加味防己黄芪汤对UUO大鼠纤维化干预作用及对JAK2/STAT3信号通路影响

[目的] 证实加味防己黄芪汤对于单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠纤维化的干预作用以及对JAK2/STAT3信号通路的影响。[方法] 选取SPF级雄性SD大鼠共60只,构建UUO模型,随机分为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、缬沙坦组,每组10只,术后第14天取材。观测肾脏脏器系数、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量;苏木精-伊红染色法（HE）、马松（Masson）病理染色;Real-time qPCR法检测NF-κB、IκBa前后表达变化;Western Blot法检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动特异性蛋白（α-SMA）前后表达变化。[结果] 各组大鼠肾脏脏器系数、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、HE、Masson病理染色结果显示,药物干预组较模型组明显改善,且中剂量、高剂量组整体改善较为明显。Real-time qPCR结果显示,NF-κB、IκBa药物干预组同模型组相比表达水平明显下降（P<0.01）。Western Blot结果,E-cad、α-SMA、p-Jak2、p-Stat3蛋白表达情况,药物干预组同模型组相比具有明显改善（P<0.05）,且中药中剂量、高剂量组较模型组具有明显的下调（P<0.05）。[结论] 加味防己黄芪汤能够改善UUO大鼠的血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、减轻UUO大鼠的病理损伤、下调UUO大鼠E-cad、α-SMA、p-Jak2、p-Stat3、NF-κB、IκBa的蛋白表达,从一定程度上能够证实加味防己黄芪汤能够干预JAK2/STAT3信号通路起到抗炎、抗纤维化的作用,对于RIF具有延缓作用。     

速效救心丸对动脉粥样硬化大鼠干预作用的实验研究

[目的]研究速效救心丸对动脉粥样硬化(AS)组织中氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)和核因子-κb(NF-κb)表达的影响。[方法]采用高脂饮食加大剂量钙负荷建立大鼠AS模型,随机分为正常组、模型组、速效救心丸治疗组、阿托伐他汀组,采用酶联免疫吸附实验(ELASA)测定ox-LDL含量;Western-blot测定PPARγ和NF-κb蛋白的表达。[结论]模型组ox-LDL的含量、PPARγ和NF-κb的蛋白表达较正常组均显著升高;速效救心丸治疗组ox-LDL的含量、PPARγ及NF-κb的蛋白表达较模型组均明显下降。[结论]速效救心丸能明显降低ox-LDL含量,抑制PPARγ和NF-κb的蛋白表达,可能是其防治AS的机制之一。     

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织细胞因子的影响

目的 探讨氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌组织核因子-κB（NF-κB）等细胞因子的影响。方法 采用大鼠盲肠结扎穿孔法制备大鼠感染性休克模型。造模后56只SD大鼠随机分为假手术组,氧化苦参碱对照组,模型组,氧化苦参碱高、中、低剂量（52、26、13 mg/kg）组、地塞米松阳性对照（10 mg/kg）组,各组给药1次。采用RT-PCR法测定心肌组织NF-κB（p65）mRNA的表达;Western blotting法测定心肌组织NF-κB（p65）及IκB-α的表达;放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-1β（IL-1β）量的改变。结果 氧化苦参碱能显著抑制大鼠心肌组织NF-κB（p65）mRNA的表达及NF-κB（p65）和IkB-α的活性（P＜0.05）,降低心肌组织匀浆中TNF-α及IL-1β的量（P＜0.05）。结论 氧化苦参碱能通过抑制NF-κB（p65）mRNA的表达及诱导NF-κB激酶（NF-κB-inducing kinase,NIK）的活化,抑制细菌、病毒等对NF-κB的激活作用,减少TNF-α、IL-1β等促炎因子的表达,进而对感染性休克大鼠心肌损伤性病变发挥治疗作用。     

清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

[目的] 通过构建脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮（QGDY）的抗炎作用及其机制。[方法] 采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件（ARE）和核因子-κB（NF-κB）双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组（1、10、100μg/mL）,倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κBp65（p65）核移位情况;采用Westernblot法检测各组细胞一氧化氮合酶（iNOS）和p65蛋白表达情况。[结果] 0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论] 清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。     

FGF21对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞TLR4/p38MAPK通路的影响

目的 探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）对谷氨酸钠（MSG）诱导非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞炎症及TLR4/p38MAPK信号通路的影响。方法 新生SD大鼠随机分成正常对照组、MSG组和FGF21组（n=10）。MSG组和FGF21组大鼠于生后第2、4、6、8、10天皮下注射MSG 4g/（kg·d）喂养至13周,FGF21组大鼠腹腔注射FGF21 1mg/（kg·d）32天。HE染色分析肝脏病理学改变;观察肝重、肝功能;qRT-PCR和Western blot法检测肝组织IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK表达情况。结果 与正常对照组比较,MSG组大鼠肝细胞发生脂肪变性伴炎性细胞浸润,肝重、ALT、AST、ALP水平升高（P<0.01）,肝细胞IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK mRNA表达增加（P<0.01）,TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达升高（P<0.01）;与MSG组比较,FGF21组大鼠肝细胞脂泡和炎性细胞减少,肝重、ALT、AST、ALP降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05）,IL-6、TNF-α、TLR4、p38MAPK mRNA表达下降（P<0.01）,TLR4、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平降低（P<0.01）。结论 FGF21可能通过调节TLR4/p38MAPK信号转导通路,抑制NAFLD炎性反应。     

基于TLR4/MyD88/MAPK信号通路探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎的作用机制研究

[目的] 探讨脉络舒通丸抗血栓性浅静脉炎（STP）的作用机制。[方法] 将36只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组（阳性药对照），每组6只。除正常组外，其余各组均采用耳缘静脉注射20%甘露醇建立STP兔模型。造模同时各给药组连续灌胃给药14 d。苏木精-伊红（HE）染色法检测各组兔耳组织病理变化；酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平；测定凝血4项；蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测耳组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和c-氨基酸末端激酶（JNK）蛋白表达及相关磷酸化水平。[结果] 与正常组比较，模型组病理损伤评分显著增加（P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平明显升高（P<0.05）；活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）缩短，纤维蛋白原（FIB）含量升高（P<0.05）；TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK，包括p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著上调（P<0.01）。与模型组比较，脉络舒通丸低、中、高剂量组、地奥司明组兔耳组织病理损伤显著改善，病理损伤评分明显降低（P<0.05或P<0.01）；血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）；APTT、PT、TT明显延长，FIB含量明显降低（P<0.05或P<0.01）；TLR4、MyD88、MAPK（p38MAPK、ERK1/2和JNK）蛋白及相关磷酸化水平均显著下调（P<0.05或P<0.01）。[结论] 脉络舒通丸可能通过抑制TLR4/MyD88/MAPK信号通路，减轻炎症反应，改善凝血功能，从而发挥抗血栓性浅静脉炎作用。     

穴位局部TLR4在针刺后穴位局部炎症反应中作用的初步研究

[目的] 探讨穴位局部TOLL 样受体4(TLR4)在针刺后穴位局部炎症反应中的作用。[方法] 将80 只健康大鼠随机分为针刺组和空白对照组,每组各40 只。每组的40只大鼠再随机分8 个时点(即刻、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、24 h),每个时点5只。采用ELISA 法检测各时间点穴区皮肤肌肉组织中TLR4、高迁移率族蛋白(HMGB1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。[结果] 空白对照组,各指标浓度在各时间点均无明显变化;针刺组针刺后TLR4、HMGB1、IL-6、TNF-α浓度升高,而IL-1β浓度无明显变化。对每只大鼠穴位局部TLR4 与其他指标浓度的相关性进行分析发现,针刺后HMGB1、TNF-α与TLR4 的相关性增强,IL-6 与TLR4 的相关性减弱,IL-1β与TLR4 的相关性针刺前后则无明显变化。[结论] 穴位局部TLR4 介导的通路可能是针刺后穴位局部炎症反应产生的通路之一。     

TLR4特异性抑制剂对大鼠心脏死亡器官捐献供肝缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨TLR4特异性抑制剂调控HMGB1/TLR4信号通路对大鼠心脏死亡器官捐献供肝缺血再灌注（IR）损伤的作用。方法 将8周龄Balb/c雄性大鼠分为对照组［术前30 min经腹腔注射二甲基亚砜（DMSO）无菌生理盐水］、对照抑制组（术前30 min经腹腔注射含TLR4抑制剂的DMSO无菌生理盐水）、模型组（术前30 min经腹腔注射DMSO无菌生理盐水）、模型抑制组（术前30 min经腹腔注射含TAK242的DMSO无菌生理盐水）,每组6只。收集肝脏组织标本,采用苏木精-伊红染色检测肝脏细胞形态结构,Suzuki评分评估肝脏细胞损伤情况;TUNEL染色法检测细胞凋亡率,Western blotting检测肝细胞HMGB1/TLR4及下游炎症因子相对表达量;免疫荧光和Western blotting测定TLR4与HMGB1的共表达作用。结果 病理结果显示,模型组肝脏损伤情况较对照组严重,模型抑制组肝脏损伤情况优于模型组;模型组Suzuki评分高于对照组（P <0.05）,模型抑制组Suzuki评分低于模型组（P <0.05）。模型组、模型抑制组HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6蛋白相对表达量高于对照组（P <0.05）;模型抑制组HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6蛋白相对表达量低于模型组（P <0.05）。模型组肝脏组织细胞凋亡率高于对照组和模型抑制组（P <0.05）。模型组HMGB1蛋白相对表达量高于对照组和模型抑制组（P <0.05）。免疫荧光结果显示,模型组大鼠肝细胞HMGB1的免疫活性显著增加,且主要位于细胞浆内;但对照组HMGB1免疫活性无显著变化。结论 TLR4特异性抑制剂可显著下调HMGB1/TLR4信号通路及相关信号分子,减轻供肝氧化应激和炎症反应,对供肝IR损伤具有保护作用。     

阿奇沙坦酯对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的抑制作用及机制探讨

目的 探讨新型降压药阿奇沙坦酯（azilsartan medoxomil,TAK-491）能否抑制球囊损伤后血管内膜增生及其可能机制。方法 选取清洁级雄性200~250g SD大鼠48只,随机分为4组,即假手术组、模型组、阿奇沙坦酯低剂量组、阿奇沙坦酯高剂量组,每组12只。建立模型后,阿奇沙坦酯低剂量组与高剂量组SD大鼠分别按2mg/kg和4mg/kg每天给予3ml药物灌胃,模型组和假手术组大鼠每天用3ml生理盐水灌胃。于术后14、28天取大鼠颈总动脉行HE染色,观察血管形态学变化,同时计算内膜面积（IA）、中膜面积（MA）及内膜/中膜面积比（IA/MA）。免疫组化技术测量增殖细胞核抗原（PCNA）、Toll样受体4（TLR4）、核因子-κB （NF-κB） p65表达变化结果,酶联免疫吸附测定（ELISA）血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6）水平。结果 与模型组对比发现,药物低、高剂量组术后14、28天IA、IA/MA明显减少（P<0.05）,颈总动脉的PCNA、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达明显降低（P<0.05）,血清中TNF-α、IL-6表达明显降低（P<0.05）。与假手术组进行对比发现,手术组术后14、28天IA、IA/MA明显增加（P<0.05）,颈总动脉的PCNA、TLR4、NF-κB p65的表达明显增加（P<0.05）,血浆中TNF-α、IL-6表达明显增加（P<0.05）。结论 阿奇沙坦酯可以减轻损伤后血管再狭窄发生率,其作用机制可能是通过抑制TLR4介导的NF-κB通路,减少了下游炎性相关因子TNF-α、IL-6等的表达,继而减少内膜增生而实现的。     

通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠肠屏障的保护作用

[目的] 探讨通腑泻肺中药对急性肺损伤/急性呼吸窒迫综合征（ALI/ARDS）大鼠肠屏障的保护作用。[方法] 27只大鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只。模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水。中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01mL/g,每日1次,共7日,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃。通过病理切片观察各组大鼠肠组织损伤情况,ELISA法检测大鼠血血浆D-乳酸及DAO水平,免疫组化染色方法方法检测肺组织核转录因子-κB（NF-κB） P65及TLR4表达。[结果] 模型组大鼠肠组织镜下可见严重的病理损伤,中药组大鼠肠组织病理损伤减轻。模型组大鼠血浆D-乳酸、DAO明显升高,中药组血浆D-乳酸和DAO降低。模型组大鼠肠组织NF-κB P65和TLR4蛋白表达升高,中药组NF-κB P65和TLR4蛋白表达显著降低。[结论] 通腑泻肺中药对ALI/ARDS病理过程中释放的大量炎性细胞因子有抑制作用,改善ALI/ARDS时肠黏膜的缺血缺氧状态,增加肠黏膜血流灌注,减轻肠黏膜细胞损害,降低肠黏膜通透性,对肠黏膜屏障起到保护作用。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析藜芦中化学成分

[目的]采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对藜芦中的化学成分进行研究。[方法]采用CORTECS C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,流速为0.3 mL/min。质谱采用电喷雾(ESI)离子源,正、负离子监测模式。利用Agilent Masshunter Qualitative Analysis分析软件对所得信息进行处理,结合Metlin数据库、对照品图谱及相关文献,对各化学成分进行辨识。[结果]共鉴定推测出藜芦中包括生物碱类、黄酮类、有机酸类等47个化学成分。[结论]通过UPLC-Q-TOF-MS/MS建立了一种能准确、简便、快速分析藜芦中化学成分的方法,为深入研究藜芦的药效物质基础和优选藜芦质量控制指标提供了理论依据。     

枳壳化学成分和代谢成分的UPLC-PAD-Q-TOF/MS分析

目的：建立寻找枳壳提取物活性成分的方法。方法：采用超高效液相色谱仪-质谱联用（UPLC-PAD-Q-TOF/MS）方法对枳壳水提液及其入血成分进行分析,通过紫外光谱、质谱数据等对化合物进行解析。结果：从枳壳水提液中鉴定了21个化合物,其中包括12个黄酮苷类化合物,9个多甲基黄酮类化合物;在小鼠血浆中检测到6种原型成分和4种代谢产物。结论：UPLC-PAD-Q-TOF/MS法可用于中药活性成分的鉴定。     

虎杖多指标成分测定及质量控制方法研究

目的 采用HPLC-DAD和HPLC-TOF/MS对虎杖中二苯乙烯类、蒽醌类和黄酮类等化合物进行快速分析,将多指标成分的测定和明晰化指纹图谱共同应用于中药质量控制的研究模式中。方法 采用Agilent SB-C_l8柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,分别采用HPLC-DAD和HPLC-TOF/MS两种分析方法对虎杖中化学成分进行分离测定。结果 共从虎杖鉴别出中2个二苯乙烯类、10个蒽醌类和10个黄酮类成分,HPLC-DAD法可以同时测定虎杖药材中的虎杖苷、白藜芦醇和大黄素、大黄素甲醚。结论 采用HPLC-DAD和HPLC-TOF/MS对虎杖中二苯乙烯类、蒽醌类和黄酮类成分进行快速分析测定,有效地控制虎杖的质量。     

一种急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型的改良

目的 首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖（LPS）模型进行对比研究,以观察其改良效果。方法 体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组（培养液+PBS）,雨蛙素组（培养液+10 nmol/L雨蛙素）,雨蛙素+LPS组（培养液+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L LPS）及改良腹水组。改良腹水组采用牛黄胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎动物模型腹水,混合后加入共培养体系,刺激体外培养的同源腺泡细胞造模。共培养体系的设置为:培养板中置入孔径为1 μm的小室,以体积比1∶1于孔板和小室中分别加入培养液及混合腹水。各组刺激24 h后收集腺泡细胞,采用流式细胞术检测腺泡细胞的凋亡/坏死率,Western blot检测凋亡/坏死相关蛋白B淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、受体相互作用蛋白1（RIP1）的表达情况,透射电镜观察腺泡细胞的亚显微结构。结果 改良腹水模型中腺泡细胞以坏死特征为主,与其余3组相比,其凋亡率及坏死率均上调,RIP1及BAX蛋白表达水平上调,而Bcl-2蛋白呈下调趋势。透射电镜结果显示改良腹水组腺泡细胞细胞器结构破坏,细胞膜降解。而雨蛙素及雨蛙素+LPS模型与对照组相比,腺泡细胞凋亡率上调,坏死率无改变;促凋亡蛋白Bax表达升高,而RIP1蛋白的表达水平无显著上调。透射电镜结果显示雨蛙素及雨蛙素+LPS组细胞染色质固缩成团,胞质降解,细胞膜完整,呈现出典型的凋亡特征。结论 相较于以腺泡细胞凋亡特征为主、研究轻症急性胰腺炎的雨蛙素及雨蛙素+LPS模型,改良的腹水模型以腺泡细胞的坏死特征为主,是研究腺泡细胞坏死及重症急性胰腺炎的良好模型。     

艰难梭菌感染C57BL/6小鼠模型的建立方法研究

目的 建立C57BL/6小鼠抗菌药物诱导艰难梭菌感染模型,为更有效地认识人类艰难梭菌感染性疾病的发病机制及治疗措施提供依据。方法 C57BL/6小鼠经抗菌药物混合液预处理3天后,进行克林霉素腹腔注射。之后给予高、中、低浓度艰难梭菌ATCC43255悬液灌胃,建立艰难梭菌感染诱导肠损伤和结肠炎的CDI模型。观察小鼠的病死率,平均相对体重、结肠组织病理学评分和粪便艰难梭菌A&B毒素变化。结果 小鼠经抗菌药物处理和艰难梭菌灌胃后,出现腹泻,体重下降,粪便艰难AB毒素检测阳性。结肠病理切片可见炎性细胞浸润和组织坏死等结肠炎表现。随着灌胃菌液浓度的增加,小鼠症状越重,粪便毒素值越高。造模后存活下来的小鼠即使再次给予艰难梭菌灌胃也不再出现症状。结论 C57BL/6小鼠艰难梭菌感染模型与人类CDI病程变化相似,可进一步用于CDI防治措施的研究。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS的防风质量差异标志物初步研究

[目的]采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS),初步确定26个道地产区及其他产地的共计78批次防风样本的质量差异标志物。[方法]采用电喷雾离子源进行正离子采集,使用Waters Acquity UPLC BEH C18柱,流动相以0.1%甲酸水、0.1%甲酸-乙腈进行梯度洗脱;通过质谱解析软件(Markerview)对数据进行主成分分析(PCA分析),依据同位素峰度比和精确质量数确定其分子式,对比二级图谱与对照品图谱,进行结构鉴定。结合防风体内物质基础以及生物活性报道,确定候选质量差异标志物,进一步分析候选质量差异标志物在防风道地产区和非道地产区的含量变化规律,确定质量差异标志物。[结果]鉴定或推断了不同产地防风中含量差异较大的10种主要活性成分,其中Ledeouriellol、亥茅酚、补骨脂素、花椒毒素可初步作为防风道地药材的质量差异标志物。[结论]该方法能够准确、快速找出一批化合物可以作为质量差异标志物,提供了新的道地药材质量评价指标研究策略。     

基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析

目的 建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系，并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法 通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列，并构建Cas9-MAD2L1载体，将该载体转染到NIH/3T3细胞中，通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后，提取细胞转染后的基因组DNA，利用PCR方法，结合T7E1分析和桑格尔测序，鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况，并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果 将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后，荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞，PCR结合T7E1结果显示，以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物，可被酶切成166 bp和62 bp片段，测序结果显示，成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑，脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论 成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系，设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。     

生殖生长对川泽泻源库关系的影响

目的 研究生殖生长对川泽泻源库关系及其特征指标的影响,为其高产优质栽培和育种提供参考。方法 比较留薹和去薹植株各部位干物质量、叶和块茎非结构性碳水化合物及含氮化合物量等生理指标的积累过程。结果 生殖生长的保留有利于川泽泻生殖库的积累,不利于叶源和营养库的增长,能够显著增加植株总库容,提高植株总生物量;去除生殖生长能够增加叶生长后期和块茎产量形成期的C/N值,提高叶和块茎的产量。结论 川泽泻栽培过程中应采取人工措施及时调整植株C/N值,以提高块茎产量;品种选育过程中,应选择叶片数适量且生长后期叶片C/N值高、块茎含氮量高的品系。     

基于RPLC/Q-TOF-MS技术的黄柏炭制前后化学成分变化研究

目的 分析黄柏炭制前后化学成分的变化情况,为黄柏炭炮制原理的阐明提供依据。方法 按照《中国药典》2010年版方法炮制黄柏炭,采用RPLC/Q-TOF-MS技术对生黄柏及黄柏炭的提取样品进行检测,找出炮制前后具有显著性差异的物质。结果 共找出21种化学成分在炮制前后具有显著性差异,其中炮制后新生成的物质有5种,质量分数增加的物质有8种,减少的物质有8种。结论 采用RPLC/Q-TOF-MS法进行中药炮制研究具有方法灵敏度高,结果准确可靠的优点,该法能够全面地反映出中药在炮制过程中多种化学成分的变化。     

大鼠灌服炙甘草汤后甘草次酸药动学研究

目的 建立大鼠ig炙甘草汤后体内甘草次酸的LC-MS/MS测定方法。方法 采用醋酸乙酯沉淀蛋白处理血浆样品,选用白藜芦醇为内标,采用LC-MS/MS法测定,色谱条件为ORBAX SB-C₁₈反相色谱柱（Agilent,50 mm×2.1 mm,1.8 μm）,乙腈-水（80∶20,含0.2%甲酸）为流动相,体积流量0.2 mL/min,柱温30 ℃。样品经电喷雾离子（ESI）源负离子化后,通过Agilent 6410三重四级杆串联质谱仪,采用多反应监测（MRM）对甘草次酸进行测定,分别选用m/z 469.4→425.4和227.1→143.0作为甘草次酸和内标物白藜芦醇的检测离子对。结果 甘草次酸在33.4～8 560.0 ng/mL线性关系良好（R²＝0.997 1）,日内（n＝6）、日间（n＝6）精密度、稳定性RSD均小于10%。甘草次酸高、中、低3个质量浓度平均提取回收率分别为75.3%、78.2%、78.5%。在此方法下得到大鼠ig炙甘草汤后血浆中甘草次酸的药动学参数分别为t_max＝（8.00±1.13）h,C_max＝（811.02±300.25）ng/mL,AUC_0～24＝（11 439.21±3 367.36）ng/mL·h。结论 该方法灵敏、准确、快速、选择性高,可用于甘草次酸血药浓度监测和药动学研究。