高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的：探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法：水浴加温诱导BcaCD88产生调亡。通过FCM－DNA、FCM－抗体检测技术,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl-2及bax基因蛋白表达的动态变.:地亡率与bcl-2蛋白表达水平存在负相关关系,与bax蛋白表达存在正相关关系。结论：高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl-2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生。     

高温诱导颊癌细胞凋亡的相关机理研究

目的 :探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡的分子机理。方法 :水浴加温诱导BcaCD885产生凋亡。通过FCM DNA、FCM 抗体检测技术 ,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中bcl- 2及bax基因蛋白表达的动态变化。结果 :凋亡率与bcl- 2蛋白表达水平存在负相关关系 ,与bax蛋白表达水平存在正相关关系。结论 :高温作为一种外来刺激信号通过下调bcl 2基因的表达、上调bax基因的表达、上调bax基因的表达 ,诱导BcaCD885细胞凋亡的发生     

热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达的关系

目的：探讨热诱导颊BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL蛋白表达变化的关系。方法：43℃40min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生死亡。采用流式细胞仪（FCM）及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量，观测诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL蛋白表达的动态变化，探讨二者间的关系。结果：凋亡组内Bcl-xL蛋白表达量明显低于对照组（P＜0．05），凋亡率与Bcl-xL蛋白表达水平存在负相关关系（r=-0.89，P＜0．05）。结论：Bcl-xL在热诱导BcaCD885细胞凋亡的调控中起重要作用。     

转染Bax基因提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨Bax基因对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：采用脂质体Lipofectamine 2000转染人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α于人颊癌细胞株BcaCD885细胞中，再对细胞进行43℃ 40min水浴加温处理，用流式细胞仪检测BcaCD885细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达水平；用RT-PCR技术检测BcaCD885细胞的Bax mRNA的表达水平。结果：Lipofectamine 2000能将人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α导人BcaCD885颊癌细胞中，Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α能在BcaCD885颊癌细胞中表达，提高BcaCD885颊癌细胞内Bax蛋白质及mRNA的水平，促进热诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡的发生。结论：转染Bax基因于BcaCD885颊癌细胞内，能提高细胞对热杀伤的敏感性。     

转染骨形成蛋白2基因对细胞凋亡影响的实验观察

目的：探讨骨形成蛋白（ＢＭＰ）与细胞凋亡的关系及意义。方法：利用脂质体转染方法将ＢＭＰ２真核表达载体ｐＢＫ－Ｂ２导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞,通过Ｇ－４１８筛选获得阳性细胞克隆。细胞原位杂交和免疫组化检测ＢＭＰ２基因的稳定转染及表达,并利用ＴＵＮＥＬ法观察细胞凋亡情况。结果：ＢＭＰ２基因成功导入ＮＩＨ３Ｔ３细胞并得到表达。转染细胞的凋亡细胞阳性率与未转染细胞相比有显著性差异。结论：ＢＭＰ２能够诱导细胞凋亡,且这种作用与细胞所处的生长分化状态密切相关。     

硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响

目的　探讨硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸(AS-sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响。方法　以脂质体Lipofectin为载体,转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,倒置显微镜观察细胞形态学改变,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达水平;转染AS-sODN于BcaCD885 细胞内,再以43℃,40 min加热细胞,FCM检测细胞凋亡率。结果　AS-sODN转染后,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状,TUNEL原位末端标记阳性,Bcl-xL蛋白表达明显下降(P<0·05),热诱导细胞凋亡率明显提高(P< 0·05)。结论　硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性。     

热疗诱导颌面部鳞癌细胞凋亡与Bcl-2和Bax蛋白表达

目的：探讨热疗诱导颌面部鳞癌细胞凋亡与Bcl—2和Bax蛋白表达间的关系。方法：选择12例颌面部鳞状细胞癌患者，43℃ 40min微波热疗后手术切除肿瘤组织，采用TUNEL原位末端标记法检测细胞凋亡，SP免疫组化染色法检测Bcl—2和Bax蛋白表达。结果：治疗后颌面部鳞癌凋亡细胞数量明显增多，Bcl—2基因蛋白表达明显降低，Bax基因蛋白表达明显升高。结论：热疗通过下调Bcl—2基因蛋白表达、上调Bax基因蛋白表达诱导颌面部鳞癌细胞凋亡。     

阻断内源性bcl-2蛋白表达提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨与bcl—2翻译起始部位碱基互补的反义bcl—2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletide，ODN)对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：以脂质体Lepofectin加为载体，转染20μM反义bcl—2 ODN于BcaCD885细胞内，阻断内源性bcl—2蛋白表达，再以43℃40min加热后，以流式细胞术—抗体及DNA分析对bcl—2蛋白、bax蛋白和细胞凋亡进行检测。结果：反义bcl—2 ODN阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达后，bax／bcl—2升高，细胞凋亡率明显提高。结论：阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达能提高其热敏感性。     

凋亡抑制基因bcl-2在牙胚发育中的作用

目的：通过检测牙胚发育中ｂｃｌ－２基因、蛋白的表达及细胞凋亡的情况,探讨ｂｃｌ－２基因及细胞凋亡在牙齿发育中的作用。方法：利用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）、原位杂交及免疫组织化学技术分别对ＳＤ大鼠牙胚发育不同时期ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、蛋白的表达及细胞凋亡进行研究。结果：在牙胚发育的各时期均有细胞凋亡现象及ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、蛋白的表达。ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ早期在上皮性成釉器及周围的间充质细胞尤其是生长中心部位表达明显。牙体组织形成后各部位阳性表达逐渐减弱、消失;ｂｃｌ－２蛋白与ｍＲＮＡ的表达基本一致。早期凋亡细胞集中出现在细胞生长中心处。牙体组织形成后散在可见。结论：ｂｃｌ－２基因可能是牙齿发育中的细胞生长、增殖及凋亡的内在调控基因之一,参与了牙齿发育的重要塑形过程。     

细胞凋亡及其相关基因Bcl-2和 Bax在大鼠正畸牙槽骨改建中的作用

目的：观察大鼠正畸牙齿移动中牙槽骨的细胞凋亡现象以及凋亡相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达,初步探讨细胞凋亡在牙槽骨改建中的作用。方法：选用２５只健康雄性ＳＤ大鼠,用单簧圈别针簧矫治器推上颌切牙侧向移动,于加力后１、３、５、７ｄ系列观察牙槽骨中细胞凋亡及其相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达,以正常组为对照,用免疫组织化学方法和ＴＵＮＥＬ法进行检测。结果：正常牙槽骨组织中存在凋亡细胞,主要见于骨细胞,呈散在性分布,数量较少。牙齿移动时,压力侧牙槽骨改建活跃,凋亡细胞有增多趋势,而张力侧牙槽骨凋亡细胞呈减少趋势。在成骨细胞、破骨细胞、透明性变区未检测到凋亡细胞。Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在正常牙槽骨细胞均有表达,在压力侧Ｂａｘ的表达强于Ｂｃｌ－２,在成骨细胞和破骨细胞Ｂｃｌ－２的表达强于Ｂａｘ。结论：细胞凋亡及其相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ参与了正畸牙齿移动过程中牙槽骨的改建过程。     

人颊癌BcaCD885细胞Fas表达水平与移植瘤形成和增殖的关系

目的 :研究Fas表达水平与人颊癌BcaCD885细胞移植瘤形成、增殖及凋亡的关系 ,探讨其相关机制。方法 :用脂质体将真核表达重组质粒pBK -Fas导入人颊癌BcaCD885细胞。转染 72h后 ,收集转染及未转染细胞 ,每组细胞分别接种 10只裸鼠。观察移植瘤形成及增殖状况 ,绘制肿瘤生长曲线。实验结束采集肿瘤标本 ,称重 ,计算肿瘤生长抑制率。同时以RT -PCR检测两组移植瘤细胞FasmRNA表达 ,流式细胞仪检测移植瘤细胞凋亡、增殖和Fas蛋白表达。结果 :Fas转染组移植瘤形成时间平均延长 3 .4d ,各观察点移植瘤体积均小于未转染组 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1)。RT -PCR和流式细胞术检测显示 ,Fas转染上调FasmRNA表达 ,提高Fas蛋白阳性表达率、阳性表达强度和细胞凋亡指数 ,但不影响肿瘤细胞增殖指数。结论 :Fas基因转染抑制移植瘤形成和增殖与提高Fas表达、增加肿瘤细胞凋亡有关。     

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对BcaCD885细胞内源性bcl-2表达的阻断作用

目的　探讨与 bcl-2翻译起始部位碱基互补的反义 bcl-2寡脱氧核苷酸 ( oligodeoxynucleotide,ODN)对 Bca-CD885细胞内源性 bcl-2表达的阻断作用。方法　以脂质体 Lepofectin为载体 ,一过性转染 2 0 μmol/L 反义及正义 bcl-2 ODN于 Bca CD885细胞中 ,FCM-抗体观测转染后 2 4h、3 6h、48h细胞内 bcl-2基因蛋白表达变化 ,RT-PCR技术检测转染后 2 4h bcl-2 m RNA的表达变化。结果　转染反义 bcl-2 ODN后 2 4h、3 6h、48h Bca CD885细胞内 bcl-2基因蛋白表达与对照组相比都明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,而正义组与对照组无差异 ( P>0 .0 5 ) ;正反义组 bcl-2m RNA与对照组相比无明显变化 ( P>0 .0 5 )。结论　反义 bcl-2 ODN能在蛋白翻译水平特异性抑制颊癌细胞内源性 bcl-2蛋白表达     

高温诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡及检测

目的　探讨热诱导 Bca CD885颊癌细胞凋亡的动力学改变及热杀伤肿瘤细胞的机理。方法　水浴加温诱导Bca CD885细胞产生凋亡。通过细胞形态观察、原位末端标记、DNA电泳及流式细胞术 DNA测定 ,从形态学、生物化学、分子生物学以及细胞学水平确定凋亡细胞特征。结果　Bca CD885细胞经 43°C40 min加热 ,呈现细胞凋亡形态改变 ,TUNEL标记见明显的凋亡小体 ,DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。同时细胞周期发生了明显的特异性改变 :G0 / G1 期百分比增加 ,S期百分比下降 ,G2 / M期百分比在加热后 3 h时也发生了明显的下降。 45°C 40 min加热则出现明显的坏死改变。结论　高温杀伤 Bca CD885细胞存在细胞坏死和细胞凋亡两种方式 ,治癌温度是通过诱导细胞凋亡发挥作用。高温诱导 Bca CD885细胞的凋亡具细胞周期特异性     

CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响

目的研究CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响,验证CyclinD1在口腔黏膜癌变中的作用。方法采用差示PCR技术检测颊癌细胞株BcaCD885中CyclinD1编码基因的扩增,并以脂质体为载体,将CyclinD1 mRNA的反义寡核苷酸序列转染肿瘤细胞,观察转染前后细胞增殖速度、体外集落形成能力的变化。结果 BcaCD885细胞株中出现CCND1基因扩增,扩增倍率6.9;转染CyclinD1mRNA的反义寡脱氧核苷酸后,细胞增殖速度减慢,体外集落形成能力下降。结论转染CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸,能部分抑制体外培养肿瘤细胞的增殖活性和恶性表型。     

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对BcaCD885细胞凋亡的影响

目的 探讨反义bel-2寡脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）对BcaCD885细胞凋亡的影响。方法 以脂质体 Lepofection为载体,一过性转染20μmol/L反义及正义bel-2 ODN于BcaCD885细胞后,通过细胞形态观察及流式细胞术（FCM）分析,从形态学及细胞学水平对凋亡细胞进行检测。结果 20μmol/L反义bel-2 ODN转染组,细胞出现了凋亡形态学改变,FCM检测凋亡率与对照组间存在显著差异（P<0.05）。而 20μmol/L正义bell-2ODN转染组与对照组相似,在形态学上未见明显的凋亡细胞出现,FCM检测两者凋亡率不存在显著差异（P<0.05）。结论 反义 bel-2 ODN能促进 BcaCD885细胞凋亡。     

nm23-H1基因对BcaCD885细胞侵袭、粘附和运动力影响的研究

目的：通过nm23-H1的转化及导入BcaCD885细胞株，建立稳定、高效、低毒的转染方法，观察nm23-H1对BcaCD885细胞株侵袭转移能力的影响。方法：（1）利用基因转化技术，制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒；（2）利用阳离子脂质体介导的转染技术，完成转染方法的建立；（3）利用免疫组化技术，检测转染前后的NDPKA的表达；（4）利用transwell小室和冲刷实验，观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果：（1）使用重组的pCMV-N-B 的真核表达载体，将nm23-H1转染口腔癌,细胞并获得稳定表达；（2）发现BcaCD885细胞株nm23-H1基因的转染前后表达水平有明显差异；（3）转染后的BcaCD885细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。结论：nm23-H1对BcaCD885细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

nm23-H1基因对舌癌细胞株化疗敏感性的影响体外实验

目的：通过nm23-H1的转化及导入BcaCD885细胞株，观察nm23-H1对BcaCD885细胞株化疗敏感性的影响。方法：完成细胞培养和基因转染后，MTT法观察nm-23-H1对BcaCD885化疗敏感性影响。结果：转染前BcaCD885细胞株对ADM、5－FU、MTX的化疗敏感性无显著差异。但转染后的BcaCD885细胞株对CDDP明显增敏。结论：nm23-H1可能通过特异笥地影响细胞内的能量交换过程来达到对CDDP化疗增敏的效果。     

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的:探讨人口腔鳞癌细胞系(Tca8113和BcaCD885)对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒(CuBE- PLA-NP)的敏感性。方法:用四唑盐显色法(MTT法)检测用不同剂量的CuBE-PLA-NP和CuBE在1~8 d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性,计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果:CuBE-PLA-NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论:经改型后的淋巴靶向CuBE-PLA-NP没有降低CuBE成份的抗癌活性,同时,由于CuBE-PLA-NP具有淋巴靶向性,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。