AGEs-RAGE信号通路在糖尿病肾病中的作用机制及中医药研究进展

糖尿病肾病是临床常见的糖尿病并发症,是导致终末期肾脏病的主要原因之一,也是糖尿病患者致死的重要因素之一。晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)-糖基化终末产物受体(receptor of AGEs,RAGE)信号通路是糖尿病肾病发生发展的重要一环,在糖尿病肾病中的作用机制主要有激活核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB),刺激产生血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF),刺激转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的产生,诱导单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)表达的增强,激活P21肾素-血管紧张素导致细胞功能紊乱,激活烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶引起氧化应激等。中医药治疗糖尿病肾病具有整体调节和多通道、多靶点的优势,可通过阻断AGEs-RAGE信号通路改善糖尿病肾病进展。目前研究存在的问题主要有:AGEs-RAGE下游机制复杂,未完全阐明,其与一些关键因子如NF-κB、VGEF、TGF-β1、MCP-1基因的关系还有待进一步研究证实;单味中药和中药复方的活性成分治疗糖尿病肾病的临床研究和动物实验较多,但针对AGEs-RAGE信号通路的研究较少;目前实验大多于体外进行,其机制和作用靶点尚未明确。今后的研究中,需进一步完善实验设计,深入了解AGEs-RAGE信号通路的作用机制,以期为糖尿病肾病的中西医结合治疗提供一定参考。     

糖基化终产物及其受体系统与糖尿病肾病

糖基化终末产物(AGEs)是持续高血糖状态下多种蛋白质非酶糖基化反应的终末产物。AGEs通过与其受体(RAGE)结合,激活细胞内信号通路、增强氧化应激,诱导细胞因子、炎性介质的释放,促进糖尿病肾病的发生、发展。阻断AGEs-RAGE系统在糖尿病肾病中的作用,对糖尿病肾病的防治具有重要意义。     

网络药理学结合转录组学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征作用机制

目的 基于转录组学与网络药理学方法探讨防己黄芪汤治疗肾病综合征的作用机制。方法 收集网络药理学和转录组学的共同靶点,进行GO/KEGG功能富集分析。构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)并进行网络拓扑分析,确定潜在核心靶点。构建通路-靶点网络图,确定发挥关键作用的信号通路。采用qPCR、Western blot法和免疫荧光染色验证大鼠肾脏组织中核心靶点的mRNA和蛋白表达水平。结果 PPI分析得到7个潜在核心靶点AKT1、AMPK、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1和TLR4,主要信号通路为AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、PPAR信号通路、NF-κB信号通路、TGF-β信号通路、P53信号通路、MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路和FoxO信号通路。经动物体内实验验证,防己黄芪汤显著下调AKT1、CPT1B、NF-κB1、P53、TGF-β1、TLR4的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),上调AMPK的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 从网络药理学和转录组学角度初步阐明了防己黄芪汤治疗肾病综合征多成分、多靶点、多途径的整体调节特点...     

桃红四物汤保护2型糖尿病模型大鼠血管损伤的实验研究

目的 观察桃红四物汤对2型糖尿病模型大鼠胸主动脉的保护作用,并探究其作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型,桃红四物汤连续干预模型大鼠8周,观察模型大鼠胸主动脉的病理学变化,Western blot法检测胸主动脉核因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）蛋白表达,RT-qPCR技术检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）mRNA表达,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量。结果 桃红四物汤可显著改善模型大鼠胸主动脉损伤;显著抑制模型大鼠胸主动脉NF-κBp65蛋白和MCP-1、VCAM-1 mRNA的表达（P<0.05）,显著降低血清TNF-α、TGF-β1的含量（P<0.05）。结论 桃红四物汤可有效保护模型大鼠胸主动脉病理损伤,其作用机制与干预NF-κB信号通路,抑制MCP-1、VCAM-1、TNF-α和TGF-β1表达有关。     

RAGE／NF-κB 信号通路调控溶血卵磷脂诱导的人视网膜内皮细胞TGF-β1表达

目的：探讨糖基化终产物受体（RAGE）／核因子κB（NF-κB）信号通路在调控溶血卵磷脂（LPC）诱导的人视网膜内皮细胞（HERCs）转化生长因子β1（TGF-β1）表达中的作用。方法利用 RAGE siRNA 及 NF-κB 抑制剂作用 RAGE／NF-κB 信号通路,实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）及 Western blot 检测 RAGE 及 TGF-β1基因表达。结果LPC 能增加 HERCs 的 RAGE、TGF-β1基因表达,RAGE 基因沉默后能抑制 LPC 诱导的 RAGE、TGF-β1的表达。加入 NF-κB 抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）能显著减少 LPC 诱导的 RAGE、TGF-β1基 因 表达。结论 RAGE／NF-κB 信号通路在调控 LPC 诱导的 HERCs 表达TGF-β1中起重要作用。     

Akt信号通路对肾小管上皮细胞分泌核因子-κB的影响

目的:探讨Akt信号通路在肾小管上皮细胞(NRK-52E)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)表达中的作用。方法:体外培养NRK-52E细胞,分别加入不同浓度(5,15,30g/L)白蛋白和/或Akt抑制剂Ly294002。应用RT-PCR方法测定TGF-β1mRNA表达,Western blot测定Akt和TGF-β1蛋白的表达。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB活化。两两比较用t检验。结果:白蛋白呈浓度依赖性上调肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达增加。TGF-β1蛋白表达也增加。白蛋白激活NF-κB活性,增加磷酸化Akt表达。Ly294002能够抑制白蛋白引起的NF-κB活性以及TGF-β1的表达。NF-κB活化与TGF-β1表达呈显著正相关(r=0.61,P<0.05)。结论:白蛋白刺激肾小管上皮细胞分泌TGF-β1和NF-κB的活性增加,其机制部分依赖于Akt的磷酸化作用。     

六味地黄丸通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路减轻糖尿病肾病炎症及纤维化

【目的】基于核因子kappa B(NF-κB)及转化生长因子β(TGF-β)/Smad双信号通路,观察六味地黄丸对糖尿病肾病炎症及纤维化的影响,探讨其对肾保护作用机制。【方法】将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组10只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法复制糖尿病大鼠模型。中药组给予大鼠六味地黄丸(剂量为6.75 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组、模型组给予大鼠等体积生理盐水灌胃。给药12周后取材,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、24h尿蛋白量(24h-Pro),采用苏木素—伊红(HE)与Masson染色观察肾组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TGF-β、alpha平滑肌抗体(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7的表达。【结果】生化指标结果显示:与正常组比较,模型组大鼠FBG、BUN、SCr、24h-Pro升高(P0.01);六味地黄丸治疗后上述指标均有所改善(P0.05)。HE与Masson染色结果显示,模型组肾小球官腔变窄、系膜基质增生及炎症细胞浸润,而中药组有所改善。Western blot结果显示:与正常组比较,模型组的NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达均呈明显上调,而Smad7表达降低(P0.01);中药组NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达下调,Smad7表达上调(P0.05)。【结论】六味地黄丸具有肾脏保护作用,其机制可能与通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路,从而减轻糖尿病肾病炎症损伤和纤维化有关。     

糖基化终末产物致糖尿病肾病足细胞损伤的信号通路机制研究进展

在糖尿病条件下糖基化终末产物(AGEs)形成速率加快,引起足细胞损伤,进而参与糖尿病肾病(DN)的发生。AGEs形成于葡萄糖和蛋白的相互作用,其毒性可通过不同的机制诱发,AGEs通过与其受体(RAGE)结合后激活磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、肾素-血管紧张素系统、胰岛素/胰岛素样生长因子(IGF)等信号通路,活化下游的靶物质,引起足细胞凋亡、肥大、脱落,进而形成蛋白尿、肾纤维化等,最终导致DN的发生与发展。     

菩人丹超微粉对STZ诱导糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及其对NF-κB信号通路的影响

目的：探讨菩人丹超微粉（PRD）对糖尿病大鼠视网膜的保护作用及其对核因子κB （NF-κB）信号通路的影响,并阐明其作用机制。方法：40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量PRD组和高剂量PRD组。给药3个月后,测定各组大鼠血糖水平,RT-PCR法检测大鼠视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素2（Ang-2） mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠视网膜组织中晚期糖基化终末产物（AGEs）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、NF-κB、VEGF和Ang-2蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,低和高剂量PRD组大鼠血糖水平及视网膜组织中VEGF、Ang-2 mRNA表达水平和AGEs、RAGE、NF-κB、VEGF、Ang-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：PRD可能通过特异性阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路对糖尿病大鼠视网膜起保护作用。     

晚期糖基化终末产物抑制大鼠外周血单个核细胞及成骨细胞增殖的作用机制

目的: 探索核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)干预大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及下颌成骨细胞(osteoblasts,OB)后的作用机制,为进一步研究糖尿病所致牙周组织炎症的临床治疗提供一定的实验基础和理论依据。方法: 采用经典的制备方法获得AGEs,体外分离培养大鼠OB、PBMCs。应用CCK-8活力测试检测AGEs不同浓度、不同时间对细胞活力的影响。采用Western blot及qRT-PCR检测NF-κB、PI3K/PKB以及MAPK信号通路相关基因的表达变化。结果: 体外成功分离并培养出PBMCs和OB,PBMCs和OB的细胞活力与AGEs的作用浓度、时间以及二者交互作用均显著相关,随着AGEs刺激浓度及时间的增加,PBMCs和OB活力显著降低(P<0.001)。AGEs刺激可显著增加PBMCs 中NF-κB的表达,并使肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量增加(P<0.01);抑制NF-κB通路后,TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01)。AGEs刺激OB后,随着作用时间的延长,NF-κB p65、JNK、p38磷酸化和非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05),而IκB磷酸化蛋白表达显著升高的同时还伴有非磷酸化蛋白表达下降(P<0.01)。在mRNA水平,NF-κB p65、JNK、p38的表达显著升高,IκB mRNA表达显著下降(P<0.05);而Akt不论是磷酸化及非磷酸化蛋白表达,还是在mRNA水平的表达,差异均无统计学意义(P>0.05);加入MAPK信号通路抑制剂后,NF-κB p65、p38、JNK磷酸化和非磷酸化蛋白表达较只加了AGEs组均显著降低,IκB磷酸化蛋白显著降低,非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05);qRT-PCR结果发现,与只加了AGEs组相比,加入JNK通路阻断剂后IκB表达显著升高(P<0.05),NF-κB p65、p38、JNK的表达呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P>0.05);与只加了AGEs组相比,加入p38信号通路阻断剂后NF-κB p65、p38、JNK的表达显著降低(P<0.05),IκB表达显著升高(P<0.05);而Akt改变在蛋白水平和mRNA水平依然未见统计学意义(P>0.05)。结论: AGEs能够抑制PBMCs和OB的增殖,NF-κB和MAPK信号通路很有可能参与调控过程,但与PI3K/PKB信号通路无关。     

中药调控NF-κB信号通路干预胃溃疡研究进展

胃溃疡(gastric ulcer, GU)是一种临床常见多发病。GU易反复发作,长期应用抑酸药治疗不良反应大。中医药对于GU的治疗具有多靶点、多疗效、不良反应少等优点。研究表明,胃溃疡发生机制与氧化应激、炎性反应等密切相关,核因子-κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB)作为炎性反应的核心因子,参与多种炎性、氧化反应。故本文以中医药为基础,NF-κB为切入点,总结中医药干预NF-κB信号通路治疗GU相关文献,发现抑制NF-κB信号通路,可通过调控炎症、氧化、细胞凋亡等机制,下调肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等因子,降低超氧化物歧化酶(auperoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO),促细胞凋亡蛋白、caspase-3活性,增加还原型谷胱甘肽(glutat...     

转化生长因子β1对肺间质纤维化发病机制的影响

肺纤维化发病机制目前多不明确,但转化生长因子β (TGF-β)是与肺纤维化关系较为密切的细胞因子,而TGF-β1又是重中之重.通过研究TGF-β1的信号传导[TGF-β 1/Smad信号转导途径、TGF-β 1活化Pl 3K/Akt信号通路、TGF-β1的MAPK信号传导途径、核转录因子(NF-κB)通路等]以及TGF-β 1的信号传导在肺纤维化中的影响来探究TGF-β 1对肺纤维化发病的影响,抑制TGF-β1对成纤维细胞的刺激作用.希望以TGF-β1为靶点通过阻断其对肺纤维化发病的影响来寻找对肺间质纤维化的治疗新途径.     

基于“AGEs-RAGE信号通路”探索从脾论治糖尿病心肌病的科学内涵

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)作为糖尿病常见的慢性并发症之一,对患者的生存质量及生命安全均产生了许多不利的影响。中医认为脾主运化,其功能包括输布水谷精微物质至周身,糖尿病心肌病的发生与脾气关系密切,因此在论治方面除了从本脏入手,益气健脾也成为其治疗过程中重要的一还。晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)是由体内过量的糖类和蛋白质在各组织、器官中经过糖基化过程后形成的非酶产物,AGEs可与各组织细胞表面的晚期糖基化终末产物受体(receptor of AGEs,RAGE)结合,激活氧化应激及炎症反应,从而参与糖尿病心肌病发生发展。本文将从“AGEs-RAGE信号通路”角度探析从脾论治糖尿病心肌病,串联其中的科学内涵可为“益气健脾”法治疗糖尿病心肌病提供更多的理论基础, 拓宽未来动物研究及临床研究的方向。     

黄芪多糖对肾阳虚型糖尿病大鼠肾组织NF-κB、TGF-β1的影响

目的:研究黄芪多糖(APS)对肾阳虚型糖尿病大鼠肾脏核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)过度表达的抑制作用。方法:将纯种SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、苯那普利治疗组和APS治疗组。实验第8周时统一处死,以RT-PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA表达,并观察肾脏超微结构变化及肾重/体重,测定大鼠血糖(BS)、血脂及肾功能。结果:与苯那普利治疗组相比,APS能使大鼠肾组织NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA表达量减少,肾脏病理改变减轻,还可明显降低肾重/体重、血糖、血脂,改善肾功能。结论:糖尿病大鼠肾组织NF-κB、TGF-β1活性增加,APS能抑制NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA的过度表达,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

糖基化终末产物对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌及P65表达的影响

目的:研究糖基化终末产物(AGEs)对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌的影响及其可能的机制。方法:用体外酶消化结合组织块法培养人牙龈成纤维细胞;将细胞分为对照组和实验组,对照组为正常培养液培养的人牙龈成纤维细胞;实验组为含AGEs终浓度分别为1、5、10、20μL/mL培养液培养的人牙龈成纤维细胞;Real time PCR检测炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α、NF-κB信号通路关键分子P65mRNA的表达情况。结果:酶消化加组织块法培养出来的牙龈成纤维细胞大多呈长梭形,胞液丰满;Real time PCR检测结果表明,与对照组相比,不同浓度AGEs刺激下的牙龈成纤维细胞IL-6表达量均升高,5、10、20μL/mL浓度AGEs刺激下TNF-α、P65的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖基化终末产物可以导致牙龈成纤维细胞炎症因子的表达升高,其机制可能是通过激活NF-κB信号通路,从而影响了糖尿病患者的牙龈健康。     

基于网络药理学探讨红曲-山楂治疗NASH的作用机制及关于NF-κB信号通路的机制验证

[目的] 基于网络药理学预测红曲-山楂治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)的潜在分子机制，并采用蛋氨酸-胆碱缺乏NASH模型对核心信号通路之一的核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路进行实验验证。[方法] 通过中医药数据和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP)、PubChem、Swiss Target Prediction等数据库获取红曲、山楂的有效成分及靶点，运用基因组注释数据平台(Genome Annotation Database Platform，GeneCard)、在线人类孟德尔遗传(Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM)等数据库获取NASH的疾病靶点，结合 Cytoscape软件构建药物-成分-靶点拓扑图；取交集靶点并筛选核心共靶基因，应用 STRING数据库构建蛋白互作(protein-protein interaction，PPI)网络；应用Metascape进行基因本体(gene ontology，GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)富集分析。建立大鼠NASH模型，通过一般情况、生化检验、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、Masson染色、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、免疫印迹等方式验证网络药理学分析结果。[结果] 通过网络药理学共筛选出18个活性成分，54个关键靶点，GO分析结果涉及炎症、代谢、自噬、肿瘤等，KEGG结果涉及NF-κB等经典信号通路。动物实验结果显示，红曲-山楂干预可显著改善NASH小鼠脂肪变性及炎症改变情况，降低组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等炎症因子水平，降低核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)p65、NF-κB p50、NF-κB抑制蛋白-α(inhibitor of NF-κB-α，IκB-α)基因水平，下调NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB-p65(phospho-NF-κB-p65，p-NF-κB p65)蛋白的表达。[结论] 红曲-山楂可能通过调控NF-κB信号通路，改善NASH模型小鼠的症状，本研究结果可为红曲-山楂的临床应用提供依据。     

TGF-β1/SMAD在糖尿病肾病中的作用机制与研究进展

糖尿病肾病是糖尿病常见的并发症,也是导致终末期肾病的重要原因之一。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)/SMAD信号活化是糖尿病肾病发病及进展的主要机制之一。研究表明,TGF-β1（前体、本体、受体）及其下游信号蛋白（SMAD3、SMAD7等）的活化,在糖尿病肾脏损伤中起了关键的作用。此外,TGF-β1/SMAD可通过多种miRNA和lncRNA等介导糖尿病肾病的发病及进展。TGF-β1、SMAD3和SMAD7作为糖尿病肾脏损伤的主要蛋白,成为防治糖尿病肾病的关键靶点。近期临床试验显示TGF-β1单克隆抗体治疗无法有效减缓糖尿病肾病。提示在TGF-β1/SMAD信号上游抑制TGF-β1/SMAD并无减轻临床症状的作用,可能与其具有多种生物效应有关。靶向抑制TGF-β1下游信号分子（如SMAD3、SMAD7）可能是减轻糖尿病肾脏损伤的有效方法。本文总结了与TGF-β1/SMAD相关的糖尿病肾病发病机制,并讨论抗TGF-β1/SMAD信号防治糖尿病肾病的可能靶点。     

硝基酪氨酸对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB、MCP-1 及TGF-β1表达的影响

目的观察硝基酪氨酸（NT）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏核因子-κB（NF-κB）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和转化生长
因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨其在DN发生发展中的作用机制。方法用链脲佐菌素腹腔注射法建立DN大鼠模型,造模
成功的大鼠随机分3组：DN模型组、DN+NT组和DN+NT+Ebselen组（NT抑制剂）,另设正常对照组。各组分别干预8周后,观
察24 h尿蛋白定量变化,采用免疫组织化学染色检测肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检
测肾组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 mRNA表达,光镜观察肾脏病理改变。结果与DN模型组比较,DN+NT组大鼠24 h尿蛋
白定量、肾脏组织中NF-κB、MCP-1和TGF-β1的蛋白及mRNA水平均显著增加,肾脏病理改变加重;NT抑制剂Ebselen可明显
减轻这些变化。结论硝基酪氨酸可上调DN大鼠肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 蛋白及其mRNA的表达,加重炎性反应,
促进DN的进展。
     

非对称二甲基精氨酸对肝星状细胞的激活作用及其机制

目的:研究内源性一氧化氮合酶抑制物非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响及其机制.方法:原代分离和培养SD大鼠HSC细胞,加入不同浓度的ADMA(1,3或10 μmol/L)孵育12至48 h.细胞组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;酶联免疫吸附试验测定Ⅰ型胶原的合成;逆转录PCR检测HSC转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA水平;荧光发光法检测细胞内氧自由基(reactive oxidant species,ROS)生成;凝胶电泳迁移率试验检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性.结果:ADMA能呈浓度和时间依赖性上调HSC TGF-β1 mRNA水平,增加α-SMA阳性细胞数和促进Ⅰ型胶原的合成.同时,ADMA能显著增加细胞内ROS生成和诱导NF-κB活化,而预处理抗氧化剂四氧化吡咯二硫代氨基甲酸酯能抑制ADMA(10 μmol/L)诱导的NF-κB活化和TGF-β1 mRNA水平上调.结论:ADMA能诱导HSC的激活(包括收缩和分泌功能),其作用与激活细胞内ROS-NF-κB途径,上调TGF-β1表达有关.因此,ADMA可能是一种新的HSC功能调节因子,在肝纤维化的发生发展中起重要作用.