用HPLC法测定人血浆中两种10-羟喜树碱含量

目的:建立同时测定人血浆中羟喜树碱(HCPT)两种活性成分羧酸型羟喜树碱(C-HCPT)和内酯型羟喜树碱(L-HCPT)含量的HPLC法,并且考察HCPT的稳定性。方法:采用HPLC-荧光法,检测器激发波长为363 nm,发射波长为530 nm。色谱柱为Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.075 mol/L乙酸铵缓冲液(32∶68,pH6.4),流速1.0 mL/min,内标法计算药物浓度。结果:人血浆样品中C-HCPT和L-HCPT峰分离良好,最低检测浓度均为5 ng/mL。L-HCPT在16.99~2 175.00 ng/mL,C-HCPT在14.94~1 912.50 ng/mL浓度范围内线性关系良好。C-HCPT和L-HCPT的相对回收率分别为96.79%~119.64%和100.23%~112.93%,日内和日间RSD均<10%。经1 mol/L盐酸溶液处理后,93.34%~97.18%的C-HCPT转化为L-HCPT。样品于-20℃保存28 d基本稳定。结论:本方法专属性强,灵敏、可靠,适用于HCPT类制剂给药后血药浓度的监测和体内药动学研究。     

反相高效液相色谱法测定人血浆中盐酸二甲双胍浓度

目的:建立测定人血浆样品中盐酸二甲双胍浓度的定量分析方法.方法:反相高效液相色谱法(RP-HPLC法).色谱柱为Nucleosil 100-5硅胶柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为0.03 mol/L的磷酸二氢铵溶液(pH=7.00)-乙腈(75:25,V/V),检测波长240 nm,柱温30℃,进样量40μL.结果:血浆中盐酸二甲双胍浓度线性范围是25～4 000 ng/mL(r=0.999 9),回收率在94.59%～100.84%之间,日内RSD(n=5)在0.67%～2.35%之间,日间RSD(n=5)在2.77%～4.09%之间,最低检测限是12.5 ng/mL.结论:HPLC法简便、快捷、灵敏、准确,适用于临床药代动力学及药效学的研究.     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中吲哒帕胺的浓度

目的:建立一种简便、灵敏的测定人体血浆中吲哒帕胺浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法。方法:以瑞格列奈钙为内标,采用乙腈:0.1%甲酸水溶液=90∶10为流动相,以Agilent-ZORBAX-C18柱(2.1mm×150mm,5.0m)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行进样检测。检测离子为[M+H]+m/z 364.1m/z 188.8(吲哒帕胺)和[M+H]+m/z 451.1m/z 134.8(瑞格列奈钙,内标)。结果:吲哒帕胺线性范围为0.5～50ng/mL,定量下限为0.5ng/mL,线性关系良好;高、中、低三个浓度的日内、日间的RSD均<15%,平均回收率为94.60%～110.33%。结论:本方法专属性强,操作简便,灵敏度高,适用于吲哒帕胺制剂的临床药动学研究。     

RP-HPLC法测定赖诺普利片剂中有关物质

目的:建立赖诺普利片剂中有关物质的RP-HPLC检测方法,为赖诺普利片剂的质量控制提供有效的分析手段。方法:色谱柱:Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-磷酸二氢钠缓冲液(pH5.2)(10∶90),流速:1.0 mL/min,检测波长:215 nm,柱温:45℃,进样量:20μL。结果:赖诺普利浓度在16~260 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.9995),赖诺普利最低检测限为3.92 ng,辅料对主药和降解产物的检测无影响,主药和降解产物能很好的分离检出。结论:本法准确、简便,适用于赖诺普利片剂中有关物质检测。     

LC-MS/MS法测定坦索罗辛在比格犬血浆中的浓度及其缓释制剂的药动学研究

目的:建立坦索罗辛血药浓度LC-MS/MS测定方法,并研究坦索罗辛缓释制剂在比格犬体内的药代动力学。方法:6只比格犬空腹单次口服给予含有0.4 mg的盐酸坦索罗辛缓释胶囊,给药前(0 h)、给药后不同时间点各采血0.3 mL,分离血浆后,加入内标愈创木酚甘油醚,经乙酸乙酯萃取,以甲醇:水:甲酸(80∶20∶0.2,V/V/V)为流动相,在反相C18色谱柱进行分离。采用电喷雾离子源(ESI源)的正离子方式检测,扫描方式为选择反应监测(SRM),用于定量分析的离子反应为m/z409.0→m/z228.0(坦索罗辛)和m/z199.0→m/z125.0(内标,愈创木酚甘油醚)。结果:坦索罗辛在线性范围内0.05～10.0 ng/mL线性良好,定量下限为0.05 ng/mL,批内、批间精密度(RSD)均小于13.4%。盐酸坦索罗辛缓释制剂0.4 mg口服给药后AUC0-24 h为(7.82±1.92)ng.h.mL-1、AUC0-∞为(8.04±2.02)ng.h.mL-1t、1/2为(2.96±2.13)h。结论:LC-MS/MS法灵敏度高、分析快速,适用于比格犬血浆中坦索罗辛的药动学研究,坦索罗辛缓释胶囊口服给药后半衰期短,消除快。     

高效液相色谱法定量尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度

目的:建立高效液相色谱法测定尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度.方法:用Agilent ZORBAX SB-Aq column色谱柱,ZORBAX-Extend C18预柱,以甲醇和47 mmol/LKH2PO4水溶液作为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长为260 nm.结果:血清中尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤的线性范围分别是(1.667～166.667)×103 ng/mL (r=0.9995)、(0.033～3.338)×103 ng/mL(r=0.9994)和(0.033～3.338)×103 ng/mL(r=0.9996),日间与日内精密度均＜15％.结论:该法灵敏度高,精密度和准确度佳,能满足非布司他体内药效学研究.     

HPLC-MS-MS测定人血浆中利托君的浓度及其药动学研究

目的:建立色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS)测定人血浆中利托君的浓度,并利用该方法研究了2种利托君制剂在健康受试者中的药代动力学。方法:血样采用乙酸乙酯提取,色谱柱为BDS Hypersil C18柱(2.1 mm×50 mm,3μm);流动相为水(含1‰甲酸):甲醇=20∶80(V/V);流速为0.20 mL/min;用于定量分析的反应离子分别为:利托君m/z:288/270,非那雄胺(内标)m/z:373.4/305.3。结果:血浆中利托君在0.13~8 ng/mL浓度范围内与峰面积比线性良好(r=0.9970);最低定量限为0.13 ng/mL;日内日间精密度(RSD)均小于12.5%;低、中、高3个浓度的绝对回收率均大于75.4%。应用此方法研究了18名健康受试者单剂量口服2种利托君制剂20 mg的药代动力学特点,两种制剂的主要药代动力学参数:Cmax(6.1±1.9)、(5.8±2.1)ng/mL,tmax(1.1±0.4)、(1.2±0.4)h,t1/2(10±4)、(9±5)h,AUC0-36(22±9)、(21±8)ng.mL-1.h,AUC0-∞(25±10)、(23±8)ng mL-1.h。结论:该方法简单快速、灵敏准确,适用于利托君药动学研究。     

依鲁替尼及其磷脂复合物在比格犬体内的药动学比较研究

目的:建立测定比格犬血浆中依鲁替尼浓度的方法,并比较依鲁替尼及其磷脂复合物在比格犬体内的药动学差异。结果:将雄性比格犬随机分为依鲁替尼混悬液组和依鲁替尼磷脂复合物组(分别以0.5%交联羧甲基纤维素钠溶液和水为溶剂,质量浓度均为5 mg/mL),每组3只。所有比格犬均单次灌胃相应药物混悬液15 mg/kg,分别于给药前及给药后0.017、0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12 h于左前肢静脉取血2 m L,采用高效液相色谱法(HPLC)测定其血浆中依鲁替尼的质量浓度。以甲苯磺丁脲为内标,色谱柱为Betasil C_(18),流动相为乙腈-水(含0.5%三乙胺,用冰醋酸调节pH至3.2)(45∶55,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为256 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。采用DAS 2.1.1软件计算两组比格犬的药动学参数,采用t检验考察两者的差异。结果:依鲁替尼检测血药浓度的线性范围5～5 000 ng/mL(r=0.999 8),定量下限为5 ng/mL,最低检测限为1.3 ng/mL;批间、批内RSD均小于10%,准确度为98.81%～106.20%,提取方法不影响待测物的测定。单次灌胃依鲁替尼混悬液和依鲁替尼磷脂复合物的t_(max)分别为(2.00±0.09)、(0.25±0.03)h,c_(max)分别为(610.67±21.36)、(2 308.72±100.41)ng/mL,AUC_(0-12 h)分别为(4 516.67±383.43)、(9 394.16±874.21)ng·h/mL,AUC_(0-∞)分别为(6 174.32±525.27)、(10 717.33±897.62)ng·h/mL,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);依鲁替尼磷脂复合物的相对生物利用度为207.99%。结论:本研究建立的HPLC法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于依鲁替尼血药浓度的测定及药动学的研究。将依鲁替尼制成磷脂复合物后,其药动学参数变化明显,药物吸收明显加快,生物利用度明显提高。     

羟基喜树碱固体自微乳和速释微球结肠定位胶囊的大鼠体内药动学

目的:研究羟基喜树碱(HCPT)固体自微乳和速释微球的结肠定位胶囊在大鼠灌胃给药后的药动学特征和结肠组织的药物浓度,以提高靶位药浓,降低全身毒副作用.方法:分别制备羟基喜树碱固体自微乳(SSMEDDS)及速释微球(microsphere),将它们和HCPT原药分别灌装于大鼠结肠定位胶囊中;分别以6 mg·kg-1的剂量对大鼠灌胃给药,后于不同时间点进行眼眶静脉丛取血,用HPLC法测定大鼠体内HCPT含量,并用3P97药动学程序对血药浓度进行处理;最后测定给药大鼠结肠组织的血药浓度.结果:HCPT对照液和结肠给药的HCPT、HCPT-SSMEDDS、HCPT-microsphere的AUC分别为(329.8±5.6) ng·h·mL-1、(134.9±3.4)ng·h·mL-1、(221.3±6.9)ng·h·mL-1和(207.6±4.8)ng·h·mL-1;MRT分别为(2.9±0.2)h、(4.8±0.4)h、(6.2±1.4)h和(5.7±1.2)h;结肠组织中内酯浓度分别为:(1.7±0.2) μg·g-1、(4.3±0.4) μg·g-1、(13.7±1.4) μg·g-1和(8.9±0.7)μg·g-1.结论:HCPTK-SSMEDDS结肠给药后可以显著降低大鼠全身血药浓度,提高结肠组织的血药浓度,并且相对于HCPT-microsphere,内酯型HCPT的稳定性提高,为HCPT治疗结肠癌提供了新的选择.     

反相高效液相色谱法测定人全血中环孢素A浓度

目的建立人全血中反相高效液相色谱法测定环孢素A(CsA)浓度的方法。方法色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C18柱(6.0mm×150mm,5μm),乙腈-水(70∶30)为流动相,流速1.4mL/min,柱温70℃,检测波长为214nm。结果 CsA血药浓度在50～2000ng/mL范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系,r=0.9998,最低检测浓度为20ng/mL,方法回收率96.89%～103.60%,日内RSD3.63%～6.13%,日间RSD3.89%～7.60%。结论本方法结果准确,操作简便,易于质量控制,适合于临床CsA血药浓度监测及药动学研究。     

羟基喜树碱注射液两种给药方式在小鼠体内的药代动力学研究

目的：研究10-羟基喜树碱注射液在小鼠体内的药劝学特征。方法：建立测定小鼠血浆中10-羟基喜树碱内酯形式的HPLC-荧光捡测法，小鼠尾静脉注射和腹腔注射后不同时间点进行眼眶静脉丛取血，测定血浆中内酯形式的血药浓度，并用PKBP—N1药动学程序对血药浓度进行处理。结果：10-羟基喜树碱内酯形式可与血浆中的其它成分较好地分离，在1．25-2500mg&#183;ml^-1的血药浓度范围内呈良好的线性关系。10-羟基喜树碱两种给药方式在小鼠体内的药动学特征基本相似。结论：与静脉注射给药方式比较，腹腔注射可以提高局部组织的药物浓度，减轻药物对全身的副作用.     

HPLC法测人血浆中丹皮酚浓度及其药代动力学研究

目的：建立HPLC丹皮酚胶囊血浓度测定方法，评价丹皮酚胶囊的药代动力学特点。方法：24名健康志愿者单剂量口服160mg丹皮酚胶囊，按设定时间采集肘静脉血经乙睛萃取处理，以XB—C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱为固定相，四氢呋喃-甲醇-水-磷酸（6：60：34：0．1）为流动相测定丹皮酚血浆浓度。采用DAS2．0计算丹皮酚主要药动学参数。结果：丹皮酚线性范围10—500mg／mL，最低检出浓度为10ng／mL。主要药代动力学参数：Cmax为（116±46）ng／mL，tmax为（1．02±0．13）h，t1/2为1．03h。结论：建立的HPLC方法特异性强、灵敏度高，可用于丹皮酚血药浓度测定和人体药动学研究。     

羟基喜树碱胶囊剂在小鼠体内的药代动力学及组织分布

目的 :研究羟基喜树碱 (HCPT)胶囊剂在小鼠体内的药代动力学及组织分布。方法 :用荧光分光光度法测定小鼠血浆及组织中HCPT含量 ,计算药代动力学参数。结果 :HCPT在0 01～0.5μg/ml浓度范围呈良好的线性关系 ;HCPT胶囊剂的血药浓度 -时间曲线符合二房室药代动力学模型 ;主要药代动力学参数T1/2α 为0 29h、T1/2β 为1 64h、AUC0～24 为14 73μg/ml、CL为12 53ml/h。HCPT在胃肠组织中AUCpo>AUCiv,P<0.05 ,而全身血中AUCpo相似文献   

羟基喜树碱脂肪乳在大鼠体内的药动学及组织分布研究

目的:研究羟基喜树碱(HCPT)脂肪乳在大鼠体内的药动学及组织分布。方法:采用高效液相色谱法测定静脉注射HCPT脂肪乳后大鼠血浆及组织中HCPT浓度,计算药动学参数并分析药物在组织中的分布情况,并与静脉注射HCPT溶液比较。结果:HCPT脂肪乳和溶液在大鼠体内药动学过程呈二室吸收模型,t1/2α分别为(0.081±0.011)h、(0.517±0.721)h,t1/2β分别为(0.778±0.107)h、(0.3890±0.053)h,AUC(0～4h)分别为(1.619±0.223)μg·h·mL-1、(2.031±0.280)μg·h·mL-1,Cl(S)分别为(114.3±15.7)mL·h-1、(100.3±13.8)mL·h-1;与溶液比较,静脉注射HCPT脂肪乳后HCPT在肝、肺、脾、脑中的浓度更高。结论:与HCPT溶液剂型比较,脂肪乳剂型更能提高药物对肝、肺、脾、脑的趋向性。     

羟基喜树碱脂质体制备工艺的研究

目的 确定羟基喜树碱(HCPT)脂质体(HCPT-lipo)的处方和制备工艺.方法 筛选乙醇、丙酮、甲醇、乙腈等有机溶剂,进行色谱条件专属性试验并在色谱条件下进样分析;测定HCPT-lipo中药物包封率(ER),以ER(％)=WE/Wz×100％求算HCPT-lipo的包封率.对比干膜法、pH梯度/真空-注入法、逆相蒸发法、高压乳匀法、乳化蒸发法5种不同方法制得脂质体的包封率,确定制备HCPT-lipo的技术.结果 每1mL脂质体溶液(含HCPT0.5 mg)加入3mL甲醇超声能够得到完全澄清透明的溶液.在与样品峰相应的位置上,空白脂质体对HCPT-lipo样品中HCPT测定无干扰;HCPT原料在0.824～692 ng具有良好的线性关系.乳化蒸发法可制得包封率高,稳定性好的脂质体.药脂比宜＞12.5∶1.结论 制得的脂质体在粒径和包封率等关键指标上都比较满意,基本达到了试验设计的目的.     

A two-step pH-dependent liquid–liquid extraction combined with HPLC-fluorescence method for the determination of 10-hydroxycamptothecin in mouse liver tissue

Context: Liquid–liquid extraction (LLE) shows high efficiency in the plasma sample preparation. However, this extraction method is not optimal for the biological samples containing complex organic interferences, such as liver and brain tissues. Some plant secondary metabolites can be converted between water-insoluble and water-soluble forms by pH adjustment.

Objective: A two-step pH-dependent LLE method was introduced in this study to eliminate both water-soluble and lipidic interferences using the properties of pH-dependent interconvertible forms of analytes during sample preparation. A sensitive and reliable method using a reverse-phase HPLC coupled with a fluorescence detector was developed and validated.

Materials and methods: 10-Hydroxycamptothecin (HCPT) with internal standard camptothecin and liver tissues were used as model compounds and biological samples. The lactone form of HCPT was converted to the water-soluble carboxylate form under moderate alkaline conditions, and the water-insoluble interferences were extracted with a nonpolar solvent. Afterward, the water-insoluble lactone form of HCPT was regenerated by acidification and then extracted using an organic solvent in a second LLE step.

Results: The calibration curve was linear (r² > 0.999) for HCPT concentrations ranging from 2.5 to 160?ng/mL. The mean recoveries of HCPT were 114.94?±?3.98, 104.30?±?2.44 and 95.90?±?1.40% (n?=?6) at concentrations of 2.5, 10 and 80?ng/mL, respectively. The stability determination data showed that no significant degradation occurred under the experimental conditions. This method was successfully applied to liver tissue distribution study of HCPT in mice.

Discussion and conclusion: This two-step LLE can be applied to distribution studies of compounds with pH-dependent interconvertible forms in other biological matrices.     

瑞格非尼片在健康志愿者体内的药动学研究

目的利用固相萃取–高效液相色谱,建立测定人血浆中瑞格非尼及其代谢产物N-氧化瑞格非尼和去甲-N-氧化瑞格非尼的方法,研究其人体药动力学。方法采用固相萃取–高效液相色谱法进行检测,以索拉非尼为内标,Oasis HLB型固相萃取柱(200 mg×6 m L);流动相:0.5%磷酸二氢钾溶液–乙腈(30∶70);检测波长:260 nm;体积流量:0.5 m L/min;柱温:30℃;进样量:5μL。健康志愿者空腹条件下用50 m L温水送服40、160 mg/片瑞格非尼片。利用DAS 2.1.1软件对药–时数据进行统计学分析,并得到主要药动学数据。结果瑞格非尼及其代谢产物N-氧化瑞格非尼和去甲-N-氧化瑞格非尼在10~10 000 ng/m L线性关系良好;检测限(LOD)分别为0.67、0.72、0.57 ng/m L;定量限(LOQ)分别为1.98、2.32、1.61 ng/m L;得到瑞格非尼及其代谢产物N-氧化瑞格非尼和去甲-N-氧化瑞格非尼药–时曲线和主要药动学数据。40、160mg/片规格瑞格非尼片中瑞格非尼的Cmax、AUClast、AUCmf、t1/2分别为(2 215.7±216.9)、(5 721.2±672.1)ng/m L,(13 772.9±10 231.1)、(51 182.3±43 219.2)ng·h/m L,(12 858.3±12 510.2)、(66 531.8±51 093.1)ng·h/m L,(6.58±1.31)、(13.12±4.23)h。结论采用固相萃取–高效液相色谱法考察瑞格非尼片在健康志愿者体内的药动学研究具有操作简便、可靠性高等优点,对该药的应用具有重要意义。     

艾普拉唑肠溶片在中国健康人体中药代动力学及绝对生物利用度研究

目的 采用液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法研究艾普拉唑肠溶片在中国健康人体中的吸收特性. 方法 采用随机交叉自身对照试验设计,16名健康受试者随机等分成4组,先后口服艾普拉唑肠溶片或静脉注射艾普拉唑钠,采用UPLC-MS/MS测定血浆药物浓度.利用WinNonlin(V6.1)软件标准非房室模型方法进行药代动力学参数的计算. 结果 注射用艾普拉唑钠(10mg)的主要药代动力学参数:最大血药浓度(Cmax)为(834.3±101.2)ng/mL,消除半衰期(t1/2)为(3.4±0.9)h,表观分布容积(Vz)为(14.0±2.2)L, 0到t时间药时曲线下面积(AUC0_t)为(3520.9±915.3)ng·h/mL,血浆清除率(CL)为(3.0±0.9)L/h.艾普拉唑肠溶片(10mg)的主要药代动力学参数:Cmax为(347.9±176.3)ng/mL,t1/2为(3.5±0.8)h,Vz为(29.1±12.2)L,AUC0_t为(1970.2±834.7)ng·h/mL,CL为(5.9±2.5)L/h.与静脉给药相比,口服艾普拉唑肠溶片的绝对生物利用度为(55.2±13.9)%. 结论 艾普拉唑肠溶片生物利用度良好,适于开发.     

Determination of macelignan in rat plasma by high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection

A high-performance liquid chromatographic method was developed for the determination of macelignan in rat plasma and applied to the pharmacokinetic study of macelignan in rats. Chromatographic separation was achieved on a conventional ODS column with the mobile phase of water: acetonitrile: methanol = 35:32.5:32.5 (v/v/v %). The flow rate of isocratic elution was 1 mL/min and peaks were detected at 240 nm. The limit of detection was 10 ng/mL and the limit of quantitation was 20 ng/mL. The calibration curve was linear over the concentration range of 50-5000 ng/mL. Intra-and inter-day precision for the assay over the concentration range was below 10 % and the accuracy ranged between 96.0-107% for intra-day and 98.8-114% for inter-day, respectively. The method was applied to the single dose pharmacokinetic study of macelignan in rats and the results showed that this HPLC method was adequate to support the in vivo pharmacokinetic study of macelignan.     

Development and validation of a sensitive reversed-phase HPLC method to determine intracellular accumulation of hydroxycamptothecin

The intracellular accumulation of anti-cancer agents strongly influences the efficiency of chemotherapy for cancer. In the present study, a simple, rapid, sensitive reversed-phase high-performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method was developed and validated to determine hydroxycamptothecin (HCPT) in Eca109 cells. HCPT in cellular lysis solution were measured by RP-HPLC with a C18 column after extraction with ethyl acetate. The mobile phase contained 0.1% triethylamine-phosphoric acid buffer (pH 3.0) and acetonitrile (75:25, v/v). Fluorescence detector with excitation and emission wavelengths of 382 and 528 nm was used for determination of HCPT. The calibration curve was linear from 2 to 100 ng/ml with correlation coefficient of 0.9999, while the limit of quantification is 2 ng/ml. The recovery of assay was between 86.5 and 105.2%. The intra- and inter-day coefficients of variation were less than 10% (R.S.D.). Furthermore, the validated method was used to determine the accumulation of HCPT after incubating the liposomal formulation of HCPT and HCPT for injection with the intact cells. HCPT liposomes showed higher intracellular accumulation of HCPT at different incubation times compared with that of conventional HCPT injection.