1株产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的产酶条件优化

目的提高菌株Y112产α-环糊精葡萄糖基转移酶（α-CGTase）的能力。方法采用单因素法和响应面法,对菌株Y112产酶的培养基成分和培养条件进行了优化。结果最终确定了菌株Y112产酶最佳培养基成分为：玉米淀粉 7.5 g/L,蛋白胨17.8 g/L,酵母浸粉 9.1 g/L,Mn2+ 0.6 mmol/L,NaCl 50 g/L,Na2CO3 15 g/L(pH 9.6);最佳产酶的培养条件为：27 ℃下发酵50 h。结论优化后的酶活为优化前的2.8倍。     

海洋源枯草芽孢杆菌生产壳聚糖酶的发酵工艺研究

目的 对一株海洋源产非诱导型壳聚糖酶的枯草芽孢杆菌LC1-1的液体发酵产酶条件进行筛选优化,并在中试水平的50 L液体深层通气发酵实验中验证摇瓶实验结果的可行性与可放大性。方法 采用Minnimum-Run Equireplicated Res IV设计和中心复合设计 (Central Composite Design)对培养基成分及发酵条件进行优化。结果 Minnimum-Run Equireplicated Res IV实验设计与统计学分析表明：蔗糖浓度和发酵温度是影响LC1-1产壳聚糖酶的2个显著性因素。以壳聚糖酶活力为响应值,对2个显著性因素进行中心复合设计,并经响应面法优化分析得到影响酶活性的二阶模型,确定了壳聚糖酶的最优产酶条件为：蔗糖浓度22.7 g/L,胰蛋白胨15.0 g/L,K2HPO4 2.0 g/L,KH2PO4 1.0 g/L,NaCl 5.0 g/L,MgSO4·7 H2O 0.7 g/L,酵母粉2.0 g/L,pH 5.5,发酵温度34 ℃,装液量20%,转速180 r/min,接种量 2%,发酵周期 20 h。在该条件下测得壳聚糖酶活为32.23±0.32 U/mL。在50 L发酵罐中对摇瓶的优化结果进行中试水平工程化验证,发酵17 h得到最高酶活为39.9 U/mL,证实了摇瓶优化条件的可重现性及可放大性。结论 通过优化菌株LC1-1的发酵条件,提高了菌株产酶能力,并在50 L发酵罐中对摇瓶优化结果进行中试水平的验证,为进一步工程化生产壳聚糖酶提供了参考依据。     

赛庚啶对离体犬心肌肌质网Ca2+,Mg2+—ATP酶活性和45Ca2+摄取功能的影响

当赛庚啶浓度在8×10^-6mol/L～2×10^-4mol/L之间时,该药对正常犬心肌肌质网Ca²⁺,Mg²⁺—ATP酶活性几乎没有影响,仅在10^-3mol/L时对该酶活性才有一定的抑制作用(抑制率为39.85%,P<0.01)。正常犬心肌肌质网的⁴⁵Ca²⁺摄取过程有明显的时间依赖性,至第30 min,其⁴⁵Ca²⁺摄取量可达312.79±22.25 nmol/mg protein.赛庚啶对心肌肌质网的~(45)Ca²⁺摄取有一定的抑制作用,其IC₅₀为1.94×10^-4mol/L。     

养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾组织TGF-β1、PI3K和PKB的影响

目的 观察养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI₃K）和蛋白激酶B（PKB）的影响,探讨养肝益水颗粒对原发性高血压早期肾损害的作用及机制。方法 取50只12周龄收缩压大于150 mmHg的自发性高血压大鼠,随机分为模型组,养肝益水颗粒高、中、低剂量组（10.8、5.4、2.7 g/kg）和阳性对照药厄贝沙坦组（0.015 g/kg）,每组10只;另取10只Wistar雄性大鼠作为正常对照组,模型组和正常对照组ig给予等量蒸馏水,每天1次,共12周。给药前和给药12周后用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠尿微量白蛋白（UMA）浓度;末次给药后,用免疫组化法检测各组大鼠肾脏组织中TGF-β₁和PI₃K的表达;用ELISA法检测PKB的浓度。结果 养肝益水颗粒有效地降低了UMA浓度和肾脏组织TGF-β₁;升高了肾脏组织PI₃K和PKB水平。结论 养肝益水颗粒对高血压的早期肾损害有一定的抑制作用,其作用机制可能与影响TGF-β₁、PI₃K和PKB的含量有关。     

一株花柳珊瑚来源真菌 Curvularia lunata 产 cytochalasin B 发酵优化及其化学表观遗传修饰研究D

目的 通过对中国南海花柳珊瑚来源真菌 Curvularia lunata (RA16-1) 进行发酵优化以提高该菌的 cytochalasin B 产量,并加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠以考察对该菌次级代谢产物的影响。方法 运用单因素试验设计,对菌株产cytochalasin B的碳源、氮源、初始pH 值、盐浓度等发酵条件进行优化;运用柱色谱层析技术对加入丁酸钠的真菌Curvularia lunata (RA16-1) 发酵产物进行分离,以及核磁与质谱技术对分离的化合物进行结构鉴定。结果 单因素试验表明最优发酵条件为：碳源为蔗糖 (30 g.L_-1)、 氮源为蛋白胨 (30 g.L_-1)、发酵时间为96 h、初始pH为5.0、盐浓度为 2%。此外,从加入丁酸钠的发酵产物中分离得到了4个化合物,其中两个化合物(化合物2和3)为首次从该物种中获得。结论 在优化条件下,cytochalasin B的产量可达到2.3g.L_-1。组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠的加入后使得该菌发酵产物的结构类型发生较大变化。     

辛伐他汀联合辅酶Q10对慢性心衰大鼠心肌转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨辛伐他汀联合辅酶Q₁₀对慢性心力衰竭大鼠心肌转化生长因子β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)表达的影响。方法 利用腹主动脉缩窄法制作SD大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为模型组、辛伐他汀组、辅酶Q₁₀组、辛伐他汀+辅酶Q₁₀组,另设假手术组,每组8只大鼠,观察各组大鼠血流动力学参数(左室舒张末压、±dp/dt_max) 和左心室心肌组织病理学改变,SP免疫组化检测各组大鼠左心室心肌中TGF-β₁表达情况。结果 与模型组相比,辛伐他汀组、辅酶Q₁₀组和辛伐他汀+辅酶Q₁₀组左室舒张末压显著降低(P<0.01),±dp/dt_max显著升高(P<0.01),左心室肌TGF-β₁阳性表达水平显著降低(P<0.01);联合用药较辛伐他汀组、辅酶Q₁₀改变更为显著(P<0.05)。结论 辛伐他汀与辅酶Q₁₀联合应用较两药单独应用改善心衰大鼠心功能、抑制心室重塑和减少TGF-β₁表达作用明显。     

UFLC法测定复方丹参片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1

目的 探索建立超快速液相色谱（UFLC）法测定复方丹参片中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁。方法 采用SHIMADZU Shim-pack XR-ODS Ⅲ（2.0 mm×75 mm, 1.6 μm）色谱柱;以乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱;体积流量为0.4 mL/min;检测波长为203 nm;进样体积为3 μL。结果 三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁分别在0.025 7～0.257 0、0.101 2～1.012 0、0.104 4～1.044 0 μg与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.7%、98.1%、98.8%。结论 本方法在15min内可以将三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁有效分离,节省了大量人力和流动相的消耗,为中药的质量控制技术提供参考方法。     

黄曲霉素产毒真菌ver-1、verB及ITS基因序列多重PCR体系的优化

目的 对黄曲霉素产毒真菌的多重PCR体系进行优化，确定最佳PCR体系。方法 以黄曲霉素产生过程中的主要调控基因ver-1、verB及通用基因片段ITS序列为目的片段，设计多重PCR引物，采用单因素和正交优化试验，对DNA模板、Mg²⁺浓度、引物用量、dNTPs用量、退火温度等因素进行考察。结果 最佳多重PCR体系为：50 µL体系中含有引物(5 µmol·L^-1)3 mL，dNTPs(2.5 mmol·L^-1)5 µL，Mg²⁺(2.5 mmol·L^-1)4 µL，DNA浓度10 ng·µL^-1，退火温度56 ℃。结论 建立的体系可用于黄曲霉素产毒真菌的多重PCR鉴定，对黄曲霉产毒菌的源头鉴定具有一定的意义。     

辅酶Q10高产酵母菌SY-3发酵工艺的研究

目的为了获得比较高的辅酶Q₁₀产量,以一株酵母菌SY-3作为辅酶Q₁₀的生产菌,研究不同的发酵条件对辅酶Q₁₀产量的影响。方法用皂化法提取,用高效液相检测。结果与结论蔗糖是较好的碳源,蛋白胨是较好的氮源,通过均匀设计初步确定的发酵培养基为:蔗糖4.2%,蛋白胨2.8%,KH₂PO₄0.13%。接种量2%,500mL三角瓶中装液量40mL,pH值4.0,温度26℃,转速240 r/min,在此发酵条件下,发酵液中菌体生长量达到10g/100mL,辅酶Q₁₀产量达到84.6mg/L。     

粉防已碱对大鼠心肌微粒体ATPases的作用

体外在常规反应条件下,粉防已碱(Tet)对大鼠心肌微粒体Na⁺,K⁺-ATPase活性无明显影响,但浓度依赖性抑制Mg²⁺-ATPase(IC₅₀=179μmol/L).Tet 10和100μmol/L使哇巴因(Oua)抑制Na⁺,K⁺-ATPase的量效曲线平行右移.Tet 100μmol/L可显著提高低K⁺或高Ca²⁺浓度时的Na⁺,K⁺-ATPase活性,但未能明显增加低Na⁺浓度时该酶的活性.动力学分析提示Tet 100μmol/L增加Na⁺,K⁺-ATPase对ATP的亲和力,但不改变其最大反应速度。     

激素治疗对阿霉素肾病大鼠上颌骨骨密度的影响

摘要： 目的 研究甲泼尼龙激素治疗对阿霉素肾病大鼠上颌骨骨密度 （BMD） 的影响。方法 将 40 只大鼠随机分为 4 组, 空白对照组、 激素组、 阿霉素肾病组、 阿霉素+激素组。阿霉素肾病组及阿霉素＋激素组采用间隔 1 周 2 次尾静脉注射盐酸阿霉素 4 mg/kg 建立大鼠阿霉素肾病模型, 空白对照组和激素组尾静脉注射生理盐水 4 mg/kg。建模后激素组及阿霉素＋激素组给予甲泼尼龙 30 mg/ （kg·d） 灌胃, 空白对照组及阿霉素肾病组给予等体积生理盐水灌胃。每日 1 次, 连续 10 周。采用酶联免疫吸附试验 （ELISA） 测定骨钙素 （BGP）、 Ⅰ型原胶原 N-端前肽 （PINP）、 β- Ⅰ型胶原交联 C 末端肽 （CTX） 水平; 并行上颌骨 micro-CT 三维扫描检测骨小梁厚度 （Tb.Th）、 骨小梁间隙 （Tb.Sp）、骨小梁数目 （Tb.N）、 骨体积分数 （BVF）、 BMD。结果 与其余 3 组相比, 阿霉素＋激素组 BGP、 PINP 降低, CTX 升高（P＜0.05）。经 micro-CT 三维扫描分析, 阿霉素＋激素组上颌骨发生明显骨质疏松现象, 包括骨显微结构的改变, BMD 降低、 BVF 降低、 Tb.Th 减少以及 Tb.Sp 增宽 （P＜0.05）。但各组 Tb.N 差异无统计学意义。结论 阿霉素肾病大鼠本身存在骨代谢异常, 大剂量激素治疗可加速骨质疏松的发生, 使其骨代谢水平下降, 影响骨小梁结构。     

环孢素代谢相关酶基因多态性对其药动学及药效学的影响

环孢素（cyclosporine A,CsA）作为钙调磷酸酶的抑制剂发挥免疫抑制作用而广泛用于器官移植和自身免疫病的治疗。然而,该药在患者个体间的疗效差异大。细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）3A4和CYP3A5是CsA体内代谢的肝药酶,此外,肠道P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）对该药的外排作用也显著影响CsA的吸收。目前研究示CYP3A5*3、CYP3A4*1B、*18B、*22的多态性,以及编码P-gp的ABCB1基因中的3种多态性,即C1236T、G2677T/A和C3435T,与CsA代谢及疗效相关联,但结论仍然存在争议。本文主要对上述研究结果进行归纳和分析,还同时对参与调节CYP活性或CsA药理作用发挥路径中涉及的分子,包括过氧化物酶体增殖剂激活受体α（peroxisome proliferators-activated receptor alpha,PPAR-α）、CYP450氧化还原酶（cytochrome P450 oxidoreductase,POR）、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）及甲酰肽受体1（formyl peptide receptor 1,FPR1）的基因多态性也进行小结,从较全面的角度归纳新近关于基因多态性对CsA在体内的代谢、疗效发挥所产生的影响的研究进展。     

Roles of proteolysis in regulation of GPCR function

The enzymatic activity of peptidases must be tightly regulated to prevent uncontrolled hydrolysis of peptide bonds, which could have devastating effects on biological systems. Peptidases are often generated as inactive propeptidases, secreted with endogenous inhibitors, or they are compartmentalized. Propeptidases become active after proteolytic removal of N-terminal activation peptides by other peptidases. Some peptidases only become active towards substrates only at certain pHs, thus confining activity to specific compartments or conditions. This review discusses the different roles proteolysis plays in regulating GPCRs. At the cell-surface, certain GPCRs are regulated by the hydrolytic inactivation of bioactive peptides by membrane-anchored peptidases, which prevent signalling. Conversely, cell-surface peptidases can also generate bioactive peptides, which directly activate GPCRs. Alternatively, cell-surface peptidases activated by GPCRs, can generate bioactive peptides to cause transactivation of receptor tyrosine kinases, thereby promoting signalling. Certain peptidases can signal directly to cells, by cleaving GPCR to initiate intracellular signalling cascades. Intracellular peptidases also regulate GPCRs; lysosomal peptidases destroy GPCRs in lysosomes to permanently terminate signalling and mediate down-regulation; endosomal peptidases cleave internalized peptide agonists to regulate GPCR recycling, resensitization and signalling; and soluble intracellular peptidases also participate in GPCR function by regulating the ubiquitination state of GPCRs, thereby altering GPCR signalling and fate. Although the use of peptidase inhibitors has already brought success in the treatment of diseases such as hypertension, the discovery of new regulatory mechanisms involving proteolysis that control GPCRs may provide additional targets to modulate dysregulated GPCR signalling in disease.     

表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的  构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法  通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果  反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论  重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。     

匹伐他汀对阿尔兹海默症作用机制的研究进展

阿尔兹海默症(AD)的主要病理学特征为β淀粉样蛋白(Aβ)沉积和tau蛋白过度磷酸化致神经纤维缠结,因此Aβ和tau是开发阿尔兹海默症药物的两大靶点。近些年的基础和临床研究,已证实他汀类药物对阿尔兹海默症有疗效。其中,匹伐他汀是他汀类新一代药,对AD的药理作用机制有:以Aβ为靶点的降胆固醇降脂作用、缓解氧化应激造成的细胞损伤作用、减少炎症反应作用、以及对神经血管和神经细胞及突触的保护作用,和以tau为靶点的减少tau蛋白总水平及其磷酸化水平,这些基础研究为相关临床研究提供了充分的依据。目前已有大量关于他汀类药物对AD疗效的临床报道,而对于匹伐他汀改善AD等神经疾病的相关研究还处于探索阶段,因此还未见具体匹伐他汀相关临床报道。     

托法替布与益赛普分别联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎的疗效及安全性分析

目的 探究托法替布与肿瘤坏死因子（TNF）-α受体拮抗剂益赛普分别联合甲氨蝶呤治疗难治性类风湿关节炎（RRA）疗效及安全性。方法 采用随机数字表法将60例RRA患者分为A组、B组和C组,每组20例。A组采用枸橼酸托法替布（5 mg）联合甲氨蝶呤（10 mg）治疗,B组单用益赛普（25 mg）治疗,C组采用益赛普（25 ...     

银杏叶提取物对大鼠美托洛尔药动学的影响

目的：探讨银杏叶提取物对大鼠美托洛尔药动学的影响。方法：将大鼠随机分为美托洛尔组和美托洛尔联合银杏叶提取物组,美托洛尔组口服给予美托洛尔40 mg·kg^-1,美托洛尔联合银杏叶提取物组口服给予银杏叶片28.8 mg·kg^-1（按黄酮醇苷量）和美托洛尔40 mg·kg^-1。给药后2,5,10,20,40,60,90,120,240,360,480,720 min股动脉采血,液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）测定美托洛尔及代谢物血药浓度。结果：美托洛尔组联合灌胃给予银杏叶提取物与美托洛尔后,美托洛尔K_a和AUC_0-t显著降低（P<0.05）,t_max显著增加（P<0.05）,美托洛尔代谢产物O-去甲基美托洛尔和α-羟基化美托洛尔AUC_0-t显著增加（P<0.05）,而CL显著减小（P<0.05）。结论：银杏叶提取物能够显著降低美托洛尔的血药浓度,抑制其代谢物O-去甲基美托洛尔和α-羟基化美托洛尔的清除。     

β-丙内酯残留量检测分析方法的建立及验证

目的  建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯（β-propiolactone , BPL）含量的分析方法。方法  采用气相色谱法进行BPL含量检测，用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果  BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰，阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52 μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88 μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间，相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30 μg/ml，定量限为0.49 μg/ml。结论  建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性，符合定量检测的需求。     

IL-6通路抑制剂的应用及发展

 IL-6是炎症反应中的关键细胞因子,参与包括癌症在内的多种慢性炎症性疾病的发病机制。监测IL-6水平可在临床早期判断疾病类型,对了解疾病进展和预后具有重要意义。研究显示,IL-6通路是维持机体平衡和许多疾病失调的关键途径,靶向IL-6通路的抗体药物成为多种自身免疫病和癌症的创新疗法,并有可能应用于可产生细胞因子风暴的其他疾病。此文针对国内外已上市及在研靶向IL-6/IL-6受体信号通路的单克隆抗体药物的发展进行综述。     

福司氟康唑合成新工艺

目的 优化福司氟康唑合成工艺。方法 以廉价易得氟康唑为起始原料,使用三氯氧磷进行氯磷酸酯化,之后与苄 醇进行缩合,得到中间体 c,将中间体 c 用 Pd/C 催化,以甲酸铵为氢供体,进行脱苄基,经过酸化,析晶,得福司氟康唑。结 果 总收率达 70.7%,纯度为 98.8%,产品结构经 1 H NMR 确证。结论 本文设计了一条新的合成路线,该合成过程操作简单, 起始原料便宜易得,反应条件温和,收率高,易于工业化。