山柰酚对博来霉素诱导小鼠肺纤维化、MRC-5细胞胶原蛋白生成的影响

目的 探讨山柰酚对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的预防作用和对MRC-5细胞胶原蛋白生成的影响。方法 将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮组(100 mg/kg)、山柰酚组(20 mg/kg),每组10只。在假手术组气管内注射生理盐水，模型组气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型。术后第2天开始给药，连续28 d,检测小鼠呼吸功能、肺组织羟脯氨酸水平，Massson染色观察肺组织胶原活性，免疫组化法检测肺组织TGF-β1、ɑ-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达量。培养MRC-5细胞株，设置空白组、TGF-β1组和山柰酚20、40、80μmol/L组，分别干预48 h后，CCK-8检测山柰酚对MRC-5细胞抑制率，ELISA检测培养基中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原水平。结果 与模型组比较，山柰酚能改善博来霉素诱导小鼠肺纤维化后的呼吸功能，减轻肺组织胶原沉积，降低肺组织羟脯氨酸水平和TGF-β1、ɑ-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。细胞实验表明，山柰酚能抑制TGF-β1对MRC-5细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型胶原生成(P<0.05,P<0.01)。...     

三七总皂苷对巨噬细胞分泌NO、TGF-β_1、MMP-9的影响研究

目的研究三七总皂苷对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞分泌一氧化氮（NO）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及TGF-β1、MMP-9 mRNA表达的影响,在细胞水平探讨三七总皂苷治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病过程中气道炎症及气道重建的可能作用机制。方法以LPS激活巨噬细胞构建炎症细胞模型。采用MTT法测定不同浓度三七总皂苷对巨噬细胞活力的影响。分别用10,30,100,300μg/m L浓度三七总皂苷与各组细胞共同孵育,Griess法测定NO释放量,ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、MMP-9的含量,实时荧光定量法检测巨噬细胞TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达量。结果 10～300μg/m L的三七总皂苷作用于巨噬细胞24 h后,细胞活性无显著变化;100μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞NO、TGF-β1的分泌（P〈0.01或P〈0.05）,明显下调TGF-β1mRNA表达（P〈0.05）;300μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞NO、TGF-β1、MMP-9的分泌（P〈0.01或P〈0.05）,明显下调MMP-9 mRNA表达（P〈0.05）。结论三七总皂苷在10～300μg/m L范围内对巨噬细胞无毒性作用,且可抑制巨噬细胞NO、TGF-β1、MMP-9的分泌,下调TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达。     

汉防己甲素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Col-I及FN表达的影响

目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2. 5,5,10,20,40μg·L~(-1))作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的增殖毒性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MRC-5细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达水平的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MRC-5细胞上清液中I型胶原(Col-I)及纤维黏连蛋白(FN)表达水平的变化,以筛选出TGF-β1活化MRC-5细胞的适宜浓度。结合筛选出的TGF-β1的浓度条件,与不同浓度的Tet(0,2. 5,5,10,20,40μmol·L~(-1))共同作用于MRC-5细胞,再次应用CCK-8法筛选TGF-β1及Tet共培养对MRC-5细胞的安全浓度,Western blot检测MRC-5细胞中α-SMA及Vimentin表达水平的变化,ELISA检测MRC-5细胞上清液中Col-I及FN表达水平的变化。结果:与空白组比较,给药24 h时,20μg·L~(-1)及40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05),给药48 h时,10,20,40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05);加入Tet培养24 h时,对MRC-5细胞的半数抑制浓度(IC50)值为14. 07μmol·L~(-1),培养48 h时,IC50值为7. 51μmol·L~(-1);与空白组比较,5μg·L~(-1)的TGF-β1刺激MRC-5细胞时,细胞中α-SMA,FN及Col-I的相对含量明显升高(P0. 05),Vimentin相对含量显著升高(P0. 01),10μg·L~(-1)组细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量显著升高(P0. 01);10μg·L~(-1)的TGF-β1与不同浓度的Tet共培养,与TGF-β1组比较,Tet 5μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin及FN相对含量显著降低(P0. 01),Col-I相对含量明显降低(P0. 05),Tet 10μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量均显著降低(P0. 01)。结论:TGF-β1能够升高MRC-5细胞中Col-I,FN等细胞外基质的水平,而Tet可以有效抑制这种变化的发生,提示Tet可能对肺纤维化的形成中,成纤维细胞大量分泌细胞外基质的过程有抑制作用。     

姜黄素对TGF-β2刺激下小鼠肺成纤维细胞PPAR-γ/PDGF-β信号通路的影响

目的探讨姜黄素对转化生长因子(TGF-β_2)刺激下小鼠肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)/血小板衍生生长因子β(PDGF-β)信号通路的影响。方法体外培养小鼠肺成纤维细胞(C57BL/6),采用细胞生长计数板检测空白组、姜黄素组(姜黄素5、25、50μmol/L)、TGF-β_2组(10 ng/mL)及TGF-β_2加姜黄素组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50μmol/L)细胞数;逆转录PCR检测空白组、TGF-β_2组(10 ng/mL)及TGF-β_2加姜黄素组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50μmol/L)PPAR-γ、PDGFR-β及FGFR1m RNA转录水平;Western blot法及ELISA法检测空白组、TGF-β_2组(10 ng/m L)及TGF-β_2加姜黄素50μmol/L组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素50μmol/L)PPAR-γ蛋白表达及胶原蛋白-1水平。结果与空白组比较,姜黄素组50μmol/L时在48、72 h时对细胞增殖抑制最明显;与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时同样在48 h、72 h时对细胞增殖抑制最明显。与空白组比较,TGF-β_2组PPAR-γ、PDGF-βmRNA表达及PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达增加(P0.05)。与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素组25、50μmol/L时PPAR-γmRNA表达水平明显升高,且高于TGF-β_2加姜黄素组5μmol/L时(P0.05),而TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时PPAR-γmRNA表达水平高于TGF-β_2加姜黄素组25μmol/L时(P0.05)。TGF-β_2加姜黄素组各浓度PDGF-βmRNA表达低于TGF-β_2组(P0.05),且TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时PDGF-βmRNA表达低于TGF-β_2加姜黄素组5、25μmol/L时(P0.05)。TGF-β_2组及TGF-β_2加姜黄素组各浓度FGFR1mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素50μmol/L组PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达降低(P0.05,P0.01)。结论姜黄素不仅抑制TGF-β_2诱导的小鼠肺成纤维细胞增殖,而且还抑制胶原合成,其可能与使PPAR-γ表达上调及PDGF-β表达下调相关。因此,姜黄素可能是通过PPAR-γ/PDGF-β信号通路阻止肺纤维化的发生发展。     

伪原薯蓣皂苷对OX-LDL诱导人冠动脉平滑肌细胞COX-2表达的影响

目的:研究伪原薯蓣皂苷对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导人血管平滑肌细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响及机制。方法:培养人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC),加入伪原薯蓣皂苷预处理细胞24小时,加入OX-LDL诱导COX-2表达,采用RT-q PCR和Western blot方法分别检测COX-2的m RNA和蛋白表达水平,检测了与COX-2炎症信号通路相关的激酶活性。结果:伪原薯蓣皂苷(60、30、15μg/ml)为有效剂量,可显著降低OX-LDL诱导的COX-2表达,呈现剂量依赖。伪原薯蓣皂苷(60、30、15μg/ml)也明显抑制与COX-2表达相关的TLR2表达和p38MAPK等激酶活性。结论:伪原薯蓣皂苷通过影响TLR2/p38MAPK通路而抑制下游炎症介质COX-2表达,可能是抑制OX-LDL引起的平滑肌细胞炎性损伤的机制。     

常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制研究

目的 研究常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法 (1)体外实验：用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol·L^-1)常春藤皂苷元处理RAW264.7细胞24 h后,采用MTT法检测细胞存活率。将RAW264.7细胞分为：空白组、脂多糖(LPS)组(1μg·L^-1)、LPS+2.5μmol·L^-1常春藤皂苷元组、LPS+5μmol·L^-1常春藤皂苷元组和LPS+10μmol·L^-1常春藤皂苷元组;采用LPS干预24 h建立体外细胞炎症模型,并用常春藤皂苷元共孵育24 h进行干预。采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测细胞中TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。(2)体内实验：将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组(200 mg·kg^-1)及常春藤皂苷元低、中、高剂量组(12.5、2...     

通腑泄浊法对慢性肾脏病大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的调节作用

目的考察通腑泄浊法对慢性肾脏病大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的调节作用。方法 30只大鼠随机分为空白组、模型组、通腑泄浊法组、大黄配方颗粒组,灌胃给予2.5%腺嘌呤混悬液(200 mg/kg)建立慢性肾脏病大鼠模型。8周给药后,检测肾功能指标、肾脏病理变化、24 h尿蛋白、尿毒症毒素、TGF-β1/p38MAPK信号通路、肾脏纤维化程度。结果与模型组比较,通腑泄浊法组尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胱抑素(CysC)、同型半胱氨酸(HCY)、硫酸吲哚酚(IS)、24 h尿蛋白、IL-6、TGF-β1水平,α-SMA、TGF-β1、p-p38MAPK蛋白表达,肾脏纤维化程度显著降低(P0.05,P0.01)。结论通腑泄浊法可通过减少尿毒症毒素、抑制被活化的TGF-β1/p38MAPK信号通路来延缓慢性肾脏病大鼠肾纤维化进展。     

肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5的影响及机制研究

目的基于Smad通路研究肺痹汤含药血清对白细胞介素17(IL-17)诱导的人胚肺成纤维细胞二倍体(MRC-5)的影响,探讨肺痹汤防治肺间质纤维化的机制。方法建立IL-17诱导的MRC-5模型,通过CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测TGF-β1、Smad 3、Smad 7表达水平,q PCR法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白RNA表达水平,研究肺痹汤含药血清对MRC-5模型是否具有干预效果。结果以IL-17诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化模型,肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5细胞中Smad 3、Smad 7、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白RNA、Ⅲ型胶原蛋RNA表达水平有明显下调作用。结论肺痹汤含药血清可抑制成纤维细胞的增殖,减少TGF-β1的分泌,阻断TGF-β1/Smad信号通路,从而减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,从而改善肺间质纤维化。     

牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化

目的:探讨牡丹皮提取物(丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物)对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法:MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化,用不同剂量的牡丹皮干预;圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-cad和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-I和FN水平。结果:12.5~200μg/m L牡丹皮对A549细胞和MRC-5细胞的增殖没有显著性影响(P0.05)。对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低(P0.01),Collagen-I表达显著升高(P0.01);与TGF-β1组比较,牡丹皮不能显著抑制圆形度的变化(P0.05),但50~200μg/m L牡丹皮能显著抑制E-cad表达的下调(P0.05或0.01),200μg/m L牡丹皮能显著抑制Collagen-I表达的上调(P0.05)。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-I的分泌量显著增加(P0.01);与TGF-β1组比较,100μg/m L和200μg/m L牡丹皮提取物组的上述两种蛋白的分泌量显著减少(P0.05或0.01)。结论:牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示牡丹皮可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。     

丹参酮ⅡA通过NLRP3/Caspase-1信号通路对心肌成纤维细胞的保护作用

目的:探讨丹参酮ⅡA对心肌成纤维细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:分离和培养大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblast, CFs)。以脂多糖(LPS)刺激CFs建立脓毒症心肌损伤体外模型,以不同浓度丹参酮ⅡA预处理CFs 30 min后,给予LPS刺激,设对照组,LPS模型组,LPS+不同浓度TSA(2μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)组;采用蛋白质免疫印迹试验法(Western blotting)检测CFs的NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中IL-1β和IL-18的含量。结果:LPS刺激24 h后,CFs的NLRP3蛋白的表达水平最高。LPS模型组NLRP3和Caspase-1蛋白的表达较对照组明显升高(P0.01)。与LPS模型组比较,丹参酮ⅡA(10μmol/L、50μmol/L)处理组NLRP3和Caspase-1蛋白的表达均明显降低(P0.05);丹参酮ⅡA处理组的IL-1β和IL-18水平均明显低于LPS模型组(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA能抑制LPS诱导的心肌成纤维细胞内NLRP3/Caspase-1炎症反应信号通路分子的表达,这可能是其保护心肌细胞的分子机制之一。     

丹参水溶性物质SA-B对TGF-β1活化细胞内Smad与p38MAPK信号传导通路的抑制作用

目的:探究丹参水溶性物质SA-B对TGF-β1活化细胞内Smad与p38MAPK信号传导通路的抑制作用。方法:将肾小管上皮细胞培养液中加入不同的药物,诱导组加入20μg/ml的马兜铃酸进行诱导;实验A1、A2、A3组,在诱导组的基础上分别加入5、10、20μg/ml的丹参水溶性物质SA-B;对照组不加任何药物。细胞培养24、48、72h后检测各组的TGF-β1-mRND水平、培养液中TGF-β1的含量、Smad以及p38MAPK的表达进行,记录检测结果。结果:诱导组的TGF-β1-mRND水平、TGF-β1蛋白含量分泌与对照组相比,均具有统计学意义(P0.05),且实验组的同期诱导组相比,水平显著下降(P0.05)。诱导组的Smad与p38MAPK合成趋势明显,而实验组Smad与p38MAPK的表达呈现下降趋势。结论:丹参的水溶性物质-SA-B对TGF-β1活化细胞内Smad与p38MAPK信号传导通路具有显著的抑制作用。     

芪归方有效组分治疗特发性肺纤维化的实验研究

目的：基于Smurf2串话TGF-β1/Smad信号通路研究芪归方有效组分对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响及机制。方法：体外予以10 ng/mL TGF-β1培养MRC-5细胞，PCR仪检测α-SMA的mRNA水平判断模型是否成功。设立正常对照组、模型组（10 ng/mL TGF-β1处理）、泼尼松处理组、芪归方有效组分高剂量组、中剂量组、低剂量组，采用CCK-8法检测MRC-5的增殖情况，Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平，RT-PCR检测各组细胞Smurf2的mRNA水平。结果：与正常对照组比较，48 h模型组细胞增殖明显，α-SMA的mRNA水平增加（P<0.01），造模成功。经10 ng/mL TGF-β1处理细胞MRC-5，与正常对照组比较，Smad7、SnoN蛋白水平显著降低，Smurf2蛋白mRNA水平升高（P<0.01或P<0.05）。不同浓度芪归方有效成分处理组细胞增殖降低，可逆转以上各指标的改变，呈一定的量效关系。结论：芪归方有效组分能抑制MRC-5细胞增殖，可通过减少MRC-5细胞中Smurf2所介导的Smad7、SnoN的泛素化，恢复Smad7、SnoN蛋白的表达，从而调节肺纤维化的发生发展。     

丹参酮Ⅱ_A对TGF-β_1诱导的人皮肤成纤维细胞增殖的影响及作用机制

目的研究丹参酮Ⅱ_A(TSA)对TGF-β1诱导的人皮肤成纤维细胞(HSF)的影响及作用机制。方法采用CCK-8法测定不同浓度TSA(2.5、5、10、20μmol/L)干预TGF-β1诱导HSF细胞增殖的影响;采用平板克隆形成实验分别分析不同浓度TSA处理48 h后HSF细胞的克隆形成能力的变化;Western blotting检测HSF细胞中TGF-β1/Smad通路蛋白及α-SMA、VEGFA和COLI蛋白的表达水平。结果 CCK-8和平板克隆形成实验结果表明,TSA显著抑制了HSF细胞的增殖和克隆形成能力(P0.01);Westernblotting结果显示,TSA各浓度组能够显著抑制p-Smad2和p-Smad3蛋白水平,下调p-Smad2/Smad2的比值(P0.01)。5、10、20μmol/L TSA组明显下调p-Smad3/Smad3的比值;另外,HSF细胞中α-SMA、VEGFA和COLI蛋白表达水平随着TSA浓度的升高而显著降低(P0.01)。结论 TSA具有抑制HSF细胞增殖的能力,其作用机制可能与TGF-β1/Smad通路有关。     

血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的研究

目的:探讨血府逐瘀胶囊对子宫内膜细胞炎症模型影响的实验研究。方法:通过酶消化法获得原代子宫内膜细胞,脂多糖(LPS)诱导炎症模型,后实验随机分为5组,正常对照组,模型组(100μg·m L~(-1)LPS),血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组(10、30、100μg·m L~(-1)血府逐瘀胶囊)。MTT法检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL~(-1)β)、IL-6、IL-8蛋白含量,免疫印迹法检测各组细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9),环氧化二酶(COX-2)蛋白表达量及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平,反转录聚合酶连锁反应检测p38 MAPK mRNA含量。结果:与正常组比较,模型组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8、MMP-9及COX-2蛋白表达量都显著提高(P0.01),p38 MAPK磷酸化水平提高(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著提高(P0.01);与模型组比较,血府逐瘀胶囊低、中、高剂量组中细胞活力下降,TNF-α、IL~(-1)β、IL-6、IL-8水平都显著降低(P0.01),p38 MAPK mRNA表达量显著降低(P0.01);血府逐瘀胶囊中、高剂量组中MMP-9及COX-2蛋白表达量及p38 MAPK磷酸化水平下调(P0.01)。结论:血府逐瘀胶囊能显著抑制LPS诱导的子宫内膜细胞炎症,与降低炎症因子表达及p38 MAPK信号通路有关。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞活化的影响

目的:探讨橙皮苷对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成细胞外基质的影响。方法:12.5~200μmol·L~(-1)的橙皮苷作用于MRC-5细胞,得出不影响细胞增殖的剂量用于后续实验。5 ng·m L~(-1)的TGF-β1作用于MRC-5细胞,诱导细胞大量合成或分泌细胞外基质成分,同时用橙皮苷干预。结果:12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷未发现显著影响MRC-5细胞的增殖(P0.05)。受到TGF-β1刺激后,MRC-5细胞的Col-I分泌量和α-SMA及FN的合成量均显著增加(P0.05)。12.5~50μmol·L~(-1)橙皮苷显著减少上述分子的分泌量或合成量(P0.05)。结论:橙皮苷抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞合成或分泌细胞外基质成分。     

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。     

黄芪甲苷和黄芪总皂苷对特发性肺纤维化小鼠治疗作用的对比研究

目的:研究比较黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化模型EMT的干预作用。方法:KM小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松阳性组、黄芪甲苷组、黄芪总皂苷组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素(10 mg·kg~(-1)),造模后治疗组予黄芪甲苷和黄芪总皂苷灌胃,模型组予等量生理盐水灌胃。给药28 d后取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,免疫组化检测EMT相关蛋白表达,western-bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果:BLM诱导肺纤维化TGF-β1明显上调(P0. 05),Smad3表达增强(P 0. 05),EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少(P 0. 05)。黄芪甲苷和黄芪总皂苷对上述改变均具有逆转作用,从而抑制EMT的形成。结论:黄芪甲苷和黄芪总皂苷对BLM诱导的肺纤维化小鼠模型EMT有抑制作用,从而延缓肺纤维化的发生发展,黄芪甲苷和黄芪总皂苷在对于炎症的治疗作用较明显,对于胶原纤维的抑制作用不甚明显,总体看来,黄芪甲苷的抑制作用优于黄芪总皂苷。     

益母草碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大p38 MAPK信号通路和miRNA-1表达的影响

目的:研究益母草碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin,AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的作用,并分析其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路和微小RNA-1(microRNA-1,miRNA-1)表达的影响。方法:以AngⅡ(0. 1μmol·L~(-1))诱导肥大心肌细胞。实验分为空白组,模型组,p38 MAPK抑制剂组(SB203580,10μmol·L~(-1))以及益母草碱低、中、高浓度组(5,10,20μmol·L~(-1))。以图像分析软件测量心肌细胞表面积; Folin-酚试剂法(Lowry)检测心肌细胞蛋白含量;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测心肌细胞miRNA-1 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞内皮素-1(endothelin-1,ET-1),p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK),肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2),β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量明显升高(P 0. 05),ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平明显上调(P 0. 05),α-MHC蛋白及miRNA-1 mRNA的表达水平明显下调(P 0. 05)。与模型组比较,益母草碱高浓度组明显减少肥大心肌细胞表面积、蛋白含量及细胞上清ANP含量(P 0. 05);下调ET-1,p38 MAPK,p-p38 MAPK,MEF2和β-MHC蛋白表达水平(P 0. 05);上调α-MHC蛋白及miRNA-1的表达水平(P 0. 05)。结论:益母草碱高浓度组(20μmol·L~(-1))可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化和上调miRNA-1的表达有关。     

化纤煎冻干粉溶液对TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察化纤煎冻干粉溶液对人胚肺成纤维细胞增殖、活化、分泌细胞外基质的影响,并观察其对TNF-α细胞因子和NF-κB信号通路的调控,探讨化纤煎治疗特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法:采用TGF-β_1诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、活化,化纤煎冻干粉溶液进行干预,CCK8法检测化纤煎冻干粉溶液对MRC-5细胞增殖的影响。qRT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA,观察成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、分泌细胞外基质情况。qRT-PCR法检测TNF-αmRNA、NF-κB p65 mRNA、IκBαmRNA、IKKβmRNA,Western Blot检测NF-κB p65蛋白,观察化纤煎对炎症反应因子TNF-α与炎症信号通路NF-κB的作用。结果:与空白对照组比较,模型对照组的细胞增殖水平显著增加(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎中、高剂量组MRC-5细胞增殖水平均明显下降(P0.01)。模型对照组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达水平显著高于空白对照组(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平显著低于空白对照组(P0.01)。与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB p65 mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),IκBαmRNA、IKKβmRNA表达水平均上升(P0.05或P0.01)。模型对照组NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(P0.01),与模型对照组比较,化纤煎低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:化纤煎冻干粉溶液可能通过抑制炎症因子TNF-α分泌和NF-κB炎症信号通路活化,从而发挥抗纤维化作用。     

白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。