人血浆中非洛地平的LC-MS测定法及其在药动学研究中的应用

目的建立人血浆中非洛地平浓度的液相色谱-质谱联用的测定方法。方法以尼莫地平为内标,血浆样品经100μL1.0mol·L-1NaOH溶液碱化,采用乙醚-正己烷(4∶1)萃取后进行LC-MS分析。色谱柱为C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸(84∶16),流速为0.8mL·min-1;离子源为电喷雾离子化源(ESI源),正离子方式检测;扫描方式为选择离子监测(SIM),用于定量分析的离子分别为m/z406(非洛地平)和m/z441(尼莫地平)。结果非洛地平在0.2～20.0μg·L-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9948),定量下限为0.2μg·L-1,低、中、高浓度的提取回收率均大于81.9%,日内、日间精密度(RSD)均小于14.9%。结论该方法准确可靠,灵敏度高,适用于血浆中非洛地平浓度的测定及其药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中的非洛地平浓度

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中的非洛地平浓度.方法:以非洛地平-d3为内标,血浆样品采用乙腈进行蛋白质沉淀前处理后,采用Waters Xbridge-C18(2.1 mm×50 mm,3.5μm),以水/甲酸/1 mol·L-1醋酸铵(100/0.2/0.1,v/v/v)、乙腈/甲酸/1 mol·L-1醋酸铵(100/0.2/0.1,v/v/v)为A、B流动相,梯度洗脱;使用电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测(MRM)模式检测,非洛地平和内标的检测离子对分别为m/z 384.2→352.0和m/z 387.2→351.9.结果:非洛地平在0.02～4 ng·mL-1范围内线性关系良好,最低定量限为0.02 moL·L-1,分析物在血浆中的提取回收率在81.1％～107.3％,准确度在±15％之内,批内、批间精密度均<10％,无明显基质效应影响和残留效应.结论:本方法准确快速,灵敏度高,专属性强,适用于本品的血药浓度检测.     

非洛地平缓释片在健康人体内的药动学研究

目的:建立用于测定人血浆中非洛地平的LC-MS/MS法,研究非洛地平缓释片在健康人体内的药动学.方法:色谱条件:色谱柱为Agilent HC C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05％甲酸溶液(83:17)和乙腈,线性梯度洗脱,流速为1 mL· min-1,柱温为35℃,进样量为20 μL;质谱条件:电喷雾正离子化,三重四极杆质谱多反应监测模式,非洛地平和内标西尼地平的选择性反应检测离子分别为m/z 384.0→338.1和m/z 493.0→375.1.20名中国成年健康男性受试者随机分为2组,采用自身双交叉试验设计,先单剂量空腹口服5 mg非洛地平缓释片受试制剂或参比制剂,并于不同时间点采集肘静脉血(0～72 h);随后进行多剂量试验,2组受试者连续8d服用受试制剂或参比制剂(5 mg,qd),于第8d服药后按单剂量试验中的采血方案在各时间点采集血样.对采集的所有血样进行血浆分离及处理,采用建立的LC-MS/MS法测定非洛地平血药浓度,用DAS2.0软件计算药动学参数.结果:分析方法学评价:非洛地平血药浓度在0.025～10 μg·L-1范围内线性关系良好,方法精密度、准确度和回收率均良好,且无明显基质效应.药动学评价:受试制剂单剂量和多剂量给药后的主要药动学参数Cmax分别为(1.29±0.49)和(1.26±0.48) mg·L-1以及AUC0-72 h分别为(21.2±5.0)和(20.1±7.9)mg·h·L-1,均与参比制剂无显著差异(P＞0.05);与单剂量给药相比,2种制剂经多剂量给药后的稳态Cmax、Tmax和AUC值均无显著性变化.结论:建立的LC-MS/MS法专属、灵敏、准确,可满足非洛地平缓释片的药动学研究要求;非洛地平缓释片多剂量给药,不会导致体内药物蓄积.     

西尼地平的健康人药动学研究

目的:建立西尼地平血药浓度的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定法,研究中国健康男性受试者口服西尼地平胶囊后的血浆药动学特点.方法:20名健康男性受试者单剂量口服10 mg西尼地平胶囊,以尼莫地平为内标,采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)正离子选择性反应检测测定血浆中的西尼地平浓度,使用DAS软件计算药动学参数.结果:西尼地平在0.1～20μg·L-1范围内线性关系良好(r0.996 7),最低定量限为0.10μg·L-1,日内、日间精密度(RSD)均<15%,绝对回收率80%.口服10 mg西尼地平胶囊后的主要药动学参数分别为:Cmax为(14.6±5.0)μg·L-1,Tmax为(4±1.1)h,t1/2为(11.3±5.8)h,AUC0～48 h为(77.5±31.3)h·wg·L-1,AUC0～∞为(82.2±35.8)h·μg·L-1,MRT为(12.3±5.0)h,CL/F为(144.9±64.6)L·h-1,V/F为(2 253±1 592)L.结论:建立的LC-MS/MS测定法专属准确,灵敏度高,可用于西尼地平血药浓度分析及药动学研究.     

盐酸曲美他嗪片在健康人体内的药代动力学研究及生物等效性评价

目的:建立人血浆中盐酸曲美他嗪浓度的LC-MS/MS法,并用于盐酸曲美他嗪片的药代动力学和生物等效性研究。方法:采用自身双交叉试验设计,20名男性受试者随机分成2组,分别单剂量口服20 mg受试制剂或参比制剂,0～24 h间隔采集血样。以LC-MS/MS内标法(盐酸丁咯地尔)测定盐酸曲美他嗪血药浓度,采用Inertsil ODS-2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-含0.1%甲酸、0.2%醋酸铵的水溶液(55∶45,v/v);多反应监测[M+H]+离子通道分别为m/z 267→181(曲美他嗪)和m/z 308→237(丁咯地尔)。DAS 2.1计算药代动力学参数。结果:建立的LC-MS/MS法在0.5～200μg.L-1范围内线性关系良好,最低检测限为0.05μg.L-1,批内及批间精密度RSD均小于15%。受试制剂与参比制剂的Tmax分别为(1.8±0.7)h和(1.8±0.8)h,Cmax分别为(60.1±10.7)μg.L-1和(59.6±10.5)μg.L-1,t1/2分别为(6.1±1.1)h和(6.1±1.0)h,AUC0-24 h分别为(518±126)h.μg.L-1和(518±120)h.μg.L-1。结论:建立的LC-MS/MS法准确可靠,可用于盐酸曲美他嗪片的药代动力学和生物等效性评价。     

尼美舒利分散片在健康人体内的药代动力学及生物等效性的LC-MS/MS研究

目的:建立人血浆中尼美舒利浓度的LC-MS/MS测定法,并用于尼美舒利分散片的药代动力学和生物等效性研究。方法:采用自身双交叉试验设计,20名男性受试者随机分成2组,分别单剂量口服100 mg受试制剂或参比制剂,0～24 h间隔采集血样。以LC-MS/MS内标法测定尼美舒利血药浓度,使用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(82∶18,v/v);多反应监测[M+H]+离子通道分别为m/z 309.1→m/z 153.9(尼美舒利)和m/z 237.1→m/z 194.0(内标卡马西平),DAS 2.1计算药动学参数。结果:建立的LC-MS/MS法在0.075～12μg·mL-1范围内色谱响应与浓度相关性良好,最低定量限为0.075μg·mL-1,批内及批间精密度RSD均小于15%。受试制剂与参比制剂的Tmax分别为(3.0±0.7)h和(3.5±1.0)h,Cmax分别为(4.863±1.194)μg·mL-1和(4.657±1.038)μg·mL-1,t1/2分别为(3.2±1.0)h和(3.3±1.1)h,AUC0-24 h分别为(32.35±12.50)h·μg·mL-1和(32.32±11.69)h·μg·mL-1,相对生物利用度F为(105.2%±35.0)%。结论:建立的LC-MS/MS法准确、灵敏,结果可靠,测得尼美舒利受试制剂和参比制剂生物等效。     

LC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平的浓度。方法以卡马西平-d2作为内标,血浆经甲醇直接蛋白沉淀后进样分析,色谱柱为CAPCELL PAK C18(100 mm×2.0 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1 mmol·L-1乙酸铵水溶液(含0.02%乙酸)(70∶30),流速0.3 m L·min-1。电喷雾离子源,正离子多反应监测扫描分析。卡马西平和内标卡马西平-d2的离子对分别为m/z 237.1→194.1和m/z 239.1→196.1。结果卡马西平在质量浓度3.077 9~1 231.2μg·L-1内线性良好(r=0.999 3,n=10);批内和批间精密度良好(RSD均<7.0%);提取回收率为98.94%~108.84%,RSD<15%;基质效应为92.76%~98.54%,RSD<5%。结论本方法灵敏度、重复性以及专属性均较好,样品处理简便易行,可用于卡马西平的血药浓度测定及药动学研究。     

HPLC-MS/MS法测定人血浆中甲氧氯普胺的浓度

目的建立测定人血浆中甲氧氯普胺浓度的LC-MS/MS方法。方法采用Alltech Alltima C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3μm),以5 mmol.L-1乙酸铵-乙腈-甲醇(体积比为50∶40∶10)为流动相,流速为0.2 mL.min-1,血浆样品在碱性条件下液-液萃取,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多离子反应监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子对分别为m/z300.20→m/z227.00(甲氧氯普胺)和m/z152.20→m/z134.00(内标,苯丙醇胺)。结果甲氧氯普胺线性范围为0.5~200.0μg.L-1,最低定量限为0.5μg.L-1,平均回收率为(71.38±6.35)%,日内和日间精密度均小于15%。结论该法适用于临床药物浓度监测和药物动力学的研究。     

用液相色谱-质谱-质谱法测定人血清中非洛地平浓度

目的:建立液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)法测定人血清中非洛地平的浓度。方法:血清样品经液-液萃取预处理。色谱柱为Xterra柱(50 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为乙腈-0.02%氨水,采用梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。非洛地平和尼莫地平(内标)的多反应监测(MRM)扫描离子对分别为m/z382.1→145和m/z417.2→92,两者的保留时间分别为1.24 min和1.06 min。结果:非洛地平在0.04～20 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999 7),低、中、高浓度(0.08、8.0、16.0 ng/mL)的日内RSD分别为6.60%、7.22%和5.01%(n=6),日间RSD分别为9.42%、8.46%和5.12%(n=14),准确度为98.21%～106.20%(n=6)。结论:本法操作简便,检测准确、灵敏、专一,重复性好,适用于非洛地平血药浓度监测和药动学及生物利用度研究。     

固相萃取LC-MS/MS法测定人血浆中头孢呋辛的浓度

目的建立人血浆中头孢呋辛浓度的LC-MS/MS检测方法。方法以头孢拉定为内标,血浆样品酸化后用固相小柱萃取处理;分析柱为Thermo Hypurity C18柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-20mmol·L-1甲酸铵水溶液(65:35);流速为0.2 m L·min-1,柱温30℃;使用电喷雾离子源(ESI),负离子多反应监测(MRM)方式进行检测。结果头孢呋辛监测离子为m/z 423.1→m/z 207.1,内标头孢拉定监测离子为m/z 348.2→m/z 235.2,样品分析时间为3 min,血浆中内源性物质对测定无干扰,头孢呋辛线性范围为0.1024~20.00μg·m L-1(r2=0.998 8),定量下限为0.102 4μg·m L-1。批内、批间精密度(RSD)均<8.5%,头孢呋辛与内标的平均回收率分别为104.4%和95.5%,平均基质效应为95.8%和93.9%,且均不存在浓度依赖性。结论该方法特异性强,灵敏度高,测定结果可靠,适用于血浆样品的高通量分析。     

LC-MS/MS法用于他喷他多在大鼠体内的药动学研究

目的建立测定大鼠血浆中他喷他多浓度的LC-MS/MS法,用以研究他喷他多在大鼠体内的药动学行为。方法采用甲醇沉淀蛋白法提取血浆中目标成分。色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18柱,流动相为甲醇-5 mmol.L-1醋酸铵-乙酸(体积比58∶42∶0.5),流速为0.5 mL.min-1,柱温为室温。以多反应离子监测(MRM)方式,在正离子模式下进行检测,用于定量分析的主要离子对分别为m/z 222.2→107.1(他喷他多),m/z 307.1→220.1(氟康唑)。结果血浆中内源性物质不干扰他喷他多的测定,他喷他多的线性范围为2.0～200μg.L-1,方法的准确度在96.2%～97.5%内,日内、日间精密度均小于15%。结论作者建立的LC-MS/MS法,简单快速、专属性强,可用于他喷他多在大鼠体内的药动学研究。     

正负离子切换液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中头孢他啶和他唑巴坦

目的:建立灵敏、专属的液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中头孢他啶和他唑巴坦,并用于临床药代动力学研究。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-5 mmol.L-1醋酸铵-甲酸(20∶80∶0.16,v/v/v)为流动相,使用VenusilASB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。采用电喷雾电离源,多反应监测模式(MRM),以正负离子切换同时测定头孢他啶和他唑巴坦,切换时间在进样后3.8 min。头孢他啶采用正离子检测,用于定量的离子反应分别为m/z 547→468(头孢他啶),m/z 364→208(内标头孢羟氨苄),头孢他啶和内标头孢羟氨苄的保留时间分别为3.0 min和2.8 min;他唑巴坦采用负离子检测,用于定量的离子反应分别为m/z 299→138(他唑巴坦),m/z 232→140(内标舒巴坦),他唑巴坦和内标舒巴坦的保留时间分别为4.4 min和4.9 min。结果:头孢他啶和他唑巴坦的线性范围分别为0.250～250μg.mL-1和0.0250～25.0μg.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于10.8%,准确度(RE)在-7.6%～2.1%之间。本法被成功应用于健康受试者静脉滴注不同剂量头孢他啶/他唑巴坦钠(6∶1)注射液(头孢他啶/他唑巴坦含量分别为1 g/0.167 g,2 g/0.333 g,4 g/0.667 g)的药动学研究。结论:该方法专属性强,灵敏度高,操作简便,适用于注射用头孢他啶/他唑巴坦临床药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS测定人血浆中羧甲司坦的浓度及其生物等效性研究

目的 建立HPLC-MS/MS方法测定人血浆中的羧甲司坦体内浓度,用于人体生物等效性分析.方法 以直接沉淀法处理血浆,色谱柱为XTerra MS C18柱(150 mm×2.1mm,5μm);流动相为甲醇-20 mmol,L-1甲酸铵(含0.5％甲酸)(75∶25,v/v);流速为0.3 mL· min-1;柱温为40℃.采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,用多反应监测模式(MRM)进行定量分析.结果 羧甲司坦线性范围为0.210 9～54 μg,mL-1,定量下限为0.210 9 μg·mL-1,绝对回收率＞80％,日内和日间RSD均＜15％.结论 此方法能够简便、高效、快速和灵敏的检测健康志愿者血浆中的羧甲司坦,可用于羧甲司坦药物代谢动力学及生物等效性研究.     

LC-MS/MS方法测定Beagle犬血浆中比卡鲁胺的浓度

目的 建立灵敏的液相色谱-串联质谱法测定狗血浆中比卡鲁胺的浓度.方法 血浆样品采用乙腈蛋白沉淀方法,以0.2％甲酸-乙腈(35∶65,v/v)为流动相;采用Zorbax SB C18柱(150 mm×4.6mm,5 μm)分离,通过电喷雾电离源,以选择多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z428.9→254.7(比卡鲁胺)和m/z 269→169.6(内标,甲苯磺丁脲).结果 建立的体内比卡鲁胺测定方法线性范围为5～2 000 ng·mL-1,定量下限可达1 ng·mL-1.日内、日间精密度(RSD)均＜10％.结论 该方法预处理操作简洁、灵敏、专属性强,可方便用于比卡鲁胺药物的体内药动学研究.     

在线固相萃取-液质联用法定量分析生物基质中丁香醛及其在大鼠体内药代动力学研究中的应用

目的建立测定SD大鼠血浆中丁香醛的在线固相萃取-液质联用法(on-line SPE LC-MS/MS)。方法采用乙腈沉淀蛋白后,取上清经on-line SPE系统进行血浆样品预处理,选用香兰素为内标,以LC-MS/MS法测定大鼠血浆中丁香醛的含量。色谱柱为GRACE Alltima HP C18(50 mm×2.1 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(60∶40,V∶V),流速为0.4 ml·min-1。电喷雾离子化(ESI)方式,采用多反应监测,检测离子为正离子,分别选择m/z 182.3→m/z123.1和m/z 153.1→m/z 93.0作为丁香醛和内标物香兰素的检测离子对。结果丁香醛在10.0～2 000μg·L-1范围内线性关系良好(r=0.9997)。方法的准确度(相对误差,RE)范围为-8.5%～5.9%;日内精密度(相对标准偏差,RSD)<16.3%,日间精密度RSD<13.8%。SD大鼠灌胃给予丁香醛(17.5 mg.kg-1和70 mg.kg-1)后,主要药动学参数:T12分别为41.9 min和54.0 min、Cmax分别为361.0μg·L-1和944.0μg·L-1、Tmax分别为10.0 min和27.5 min、CL分别为848.1 ml·min-1.kg-1和683.9 ml·min-1·kg-1。结论建立的基质中丁香醛的测定方法快速、准确、特异性好,适用于丁香醛在SD大鼠体内的药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定恒河猴血浆中巴替非班的浓度及药代动力学研究

目的:建立恒河猴血浆中巴替非班浓度的高效液相-串联质谱(Liquid Chromatography-TandemMass Spectrometry,LC-MS/MS)测定法,并研究其在恒河猴体内的药代动力学。方法:取恒河猴血浆200μL,加入含2μg.mL-1内标依替巴肽的乙腈-甲醇(70∶30)混合溶剂600μL沉淀蛋白,取上清液吹干,残留物加100μL流动相复溶,取上清液进行LC-MS/MS分析。色谱柱为ODS C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-20 mmol.L-1甲酸铵(50∶50),流速为0.4 mL.min-1;质谱采用电喷雾离子化,正离子检测,巴替非班和内标的选择性检测离子分别为m/z 818.3→632.4和m/z 832.0→646.2。结果:巴替非班的线性范围为25～5 000 ng.mL-1,最低定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ)为25 ng.mL-1,准确度、精密度及回收率均符合要求。结论:本方法专属性强,检测限低,灵敏度高,线性关系良好,方法简便快捷,适用于巴替非班临床前药代动力学研究。     

液相色谱-质谱法测定人血浆中的甲哌卡因

目的建立灵敏、快速液相色谱-串联质谱法测定人血浆中甲哌卡因的浓度,并用于人体药动学研究。方法 200μL的血浆样品经甲基叔丁基醚提取处理后,以10 mmol.L-1醋酸铵(含0.5%甲酸)水溶液-乙腈(60∶40,v/v)为流动相,Inertsil CN柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)的方式进行检测,选择离子反应为m/z 247.2→98.0(甲哌卡因)和m/z 235.2→86.0(利多卡因)。结果甲哌卡因在0.500～1 500 ng.mL-1线性关系良好,定量下限为0.500 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均≤10.1%,甲哌卡因和内标利多卡因的提取回收率分别为64.6%～67.4%和64.5%。结论该法选择性强、灵敏度高,适用于人血浆中甲哌卡因的浓度测定。     

UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度

目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度。方法:血浆样品用甲基叔丁基醚提取,离心后取上清液氮气吹干,流动相复溶后进行UPLC-MS/MS测定。色谱柱:BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相:乙腈-0.01 mol.L-1醋酸铵(72∶28);流速:0.15 mL.min-1;柱温:40℃,进样量:8μL。电喷雾离子化(ESI),正离子模式多重反应选择离子检测(MRM),辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸及内标洛伐他汀的检测离子对分别为:m/z 419→199,437→303,405→199。结果:血浆样品中辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸线性范围分别为0.241～61.76 ng.mL-1(r=0.999,n=5)和0.344～88.16 ng.mL-1(r=0.997,n=5),日内、日间精密度(RSD)均小于15%,方法的平均回收率分别为100.6%和106.0%,血浆基质对血浆中的辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸测定无干扰。结论:建立的UPLC-MS/MS法处理简单、灵敏、特异性高,定量准确,为辛伐他汀制剂的临床药代动力学研究提供了简便、准确的分析测定方法。