米诺环素调控P2X7受体抑制BV-2细胞活化的研究*

 目的：探索P2X7受体在米诺环素(Mino)抑制脂多糖（LPS）刺激的BV-2细胞活化中的作用。方法：将体外培养的BV-2细胞分为5组：空白对照组、LPS处理组、LPS+ 0.1 μmol/L Mino组、LPS+ 1 μmol/L Mino组和LPS+ 10 μmol/L Mino组。分组处理8 h后行real-time PCR检测P2X7受体mRNA表达;处理24 h后观察各组细胞形态学变化,Western blotting检测P2X7受体蛋白表达,取细胞培养液上清行ELISA检测TNF-α和IL-1β的分泌情况。结果：经LPS处理后,BV-2细胞P2X7受体mRNA及蛋白的表达均升高,细胞培养液上清的TNF-α和IL-1β表达升高,同时伴有形态学的改变,而0.1～10 μmol/L Mino能抑制这一趋势,差异有统计学意义（P<0.01）。 结论： Mino抑制BV-2细胞活化的机制可能与抑制P2X7受体的活性相关。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

阿托伐他汀对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠主动脉内皮细胞PAPP-A表达的影响

目的: 研究阿托伐他汀对炎症因子肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠主动脉内皮细胞表达妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的影响。方法: 原代培养大鼠主动脉内皮细胞,选择生长良好的第3-4代细胞用于实验。实验分组:(1)空白对照组 :不加干预措施原培养液继续培养;(2)阿托伐他汀浓度组:加入浓度分别为 0.1、1、10 μmol/L的阿托伐他汀作用24 h;(3)阿托伐他汀时间组:加入浓度为10 μmol/L的阿托伐他汀分别作用6、12、24 h;(4)阿托伐他汀干预组:加入TNF-α(60 μg/L)或者IL-1β(20 μg/L)作用1 h后,再加入不同浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)进行培养,分别于作用6、12、24 h终止实验。MTT法观察药物对细胞增殖的影响, RT-PCR技术测定细胞中PAPP-A mRNA的表达, ELISA方法检测上清液中PAPP-A蛋白水平。结果: (1) 外源性加入阿托伐他汀及TNF-α或者IL-1β后,分别作用3、6、12、24、48 h,同对照组相比,细胞增殖能力无明显变化(P<0.05),说明干预药物本身对细胞没有毒性作用。(2)单独加入阿托伐他汀,细胞PAPP-A表达水平与空白对照组比较没有明显差异(P<0.05)。(3)炎症因子作用一段时间后再加入阿托伐他汀,PAPP-A mRNA和蛋白表达水平随着阿托伐他汀浓度和作用时间的增加而逐渐降低,有一定的浓度-时间依赖关系,与 TNF-α组和IL-1β组比较明显下降(P<0.05)。结论: 阿托伐他汀本身对细胞表达PAPP-A没有影响,但在一定程度上抑制TNF-α和IL-1β诱导的内皮细胞PAPP-A的表达,并有浓度-时间依赖关系。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。     

原花青素B1与B2抑制脂多糖诱导的BV-2细胞炎症反应作用的比较

目的:比较原花青素二聚体的2种同分异构体——原花青素B1和B2对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞炎症反应的抑制作用。方法:体外培养BV-2细胞,MTT法检测原花青素B1与B2对BV-2细胞活力的影响;以1 mg/L的LPS刺激BV-2细胞12 h建立的细胞炎症模型为研究对象,分别采用ELISA法、Transwell趋化实验和Western blot法比较原花青素B1和B2对LPS诱导的BV-2细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、趋化行为及核因子κB(NF-κB)磷酸化的抑制作用。结果:原花青素B1和B2对BV-2细胞没有毒性。与LPS组比较,原花青素B1和B2均可显著降低LPS诱导的TNF-α和IL-1β的释放及BV-2细胞的趋化作用,并抑制NF-κB的磷酸化。结论:原花青素B1和B2均能抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,其作用强度无显著差异。     

慢性华支睾吸虫感染对脂多糖刺激巨噬细胞反应的影响

 目的：了解慢性华支睾吸虫（Cs）感染的免疫状态及其对巨噬细胞表型和炎症反应的影响。方法：选择Sprague-Dawley雄性大鼠,按随机数字表法分组进行2部分实验。(1) 经口华支睾吸虫虫卵灌胃感染70 d建立慢性Cs感染模型,分为正常对照组和慢性Cs感染组,每组10只,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素 4（IL-4)、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）水平,腹腔灌洗获取巨噬细胞,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞亚型;(2)腹腔灌洗获取巨噬细胞,按照腹腔巨噬细胞的来源,分为空白对照组、正常组和慢性Cs感染组,以脂多糖（LPS,10 μg/L）刺激孵育,用ELISA法动态监测LPS刺激后0、2、12和24 h细胞培养上清液的TNF-α和IL-10的变化。结果：(1) 慢性Cs感染组大鼠血清促炎因子TNF-α［(77.64±3.25) ng/L］和IFN-γ［(212.69±12.60)  ng/L］水平较正常组TNF-α［(55.13±3.25) ng/L］和IFN-γ［(108.15±10.49)  ng/L］升高（均P＜0.05）,而抗炎因子IL-4［(248.24±8.99) ng/L］和IL-10［(223.56±5.60) ng/L］水平较正常组血清IL-4［(52.40±3.97) ng/L］和IL-10［(60.18±5.36) ng/L］也显著升高（均P＜0.01）,并可使腹腔巨噬细胞向替代活化型（M2型）巨噬细胞分化;(2) 2组腹腔巨噬细胞培养上清液TNF-α水平在LPS刺激后2 h即开始上升,至24 h达到高峰,慢性Cs感染组巨噬细胞在LPS刺激后2、12和24 h上清液的TNF-α水平均显著低于正常大鼠组［2 h： （88.20±1.91） ng/L vs（123.45±2.98） ng/L;12 h：（123.66±4.31） ng/L vs（161.11±7.38） ng/L;24 h：（154.52±4.83） ng/L vs（227.85±10.67） ng/L,均P＜0.05］,而IL-10的水平较正常组升高［2 h：（105.46±12.28） ng/L vs（80.86±2.28） ng/L;12 h：（194.19±8.62） ng/L vs（117.56±8.02） ng/L;24 h：（280.02±11.31） ng/L vs（168.14±8.97） ng/L,均P＜0.05］。结论：慢性Cs感染时宿主血清的促炎因子升高,而抗炎因子升高得更明显,使巨噬细胞向M2型极化;体外实验表明慢性Cs感染宿主的巨噬细胞对LPS刺激产生耐受。     

冠脉成形术缺血性刺激前后血清IL-6、TNF-α水平的变化

目的:冠脉成形术(PTCA)引起的炎症反应始于术后早期。白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)是主要的炎性细胞因子。本实验拟通过对比有或没有侧支循环病人PTCA前后IL-6、TNF-α水平的变化,探讨PTCA引起早期炎性反应的机制。方法:参照Leaman冠脉积分系统,对PTCA球囊阻断引起的缺血强度进行量化。计算正常对照组与冠心病组PTCA手术前后的IL-6、TNF-α水平变化,并进行相关性分析。结果:缺血性剌激前IL-6和TNF-α分别为(9.592±1.847)ng/L和(26.959±1.967)ng/L。在剌激后4h分别为(27.423±1.882)ng/L和(78.542±1.573)ng/L,呈显著差异。结论:IL-6、TNF-α是反映PTCA术后早期炎性反应的敏感指标。缺血积分可作为反映PTCA术中缺血/再灌注损伤程度的量化指标。侧支循环可减轻PTCA术后早期炎症反应。     

大肠杆菌DNA诱导全身性炎症反应综合征的作用机制研究

目的: 探讨细菌DNA是否参与全身性炎症反应综合征(SIRS)的发生及其可能机制。方法: 碱裂解法抽提纯化大肠杆菌DNA(EC DNA); 观察EC DNA攻击小鼠的死亡率及大鼠血清TNF-α、IL-6的变化情况; 体外培养小鼠单核细胞株ANA-1细胞, 采用不同终浓度的EC DNA、LPS刺激ANA-1细胞,测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的释放情况, 并检测人单核细胞株THP-1细胞表面Toll样受体9(TLR9)和Toll样受体4(TLR4)表达以及核转录因子κB(NFκB)的活化情况。结果: EC DNA可导致小鼠死亡, 并具有明显的量效关系, 小牛胸腺DNA和DNA酶消化的EC DNA则不能引起小鼠死亡; EC DNA与LPS均可导致大鼠血清TNF-α、IL-6水平升高,变化趋势相似, 但EC DNA所致的TNF-α峰值早于LPS组1 h出现。在体外实验中, 不同浓度的EC DNA、LPS可诱导ANA-1细胞大量释放TNF-α、IL-6, 以及THP-1细胞表面TLR9和TLR4的高表达, 但EC DNA诱导NFκB活化的能力远小于LPS。结论: EC DNA可以和LPS一起参与SIRS的发生, 可能机制与诱导单核细胞TNF-α、IL-6的释放有关, 但EC DNA诱导细胞因子释放的信号转导过程中可能尚有其它途径的存在。     

清开灵对家兔内毒素性发热的作用及机制研究

目的:探讨清开灵(QKL)注射液对家兔内毒素性发热的解热作用和机制。方法:复制家兔内毒素(ET)性发热模型, 用数字温度计测量家兔的直肠温度, 用放免法测定下丘脑的IL-1β和cAMP、脑脊液中的cAMP、腹中隔区的AVP含量。结果:QKL+ET组的△T(0.24±0.10)℃、TRI₁(1.02±0.81)、下丘脑IL-1β(3.02±0.58)ng/g、下丘脑cAMP(1.37±0.23)nmol/g、CSF中cAMP(14.13±3.80)nmol/L、腹中隔区AVP(25.24±2.61)ng/g, 分别低于ET组的△T(0.40±0.11)℃、TRI₁(1.78±0.79)、下丘脑IL-1β(6.08±0.79)ng/g、下丘脑cAMP(2.90±0.40)nmol/g、CSF中cAMP(32.10±4.51)nmol/L、腹中隔区AVP(47.32±3.77)ng/g, 两者相比差异显著(P<0.01)。结论:QKL抑制下丘脑内生致热原和中枢发热介质的生成, 促进解热物质的释放, 可能是QKL对内毒素性发热的重要解热机制。     

石杉碱甲的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用

 目的： 探讨石杉碱甲（HupA）的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用。方法：取新生SD大鼠海马组织,分离并培养神经干细胞和小胶质细胞,建立Transwell共培养体系。将细胞分成3组：空白对照组、淀粉样β肽（Aβ）组和HupA组。Aβ组小胶质细胞层中加入终浓度为10 μmol/L的Aβ1-42,HupA组于加入Aβ1-42前4 h用1 μmol/L HupA预处理小胶质细胞。液相芯片技术检测炎症因子白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）的表达,流式细胞术和Western blotting检测神经干细胞的凋亡。结果：小胶质细胞与神经干细胞共培养72 h后,与空白对照组相比,Aβ组IL-6、TNF-α和MIP-1α水平以及神经干细胞凋亡率（25.46%）均显著升高(P<0.01);HupA预处理小胶质细胞后,Aβ诱导的小胶质细胞炎症因子分泌显著减少,IL-6、TNF-α和MIP-1α的水平降低(P<0.01),同时神经干细胞凋亡率降低至8.05% (P<0.01)。Western blotting检测结果显示,HupA组Bcl-2/Bax值显著高于Aβ组(P<0.05)。结论：石杉碱甲可以抑制小胶质细胞分泌细胞因子和趋化因子,减弱Aβ诱导的炎症反应,降低神经干细胞凋亡率,从而发挥抗炎和神经保护作用。     

可乐定通过激活胆碱能抗炎通路抑制肺损伤小鼠炎性反应

目的:探讨可乐定对肺损伤小鼠炎性反应的影响及其作用机制。方法:以脂多糖(lipopolysac charide,LPS)诱导的肺损伤小鼠为模型,静脉注射可乐定,取左肺上叶组织,检测肺湿干重比(W/D)和总肺含水量(TLW),ELISA试剂盒检测炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,RT-PCR和Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的变化;鼻内吸入法将α7nAChR基因RNA干扰慢病毒载体导入肺损伤模型小鼠肺内,或者静脉注射HMGB1外源性蛋白,检测炎性因子和HMGB1的变化。结果:可乐定可减轻LPS诱导的小鼠肺损伤,并通过降低细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α水平从而抑制LPS诱导的炎性反应;可乐定促进α7nAChR表达从而激活胆碱能抗炎通路,并抑制HMGB1的表达。结论:可乐定对肺损伤小鼠具有抗炎作用,这可能与激活胆碱能抗炎通路,抑制HMGB1的表达有关。     

上调miR-181a抑制香烟提取物诱导的支气管上皮细胞致炎因子生成与collagen IV、fibronectin和α-SMA表达

目的:探讨微小RNA-181a(miR-181a)对香烟提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells, HBECs)致炎因子生成与IV型胶原蛋白(collagen IV)、纤连蛋白(fibronectin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并分析其可能的机制。方法:RT-qPCR检测CSE诱导下HBECs中miR-181a的表达情况。转染miR-181a mimic后经ELISA检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;Western blot检测collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达;并进一步评估NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活性。结果:CSE可显著增加HBECs中致炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β1的生成,显著上调collagen IV、fibronectin和α-SMA的表达,同时细胞内miR-181a的表达明显降低(P0.05);转染miR-181a mimic可显著抑制CSE诱导的HBECs致炎因子生成及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达(P0.05)。此外,Western blot的结果显示转染miR-181a mimic可抑制CSE诱导的NF-κB/TGF-β1/Smad3信号活性(P0.05)。结论:上调miR-181a表达可部分逆转CSE诱导的HBECs致炎因子的释放及collagen IV、fibronectin和α-SMA表达,其作用机制可能与抑制NF-κB/TGF-β1/Smad3信号通路的活化有关。     

α3β2与α3β4烟碱型乙酰胆碱受体α和β亚基不同配比的药理活性研究

目的:比较α和β亚基不同配比形成α3β2和α3β4烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)敏感性的差异。方法:体外转录获得α和β亚基的cRNA,采用显微注射将3种不同配比(α∶β分别为1∶10、1∶1和10∶1)的cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳检测受体表达情况。利用激动剂乙酰胆碱(ACh)和拮抗剂α-芋螺毒素Reg IIA(α-CTx Reg IIA)检测在3种配比条件下形成受体药理活性的差异。结果:对于α3β2 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的半数有效浓度(EC50)分别为91.2μmol/L、104.4μmol/L和130.6μmol/L,α-CTx Reg IIA的半数抑制浓度(IC50)分别为40.2 nmol/L、36.4 nmol/L和42.3 nmol/L。对于α3β4 nAChR亚型,在3种配比情况下,ACh的EC50分别为44.0μmol/L、110.0μmol/L和230.0μmol/L,α-CTx Reg IIA的IC50分别为226.8 nmol/L、71.5 nmol/L和49.4 nmol/L。结论:α3和β4亚基比例的改变会导致α3β4 nAChR结构和药理活性的改变。α3和β2亚基比例的改变对α3β2 nAChR结构和活性没有影响。     

青蒿素减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤的实验研究

目的:探究青蒿素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肠上皮IEC-6细胞屏障功能损伤的影响。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为5组:对照组、LPS(100 mg/L)组和LPS+青蒿素(30、50和100μmol/L)组,MTT法检测各组细胞毒性变化,ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化,电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER),酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1和occludin)以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达的变化。结果:LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC-6细胞均无毒性。与对照组相比,LPS处理下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB的mRNA和蛋白表达明显增加,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达升高(P0.05),均呈现浓度依赖性。结论:青蒿素可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。     

LPS、TNF-α、IL-1β对人脐静脉内皮细胞COX-2表达的影响

目的:探讨LPS、TNF-α、IL-1β对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)环氧合酶2(COX-2)表达及前列腺素(PGs)的影响。方法:在分离培养的HUVEC细胞给予LPS、TNF-α、IL-1β刺激24h后,采用原位杂交、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测HUVECCOX-2mRNA及蛋白的表达并观察了培养液前列腺素(PGs)的变化。结果:静息状态的HUVEC表达极少量的COX-2;受炎性刺激后,HUVEC大量表达COX-2mRNA及蛋白,同时伴有PGs的升高。结论:结果提示,静息状态下HUVEC表达极少量的COX-2,炎性刺激可诱发COX-2高表达和PGs升高,因此内皮细胞可通过COX-2的调节参与炎症反应。     

敲减TLR4表达减少LPS诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子

目的:研究Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子的影响。方法:用LPS处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中TLR4表达的变化。将携带TLR4 siRNA的慢病毒感染AR42J细胞,给予LPS处理,real-time PCR和Western blot检测干扰效率,MTT法检测细胞活力,二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,ELISA法检测细胞分泌白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,硫代巴比妥酸法测定上清中丙二醛(MDA)的含量,用黄嘌呤氧化法测定上清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:LPS处理后的AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.01)。携带TLR4 siRNA的慢病毒可以明显下调LPS刺激下AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平(P0.01)。LPS处理后的AR42J细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞分泌的IL-1β和TNF-α增多,培养上清中MDA含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性降低(P0.01)。敲减TLR4表达可以提高LPS刺激下AR42J细胞的活力,降低细胞的LDH漏出率及分泌IL-1β和TNF-α的水平,减少细胞培养液中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px和CAT的水平(P0.01)。结论:LPS诱导胰腺腺泡AR42J细胞TLR4表达,敲减其表达可以减少LPS诱导的AR42J细胞分泌IL-1β、TNF-α等炎症因子,减轻氧化损伤。     

TLR4在LPS诱导的结肠炎症恢复中的作用

目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)在结肠炎症中的作用,探讨LPS在炎症性肠病中的治疗作用。方法:取正常肠上皮细胞进行体外脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预培养。采用慢病毒转染技术,构建TLR4低表达、正常表达及高表达的肠上皮细胞亚组。正常表达组(normal组)及高表达组(high组)培养基中加入LPS诱导细胞炎症,刺激时间分别为0、2、4 h。Western blot法检测TLR4的表达;收集细胞上清液,ELISA检测各亚组细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-8的水平。收集细胞,qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1βmRNA的表达水平。划痕试验观察对比2组细胞的迁移能力。结果:LPS干预培养细胞后,TLR4的表达量显著增加(P0.05)。ELISA和qPCR检测高表达组与正常表达组组间细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10和IL-1β的蛋白和mRNA水平的差异均有统计学意义(P0.05)。划痕试验提示TLR4高表达组的细胞迁移能力明显高于正常对照组。结论:LPS影响TLR4炎症通路的活化,促进前炎症因子及辅助刺激分子的释放,起到调节炎症反应的作用。