腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹状小分子干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响.方法 将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA感染MG63.噻唑蓝(MTT)比色分析细胞体外增殖力,Hoechst染色、流式细胞术观察细胞凋亡.建立30只裸鼠移植瘤模型,Ad-VEGF-siRNA组瘤内注射Ad-VEGF-siRNA病毒纯化液0.2ml,通过免疫组织化学技术,观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡.结果 与对照组比较,Ad-VEGF-siRNA组MG63细胞生长减慢,Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞,24、48、72h凋亡率分别为7.27%、12.01%和20.09%.Ad-VEGF-siRNA明显抑制移植瘤生长,抑瘤率达40.7%.Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征,同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少(P<0.01). 结论 Ad-VEGF-siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

shRNA介导的热休克蛋白70敲低对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)敲低对结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法:构建两种干扰HSP70的shRNA(HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2)质粒表达载体,分别转染到结肠癌HT29细胞,并以空质粒转染(阴性对照)和未转染的HT29细胞(空白对照)为对照,用RT-PCR和Western blot方法检测各组HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达;将HSP70shRNA-2转染、空质粒转染及未转染的HT29细胞分别接种至裸鼠皮下建立移3组植瘤模型,观察肿瘤生长情况,3周后剥离瘤块,用HE染色、免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织形态学、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2均能明显抑制HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达,且HSP70 shRNA-2的抑制作用更为明显,空质粒转染对HSP70的表达无明显影响;与空白对照组比较,HSP70 shRNA-2转染组裸鼠移植瘤生长明显较明显减慢(P<0.01),瘤组织中心出现明显坏死,PCNA表达明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而空质粒转染组无明显上述改变(P>0.05)。结论:HSP70沉默能抑制结肠癌HT29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进细胞凋亡,HSP70可能是治疗结肠癌有效靶点。     

反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

摘要：目的:探讨反义HIF-1α基因对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响及其相关机制。方法:使用人原发性肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。待肿瘤生长至直径约0.4cm时，将荷瘤裸鼠随机分为3组，分别注射生理盐水、质粒PcDNA3和HIF-1α/PcDNA3B，质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线；取肿瘤标本作免疫组织化学检查（SABC法）及蛋白质印迹检查，检测各组肿瘤的VEGF和HIF-1α表达及微血管密度（MVD）和细胞凋亡。结果:HIF-1α/PcDNA3B治疗组各时点的肿瘤体积，以及肿瘤组织中HIF-1α蛋白、MVD，VEGF表达均低于对照组，而细胞凋亡指数高于对照组，差异均有显著性（P＜0.05）。结论:通过阻断癌细胞的缺氧适应途径，反义HIF-1α基因治疗肝癌有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤血管生成及诱导细胞凋亡的作用。     

氩氦刀冷冻联合CpG寡脱氧核苷酸治疗小鼠皮下移植性结肠癌

目的 探讨氩氦刀冷冻消融联合CpG寡脱氧核苷酸（ODN）对小鼠移植性结肠癌的治疗作用.方法 BALB/c小鼠皮下接种结肠癌CT26细胞建立荷瘤鼠模型,小鼠被分成PBS组（6只,瘤周注射PBS组）、氩氦刀组（6只,氩氦刀冷冻组）、CpG ODN组（6只,瘤周注射CpG ODN）和联合治疗组（6只,氩氦刀冷冻加瘤周注射CpG ODN）.观察各组小鼠存活及肿瘤生长情况;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠外周血中IL-12和IFN-γ的含量;利用流式细胞仪检测小鼠外周血中CD3＋CD4＋T细胞与CD3＋CD8＋T细胞比例;对氩氦刀组和氩氦刀联合CpG ODN组治愈小鼠进行再攻击实验,观察小鼠再次成瘤率.结果 氩氦刀组和联合治疗组小鼠的平均生存时间为（80.3±5.4）d和（83.8±5.5）d,明显长于PBS组[（53.7±3.7）d]和CpG ODN组[（51.5±6.8）d],差异均有统计学意义（P＜0.05）.氩氦刀组和联合治疗组抑瘤率分别为83.8%和86.2%.治疗后20 d,氩氦刀组和联合治疗组的CD3＋CD4＋T细胞/CD3＋CD8＋T细胞比值、IL-12和IFN-γ水平均高于PBS组和CpGODN组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与氩氦刀组比较,联合治疗组CD3＋CD4＋T细胞/CD3＋CD8＋T细胞比值差异无统计学意义,但IL-12和IFN-γ水平则显著升高（P＜0.05）.肿瘤再攻击后,氩氦刀组和联合治疗组分别有5只（5/6）和1只（1/6）再次成瘤,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 氩氦刀冷冻联合CpG ODN可以增强荷瘤鼠的抗肿瘤免疫应答,增强了氩氦刀治疗小鼠的免疫功能,减少了肿瘤再次攻击的成瘤率.     

射频消融对兔肝癌模型细胞凋亡的影响

目的　射频消融治疗肝脏肿瘤的机制目前尚不明了 ,我们通过本实验观察射频治疗后兔肿瘤模型及临床肝癌病例的分子生物学改变。方法　实验兔 3 2只制成VX2 细胞肝癌模型 ,分为射频组 ( 2 8只 )即术后 0、2、6、12、2 4、48、168h和对照组 ( 4只 ) ,通过HE染色、TUNEL法及二苯胺法观察肿瘤组织及治疗旁中心区组织的凋亡指数改变。结果　射频组肿瘤经射频治疗后发生凝固性坏死及细胞凋亡 ,凝固性坏死边缘区肿瘤组织凋亡指数明显高于对照组 ,其指数术后 0h即升高 ,术后 12h均值达高峰 (P <0 .0 1) ,后逐渐下降 ,但术后 168h仍高于术前组。结论　射频治疗通过诱导高温凝固性坏死区周边肿瘤细胞凋亡 ,进一步扩大了射频治疗的治疗范围 ,诱导细胞凋亡是射频治疗治疗恶性肿瘤的一个重要机制     

大黄素增强顺铂对膀胱癌T24细胞移植瘤抑制作用的实验研究

目的 探讨大黄素增强顺铂对膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的化疗作用及其机制。方法 建立膀胱癌T24细胞的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将荷瘤鼠随机分为:Con组(生理盐水)、Cis组(顺铂50mg/kg)、Emo组(大黄素40mg/kg)和Cis+Emo组(联合用药,顺铂50mg/kg+大黄素40mg/kg)。腹腔注射给药,每3d1次,共8次。给药后测量肿瘤体积及质量。采用原位末端转移酶标记技术(Tunel)检测各组标本肿瘤细胞凋亡情况。免疫组织化学法检测肿瘤组织核转录因子(NF-κB)、凋亡抑制因子(XIAP)和胱天蛋白酶(Caspase-3)蛋白的表达。RT-PCR检测NF-κB、XIAP和Caspase-3mRNA的表达。结果 Cis+Emo组肿瘤体积和质量明显小于其他各组。Tunel实验显示,Cis+Emo组细胞凋亡水平明显高于其他各组。免疫组化和RT-PCR结果显示:与Con组相比较,Emo组和Cis+Emo组的NF-κB、XIAP蛋白、mRNA的表达显著下降;与Cis组和Emo组相比较,Cis+Emo组的NF-κB、XIAP蛋白、mRNA的表达显著下降;与其他各组相比,Cis+Emo组的Caspase-3蛋白和mRNA的表达显著增强。结论 大黄素可以通过下调NF-κB和XIAP、上调Caspase-3基因和蛋白的表达,增强顺铂对膀胱癌T24细胞移植瘤诱导凋亡作用。     

二烯丙基三硫化物对肝移植术后大鼠肝癌生长的抑制作用

目的 探讨二烯丙基三硫化物(DAIS)对肝移植术后大鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响及其机制.方法 建立大鼠肝移植术后肝癌皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、DAIS Ⅰ组(每日1 mg/kg)、DAISⅡ组(每日15 mg/kg).用药2周后观察肿瘤体积和重量,生化法测定大鼠血清肝肾功能,荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA的表达,肿瘤组织切片行透射电镜检查.结果 与对照组比较,DAIS能抑制肿瘤生长,对照组、DAIS Ⅰ组和DAIS Ⅱ组皮下移植瘤体积分别为(0.78±0.25)、(0.42±0.17)、(0.38±0.21)cm3(P<0.01);DAIS抑制肝癌细胞VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录(P<0.01).DAIS对肝移植术后大鼠肝、肾功能无明显毒性作用(P>0.05);透射电镜下可见DAIS组肿瘤组织内有较多细胞凋亡现象.结论 DAIS可以抑制肝癌细胞VEGFmRNA和MMP-2 mRNA的转录,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝移植术后皮下移植瘤的生长.     

致敏树突状细胞联合射频消融治疗对荷瘤大鼠免疫机能的影响

目的探讨经冻融肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DCs）联合应用于射频消融术（RFA）后治疗大鼠实体瘤对大鼠抗肿瘤免疫的影响。方法30只荷Walker256实体瘤SD大鼠随机分成三组，每组10只：对照组1仅行RFA治疗；对照组2行RFA＋未致敏DC治疗；实验组行RFA＋冻融抗原致敏DC治疗。治疗前及治疗后第4天经流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋／CD8^＋比值；同时，超声评价治疗前后各组肿瘤体积变化，记录大鼠的荷瘤生存期，各组间比较。结果治疗后，实验组大鼠外周血CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值的升高较两对照组比明显，与对照组2比差异显著（P〈0．05）；实验组外周血CD8^＋T细胞的降低显著大于两对照组（P〈0．05）。实验组大鼠肿瘤生长速度显著慢于对照组，其荷瘤生存期较对照组明显延长（P〈0．05）。结论肿瘤抗原致敏树突状细胞联合射频消融治疗可有效改善大鼠的抗肿瘤免疫机能，从而延缓肿瘤生长、延长荷瘤大鼠寿命。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制胆囊癌血管生成的研究

目的探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growthfactor,VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)转染对人胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠移植瘤的VEGF表达和血管形成的影响。方法裸鼠接种GBC-SD细胞建立移植瘤模型,随机分为A、B、C三组,各组裸鼠在接种1周后,分别给于200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGFSODN100μg Oligofectamine0.5μl及VEGF ASODN100μg Oligofectamine0.5μl,每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,各组移植瘤中VEGF表达及微血管密度(MVD)变化。结果三组裸鼠3周时的成瘤率,C组显著低于A、B两组(P<0.05),6周时各组的成瘤率无差异。各组移植瘤6周时的体积和瘤重相比C组显著低于A、B两组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B两组移植瘤VEGF表达及MVD均无显著性差异(P>0.05),而C组移植瘤VEGF的表达较A、B两组明显减弱(P<0.05),MVD明显小于A、B两组(P<0.05)。结论VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF在蛋白水平的表达,减少裸鼠移植瘤中血管的形成,降低微血管密度。     

联合反义存活素、血管内皮生长因子治疗裸鼠骨肉瘤

目的探讨存活素（Survivin，SVV）、血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）联合治疗裸鼠骨肉瘤。方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型，采用瘤内注射给药方式（5mg,／kg体重），以反义SVV、反义VEGF对瘤鼠进行联合干预治疗1周，并与各单药组和空白对照组进行比较，观测各组裸鼠肿瘤生长情况、评估瘤体病理形态，免疫组织化学法检测移植瘤组织SVV、VEGF蛋白表达，DNA末端原位标记法（TUNEL法）检测肿瘤细胞凋亡水平。结果与对照组比较，各治疗组肿瘤生长均不同程度受抑，以联合组最为显著，瘤重仅为（0．52±0．01）g，抑瘤率IR为（42．80±0．88）％；各治疗组肿瘤细胞中SVV、VEGF蛋白表达有所减低，肿瘤细胞出现凋亡坏死改变，其中联合组细胞凋亡指数AI[（27．90±3．66）％]显著高于对照组[（7．10±2．05）％，Χ^2=46．27，P〈0．01]。结论联合应用SVV与VEGFASODN将对裸鼠荷骨肉瘤发挥更强的抗瘤效应。     

stTRAIL—MSC靶向促进肝癌大鼠RFA过渡区残癌细胞凋亡的体内研究

目的：探讨stTRAIL-MSC靶向促进肝癌大鼠RFA过渡区残癌细胞凋亡的作用。方法：对150只雄性SD大鼠,采用N1S1肿瘤细胞建立肝荷瘤大鼠模型,并随机将其分为stSTRAL-MSC组、MSC组、Vector-MSC组、培养液组以及空白对照组,每组30只,在接受治疗前1周给以注射相应的制剂,在接受RFA治疗后12h、24h、48h以及1周时每组取6只处死并进行相关检查（空白组除外）,同时比较空白组与RFA组其生存时间。结果：stTRAIL-MSC在接受RFA治疗后其肿瘤体积变化、过渡区肿瘤细胞凋亡指数、大鼠肿瘤毁损体积、过渡区肿瘤细胞（ki-67染色）增殖指数等比较明显优于其他几组,而且在对caspase-3、caspase-8、Bcl-2水平检测时发现,stTRAIL-MSC其caspase-、3caspase-8水平明显高于其他四组,而Bcl-2水平低于其他四组,对接受RFA以及空白对照组大鼠的生存情况分析发现,采用RFA治疗的大鼠其生存时间明显高于空白对照组。结论：stTRAIL-MSC靶向通过提高cas-pase蛋白酶级联反应继而达到促进肝癌大鼠RFA过渡区残癌细胞凋亡。     

Hepatic cryoablation, but not radiofrequency ablation, results in lung inflammation

OBJECTIVE: To compare the effects of 35% hepatic cryoablation with a similar degree of radiofrequency ablation (RFA) on lung inflammation, nuclear factor kappaB (NF-kappaB) activation, and production of NF-kappaB dependent cytokines. SUMMARY BACKGROUND DATA: Multisystem injury, including acute lung injury, is a severe complication associated with hepatic cryoablation of 30% to 35% or more of liver parenchyma, but this complication has not been reported with RFA. METHODS: Sprague-Dawley rats underwent 35% hepatic cryoablation or RFA and were killed at 1, 2, and 6 hours. Liver and lung tissue were freeze-clamped for measurement of NF-kappaB activation, which was detected by electrophoretic mobility shift assay. Serum concentrations of tumor necrosis factor alpha and macrophage inflammatory protein 2 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Histologic studies of pulmonary tissue and electron microscopy of ablated liver tissue were compared among treatment groups. RESULTS: Histologic lung sections after cryoablation showed multiple foci of perivenular inflammation, with activated lymphocytes, foamy macrophages, and neutrophils. In animals undergoing RFA, inflammatory foci were not present. NF-kappaB activation was detected at 1 hour in both liver and lung tissue samples of animals undergoing cryoablation but not after RFA, and serum cytokine levels were significantly elevated in cryoablation versus RFA animals. Electron microscopy of cryoablation-treated liver tissue demonstrated disruption of the hepatocyte plasma membrane with extension of intact hepatocyte organelles into the space of Disse; RFA-treated liver tissue demonstrated coagulative destruction of hepatocyte organelles within an intact plasma membrane. To determine the stimulus for systemic inflammation, rats treated with cryoablation had either immediate resection of the ablated segment or delayed resection after a 15-minute thawing interval. Immediate resection of the cryoablated liver tissue prevented NF-kappaB activation and lung injury; however, pulmonary inflammatory changes were present when as little as a 15-minute thaw interval preceded hepatic resection. CONCLUSIONS: Hepatic cryoablation, but not RFA, induces NF-kappaB activation in the nonablated liver and lung and is associated with acute lung injury. Lung inflammation is associated with the thawing phase of cryoablation and may be related to soluble mediator(s) released from the cryoablated tissue. These findings correlate the clinical observation of an increased incidence of multisystem injury, including adult respiratory distress syndrome (ARDS), after cryoablation but not RFA.     

兔肝VX2肿瘤射频消融后不同区带VEGF的表达和细胞凋亡

目的分析兔肝VX2肿瘤射频消融(RFA)后不同区带血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达和肿瘤细胞凋亡情况。方法将48只兔肝移植VX2肿瘤,建立动物模型,分为实验组(n=42)和对照组(n=6)。对实验组行RFA,分别在术后即刻、1天、2天、1周、2周、3周各处死7只实验兔,留存肿瘤标本,进行HE染色、VEGF检测、Annexin V-FITC/PI标记和流式细胞仪检测,观察不同时间段、不同区带的VEGF变化及细胞凋亡情况。结果实验组RFA术后针道炭化区、热凝固区和消融边界区平均VEGF值差异均有统计学意义(P均0.05);针道炭化区、热凝固区及边界区术后即刻与其他时间点间两两比较差异均有统计学意义(P均0.05);针道炭化区及热凝固区VEGF在术后即刻达高峰,术后1天~3周呈整体下降趋势,消融边界区VEGF在术后即刻到1周呈上升趋势,2周后下降。术后针道炭化区、热凝固区和消融边界区平均肿瘤细胞凋亡率与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05),各区带细胞凋亡率均在术后1天达高峰,后呈下降趋势。结论 RFA后针道区和热凝固区内肿瘤细胞VEGF下降和肿瘤凋亡显著,而消融交界区仍可能有存活的肿瘤细胞;在RFA后第3周时,残留肿瘤细胞的增殖能力可恢复到术前状态,此时宜进一步采取相应的治疗措施。     

上胸段硬膜外阻滞复合尼莫地平在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的探讨上胸段硬膜外阻滞(HTEB)复合尼莫地平对兔蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)的保护作用。方法新西兰兔50只,随机均分为五组:假手术组(S组)、对照组(C组)、HTEB组(H组)、尼莫地平组(N组)和HTEB复合尼莫地平组(HN组)。经颅多普勒检测兔基底动脉平均血流速度(Vm)。光镜下观察基底动脉形态学变化,TUNEL法检测基底动脉内皮细胞凋亡情况,免疫组化测定内皮细胞Bcl-2、Caspase-3表达情况。结果与S组比较,其余四组基底动脉Vm均明显升高,管壁增厚、管腔变窄,细胞凋亡指数(AI)、Bcl-2表达、Caspase-3表达升高(P<0.01)。与C、H和N组比较,HN组基底动脉Vm明显减慢,管壁增厚减轻、管腔增宽,Bcl-2表达升高,AI和Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论上胸段硬膜外阻滞复合尼莫地平显著改善蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛,且优于上胸段硬膜外阻滞或尼莫地平的单独应用。     

射频消融联合亚砷酸治疗兔肝VX2肿瘤的实验研究

目的:探讨射频消融联合亚砷酸局部治疗对兔肝VX2肿瘤的有效性和安全性，并探讨其机制。方法:建立新西兰兔肝VX2肿瘤模型28只，随机分为4组，每组7只，分别进行亚砷酸（亚砷酸组）、射频消融（射频组）、射频消融加亚砷酸（联合组）和生理盐水（对照组）治疗。于术前、术后1，3，7d和14d耳缘静脉抽血检查丙氨酸转氨酶（ALT），同时行超声学检查。治疗后第14天处死所有实验动物，通过免疫组织化学方法检测VEGF，并分析其与肿瘤体积的相关性。结果:联合组治疗后仅第1天ALT与术前差异有显著性（P<0.05）,第3天下降至接近术前水平;联合治疗能更好地抑制肿瘤生长;亚砷酸组、射频组及联合组肿瘤组织VEGF水平均低于对照组（P<0.05），射频组低于亚砷酸组（P<0.05），联合组低于其余2组，VEGF表达强度与肿瘤体积呈显著正相关（r=0.78,P<0.01）。结论:联合治疗能通过抑制肿瘤新生血管生成而抑制肿瘤生长，且对肝脏无明显损害     

经导管栓塞联合射频消融对兔VX2肝肿瘤的干预效果

目的 探讨经导管动脉栓塞术（TAE）联合射频消融（RFA）对兔VX2肝肿瘤的干预效果。方法 将兔VX2肝肿瘤模型分为4组,每组15只。对TACE+RFA组于TACE治疗15 min后行RFA,TAE+RFA组TAE治疗15 min后行RFA,RFA组仅给予RFA,TACE组仅给予TACE。分别于术前1天及术后3、7天检测血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）,术后7天检测肿瘤生长率、肿瘤坏死率及Suzuki评分;术后1、3、7天采用免疫组织化学法检测坏死区或凝固区周围肝组织热休克蛋白70（HSP70）表达,计算肝细胞凋亡指数及增殖指数。结果 TACE+RFA组术后3、7天血清ALT、AST水平均高于其他3组（P均<0.05）。术后7天,TACE+RFA组Suzuki评分高于其他3组,TACE+RFA组、TAE+RFA组肿瘤生长率低于RFA组和TACE组、肿瘤坏死率高于RFA组和TACE组（P均<0.05）。4组术后1、3、7天坏死区或凝固区周围肝组织HSP70表达均逐渐升高,TACE+RFA组术后1、3、7天均高于其他3组,术后1、3天TAE+RFA组均高于TACE组和RFA组（P均<0.05）。4组术后1、3、7天坏死区或凝固区周围肝细胞凋亡指数均逐渐降低,TACE+RFA组术后1、3、7天均高于其他3组,TACE组术后1、3天均高于TAE+RFA组、RFA组（P均<0.05）。4组术后3天肝细胞增殖指数均高于术后1、7天,TAE+RFA组术后1、3、7天均高于其他3组,RFA组术后1、3天均高于TACE+RFA组和TACE组（P均<0.05）。结论 TACE+RFA、TAE+RFA抑制兔VX2肝肿瘤生长效果优于单独应用TACE、RFA;TAE+RFA对肝损伤更小,促进肝细胞增殖、抑制其凋亡的效果更好。     

氩氦刀冷冻消融与射频消融在肝癌治疗中的临床应用

目的探讨氩氦刀冷冻消融与冷循环射频消融(cool-tip radiofrequency ablation,RFA)在恶性肝肿瘤治疗中的临床应用价值。方法超声引导下氩氦刀冷冻消融治疗肝癌38例共42个病灶;经超声引导下RFA治疗肝癌40例共44个病灶,治疗前后经超声造影、增强CT或增强MRI检查明确诊断及评价疗效。结果 42个病灶经一次冷冻消融治疗后32个达完全消融,10例经再次冷冻消融后达到完全消融;44个病灶经一次RFA治疗后完全消融33个,11例经再次RFA后达到完全消融。两者一次完全消融率分别为76.2%(冷冻消融)和75%(RFA),差异无统计学意义。结论氩氦刀冷冻消融和冷循环RFA均能有效地原位灭活肝癌细胞,是有效的非手术治疗恶性肝肿瘤的方法之一。     

环五肽RGD靶向的纳米金偶联VEGFsiRNA增强兔VX2肝肿瘤射频消融损伤效应的研究

目的:探讨环五肽RGD(Tyr RGD)靶向的纳米金颗粒(GNPs)偶联VEGF小干扰RNA(Tyr RGDGNPs-VEGFsi RNA)复合物对兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)损伤效应的影响。方法:采取开腹肝脏种植VX2肿瘤组织块的方法建立兔VX2肝癌模型。首先将6只肝癌兔均分为两组分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物和GNPs,注射48 h后,透射电镜检测两者在肿瘤标本中的聚集和分布情况。然后将30只肝癌兔均分为3组,分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物、GNPs、生理盐水48 h后,行RFA治疗,48 h后切取标本,行病理学观察,测量肿瘤毁损体积,TUNEL法检测残癌细胞凋亡。最后将27只肝癌兔均分为3组,分别行RFA+Tyr RGD-GNPsVEGFsi RNA注射,RFA+生理盐水注射、生理盐水注射,饲养至自然死亡,记录生存时间。结果:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物在肿瘤中的聚集明显优于GNPs(14.2颗/500 nm视野vs.0颗/500 nm视野,P0.01)。注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物后的RFA治疗毁损体积明显大于注射GNPs和生理盐水(5.12 cm3 vs.1.78 cm3 vs.1.49 cm3,P0.01),且前者残癌区肿瘤细胞凋亡数明显高于后两者(111.7个vs.36.3个vs.34.7个,P0.01),而后两者上述指标差异均无无统计学意义(均P0.05)。RFA+Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA治疗的肝癌兔较RFA+生理盐水治疗、单纯生理盐水治疗的肝癌兔的平均生存时间明显延长(70.9 d vs.51.2 d vs.43.9 d,P0.01)。结论:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物能在肝脏肿瘤中靶向聚集,具有扩大RFA毁损范围和促进肿瘤细胞凋亡的作用,从而增强RFA疗效。     

Study of apoptosis and heat shock protein (HSP) expression in hepatocytes following radiofrequency ablation (RFA)

BACKGROUND: Radiofrequency ablation (RFA) of the liver produces necrosis of the hepatocytes. Histological examination shows a sharp demarcation between ablated and normal liver tissue. This experiment was carried out to study the cellular injury produced by RFA in area surrounding the ablated tissue and effect of reperfusion on this zone. MATERIAL AND METHODS: Five pigs underwent RFA of liver parenchyma. Four pigs were sacrificed 30 min after RFA and one pig was sacrificed 5 days later. Ablated lesions including surrounding liver parenchyma was examined for apoptosis and HSP 70 expression. RESULTS: There was a zone of transition surrounding the necrotic ablated area that showed apoptosis as well as increased HSP 70 expression. This was more prevalent in the pig that was sacrificed 5 days later. CONCLUSION: RFA produces sub lethal injury in the zone of transition causing apoptosis and increase in HSP 70 expression. Increased HSP expression enhances immunogenicity of these cells that can have therapeutic implications for the treatment of liver.     

大鼠肝组织冷冻和射频灭活治疗对肺形态学和功能影响的比较实验研究

目的 比较大鼠肝组织冷冻或射频治疗后对肺形态学和功能的影响.方法 SD大鼠随机分成A(n=47)、B(n=32)两组,A组给予冷冻治疗,-196℃液氮浸泡冷冻,治疗时间15～20 s;B组给予射频治疗,功率15 W,时间60～90 s.按预定时间处死.术前、术后1、3、6、24 h ELASA检测血TNF-α,IL-8;同时观察肺组织学表现和早期死亡率.结果 术后,A组血TNF-α,IL-8浓度1 h显著升高,3 h达峰值;B组仅轻微的升高(A与B组相比:P＜0.01).A组光镜下可见肺组织间隔明显增厚,充血,水肿,灶性肺实质出血,大量的中性粒细胞,巨噬细胞浸润;而B组肺部仅有少量的炎细胞浸润.另外,术后48 h内死亡率,A组为25.5%;B组仅为5.4%,差异显著(P＜0.05).结论 相同条件下,冷冻治疗引起了急性肺损伤、高死亡率等并发症,而射频治疗影响轻微.在一定条件下,射频是相对安全的.