾丸支持细胞(TM4)的毒性作用。方法 用浓度为0、25、50和100μg/ml的纳米二氧化钛染毒TM4细胞24h。使用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK8) 检测细胞存活率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,试剂盒检测超氧化歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的水平。结果 与对照组相比,随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高,TM4细胞存活率逐渐下降,当浓度达到100μg/ml时,细胞存活率下降明显(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,与对照组相比,随着染毒剂量的增加,各个染毒组的细胞凋亡率和ROS水平逐渐增加(P<0.05)。细胞SOD活性和GSH含量随着染毒浓度的增加而逐渐降低,且在100 μg/ml 剂量组与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 纳米二氧化钛可以抑制睾丸支持细胞TM4的活性,诱导细胞凋亡,其毒性机制可能与细胞发生氧化应激有关。     

四溴双酚A对HepG2细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的研究不同浓度四溴双酚A(TBBPA)暴露对人肝癌(Hep G2)细胞凋亡的影响。方法以不同浓度TBBPA染毒Hep G2细胞,采用MTS法检测细胞存活率,JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位变化,以AnnexinⅤ与PI联合标记并使用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 Hep G2细胞存活率随着TBBPA暴露浓度升高相应降低;与对照组相比,20和30μmol/L TBBPA暴露组Hep G2细胞线粒体膜电位显著下降(P0.01);Hep G2凋亡细胞随TBBPA暴露浓度升高有增加趋势,其中30μmol/L TBBPA暴露组与对照组相比差异显著(P0.01)。结论 TBBPA可能通过降低线粒体膜电位引起细胞凋亡。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

维生素C对脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导的单个核细胞凋亡及增殖抑制作用的影响

目的探讨维生素 C(vitamin C,VC)预处理对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导的人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,HPBMC)凋亡及其相关基因表达和增殖抑制作用的影响。方法采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)和蛋白印迹(Western blotting)方法研究不同剂量 VC 预处理后,DON 对 HPBMC 凋亡及相关基因 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响的变化,同时观察 VC 预处理对 DON 引起的增殖抑制作用的影响。结果FCM 检测结果表明,终浓度为2000μg/L 的 DON 可诱导体外培养的 HPBMC 凋亡,其凋亡率为(28.82±1.67)%,25μmol/L VC 预处理可明显抑制 DON 诱导的体外培养 HPBMC 凋亡(22.39±1.05)%,P<0.05,而100μmol/L VC 预处理则可明显增高 DON 诱导的 HPBMC 凋亡(36.07±2.92)%,P<0.05。Western blotting 分析结果表明,25μmol/L VC 预处理可明显降低 DON 诱导的HPBMC Bax 和 caspase-3蛋白高表达,同时使 DON 抑制的 Bcl-2蛋白表达明显升高。100μmol/L VC预处理可明显促进 DON 诱导的 Bax 和 Caspase-3蛋白的高表达,但对 DON 抑制的 Bcl-2表达无明显影响。不同剂量 VC(25μmol/L 和100μmol/L)预处理均可降低 DON 对 HPBMC 增殖的抑制作用(P<0.05),但不同剂量 VC 之间没有显著差异。结论 25μmol/L VC 预处理可一定程度地抑制DON 诱导的 HPBMC 亡及凋亡相关基因的异常表达,而100μmol/L VC 则促进 DON 诱导的HPBMC 凋亡。不同剂量 VC 预处理可以明显降低 DON 对 HPBMC 的增殖抑制作用。     

超氧化物歧化酶复合酶对尘肺患者肺泡巨噬细胞Fas/FasL信号转导及细胞凋亡的调控作用

目的 探讨超氧化物歧化酶(SOD)复合酶对尘肺患者肺泡巨噬细胞(AM)Fas/FasL信号转导及细胞凋亡的调控作用,为尘肺的早期防治提供依据.方法 收集在某专科医院进行大容量双肺灌洗治疗的0+接尘工人、Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者(共50例)的肺泡灌洗液中的细胞成分,将每例的AM分为非处理组、SOD组、Fas/FasL组.分别取5×106个细胞于DMEM中纯化培养2 h,3组均换新的DMEM,SOD组加SOD复合酶200 U/ml、Fas/FasL组加抗肿瘤坏死因子α((TNF-α)抗体50 ng/ml、抗-TRAIL抗体200 ng/ml后继续培养24 h.取1×106个AM进行细胞裂解,用western blot方法检测Fas、FasL、Caspases-8、Caspases-3蛋白表达,用quantity one 7.0图像分析软件测定各蛋白的相对含量.采用末端脱氧核酸转移酶(TdT)介导的duTP缺口末端标记技术(TFUNEL)检测AM凋亡情况;琼脂糖凝胶电泳法定性检测AM DNA片断化.结果 SOD组、Fas/FasL组凋亡指数分别为(9.50±2.76)%和(14.01±2.56)%,均低于未处理组[(19.18±2.83)%],差异有统计学意义(P＜0.05);未处理组呈现细胞凋亡的特征性DNA梯状带,Fas/FasL组梯状带隐约可见,SOD组未见特征性梯状带.SOD组Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者的Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3蛋白表达水平均低于未处理组和Fas/FasL组,差异有统计学意义(P＜0.05).不同处理组各期尘肺的AM Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3的蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 SOD复合酶可下调Fas/FasL系统的Fas、FasL、Caspase-8、Caspase-3的蛋白表达水平,抑制AM的凋亡.     

二硫化碳对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨二硫化碳（CS2）对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及细胞凋亡的影响。方法将24只SD雄性大鼠随机分为对照组、低剂量CS2染毒组和高剂量CS2染毒组，染毒结束后取视网膜组织制成切片，测量内视网膜厚度比率，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶染色（NADPH-NDP）法检测iNOS活力，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果（1）染毒组的内视网膜（包括内核层、内丛状层、节细胞层、神经纤维层和内界膜）厚度减小，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（2）染毒组视网膜iNOS表达增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（3）染毒组视网膜出现细胞凋亡，凋亡指数与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论CS2能激活视网膜组织iNOS表达，由此产生的过量的NO可损伤视网膜细胞。同时，视网膜细胞凋亡也是CS2所致视网膜损害的机制之一。     

氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡与应激活化蛋白激酶活性的 …

目的 了解氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡的发生及应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）活性的变化。方法 体外分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素Ⅴ和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测,观察氯化镉诱发细胞凋亡的特征;采用免疫沉淀－化学发光法测定ＳＡＰＫ活性。结果 ６．２５～２００．００μｍｏｌ／Ｌ剂量氯化镉处理２ｈ,凋亡细胞百分率随剂量增加而增加,平均为９．９０％、１５．４７％、３３．６７％、５３．７０％     

二硫化碳接触工人体内一氧化氮水平的初探

目的　探讨二硫化碳 (CS2 )作业工人体内一氧化氮 (NO)水平的变化及其机制。　方法选取某化纤厂CS2 作业工人 6 0名和不接触CS2 工人 36名 ,分别测定血浆NO、脂质过氧化物 (LPO)水平及红细胞超氧化物歧化酶 (Ery SOD)活性。结果　高、低剂量接触组工人血浆NO水平分别为(4 3 2 8± 19 83)和 (5 0 0 7± 2 1 0 1) μmol/L ,与对照组 (70 6 6± 2 6 83) μmol/L比较 ,两者均显著降低 ;高、低剂量接触组工人Ery SOD活性分别为 4832 2 1和 3 5 2 0 80u/gHb ,与对照组 (2 42 5 34u/gHb)比较 ,高剂量组显著升高 ;高、低剂量接触组工人血浆LPO水平分别为 19 38和 17 0 9μmol/L ,与对照组(4 37μmol/L)比较 ,均显著增高。结论　职业性长期接触CS2 能导致体内血浆NO水平下降 ,其机制与CS2 诱导体内超氧阴离子水平升高有关     

氯化镉诱发肾上腺皮质细胞凋亡与蛋白激酶B活力的关系

目的 了解氯化镉(CdCl2)诱发肾上腺皮质细胞凋亡的发生与蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)活力变化的关系.方法 体外分离培养豚鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶联合标记,流式细胞仪检测,观察CdCl2诱发细胞凋亡的特征;采用免疫沉淀-化学发光法测定PKB/Akt活力.结果 6.25～100.00 μmol/L剂量CdCl2处理肾上腺皮质细胞2 h,细胞凋亡发生率随剂量增加而增加,25.00 μmol/L及更高剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);回归分析表明,CdCl2剂量与凋亡发生率呈剂量-效应关系.以50.00 μmol/L CdCl2处理细胞,细胞凋亡发生率随时间的延长而增加,CdCl2作用15 min～4h,平均凋亡率为5.58%-73.08%,其中1、2、4h时间点与对照相比,差异有统计学意义(P＜0.05);CdCl2处理时间与凋亡发生率呈时间-效应关系.6.25～200.00 μmol/L剂量CdCl2处理30 min,显示CdCl2可引起肾上腺皮质细胞PKB/Akt表达降低,在一定剂量范围内呈线性关系.结论 CdCl2诱发肾上腺皮质细胞凋亡的同时引起细胞内PKB/Akt表达水平的降低.     

镉对人胚肾细胞凋亡和血红素氧合酶-1表达的影响

目的探讨镉对人胚肾细胞(HEK239T)凋亡和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响。方法 MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测镉诱导人胚肾细胞凋亡,应用逆转录多聚酶链反应 (RT-PCR)及Western免疫印迹法检测镉对人胚肾细胞HO-1 mRNA及蛋白表达的影响。结果 5．0、 10．0、20．0、40．0μmol／L CdCl2诱导人胚肾细胞后,凋亡率分别为11．90％±0．28％、9．27％±1．73％、 9．79％±0．67％、8．97％±1．60％,均明显高于对照组(6．69％±0．46％),差异有统计学意义(P< 0．01)。10～40μmol／L CdCl2均可高度诱导人胚肾细胞HO-1表达,随着剂量增高缓慢上升并达到平台期,随时间的延长略有降低。结论镉可诱导人胚肾细胞凋亡,上调HO-1的表达。     

PM_(2.5)颗粒物引起血管内皮细胞氧化损伤的研究

目的　探索PM2. 5颗粒物引起心血管疾病的机制。方法　ECV30 4细胞暴露于不同浓度的PM2. 5颗粒物混悬液 (5 0、2 0 0、4 0 0 μg/ ml) ,染毒 2 4小时后运用MTT法测细胞存活率、测定细胞内SOD和GSH含量、并进行流式细胞仪分析凋亡来综合分析。结果　随着染毒浓度上升 ,ECV30 4细胞存活率逐渐下降 ,死亡率逐渐上升 ;染毒浓度为 5 0、2 0 0、4 0 0 μg ml,细胞内GSH含量 (mg gprot)分别为 2 0 . 6 4 3± 2 .16 7、16. 774± 2 911(P <0. 0 5 )、15. 6 5 8± 3. 4 71(P <0. 0 1) ,SOD含量 (U mgprot)为 5. 878± 0. 4 0 1、5 14 0± 0 . 4 4 8(P <0 .0 1)、4 . 817± 0 . 4 5 1(P <0 . 0 1)。结论　PM2. 5可通过氧化损伤途径使血管内皮细胞死亡 ,导致心血管疾病的发生。     

Protective effects of taurine on endothelial cells impaired by high glucose and oxidized low density lipoproteins

BACKGROUND: Endothelial dysfunction, common to diabetes and cardiovascular diseases, is an early step in the development of atherosclerosis and diabetic angiopathies. Deficiencies of taurine have been related to diabetes and cardiovascular diseases. AIMS OF THE STUDY: We investigated whether taurine provides protective action against endothelial dysfunction induced by hyperglycemia and/or oxidized low density lipoproteins (oxLDL). METHODS: Quiescent human umbilical cord venous endothelial cells were exposed for 20 h to high glucose (35 mM) and/or oxLDL (60 microg/ml) alone and in presence of taurine (0.5-2.5 mg/ml). Apoptosis, caspase-3 activity, soluble(s) and cell surface expressions of vascular cellular (VCAM-1) and intercellular (ICAM-1) adhesion molecules were determined. Results are given as a percentage of the low glucose medium control. Apoptosis, VCAM-1 and ICAM-1 expressions were related to cell number. RESULTS: Hyperglycemia increased apoptosis to 162.5 +/- 19.2%, caspase-3 activity to 153.2 +/- 10.3%, cell-surface expression of VCAM-1 to 125.1 +/- 5.8%, the expression of ICAM-1 to 123.7 +/- 2.8% and sICAM-1 to 146.5 +/- 7.9%. Taurine (0.5-2.5 mg/ml) restored apoptosis, caspase-3 activity and expressions of VCAM-1 and ICAM-1. OxLDL (60 microg/ml) increased apoptosis to 114.8 +/- 3.1%; taurine (2.5 mg/ml) reduced this apoptosis to 40.5 +/- 4.1%. The combination of hyperglycemia and oxLDL increased apoptosis to 211.7 +/- 11.6%. This increase was normalized by taurine (2.5 mg/ml) to 97.9 +/- 12.8%. CONCLUSION: Taurine protects HUVECs from endothelial dysfunction induced by hyperglycemia through down-regulation of apoptosis and adhesion molecules. Counteracting the combination of oxLDL and hyperglycemia requires pharmacological concentrations of taurine.     

跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗诱导恶性黑色素瘤细胞B16凋亡的作用。方法采用脂质体转染法分别将前期构建的模拟肽疫苗稳定转染B16细胞，加入终浓度为2．5μg／ml、5μg／ml、10μg／ml及20μg／ml的抗血型A单克隆抗体培养72h，AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率。结果P／F-M-pIRES组的B16细胞经10μg/ml抗血型A单克隆抗体诱导后凋亡率为74．74％，转染有模拟肽／Fas融合基因的P／F-M-pIRES组和P／F-pIRES组凋亡率明显高于未转染的M-pIRES组和pIRES组。析因设计的方差分析显示不同实验分组之间的差异主效应差异有统计学意义（F=669．707，P〈0．01），不同浓度分组之间的主效应差异有统计学意义（F=106．596，P〈0．01），不同实验分组不同浓度之间的交互效应差异也有统计学意义（F=34．806，P〈0．01）。结论跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗可诱导黑色素瘤细胞B16凋亡，在黑色素瘤治疗中可能是一种有潜在价值的方法。