Toll样受体4在高迁移率族蛋白B1影响小鼠调节性T细胞免疫功能中的作用

目的 探讨腹腔注射高迁移率族蛋白B1(HMGB1)后不同基因型小鼠天然调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)免疫功能的改变及其受体作用机制.方法 分别给C3H/HeN和C3H/HeJ[分别为Toll样受体4(TLR4)野生型(TLR4~(+/+))和天然突变型(TLR4~(-/-)]小鼠腹腔注射不同剂量HMGB1(0、10、20μg/只),饲养48 h后采用免疫磁珠法分离小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg.体外培养12 h后采用流式细胞仪检测CD4~+CD25~+Treg表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)表达强度,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CD4~+CD25~+Treg生成白细胞介素(IL)-10量.结果 与对照组比较,20 μg HMGB1攻击后C3H/HeN小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4水平显著下降(78.70±11.42与60.76±7.64,P<0.01),同时细胞牛成IL-10量也明显降低[(96.89±6.25)ng/L与(47.11±4.25)ng/L,P<0.01];但不同剂量HMGB1攻击可引起C3H/HeJ小鼠CD4~+CD25~+Treg表达CTLA-4明显上调和生成IL-10量不同程度地增加(P<0.01).结论 HMGB1攻击可显著影响CD4~+CD25~+Treg介导的免疫状态,TLR4在HMGB1诱导CD4~+CD25~+Treg免疫活性过程中发挥了重要负向调控作用.     

CD4+CD25+Treg细胞对肿瘤特异性CTL杀伤效果的影响

目的 探讨CD4+CD25+Treg细胞对肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)杀伤效果的影响及机制.方法 将C57BL/6小鼠80只随机分为4组,每组20只.A组:树突状细胞(DC)与T细胞共同培养前删除CD4+CD25+Treg;B组:DC与T细胞共同培养后删除CD4+CD25+Treg;C组:DC与T细胞共同培养时不删除CD4+CD25+Treg;对照组:无DC诱导的T细胞.应用脾脏来源DC细胞诱导T细胞制备CTL,在CTL形成的不同时期采用MACS法删除CD4+CD25+Treg.应用噻唑蓝(MTY)比色法检测不同组别CTL对B16黑色素瘤细胞的杀伤效果.同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ含量变化.结果 3组实验组CTL杀伤率明显高于对照组(P<0.05).删除CD4+CD25+Treg的A组、B组CTL杀伤率明显高于未删除的C组(P<0.05).但CTL形成的不同时期删除CD4+CD25+Treg对CTL杀伤率的影响无统计学意义(P>0.05).IL-2、IFN-γ含量变化与杀伤率呈现相同的变化趋势.结论 删除CD4+CD25+Treg细胞可明显提高CTL的杀伤效果,是消除肿瘤免疫耐受机制的新途径.     

IL-2调控慢性丙型肝炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制效应

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血中HCV特异性CD4+CD25+调节性T细胞的抑制活性以及外源性IL-2对CD4+CD25+Treg细胞抑制效应的影响.方法 采用免疫磁珠分选18例慢性丙型肝炎患者与15例正常人外周血中CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25- T细胞,在此两种细胞共同培养体系中加入不同浓度外源性IL-2和IL-4,检测CD4+CD25+T细胞的抑制能力以及对HCV特异性CD4+T细胞的影响.结果 与正常对照相比,慢性丙型肝炎患者的CD4+CD25+Treg细胞的抑制增殖活性高 (P=0.034);CD4+CD25+ Treg细胞显著抑制HCV特异性CD4+T细胞的增殖;当IL-2浓度为2 000 U/ml时,能够显著改变CD4+CD25+ Treg细胞的低增殖能力,而且IL-2与IL-4的共同作用改变更明显,其中高浓度的IL-2能够阻断CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25- T细胞的抑制功能.结论 慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的抑制活性增强,高浓度IL-2可阻断CD4+CD25+Treg细胞的抑制效应.     

胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞与IL-4、IFN-γ的关系

目的 研究胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量变化及其相互关系.方法 分别应用流式细胞仪及ELISA法检测25例胰腺癌患者和45名健康人外周血中CD4-CD8-T细胞比例和IL-4、IFN-γ的含量.结果 25例胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(4.2±1.7)%,45名健康人CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(6.3±2.6)%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IL-4含量为(86.3±23.3)fg/L,健康对照组外周血中IL-4含量为(56.2±9.2)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IFN-γ含量为(16.4±4.8)fg/L,健康对照组外周血中IFN-γ含量为(27.4±3.8)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者手术后CD4-CD8-T细胞比例显著高于术前(P＜0.01).胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4含量呈负相关,与IFN-γ含量呈正相关;胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞比例、IL-4含量与肿瘤临床分期有关(P＜0.05),与肿瘤分化程度均无关(P＞0.05),IFN-γ含量与肿瘤临床分期和肿瘤分化程度均无关(P＞0.05).结论 CD4-CD8-T细胞在胰腺癌患者外周血中比例降低,CD4-CD8-T细胞可能通过影响IFN-γ的分泌参与胰腺癌的发生和发展.     

小鼠CD4+CD25+T调节细胞的分离、纯化及其功能检测

目的 探讨小鼠CD4+CD25+T调节细胞(Treg)的分离培养、纯化及其部分功能检测.方法 采用免疫磁珠分离法(MACS)对分离小鼠的脾淋巴细胞进行分选CD4+CD25+Treg细胞,锥虫蓝细胞染色检测其活性,流式细胞仪检测分选所得活性细胞的纯度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的浓度.结果 MACS分离的CD4+CD25+Treg细胞的纯度达83%～96%.体外培养中Treg组、T组和混合组IL-2和IL-10的平均水平分别为:(10.25±2.31)、(40.32±8.05)ng/L;(5 8.21±13.05)、(11.52±3.01)ng/L;(39.54±12.82)、(31.25±4.36)ng/L,数据差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 采用MACS系统两步法,可获得高纯度、具有免疫抑制功能的Treg细胞,该细胞对CD4+CD25-T细胞的免疫抑制作用可能是通过IL-10对IL-2的调节作用实现的.     

胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素-2、-6、-7水平测定的研究

目的 检测60例胰腺癌患者及60例正常人外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-7水平,探讨其与胰腺癌的关系.方法 采用流式细胞仪检测60例胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞水平;酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测60例胰腺癌患者外周血清IL-2、IL-6、IL-7水平,并与60名健康人群进行对照比较.结果 胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞占CD3+T细胞的比例为(3.43±0.88)％,低于正常人群(5.66±1.23)％(P＜0.05);胰腺癌患者外周血中IL-2水平为(2.00 ±0.42) ng/L,低于正常对照组(5.50 ±0.64) ng/L(P＜0.05);IL-6水平为(210.68±10.82) ng/L,高于正常对照组(1.77 ±0.22) ng/L(P＜0.05);IL-7水平为(1.89±0.32) ng/L,低于正常对照组(6.35 ±0.56) ng/L(P ＜0.05).结论 胰腺癌患者外周血中CD4-CD8-T细胞的比例降低,IL-2、IL-7水平降低及IL-6水平升高可能与胰腺癌的发生有关.     

血必净促进内毒素/脂多糖刺激调节性T淋巴细胞凋亡并介导辅助性T淋巴细胞漂移的作用

目的 了解血必净注射液促进LPS刺激CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)凋亡过程及介导辅助性T淋巴细胞(Th)漂移的调节作用.方法 免疫磁珠法分选获得大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,分为常规培养对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+LPS组、抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组,培养3 d后应用流式细胞术检测Treg细胞凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达.将CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25+T淋巴细胞1:1培养,伴刀豆球蛋白A刺激68 h,检测上清液中Th1分泌的γ干扰素(IFN-γ)、Th2分泌的IL-4、Th17分泌的IL-17水平.结果 抗CD3/CD28+LPS+血必净组Treg细胞凋亡率为(45.1±2.7)%,明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.4±1.6)%,P＜0.01];2组Foxp3平均荧光强度分别为95±9、140±18,差异有统计学意义(P＜0.01).同时,抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ分泌水平显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01),IL-4则呈相反变化(P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ/IL-4较对照组升高(P＜0.01);抗CD3/CD28+血必净组IL-17分泌水平较抗CD3/CD28组明显下降(P＜0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞活化介导了Th1向Th2功能性极化;血必净对LPS诱导的T淋巴细胞免疫功能有重要调节作用,可促进CD4+CD25+Treg细胞凋亡并介导Th2向Th1漂移,从而缓解细胞免疫抑制状态.     

CD4+CD25-T淋巴细胞转化为CD4-CD8-调节T细胞的体外实验研究

目的 探讨体外诱导和纯化CD4+ CD25-T淋巴细胞(effector T cell,Teff)转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞(double negative regulatory T cell,DN Treg)的最适条件.方法 采用免疫磁珠分选方法提取C57BL/6小鼠的CD4+ CD25-T淋巴细胞、DBA/2小鼠的成熟树突状细胞共培养,加入不同剂量的IL-2,通过流式细胞检测CD4-CD8-T细胞的转化比例并确定最适条件,免疫磁珠阴性选择分选提纯转化的CD3+ CI4-CD8-T细胞,流式细胞仪检测转化的CD4-CD8-调节T细胞对CD4+ CD25-效应T细胞增殖抑制情况.结果 CD4+ CD25-T淋巴细胞与DBA/2小鼠的树突状细胞共培养6d后检测CD4-CD8-调节T细胞的转化比率为6.21％ ±2.03％,实验组加入不同浓度IL-2的转化率:A组(25 ng/ml)为14.77％±2.15％,B组(50 ng/ml)为21.29％±2.68％,C组(75 ng/ml)为43.45％ ±4.45％,D组(100 ng/ml)为28.59％±3.05％,IL-2浓度在75 ng/ml时,转化获得率最高(C组与对照组、实验A、B、D组比较分别t=10.700,8.288,6.158,3.932,均P＜0.05);分离提纯CD4-CD8-双阴性调节细胞纯度达到98.10％,CD4-CD8-双阴性调节细胞与CFSE染色的CD4+ CD25-T淋巴细胞、小鼠树突状细胞共培养6d,实验组增殖指数为1.15明显低于对照组2.07.结论 小鼠CD4+ CW25-T淋巴细胞在体外,成熟树突状细胞刺激下可转化为CD4-CD8-双阴性调节T细胞,IL-2可显著提高其转化率.     

IKK2dn转染树突状细胞诱导产生的CD4+CD25-T细胞的筛选及鉴定

目的 探讨从转染IKK2dn并负载供者抗原的未成熟树突状细胞(imDC)诱导产生的调节性T细胞(Treg)中筛选CD4+ CD25 - Treg的方法,并进行鉴定.方法 Lewis大鼠骨髓源性imDC,转染IKK2dn后负载供者BN大鼠抗原,与Lewis大鼠T细胞进行体外混合淋巴细胞反应(MLR)诱导产生Treg,用免疫磁珠法(MACS)筛选出CD4+ CD25 -T细胞,流式细胞仪(FCM)检测细胞纯度.加入CD4+ CD25 -T细胞行再次MLR检测其抑制T细胞增殖的作用.结果 经MACS筛选,CD4+ CD25 -T细胞纯度为(95.78±1.25)％.再次MLR结果显示CD4+ CD25 -T细胞组的吸光度值为(0.106±0.006),低于BN抗原组(0.189±0.007)、Adv0-CD4+T细胞组(0.419±0.014)及第三方供者抗原组(0.200±0.008),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染IKK2dn并负载抗原的imDC诱导产生的Treg,经MACS筛选可以获得高纯度的CD4+CD25-T细胞,对同种T细胞增殖具有针对供者的特异性免疫抑制作用.     

调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究

目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞表达T淋巴细胞毒性相关抗原-4水平的影响及受体机制

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠调节性T细胞(Treg)表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4水平的影响及其受体机制.方法 免疫磁珠法分离正常C3H/HeN[(TOU样受体4(TLR4)野生型)]小鼠脾脏CD4+ CD25+Treg,接种于细胞培养板,各细胞培养孔均加入可溶性抗CD3和可溶性抗CD28作为辅助活化剂.应用/不应用抗TLR4抗体预封闭CD4+CD25+Treg表面TLR4,观察HMGBl刺激CD4+CD25+Treg表达CTLA-4的时间-效应关系和剂量-效应关系.结果 HMGBl(0.1 mg/L)刺激CD4+CD25+Treg,CTLA-4在24、48、72 h表达水平(47.56±5.49、35.83±4.96和31.94±4.65)较正常对照组水平(79.42±2.79)均显著下降(P<0.01),以48、72h组下降尤为明显;不同剂量HMGBI刺激CD4+CD25+Treg48h其CTLA-4表达水平显著下调(P<0.01),其中以0.1 mg/L和1 mg/L组表达水平(分别为33.34±4.00和29.90±4.30)降低幅度尤为明显.经封闭TLR4预处理后,给予HMGBl(0.1 mg/L)刺激24、48和72 h CD4+CD25+Treg表达CTLA-4的水平(90.39±8.80、93.13.4-4.80和80.29±4.31)均较对正常照组(71.03±4.34)显著增强(P<0.05或P<0.01);而不同剂量HMGBl刺激CD4+ CD25+Treg 48 h,仅以0.1 mg/L组能显著上调CTLA-4的表达水平(P<0.01).结论 HMGB1通过TLR4负向调节CIM+ CIY25+ Treg表达CTLA-4水平,从而影响Treg的免疫活性.     

Requirement of CD28 signaling in homeostasis/survival of TGF-beta converted CD4+CD25+ Tregs from thymic CD4+CD25- single positive T cells

BACKGROUND: The thymus is a major organ that generates "natural" CD4+CD25+ T regulatory cells (Tregs). However, the detailed pathway(s) by which Tregs are developed remain a mystery. CD28-/- mice have profound decrease in Tregs, but the underlying molecular events remain largely undefined. METHODS: CD4+CD25+ thymocytes from wildtype and CD28-/- mice were cultured with T-cell receptor (TCR) and transforming growth factor (TGF)-beta stimulation to generate CD25+ Tregs and their phenotype and function were studied in vitro and in vivo. RESULTS: TGF-beta induced Foxp3 expression in thymic CD4+CD25+ cells and converted them to CD25+ Tregs. The converted Tregs expressed high levels of CD25, whereas the non-suppressive CD4+ T cells from the control cultures expressed CD25(low). CD28-/- thymic CD4+CD25+ cells showed transit lower levels of Foxp3 upon TCR and TGF-beta stimulation early in culture, but the defect in Foxp3 expression was restored to normal levels after 60-72 hr. Consequently, TGF-beta converted CD28-/- CD25+ cells to CD25+ Tregs that were indistinguishable from those of the wildtype mice. However, the total number of TGF-beta converted CD28-/- Tregs was significantly lower than that of wildtype mice. In vivo, TGF-beta converted CD28-/- CD25+ Tregs were less viable than those from the wildtype mice. Importantly, TGF-beta induced alloantigen specific CD4+CD25+ Tregs from thymic CD25-SP cells which also required CD28 to maintain their survival. CONCLUSIONS: TGF-beta and TCR co-stimulation converts thymic CD4+CD25+ T cells into CD4+CD25+ Tregs by inducing Foxp3, and the contribution of CD28 stimulation to this process is mainly through maintaining survival of the induced Tregs.     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对效应T细胞增殖和分泌功能的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨血必净注射液对脓毒症大鼠CD+4CD+25调节性T细胞(Treg)凋亡的影响及与效应T细胞(Teff)增殖及分泌功能的关系.方法 Wister大鼠随机分为对照组、假于术组、肓肠结扎穿孔(CLP)组和血必净治疗组,每组8只;于第3天采用免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD+4CD25+Treg和CD+4CD25-T细胞.CD+4CD25+Treg培养12 h后检测凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达及门细胞介素(IL)-10的分泌.将Treg与CD+4CD25-T细胞共培养,并以刀豆素A刺激后观察Treg对Teff增殖活性和细胞培养上清IL-2/可溶性IL-2受体α(slL-2Rα)含量的影响.结果 CLP组CD+4CD25+Treg细胞凋亡率<对照组和假于术组(P<0.01),而血必净治疗组明显>CLP组(P<0.01).与CLP组比较,血必净治疗组CD+4CD25+Treg细胞Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌显著下降(P<0.01).同时,CLP组Teff增殖反应抑制率明显>对照组,而血必净组其抑制率CLP组,sll-2Rα低于CLP组(P<0.01).结论 脓毒症病理过程中CD+4CD25+Treg细胞对Teff抑制效应明显增强,而血必净注射液能诱导Treg细胞凋亡,减轻Treg对Teff的抑制作用.     

Generation and expansion of human CD4+ CD25+ regulatory T cells with indirect allospecificity: Potential reagents to promote donor-specific transplantation tolerance

BACKGROUND: Harnessing naturally arising CD4+ CD25+ regulatory T cells (Tregs) for potential adoptive cell therapy is hampered by their innate autoreactivity and their limited number. METHODS: CD4+ CD25+ Tregs were purified from peripheral blood of human leukocyte antigen (HLA) DR1*0101+ A2- individuals, and stimulated with autologous monocyte-derived dendritic cells (DCs). RESULTS: Here we show that CD4+ CD25+ Tregs specific for an HLA A2 (103-120) peptide can be selected from the peripheral blood CD4+ CD25+ T cell population of a healthy individual and detected using a tetramer comprised of HLA DRB1*0101 and the A2 peptide. The selected cells can be expanded substantially (i.e., a 1600-fold increase over a two-week period) by T-cell receptor (TCR) stimulation and high-doses of interleukin-2 (IL-2). The CD4+ CD25+Tregs with indirect allospecificity for the A2 peptide showed more potent antigen-specific suppression than polyclonal CD4+ CD25+ Tregs. CONCLUSIONS: These data may pave the way for clinical studies using CD4+ CD25+ Tregs with indirect allospecificity as therapeutic reagents for the induction of donor-specific transplantation tolerance.     

阿尔茨海默病患者外周血调节性T细胞稳定性的分析

目的:探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血调节性T细胞(Tregs)稳定性的特点.方法:分选AD患者外周血Tregs,通过流式细胞仪检测特征性标志物叉头转录因子(Foxp)-3和表面分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4及膜相关转化性生长因子(TGF)-β的表达水平,通过ELISA检测特征性细胞因子TGF-β和白细胞介素(IL)-10分泌水平,并进一步通过Transwell培养板培养方法,分析AD患者Tregs发挥免疫抑制功能的特点.结果:与对照组比较,AD组患者细微精神状态语言检查(MMSE)评分明显降低(P＜0.01);AD组外周血Tregs数目、特征性标志物Foxp-3及细胞表面标志物CTLA-4和膜相关TGF-β表达水平均均低于对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01);特征性细胞因子TGF-β和IL-10分泌水平均无明显变化(P＞0.05);经Transwell培养板培养24h,能够降低AD组Tregs对CD4+ CD25-T细胞增殖功能的抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:AD能够降低患者外周血Tregs稳定性,其机制主要是降低其以细胞接触途径介导的免疫调节作用.     

吗替麦考酚酯抑制小鼠TH17细胞的分化和增殖

目的 通过观察吗替麦考酚酯(MMF)对小鼠辅助性T淋巴细胞17(TH 17细胞)分化和增殖的影响,探讨MMF的免疫抑制作用及其机制.方法 采用随机数字表法将小鼠分为MMF组与对照组,每组8只.MMF组小鼠每天给予MMF 40 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组小鼠每天给予等体积生理盐水灌胃.3周后取小鼠外周血和脾脏,采用流式细胞术检测小鼠外周血和脾细胞中TH17细胞和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的比例,并计算出TH 17细胞与Treg细胞的比值;采用酶联免疫吸附试验法分别检测两组小鼠血清中白细胞介素(IL)-17和IL-23的浓度.结果 MMF组外周血和脾细胞中TH17细胞比例分别为(1.95±0.08)％和(2.42±0.06)％,对照组分别为(3.19±0.07)％和(4.21±0.25)％,两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).MMF组外周血和脾细胞中TH 17细胞与Treg细胞的比值均显著低于对照组(P＜0.05).MMF组小鼠血清IL-17水平明显低于对照组(P＜0.05),而血清IL-23水平高于对照组(P＜0.05).结论 MMF能够明显抑制小鼠体内TH17细胞的分化与增殖,降低TH 17细胞与Treg细胞的比值,减少IL-17的分泌,有利于诱导免疫耐受.     

外源性IL-2对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞影响的实验研究

目的：探讨IL-2对CD4＋CD25＋调节性T细胞（Tregs）的增殖及功能的影响。方法：提取B6小鼠脾脏细胞,流式细胞仪分离CD4＋CD25＋Tregs,将新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs与抗CD3单克隆抗体、同种同系抗原递呈细胞（APCs）及外源性IL-2共同培养,测定其增殖活性;并检测体外扩增后的CD4＋CD25＋Tregs的免疫抑制活性及其Foxp3的表达。结果：与外源性IL-2共同培养的CD4＋CD25＋Tregs增殖程度强烈,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs抑制CD4＋CD25-T细胞增殖活性的能力与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs相似（P〉0.05）。体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs的Foxp3表达与新鲜分离的CD4＋CD25＋Tregs亦相似（P〉0.05）。结论：外源性IL-2能够消除CD4＋CD25＋Tregs的无反应状态,且体外扩增的CD4＋CD25＋Tregs保持了其抑制活性。