补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响

目的研究补肾健脾法对氢化可的松诱发的脾肾虚证小鼠肾上腺功能的影响。方法将60只ICR小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松组、四君子汤组[12.75 g(生药)/kg]、六味地黄汤组[12.5 g(生药)/kg]、桂附地黄汤组[13.5 g(生药)/kg],连续灌胃给药氢化可的松(1.65 mg/kg)14 d建立药源性证候模型;各中药复方组在灌胃氢化可的松的同时及停止氢化可的松灌胃后7 d,每日分别灌胃给药3个中药复方。每日称定小鼠体质量;在第14、21天,运用小鼠辨证论治实验方法学观测小鼠四诊指标;在第15、22天,计算脾脏、胸腺指数,ELISA检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素、肾上腺素和去甲肾上腺素水平,采用实时荧光定量PCR技术检测Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2、Dbh、Ddc、Pnmt、Th mRNA表达,Western blot检测LDLR、SRBI、Star蛋白表达。结果氢化可的松干预后,小鼠体质量,抓力,尾部最低温度,脾脏、胸腺指数,血清皮质酮、促肾上腺皮质激素水平显著下降(P<0.05,P<0.01);显著抑制相关肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并抑制胆固醇转化为肾上腺类固醇激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、StAR)表达。与氢化可的松组比较,桂附地黄汤组显著增加小鼠抓力(P<0.01),四君子汤组、六味地黄汤组和桂附地黄汤组显著升高血清皮质酮均水平(P<0.01),四君子汤组、桂附地黄汤组明显抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),3个复方组能改善LDLR、SRBI、StAR蛋白下降。结论桂附地黄汤对小鼠阳虚证候有所改善,3个中药复方对小鼠阴虚证候疗效不显著。3个中药复方对氢化可的松诱发的肾上腺皮质功能抑制均有缓解作用。     

不同中药药对调节氢化可的松药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的研究

目的研究不同治法中药配伍调节肾上腺皮质功能的作用。方法小鼠ig给予1.65 mg/(kg·d)氢化可的松14 d诱发药源性证候,同步给予助阳散寒(附子-肉桂)、滋阴泻火(知母-黄柏)、补气生津(人参-黄芪)、补血益精(熟地-山茱萸)4种中药药对干预,检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取脾脏、胸腺称定质量并计算脏器指数;运用ELISA法检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素和去甲肾上腺素含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21-羟化酶(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)和11β-羟化酶2(Cyp11b2)、酪氨酸羟化酶(Th)、多巴胺脱羧酶(Ddc)、多巴胺β-羟化酶(Dbh)、苯乙胺-N-甲基转移酶(Pnmt)基因表达;运用Western blotting方法检测肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族I型清道夫受体(SR-BI)、StAR蛋白表达。结果 4种治法对氢化可的松造成的小鼠体质量下降和体温下降效果不显著,附子-肉桂组小鼠抓力显著高于模型组(P0.05)。与模型组比较,知母-黄柏组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P0.01),StAR、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达水平显著升高(P0.05、0.01),SR-BI、StAR蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。结论滋阴泻火治法寒性药对(知母-黄柏)对小剂量氢化可的松诱发的药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的纠正作用最佳。     

六味地黄汤和桂附地黄汤对小剂量氢化可的松减停给药后致小鼠药源性虚证的调节作用

目的:研究补肾复方对小剂量氢化可的松减停给药诱发的小鼠证候及肾上腺皮质功能的影响。方法:48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、氢化可的松组、六味地黄汤组、桂附地黄汤组,每组12只。每组给予1.32 mg·kg^-1·d^-1氢化可的松28 d减半剂量7 d停止用药14 d造模,减量及停药阶段同步给予相应组六味地黄汤药液12.5 g·kg^-1·d^-1,桂附地黄汤药液13.5 g·kg^-1·d^-1,连续21 d。实验第28,49天采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(抓力、体表红外温度);在实验第50天处死小鼠取材,摘取脾脏、胸腺,计算脾脏与胸腺脏器指数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清皮质酮含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(Star),胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1),细胞色素P450家族21亚家族A多肽1(Cyp21a1),细胞色素P450家族11亚家族b多肽1(Cyp11b1),低密度脂蛋白受体(Ldlr),B类I型清道夫受体(Scarb1/SRBI),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr),酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1(Acat1),激素敏感性脂肪酶(HSL/LIPE),胰岛素诱导基因1(Insig1),固醇调节元件结合转录因子2(Srebf2)mRAN表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测低密度脂蛋白受体(LDLR),B类I型清道夫受体(Scarb1/SRBI),胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1),胆固醇21-羟化酶(CYP21A2)蛋白表达。结果:与正常组比较,连续给药28 d后,模型组小鼠体质量与躯体平均红外温度均显著下降(P<0.01);减停造模后,模型组小鼠抓力明显下降(P<0.05),胸腺指数显著升高(P<0.01),血清皮质酮含量明显降低(P<0.05),肾上腺Cyp21a1,Hmgcr mRNA表达明显下降(P<0.05,P<0.01),Lipe,Acat1 mRNA表达显著上升(P<0.01),肾上腺CYP11A1,SRBI蛋白表达显著下降,LDLR蛋白表达上升。与模型组比较,中药治疗21 d后,桂附地黄汤组小鼠体质量显著下降(P<0.01);六味地黄汤组小鼠脾脏指数显著下降(P<0.01);桂附地黄汤组Cyp11a1,Cyp21a1,Acat1,Lipe mRNA表达明显上升(P<0.05,P<0.01),Ldlr,Scarb1 mRNA表达明显下降(P<0.05),六味地黄汤组Ldlr,Acat1,Lipe mRNA表达明显下降(P<0.05,P<0.01);六味地黄汤及桂附地黄汤组CYP11A1,SRBI蛋白表达上升。结论:桂附地黄汤可通过纠正肾上腺皮质激素合成酶的表达,以促进药源性虚证小鼠肾上腺皮质功能恢复。     

氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征再评价及肾上腺皮质功能变化研究

目的研究氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征及其可能的物质基础。方法将60只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组和模型组,每组30只。正常对照组自由饮水与摄食,模型组自由饮用剂量递减的氢化可的松溶液。其中,0.015 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用3天;0.010 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用5天;0.007 5 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用7天。在造模的第8天、第15天,采用本课题组建立的小鼠四诊标准采集技术与辨证方法判断小鼠的证候属性;于造模的第3天、第8天、第15天分批处死小鼠,取肾上腺组织,分别抽提RNA和蛋白质,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达,以Western blotting法检测类固醇合成急性调节蛋白(STAR)表达,并以ELISA方法检测血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果 ?与正常对照组比较,模型组小鼠在造模期间,消瘦、体质量增长显著减慢(P0.05),被毛蓬松易脱落、光泽度下降,活动度降低、喜蜷缩,体温尤其是尾部温度下降,爪部色泽变化不明显。②造模第15天,与正常对照组比较,模型组小鼠气虚证、阴虚证明显,肾上腺、脾脏与胸腺持续性萎缩(P0.05);血液ACTH水平下降(P0.05);肾上腺皮质激素合成过程重要受体Srb1、Ldlr基因表达降低(P0.01),类固醇激素合成酶Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达及其酶的调节因子Fdx1、Fdxr、Nr4a1、Nr4a2、Nr5a1基因表达显著下降(P0.05),以及STAR蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论氢化可的松复制的小鼠模型属于虚证模型,具有气虚与阴虚证的特征;参与肾上腺皮质激素合成的重要功能分子涉及相关证候的发生。     

经典气血阴阳虚证模型小鼠在“肾藏象”层面的证候物质基础研究

目的研究气血阴阳虚证模型小鼠在"肾藏象"层面的证候物质基础。方法以雄性ICR小鼠为对象,以控食法复制气虚证模型,以乙酰苯肼复制血虚证模型,以甲状腺素复制阴虚证模型,以氢化可的松复制阳虚证模型。动态观察小鼠体质量变化,检测各脏器变化;取肾脏、肾上腺和骨髓组织抽提RNA,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达;以ELISA方法检测血清皮质酮含量。结果 (1)与正常对照组比较,控食组小鼠体质量下降最显著(P0.01),乙酰苯肼和氢化可的松组小鼠体质量也显著下降(P0.05);控食组和氢化可的松组小鼠脾脏与胸腺明显萎缩(P0.01),乙酰苯肼组小鼠脾脏显著肿大、而胸腺严重萎缩(P0.01)。(2)与正常对照组比较,控食组和乙酰苯肼组血清皮质酮水平显著升高(P0.05),而氢化可的松组显著下降(P0.001)。(3)控食组小鼠肾上腺合成皮质激素的重要酶Star、Cyp21a1、Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo表达显著升高(P0.05),Csf2显著下降(P0.05);骨髓Tpo、IL-4表达显著上调(P0.05)。(4)乙酰苯肼组小鼠肾上腺Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo、Csf2、Csf3表达显著升高(P0.05);骨髓Csf3、IL-4、IL-5、IL-6表达显著升高,而IL-1b和IL-7显著下降(P0.05)。(5)甲状腺素组小鼠肾上腺Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo表达显著升高,Csf2显著下降(P0.05);骨髓Csf3、IL-2和IL-5表达显著下降(P0.05)。(6)氢化可的松组小鼠Star、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2表达显著下降(P0.05),肾脏Epo表达显著升高,而Csf1和Csf2显著下降(P0.05),骨髓Csf3、IL-1b、IL-5和IL-7表达显著下降,IL-4却显著升高(P0.05)。结论通过控制摄食量,给予乙酰苯肼、甲状腺素及氢化可的松,可以复制出相关的中医虚证模型,且在肾上腺、肾脏及骨髓等"肾藏象"层面存在相应的物质功能变化。     

地黄-知母-黄柏配伍对药源性阴虚证小鼠肾上腺皮质功能的调节作用

目的研究地黄、知母、黄柏单独及配伍使用对药源性阴虚证小鼠肾上腺皮质功能的保护作用。方法 72只雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组、地黄组、知母组、黄柏组、地黄-知母-黄柏组,每组12只。采用25mg/(kg·d)氢化可的松ig给予小鼠,每日1次,连续5 d,复制药源性阴虚证模型,给药组分别ig给予地黄[9.0 g/(kg·d)]、知母[(6.0 g/(kg·d)]、黄柏[(5.0g/(kg·d)]、地黄-知母-黄柏配伍[(6.7g/(kg·d)]的水煎药液,连续给药5d。透射电子显微镜检测肾上腺皮质超微结构;ELISA检测血清皮质酮;实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇激素合成酶基因(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)、胆固醇摄取基因(Ldlr;Scarb1,蛋白名SRB1)、胆固醇合成限速酶基因(Hmgcr)、胆固醇储存基因(Acat1、Lipe)、胆固醇流出基因(Abca1、Abcg1)、胆固醇稳态基因(Nr1h3,蛋白名LXRα)表达变化;Westernblotting检测肾上腺LDLR、SRB1、LIPE、ACAT1、CYP11A1、StAR、LXRα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠体质量、血清皮质酮水平均显著下降(P0.05),肾上腺束状带细胞出现典型的脂滴融合现象、线粒体萎缩;氢化可的松显著抑制肾上腺皮质激素合成过程Star、Cyp21a1、Cyp11b1、Ldlr、Scarb1、Acat1基因表达(P0.05),以及抑制StAR、LDLR、SBR1和LXRα蛋白表达,促进Abcg1基因表达(P0.05)。与模型组比较,各药物治疗后肾上腺束状带细胞未见明显的脂滴融合;地黄、知母、黄柏单独治疗后显著抑制皮质酮分泌(P0.05);地黄-知母-黄柏配伍显著提升Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Lipe、Abca1、Nr1h3基因表达(P0.05),并增强CYP11A1、StAR、LDLR、SBR1和LXRα蛋白表达。结论地黄、知母、黄柏单独给药及其配伍治疗可通过调节胆固醇稳态平衡及恢复部分受抑制的皮质激素合成酶,配伍给药更有助于改善受损伤的肾上腺皮质功能。     

不同剂量泼尼松龙诱发小鼠药源性虚证模型的证候特征

目的探讨泼尼松龙诱发小鼠药源性证候的特征及可能物质基础。方法 80只ICR小鼠随机分为正常对照组、极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各16只。极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予醋酸泼尼松龙片0. 25、0. 5、2. 5、12. 5 mg/(kg·d)灌胃,正常对照组给予等量灭菌水。每组16只中8只干预7天,另外8只干预14天。隔日动态观测小鼠体质量,分别比较干预不同时间各组小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取小鼠脾脏、胸腺和睾丸称重并计算脏器指数;检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;检测肾上腺功能相关基因表达和肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族I型清道夫受体(SRBI)、类固醇合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达。结果中剂量组和高剂量组干预7天和干预14天,小鼠体质量、脾脏质量、胸腺质量、脾脏指数、胸腺指数较正常对照组同时间下降,血清皮质酮和ACTH含量、肾上腺功能相关基因表达和肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白均较正常对照组不同程度降低(P 0. 05),而各组小鼠抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度差异无统计学意义(P 0. 05)。结论泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证为阴虚证,该药源性虚证的物质基础可能以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主。     

真武汤通过PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制H22肝癌小鼠肿瘤增长的研究

目的研究真武汤对肿瘤增长的影响及可能的作用机制。方法将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组8只,肿瘤模型组15只,肿瘤真武汤组15只。除正常对照组外,接种H22肝癌细胞至腋下复制荷瘤模型小鼠并同步给予真武汤防治14天。动态观测小鼠体质量与肿瘤大小变化;处死小鼠后,取脾脏、胸腺称重并计算脏器指数;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1以及肿瘤Akt1、Cdkn1b、Mtor、Pik3r1、Pten的mRNA表达;运用Western blot方法检测肾上腺SRB1、St AR和肿瘤AKT、P-AKT蛋白表达。结果与正常对照组比较,肿瘤模型组脾脏显著增大(P0.05);肾上腺Cyp11a1、Cyp11b1的基因表达显著下调(P0.05)。与肿瘤模型组比较,真武汤防治后小鼠生存率80%显著高于模型组53.3%(P0.05),且抑制肿瘤快速增长;同时真武汤显著促进肿瘤组织Pik3r1、Cdkn1b基因表达上调(P0.05)、抑制p-AKT蛋白表达(P0.05),并显著增强肾上腺St AR蛋白表达(P0.05)。结论真武汤通过调节PI3K-AKT-mTOR信号通路关键分子抑制肿瘤快速增长,并通过改善肾上腺与脾脏功能延长生存期。     

丹参对老龄小鼠肝微粒体细胞色素P450部分亚型的影响

目的观察丹参对老龄小鼠肝微粒体细胞色素P450部分亚型的影响。方法给予12月龄小鼠含丹参不同剂量的药物鼠粮,连续给药三个月后,以6月龄小鼠为对照,采用荧光定量PCR法检测小鼠肝脏组织CYP1a1、CYP2a4、CYP2a5、Cyp2b9、CYP3A41、Cyp4a12、Fmo1、Fmo5等P450亚型基因m RNA的表达。结果模型组小鼠肝脏组织CYP1a1、CYP2a4、CYP2a5、Cyp2b9、CYP3a41、Cyp4a12、Fmo1、Fmo5等基因mRNA的表达量显著低于正常组小鼠;不同剂量丹参给药组肝脏CYP1a1、CYP2a4、CYP2a5、Cyp2b9、CYP3a41、Cyp4a12、Fmo1、Fmo5等基因m RNA的表达量均显著高于模型组,且丹参高剂量组作用优于低剂量组。结论衰老可导致细胞色素P450亚型基因表达减少,丹参对老龄小鼠肝微粒体CYP1a1、CYP2a4、CYP2a5、Cyp2b9、CYP3a41、Cyp4a12、Fmo1、Fmo5等基因具有诱导作用。     

热敏灸对肠易激综合征模型大鼠CRH、ACTH及CORT的影响

目的:观察热敏灸对肠易激综合征(IBS)模型大鼠CRH、ACTH与CORT的影响。方法:64只SD雄性大鼠随机分为空白组(8只)、模型组(8只)、艾灸组(32只)、假手术组(8只)、NMDA组(8只),空白组不予干预,其余各组通过慢性不可预见性刺激法复制IBS模型。造模完成,艾灸组以悬灸命门穴出现尾温变化为依据,分为热敏灸组和非热敏灸组。实验第21、28、35天,NMDA组套管植入海马微量注射5μg/μL NMDA 1μL,假手术组、艾灸组注射生理盐水。观察各组大鼠行为学变化。应用Real-time PCR检测下丘脑CRH mRNA表达,放射免疫法检测血清ACTH、CORT水平。结果:(1)与空白组相比,各组大鼠下丘脑CRH mRNA表达均升高(P0.01,P0.05)。与模型组相比,假手术组CRH mRNA表达无明显差异,NMDA组CRH mRNA表达升高(P0.01),热敏灸组、非热敏灸组CRH mRNA表达均明显降低(均P0.01)。与非热敏灸组相比,热敏灸组CRH mRNA表达降低,差异有统计学意义(P0.05);(2)与空白组相比,各组大鼠血清ACTH含量均升高(均P0.01)。与模型组相比,假手术组ACTH含量无明显差异,NMDA组ACTH含量升高(P0.01),热敏灸组、非热敏灸组ACTH含量均明显降低(P0.01,P0.05)。与非热敏灸组相比,热敏灸组ACTH含量降低(P0.05);(3)与空白组相比,各组大鼠血清CORT含量均升高(P0.01,P0.05)。与模型组相比,假手术组、NMDA组CORT含量无明显差异;热敏灸组、非热敏灸组CORT含量均明显降低(均P0.01)。与非热敏灸组相比,热敏灸组CORT含量降低(P0.05)。结论:热敏灸可有效改善IBS模型大鼠相关症状,可能是通过调节NR的表达,降低下丘脑CRHmRNA表达及血清ACTH、CORT含量,恢复HPAA负反馈调节功能实现的。     

乙酰苯肼致血虚证模型小鼠的证候物质基础初探

目的研究乙酰苯肼引起的血虚证模型小鼠证候可能的物质基础。方法以雄性ICR小鼠为对象,采用乙酰苯肼170 mg/kg皮下注射,第1天和第4天各1次制作血虚证模型,并设立正常对照组。动态观察小鼠体重变化,显微镜下观察血液细胞与股骨骨髓细胞,取肾脏、肾上腺和骨髓分别抽提RNA,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达、以ELISA方法检测血清皮质酮含量。结果与正常对照组比较,乙酰苯肼小鼠造模3天后体重显著下降(P<0.05),小鼠呈现虚弱征象,小鼠脾脏代偿性增大而胸腺却明显萎缩(P<0.01)。乙酰苯肼组小鼠血液红细胞形态异常、正常红细胞数量减少、白细胞代偿性增多;骨髓成熟的环状核细胞减少。与正常对照组比较,乙酰苯肼组小鼠骨髓IL-5和IL-6基因表达显著升高(P<0.05),而巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、IL-1b和IL-7基因表达显著下降(P<0.05);肾脏促红细胞生成素(Epo)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和M-CSF基因表达也显著升高(P<0.05,P<0.01),而粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因表达则被乙酰苯肼抑制(P<0.05);肾上腺Cyp21a1与Cyp11b1基因表达显著升高(P<0.05);小鼠血清皮质酮含量明显升高(P<0.01)。结论乙酰苯肼所复制的证候以血虚证为主,脾脏肿大、肾脏Epo基因代偿性高表达以及继发肾上腺皮质功能虚性亢奋是该证候物质与功能变化最突出特征。     

子午流注针法对心理应激大鼠HPA轴中枢调控的影响

目的观察子午流注针法对心理应激大鼠HPA轴中枢调控中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、血清皮质醇(CORT)及免疫因子白细胞介素1 (IL-1)的影响,探讨子午流注针法治疗心理应激的机制。方法 52只Wistar大鼠随机分为子午流注开穴组、针刺对照组、造模组、正常组,每组13只。采用旁观电击实验建立心理应激模型。子午流注开穴组以养子时刻开穴法定时开穴治疗,针刺对照组针刺取百会穴。放射免疫法分别检测血清CORT和ACTH含量、下丘脑中CRH含量、垂体中ACTH含量、肾上腺中CORT含量,免疫组化法、RT-PCR法分别检测下丘脑、垂体中IL-1及其mRNA表达水平。结果与正常组比较,造模组大鼠血清CORT和ACTH水平、下丘脑中CRH含量、垂体中ACTH含量、肾上腺中CORT含量显著升高(P0.01),下丘脑、垂体中IL-1及其mRNA表达水平显著升高(P0.01);与造模组比较,子午流注开穴组大鼠血清CORT和ACTH水平、下丘脑中CRH含量、垂体中ACTH含量、肾上腺中CORT含量显著降低(P0.01),下丘脑、垂体中IL-1及其mRNA表达水平显著降低(P0.01);与针刺对照组比较,子午流注开穴组大鼠血清CORT和ACTH水平、下丘脑中CRH含量、垂体中ACTH含量、肾上腺中CORT含量明显降低(P0.05),下丘脑、垂体中IL-1及其mRNA表达水平明显降低(P0.05)。结论子午流注开穴针法可以调控心理应激大鼠CRH、ACTH、CORT的异常分泌,促进处于异常状态的HPA轴向正常状态恢复,其作用机制可能与下调IL-1 mRNA,减少诱发ACTH的分泌,传递信号参与大脑中枢调控有关,从而改善机体出现应激状态。     

含砷、汞类矿物中药对小鼠肝/肠Cyp3a和肠道P-gp的影响

目的研究雄黄、水飞雄黄、朱砂、氯化汞(Hg Cl2)对小鼠肝/肠细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)及肠道P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响。方法将120只NIH小鼠随机分为纯水组,羧甲基纤维素钠(CMC)对照组,利福平组(40 mg·kg-1),酮康唑组(1.8 mg·kg-1),雄黄高、低剂量组(60,15 mg·kg-1),水飞雄黄高、低剂量组(60,15 mg·kg-1),朱砂高、低剂量组(120,30 mg·kg-1)和Hg Cl2高、低剂量组(0.2,0.05mg·kg-1)。小鼠每天灌胃2次,连续5 d。第6天灌胃1 h后摘取肝脏和全段小肠。用超微量ATP酶测试盒测定肠匀浆液中P-gp依赖性ATP酶的活性;用紫外分光光度法测定梯度离心分离的小鼠肝/肠微粒体中Cyp3a的活性;用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)法测定肝中Cyp3a11和肠道P-gp基因(Abcb1b)m RNA的表达。结果小鼠肠道P-gp偶联的ATP酶活性测定结果显示,雄黄、水飞雄黄、朱砂和Hg Cl2的高、低剂量组与CMC对照组比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);用红霉素和氨基比林为探针药检测肝脏和小肠微粒体Cyp3a酶活性的结果显示,各供试物组的Cyp3a酶活性均显著高于CMC对照组(P0.05,P0.01),而RT-PCR结果显示各供试物均能显著诱导Cyp3a11和抑制Abcb1b的m RNA表达。结论雄黄、水飞雄黄、朱砂、Hg Cl2对小鼠肝脏和肠道中的Cyp3a均具有显著的诱导作用,而对肠道P-gp的转运活性则有显著抑制作用。     

脾阳虚证失眠大鼠模型的建立和附子理中汤的干预效应

目的:探讨附子理中汤对脾阳虚证失眠大鼠下丘脑增食素(orexin) mRNA表达及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA axis)的影响及机制.方法:100只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、附子理中汤低剂量组,中剂量组和高剂量组5组,每组20只.模型组按400 mg· kg-1 ip对氯苯丙氨酸(PCPA)每天1次,连续2d,建立脾阳虚证失眠模型.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别以附子理中汤10,20,40 g·kg-1 ig,每日1次,连续7d.疗程结束后对各组大鼠用ELISA法检测下丘脑5-羟色胺(5-HT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,RT-PCR法检测下丘脑orexin mRNA表达.结果:与正常组相比,模型组orexin mRNA表达量显著升高(P＜0.01),5-HT含量显著降低(P＜0.01);CRH,ACTH含量显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,附子理中汤高剂量组orexin mRNA表达量显著降低(P＜0.01),附子理中汤高、中剂量组5-HT含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05);高剂量组CRH,ACTH含量显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:附子理中汤下调orexin mRNA表达,抑制HPA轴激活,降低应激反应性,可能是其治疗失眠的机制之一.     

养阴益肾颗粒对糖皮质激素致肾阴虚证大鼠HPA轴的影响

目的:观察养阴益肾颗粒(YYP)对糖皮质激素(GC)致肾阴虚证大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA轴)的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,YYP高、中、低剂量组(6.48,3.24,1.62 g·kg~(-1)·d~(-1))和六味地黄丸组(0.39 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。除正常组外,其他各组大鼠予氢化可的松50 mg·kg-1ip 7 d建立肾阴虚证模型。正常组和模型组大鼠予蒸馏水(10 m L·kg-1·d-1)ig,YYP高、中、低剂量组和六味地黄丸组大鼠予相应药物ig,共7 d。观察大鼠活动度、体毛、尾色、摄食量、大便、体重等一般情况的变化,摘取两侧肾上腺,称肾上腺质量及计算肾上腺脏器指数,ELISA法检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH),促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)浓度,RT-PCR检测下丘脑CRH,垂体ACTH,肾上腺CORT mRNA的表达,并行肾上腺组织形态学检查。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般情况较差,体重明显减轻(P0.01),肾上腺质量,肾上腺脏器指数,CRH,ACTH,CORT均明显降低(P0.01),CRH,ACTH,CORT mRNA表达明显下调(P0.01),肾上腺病变重;与模型组比较,YYP高、中、低剂量组和六味地黄丸组大鼠一般情况得到改善,给药后体重增加(P0.01),肾上腺质量,肾上腺脏器指数,CRH,ACTH,CORT升高(P0.05,P0.01),CRH,ACTH,CORT mRNA表达明显上调(P0.01),肾上腺病变程度减轻。结论:养阴益肾颗粒对GC所致肾阴虚证大鼠HPA轴的抑制状态具有拮抗作用。     

蛇床子素对Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质功能的影响

目的研究蛇床子素(Osthole,Ost)对肾上腺皮质功能的影响。方法以Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,以含10%、1%和0.1%血清培养液培养细胞,分别采用1、10、25、50、100、200μmol/L Ost处理Y1细胞24、48 h,以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,腺苷酸环化酶激活剂(Bu)2cAMP为阳性对照组,倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用ELISA法检测细胞分泌液皮质酮含量,RT-qPCR法检测类固醇急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶(Cyp21a1)、3β-羟基类固醇脱氢酶(Hsd3b2)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、11β-羟化酶2(Cyp11b2)、17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶(Cyp17a1)及17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因表达水平。结果 100、200μmol/L Ost组可明显抑制Y1细胞增殖,且对含0.1%血清培养液中细胞抑制作用更明显。与阴性对照组比较,阳性对照组Y1细胞Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Hsd3b2、Cyp11b1、Cyp17a1及Hsd17b3基因表达水平明显增强(P0.05);干预24、48 h,50μmol/L Ost组Y1细胞皮质酮水平明显升高(P0.05)。与24 h比较,干预48 h后,25、50μmol/L Ost组皮质酮含量明显升高(P0.01)。干预24 h后,25、50μmol/L Ost组Star、Cyp21a1、Hsd3b2基因表达明显增强(P0.05);干预48 h后,Star基因表达水平进一步增强(P0.05),但Cyp11a1基因表达无明显差异(P0.05)。干预24、48 h后,10、25、50μmol/L Ost组皮质酮合成酶Cyp11b1和性激素合成酶Cyp17a1基因表达明显增强(P0.05);Ost对醛固酮合成酶Cyp11b2和性激素合成酶Hsd17b3基因表达水平未见明显作用。结论蛇床子素通过增强类固醇激素合成相关酶基因表达,参与调节肾上腺皮质功能,并以促进皮质酮的合成与分泌作用为主。     

血人参乙酸乙酯部位对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究血人参乙酸乙酯部位对对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将雄性KM小鼠随机分为正常对照组、模型组、双环醇组、血人参乙酸乙酯部位低、高剂量组,每组10只,双环醇组连续灌胃给予双环醇(150 mg·kg~(-1))4天。血人参乙酸乙酯部位低、高剂量组分别皮下注射血人参乙酸乙酯(200mg·kg~(-1),400 mg·kg~(-1)),连续4天,末次给药8 h后,除正常对照组以外,其余各组均腹腔注射300 mg·kg~(-1)对乙酰氨基酚水溶液建立小鼠急性肝损伤模型,禁食,16 h后,断头取血并分离血清,解剖取肝脏。测定小鼠血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),观察肝组织病理学的变化情况,Realtime RT-PCR检测肝组织Cyp1a2,Cyp2e1和Cyp3a11以及Egr-1、TNF-α基因的表达水平。结果血人参乙酸乙酯部位低、高剂量组未对正常小鼠造成明显肝损伤且能降低APAP模型小鼠血清中ALT、AST含量并明显改善肝细胞坏死病变的程度,抑制肝组织Cyp1a2,Cyp2e1和Cyp3a11以及Egr-1、TNF-α基因的表达水平。结论血人参乙酸乙酯部位未见明显肝毒性且具有较好的肝脏保护效果,可能与其抑制Cyp1a2,Cyp2e1和Cyp3a11代谢酶表达,下调Egr-1和TNF-α基因表达有关。     

艾条悬灸肾俞、关元对肾阳虚大鼠垂体-肾上腺轴和垂体-甲状腺轴的影响

目的:探讨艾条悬灸对肾阳虚大鼠垂体-肾上腺轴和垂体-甲状腺轴的影响。方法:以氢化可的松肌肉注射制作皮质酮肾阳虚动物模型,将大鼠随机分成模型对照组、艾灸治疗组并设立空白对照组各8只,艾灸治疗组采用艾条悬灸肾俞、关元,每次每穴20min,每日一次,治疗14次,治疗结束后采用ELISA方法检测各组大鼠血清CORT、ACTH、T_3、T_4、TSH的含量,采用RT-PCR方法检测垂体ACTH、TSH mRNA的表达。结果:与模型对照组比较,艾灸治疗组血清CORT无显著性差异(P0.05),血清ACTH、T4、TSH和垂体ACTH、TSHmRNA均具有显著性差异(P0.05),血清T_3具有极显著性差异(P0.01);与空白对照组比较,艾灸治疗组上述各指标均无显著性差异(P0.05)。结论:艾条悬灸肾俞、关元对肾阳虚大鼠有明显的治疗作用。     

吴茱萸经不同比例甘草炮制后肝毒性变化与对CYP450酶调控的相关性分析

目的 通过分析吴茱萸经不同比例甘草炮制后致小鼠肝毒性的差异与肝脏细胞色素P450(CYP450)酶蛋白和mRNA表达变化间的联系,探寻甘草炮制减轻吴茱萸肝毒性的作用靶点,阐释吴茱萸甘草炮制的原理及科学内涵。方法 参照《中国药典》2020版中制吴茱萸的炮制方法制备吴茱萸不同比例甘草炮制品;80只雄性小鼠随机分8组,分别为空白组、对乙酰氨基酚组、吴茱萸生品组、无甘草炮制品组和甘草炮制品(100∶3、100∶6、100∶12、100∶24)组,吴茱萸的给药剂量为30 g·kg^-1;采用酶联免疫法检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)和白蛋白(ALB)水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织Cyp1a2、Cyp2c29、Cyp2d22、Cyp2e1、Cyp3a11蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织Cyp1a2、Cyp2c29、Cyp2d22、Cyp2e1、Cyp3a11 mRNA表达;采用两变量回归分析法对AST和ALT水平与CYP450酶蛋白及m...     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。