运用蛋白指纹图谱技术筛选类风湿关节炎患者血清特异性标志物

目的: 用纳米磁珠与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测类风湿关节炎(RA)患者血清蛋白质组,筛选候选蛋白标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在RA早期诊断中的临床意义。方法: 采用弱阳离子(WCX)纳米磁性微球捕获60例RA患者、35例骨性关节炎(OA)患者和36名健康体检者血清中的蛋白质。所获蛋白经PBSⅡ-C蛋白质芯片阅读仪绘制蛋白指纹图谱。这些蛋白指纹图谱经Ciphergen ProteinChip和Biomarker Wizard软件分析之后,再用Biomarker Patterns 软件进行识别,最终筛选出RA的特异性蛋白标志物,并优化组合建立诊断模型。结果: 在RA患者和对照组之间共找到33个差异蛋白峰(P<0.05)。其中质荷比(m/z)为15 715.5D、7 771.4D、8 959.4D、8 469.8D和8 710.8D的蛋白峰用于建立RA诊断模型。经双盲实验验证,该模型对RA诊断的敏感性为86.7%,特异性为90.0%。结论: 采用WCX纳米磁性微球联用MALDI-TOF-MS技术可检出RA患者血清中的特异性蛋白标志物,并建立敏感性和特异性均较高的RA诊断模型。     

SELDI-TOF-MS技术筛选NSCLC血清肿瘤标志物

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)血清蛋白表达谱的改变,筛选并建立NSCLC血清蛋白的差异表达谱。方法 应用表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS,简称SELDI-TOF或SELDI)技术,分析100例NSCLC患者和100例正常对照血清,获得蛋白表达图谱。用Biomarker Pattern(BPS)软件分析NSCLC差异蛋白并初步建立诊断模型。通过盲筛进一步验证诊断模型。结 果 发现NSCLC患者血清与正常人有16个显著差异的蛋白波峰,显著高表达8个（P<0.001）。显著低表达8个（P<0.001）。经BPS软件分析,建立分类树模型,其诊断的灵敏度为100％,特异度为100％。100例样本盲筛验证结果显示,其灵敏度为96.15％,特异度为95.83％。无吸烟史患者较有吸烟史患者血清中显著高表达蛋白质波峰有3个（P<0.05）。鳞癌患者较腺癌患者血清中显著高表达蛋白质波峰有2个（P<0.01）。不同病理分期患者之间未发现差异蛋白峰。结 论 SELDI-TOF-MS 技术可筛选出NSCLC差异性蛋白并建立NSCLC诊断的分类树模型,有望成为NSCLC早期诊断的辅助指标。     

应用蛋白质谱建立活动性肺结核病的血清诊断模型

目的 应用蛋白质谱技术研究活动性肺结核病患者的血清诊断标志物,建立诊断模型早期诊断活动性肺结核.方法 应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和蛋白芯片技术检测264例活动性肺结核患者、其他呼吸疾病患者和正常人血清;应用Ciphergen蛋白芯片3.1.1软件比较、分析血清蛋白峰,找出差异蛋白;应用Biomarker Pattern 5.0软件建立活动性肺结核的诊断模型.结果 129例活动性肺结核血清和135例对照血清蛋白指纹图谱比较,有50个差异蛋白峰(P<0.01).以69例其他呼吸疾病血清和66例健康人血清为对照,选择5个蛋白峰(4360、3311、8160、5723、15173 m/z)建立诊断模型1,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为82.95%,特异性为89.63%,准确率为86.36%.以69例其他呼吸疾病血清为对照,选择3个蛋白峰(5643、4486、4360 m/z)建立诊断模型2,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为96.9%,特异性为97.8%,准确率为97.3%.结论 应用蛋白质谱技术分析肺结核病患者血清可能建立一种新的结核病早期诊断方法 .     

类风湿性关节炎疾病相关的特异性血清蛋白标志物

目的运用蛋白质指纹图谱技术筛选类风湿性关节炎(RA)患者血清中的特异性标志物,建立RA疾病相关的蛋白质组学诊断模型。方法采用弱阳离子纳米磁性微珠捕获血清蛋白,ProteinChip PBSII-C型蛋白质芯片阅读仪分别绘制性别年龄匹配的43例RA患者组及100例对照组(包括自身免疫性疾病对照组50例和正常对照组50例)的血清蛋白质指纹图谱,经Biomarker Wizard3.1软件分析蛋白峰后,再用Biomarker Patterns Software5.0软件筛查与RA疾病诊断密切相关的特异性血清蛋白标志物,建立RA诊断模型。结果在RA患者组中找到34个蛋白峰与对照组具有统计学差异(P<0.05),经Biomarker Patterns Software5.0软件识别,发现其中四个质荷比(m/z)分别为4966.89,5065.3,5636.97,7766.88的蛋白峰联合起来作为诊断模型,辨别RA患者及对照组的敏感性为86.36%,特异性为92.16%。对患者标本进行双盲验证,该诊断模型对RA的诊断敏感性为85.71%,特异性为87.76%。结论采用弱阳离子纳米磁性微珠与蛋白质芯片阅读仪联用的蛋白质指纹...     

蛋白质指纹图谱在乳腺癌诊断与随访中的应用研究

目的:应用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)和CM10蛋白质芯片检测乳腺癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物,建立、验证诊断模型并初步探讨其在术后随访监测中的价值。方法:SELDI-TOF-MS技术及CM10芯片检测63例乳腺癌和40例健康人的指纹图谱,ZJU-PDAS软件筛选标志物、建立模型,在另23例乳腺癌和20例健康人中盲法验证模型;并检测16份术后标本以探索其随访监测价值。结果:质荷比(m/z)为3.9kD和5.6kD的2个蛋白质峰(分别命名为BC1和BC2)构建的模型诊断乳腺癌灵敏度为87.30%(55/63)、特异度为95.00%(38/40);盲法验证灵敏度为95.65%(22/23)、特异度为85.00%(17/20);对不同病期患者具有相同诊断效力(P0.05)。BC1手术后表达升高;BC2手术后表达降低,且复发转移组表达高于无瘤生存组(P0.05)。结论:该方法在乳腺癌的诊断、术后随访及肿瘤标志物筛选等方面具有一定价值,值得进一步研究。     

蛋白质芯片筛选急性白血病血清标记蛋白质

目的利用蛋白质芯片从初诊急性白血病患者血清中筛选标记蛋白质。方法采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS surfaced enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectroscopy)和弱阳离子交换(WCX2)蛋白质芯片对80例初诊急性白血病患者(44例儿童急性淋巴细胞白血病、36例成人急性粒细胞白血病)血清和78例正常人(35例为儿童)血清的蛋白质图谱进行检测,使用PBSII-C型蛋白质芯片阅读机读取数据。结果急性淋巴细胞白血病初诊患儿与正常儿童血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质7个,用标记分子建立儿童急性淋巴细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为88.6%(39/44)、特异性为82.9%(29/35);成人急性粒细胞白血病患者与正常成人血清蛋白质谱相比有显著差异蛋白质8个,用其中的7个标记分子建立成人急性粒细胞白血病诊断的分类树模型,检测灵敏度为86.1%(31/36)、特异性为95.3%(41/43)。结论蛋白质芯片技术对于发现和筛选急性白血病血清中的标记蛋白质是一种有效、快速的工具。     

血清KL-6水平对类风湿关节炎合并间质性肺病的预测及其与预后的关系

目的：探讨血清KL-6水平对类风湿关节炎（RA）合并间质性肺病（RA-ILD）的预测及其与预后的关系。方法：选取2018年1月至2021年1月内蒙古医科大学附属医院收治的RA患者70例,依据其是否合并间质性肺病（ILD）分为RA-ILD组（34例）和RA组（36例）,对两组患者的临床资料进行单因素分析,重点比较两组患者血清中KL-6表达水平及实验室指标、肺功能、影像学等相关性分析,多因素Logistic回归分析影响RA-ILD的危险因素。结果：两组患者性别、吸烟史、年龄及发病年龄、病程、DAS28、KL-6、WBC、UA、RF、抗CCP抗体、TLC%Pred、DLCO%Pred差异有统计学意义（P<0.05）;RA-ILD组患者临床症状占比关节痛较为突出,HRCT表现胸膜粘连增厚较为突出;Spearson相关性分析显示,RA-ILD组患者血清KL-6水平与TLC%Pred、VC%Pred、DLCO%Pred呈显著负相关（P<0.05）,与RF、抗CCP抗体水平呈显著正相关（P<0.05）;与FEV1%Pred、FEV1/FVC无明显相关性（P>0.05）;RA-...     

类风湿关节炎患者检测血清14-3-3浊蛋白和自身抗体的临床意义

目的:探讨血清14-3-3浊蛋白与自身抗体检测对类风湿关节炎(RA)诊断的临床价值。方法:收集134 例RA患者、90 例非RA 关节病变患者及同期40 例健康体检者血清样本,采用ELISA 和速率比浊法分别检测14-3-3浊蛋白、抗CCP抗体(anti-CCP)、抗RA33 抗体(anti-RA33)、抗Sa 抗体(anti-Sa)和类风湿因子(RF)含量,并分析其对RA 的诊断价值。结果:血清14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa、RF 水平在RA 组均显著高于非RA 组和对照组,组间差异都具有统计学意义;于绘制各指标ROC 曲线,14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa、RF 曲线下面积(AUC)分别0.831、0.852、0.615、0.706和0.739,均P<0.01;其中14-3-3浊蛋白和anti-CCP 达到中等以上诊断价值,对应cutoff 值分别为2.59 ng/ ml 和24.0 U/ ml; 所有指标中anti-Sa 特异度最强为97.69%,RF 灵敏度最高为83.58%;14-3-3浊诊断RA 的特异度为91.54% 仅稍次于anti-Sa和anti-RA33 抗体,但其敏感度较anti-Sa 和anti-RA33 均高。结论:14-3-3浊蛋白、anti-CCP、anti-RA33、anti-Sa 和RF 在RA 中均显著升高,对RA 的诊断都有一定的价值。同时,14-3-3浊诊断RA 的敏感度和特异度相比自身抗体更有一定优势,可以作为辅助诊断RA 的指标。     

应用SELDI-TOF-MS技术建立胰腺癌筛选血清蛋白指纹图谱模型

目的：建立胰腺癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型。方法：应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术,采用弱阳离子交换芯片（CM10）首先对33例胰腺癌患者和31例性别年龄匹配的健康对照血清蛋白表达谱的差异进行了分析,建立决策树分类模型。结果：在质荷比（M/Z）2000～20000范围内,共检测到185个有效蛋白峰,其中12个峰差异有显著性（P〈0.01）。自动选用M/Z为11674.7和7771.2的2个差异蛋白峰,建立胰腺癌决策树分类模型,其灵敏度为96.97%（32/33）,特异度为96.67%（30/31）。结论：应用SELDI-TOF-MS技术可以筛选出胰腺癌相关的血清蛋白标志,建立的决策树模型可能对胰腺癌的诊断具有重要的临床价值。     

血清IL-22与IL-33在类风湿性关节炎合并间质性肺病中的表达及临床意义

探讨类风湿性关节炎合并间质性肺病患者血清IL-22、IL-33水平及临床意义。53例RA患者,分为RA-ILD组和单纯RA组,并与30例健康者对照研究。用Luminex液相芯片技术分别检测血清IL-22、IL-33水平,观察比较各组细胞因子表达情况,并分析相关性。1治疗前RA组及RA-ILD组两组患者年龄、关节肿胀数、压痛数及ESR、CRP、DAS28的比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。2治疗前血清IL-22、IL-33在单纯RA组和RA-ILD组的表达均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.01),且RA-ILD组较单纯RA组显著增高(均P<0.01)。3RA-ILD患者血清IL-22、IL-33浓度水平与RF、CCP呈正相关(均P<0.05),但与ESR、CRP、DAS28无直线相关性(均P>0.05)。4RA-ILD组患者治疗后血清IL-22、IL-33水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(均P<0.05)。IL-22、IL-33可能参与了RA的发病,同时在RA-ILD发病过程中起重要作用;IL-22、IL-33高表达可作为RA-ILD发病预测及疗效判定的重要参考指标。     

Specificity of an HLA-DRB1*0401-restricted T cell response to type II collagen

A panel of HLA-DRB1*0401-restricted CD4⁺ mouse T cell hybridomas specific for bovine type II collagen were generated from transgenic mice expressing the human HLA-DRA1*0101/-DRB1*0401 and CD4 molecules. The vast majority recognized a single peptide determinant corresponding to residues 261–273 (CII 261–273). This determinant was rapidly defined by the use of a predictive algorithm for peptide binding to DRB1*0401. CII 261–273 is conserved in bovine and human type II collagen and overlaps with an important I-A^q-restricted T cell determinant in mice with collagen-induced arthritis. This study demonstrates how HLA-DR and human CD4-transgenic mice can be used to identify a T cell epitope in a potential or candidate autoantigen.     

云克(~(99)Tc-MDP)治疗类风湿关节炎的疗效分析

目的　应用99Tc -MDP治疗类风湿性关节炎 ,探讨其临床应用方式及疗效 .方法　应用该药的两种制剂对临床确诊的类风湿关节炎 137例进行治疗 ,根据不同剂型分为单纯静脉推注法 ;单纯静脉滴注法和混合注射法 3种 ;并以病变关节功能受累情况及临床表现分为重、中、轻 3类 ,分别评价其治疗效果 .结果　 137例类风湿关节炎患者中显效 34例 (2 4.8% ) ;有效 82例 (5 9.8% ) ;无效 2 1例 (15 % ) ;总有效率 84.7% .静脉滴注法早期疗效反应及效果明显早于推注法 .静脉推注法治疗效果的反应在 1～ 2个疗程以后 .结论　云克使用简便、安全、疗效满意、副作用少 ,值得临床推广应用 ;对不同病情患者 ,选择不同剂型和给药方式有利于提高疗效     

类风湿关节炎患者血清IgG-IgM型类风湿因子免疫复合物检测的临床意义

目的 探讨血清IgM型类风湿因子与变性IgG抗原形成的复合物定量检测对类风湿关节炎诊断的临床意义.方法 收集类风湿关节炎(RA)患者36例、非RA患者41例和体检健康者40名作为研究对象.用包被有鼠抗人μ链抗体的ELISA孔板及HRP标记的兔抗人IgG对血清中IgM型类风湿因子(RF)与变性IgG抗原形成的免疫复合物水平进行检测,同时用胶乳凝集法检测RF,并对二者结果进行相关性分析;用ELISA试剂盒进行抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)的定性检测,并比较其与IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA诊断的敏感性和特异性.结果 待检血清最佳稀释倍数为100倍.IgG-IgM型RF免疫复合物对于RA的敏感性为72.2％,特异性为95.3％.IgG-IgM型RF免疫复合物OD值与RF阳性程度相关系数为0.687(P ＜0.01).结论 血清IgG-IgM型RF免疫复合物水平对RA具有较高的敏感性和特异性,可作为RA诊断的参考指标.     

Reproducible metacarpal joint space width measurements using 3D analysis of images acquired with high-resolution peripheral quantitative computed tomography

ObjectiveJoint space narrowing is an important feature of progressive joint damage and functional impairment in rheumatoid arthritis (RA). Methods to provide a continuous measurement of joint space width have not been adopted in research or clinical settings. High-resolution peripheral quantitative computed tomography (HR-pQCT) (Scanco Medical AG, Brüttisellen, Switzerland) accurately and reproducibly images bone microstructure at a nominal isotropic voxel dimension of 82 μm. Given the ability of HR-pQCT to detect bone margins with high precision, we developed methodology to measure a three-dimensional (3D) metacarpophalangeal (MCP) joint space width and tested the reproducibility of the scan protocol with hand repositioning.Materials and methodsConsecutive HR-pQCT scans of the 2nd and 3rd MCP joints of ten subjects with early RA (70% female, mean age 45 years), with repositioning between scans, were obtained. The periosteal edges of the metacarpal head and proximal phalanx base were detected using the μCT Evaluation Program V6.0 (Scanco Medical AG). Using the method of ‘fitting maximal spheres’, the joint space width and distribution of joint space thickness was estimated.ResultsThe mean minimum joint space width of the 2nd MCP was 1.82 mm (SD 0.20) and of the 3rd MCP 1.84 mm (SD 0.23). Reproducibility with repositioning was reliable, with overlapping filtered histograms and a root square mean coefficient of variance of 4.8%.ConclusionsWe provide reproducible methodology for evaluating the joint space width of the MCP joints. When combined with the assessment of erosions and periarticular bone density, HR-pQCT may be the ideal technology to assess disease activity and progression in RA.     

Muscle changes in rheumatoid arthritis

Summary Muscle changes were studied in biopsy material obtained from 100 patients suffering from classical rheumatoid arthritis. The abnormalities consisted of denervation atrophy of type II muscle fibres, degenerative changes in the sarcoplasm including presence of nemaline rods, and changes within the interstitium: namely perivascular nodular myositis, lymphocytic accumulations, different stages of vasculitis and abnormalities within the intramuscular nerves and muscle spindles. The muscles examined were always severely affected. It is considered that the simultaneous presence of these abnormalities is suggestive of rheumatoid arthritis. The importance of histochemical studies is emphasized. The literature concerning muscle changes in rheumatoid arthritis is reviewed.Temporary Research Fellow the Rotterdam Centre for Rheumatic Disease     

滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎发病中的作用

类风湿性关节炎是复杂的多系统疾病,近年来,越来越多的证据表明,滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎中过度增殖,介导炎症反应,造成关节结构破坏。滑膜成纤维细胞在类风湿性关节炎发病过程中具有重要的作用。     

Kinase inhibitors: A new tool for the treatment of rheumatoid arthritis

Despite aggressive immunosuppression with biologics and traditional DMARDs, achieving disease remission remains an unmet goal for most rheumatoid arthritis (RA) patients. In this context, there is a demand for novel treatment strategies, with kinase inhibitors expected to enrich the existing therapeutic armamentarium. In RA some kinases participate in the generation of pathogenic signaling cascades. Pharmacologic inhibition of kinases that mediate pathogenic signal transduction heralds a new era for RA therapeutics. Oral inhibitors of JAKs, Syk, PI3Ks, MAPKs and Btk are under development or in clinical trials in patients with RA. In this review, we discuss the scientific rationale for the use of kinase inhibitors in RA and summarize the experience from clinical trials.     

男性类风湿关节炎患者血浆催乳素水平的变化及其临床意义

目的：为探讨男性类风湿关节炎（ＲＡ）患者血浆催乳素（ＰＲＬ）水平的变化有临床意义。方法：用放射免疫法对６２例男性ＲＡ患者进行了血浆ＰＲＬ、雄激素睾酮（Ｔ）Ｔ、去氢表雄固酮（ＤＨＥＡ－Ｓ）水平测定及其多聚酶链反应（ＰＣＲ）作了ＨＬＡ＿ＤＲ４筛选,并与相庆的临床和实验室指标作对比分析。结果：ＲＡ患者血冰ＰＲＬ水平与正常人比较无显著差异,但在中度以上活动性的患者或ＨＬＡ＿ＤＲ４阳性患者中的血浆ＰＲＬ水平     

类风湿性关节炎患者外周血淋巴细胞凝集素受体的表达及细胞免疫功能的测定

采用生物素标记的７种植物凝集素和Ｔ细胞花环法，检测了类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血中淋巴细胞（ＰＢＬ）的凝集素受体的表达和细胞亚群的变化。结果显示这７种凝集素（ＣｏｎＡ，ＤＢＡ，ＢＰＡ，ＳＢＡ，ＰＮＡ，ＵＥＡ和ＷＧＡ）均与患者和正常对照组的ＰＢＬ相结合，但ＷＧＡ和ＣｏｎＡ的受体结合率在ＲＡ组明显高于正常组（Ｐ＜０．０５）。ＲＡ患者ＰＢＬ中Ｔ８细胞亚群减少和Ｔ４／Ｔ８比率增高十分明显，同时伴有淋巴细胞转化功能的降低及其他血清学方面的改变。     

BML-111, a lipoxin receptor agonist, modulates the immune response and reduces the severity of collagen-induced arthritis

Objective: Lipoxins (LXs) are endogenous antiinflammatory and pro-resolving eicosanoids generated during various inflammatory conditions. Recent research has revealed the novel immunomodulatory function of LXs. The aim of this study is to investigate whether LXs modulate the pathogenesis of collagen-induced arthritis (CIA), a typical chronic immune-mediated inflammatory disease. Methods and results: CIA was induced in DBA/1 mice and BML-111, a lipoxin A ₄ receptor agonist, was administrated. Results indicated that compared with untreated CIA mice, both clinical disease activity scores and histological destruction of joint were significantly reduced in BML-111-treated CIA mice. The dampened joint injury was accompanied by decreased concentrations of serum pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor α and interleukin-6 in BML-111-treated CIA mice. In addition, proliferation of isolated spleen cells, as well as circulating levels of antibody to type II collagen, were reduced significantly in BML-111-treated CIA mice. Conclusion: BML-111 attenuated CIA in part by negatively regulating the immune response, which implicates the potential pharmacological value of LXs in the treatment of chronic immune-mediated inflammatory diseases such as RA. Received 30 July 2007; returned for revision 24 August 2007; received from final revision 14 September 2007; accepted by J. Di Battista 25 October 2007