小儿复方鸡内金散中鸡内金的真伪鉴定

目的 鉴定小儿复方鸡内金散中鸡内金的真伪。方法 根据家鸡、麻鸭、家鹅的线粒体基因序列设计和筛选引物,优化反应条件和体系,建立基于特异性引物的多重PCR法进行鉴别。结果 鸡内金、鸭内金、鹅内金DNA在优化条件下,分别在94、124、155 bp处产生了清晰、明亮的条带,并且未观察到非特异性扩增,呈现出较好的特异性,检测灵敏度均达到0.1 ng/μL。来源于8个厂家的11批样品中,有2批检出了鸭内金掺伪,检出率为18.2%。结论 该方法灵敏度高,特异性强,可为更好地监控含鸡内金中药制剂的质量提供新颖的途径和有力的手段。     

特异性PCR方法鉴别鳖甲药材和饮片

鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行PCR扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。     

基于双向位点特异性PCR的金银花真伪鉴别方法研究

目的:筛选获得金银花真伪鉴别SNP位点并建立双向位点特异性PCR方法,用于鉴别金银花和其常见伪品以及两者的混杂品.方法:通过对GenBank收录的忍冬属植物叶绿体trnL-trnF序列进行对比分析,获得金银花真伪鉴别SNP位点;并依据该SNP位点设计特异性引物,对84份金银花基原植物及其市售饮片、伪品进行双向位点特异性PCR扩增,并根据真伪品的特异性条带进行金银花药材鉴别.结果:退火温度为61℃时,正品均出现468 bp的条带,红腺忍冬、华南忍冬、灰毡毛忍冬、黄褐毛忍冬、水忍冬、金银忍冬、郁香忍冬、新疆忍冬、繁果忍冬等9个伪品均出现324 bp的条带,在正品DNA中掺入5％以上伪品时同时出现正品和伪品条带.结论:双向位点特异性PCR可以鉴别金银花真伪品及两者的混杂样品.     

何首乌等位基因特异性PCR鉴别方法研究

目的建立一种快速鉴别何首乌真伪的方法。方法通过何首乌及其混伪品的psb A-trn H基因序列,寻找SNP位点并设计特异性引物,对来自于不同产地的何首乌及其3个同属混伪品进行PCR扩增,优化反应体系条件,并对此方法进行考察。结果建立了何首乌特异性PCR的方法,在退火温度48℃、循环次数30时仅有何首乌能扩增得到191 bp的特异性条带,伪品则无。结论等位基因特异性PCR鉴别何首乌真伪方法简单、可靠。     

特异性PCR鉴别蜈蚣及其混伪品

目的:蜈蚣是我国传统的中药材,具有良好的药用价值。目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多,临床用药的安全性和有效性难以保证。该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品。方法:通过比较蜈蚣及其混伪品基原物种的COI基因序列差异,根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R,采集蜈蚣原动物样本及药材样本,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。结果:少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带,其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现。结论:PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪,具有高度特异性,为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据。该方法具有简单、直观等特点,有利于广泛的普及与应用,在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景。     

紫河车饮片 干浸膏粉及配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 紫河车在我国有悠久的药用历史,《中华人民共和国药典》自2015年版起不再收录紫河车及其中药成方制剂,但市场上仍有紫河车饮片及含紫河车的产品,并存在使用猪、牛、羊等动物胎盘伪充紫河车入药的现象。建立一种适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据紫河车COⅠ基因序列筛选适用于紫河车饮片、干浸膏粉及配方颗粒的稳定引物区间,并在区间内筛选获得紫河车及其混伪品的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,设计特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性及适用性考察。结果 当退火温度为60 ℃,循环数为33次时,紫河车正品饮片、干浸膏粉及配方颗粒均能扩增出约110 bp片段,其他3种伪品及阴性对照均无条带。结论 建立的特异性PCR鉴别方法可准确地鉴别紫河车及相关产品真伪。     

位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究

目的:针对正品鹿茸与近源种鹿茸药材饮片鉴别的难点,建立一种简便、快速、准确的近源种鹿茸药材分子鉴别方法.方法:根据鹿科鹿属种动物cytb全序列比对分析,设计1对能准确鉴别正品鹿茸(包括梅花鹿和马鹿)和其他近源种鹿茸的引物,在此基础上建立鹿茸药材位点特异性PCR鉴别方法,并对影响PCR结果的主要因素退火温度、Taq用量、循环次数以及模板用量和重复性等进行方法学考察和优化.结果:在方法学考察的基础上,在μL PCR反应体系,退火温度为65℃的条件下,能准确扩增出约323 bp大小的阳性DNA条带,经测序验证结果表明,系正品鹿茸原动物的Cytb基因序列片段,而伪品鹿茸未扩增出条带.结论:所建立的位点特异性PCR方法,能将正品鹿茸与其他近源种鹿茸药材鉴别开来,具有较高的特异性、重复性,可广泛应用于鹿类药材的鉴别.     

柴胡及其常见伪品的DNA指纹鉴定

目的:建立柴胡及其伪品DNA指纹鉴别方法.方法:采用改良的CTAB法提取柴胡及常见伪品的干根基因组DNA,设计鉴别正品柴胡及其伪品的特异性引物,利用PCR扩增技术对正品柴胡及其伪品进行DNA指纹鉴定.结果:改良的CTAB法提取出大小为23 kb的基因组DNA条带,纯度在(1.71±0.11),且经特异引物PCR扩增,只有正品柴胡能扩增出173bp大小的片段,而伪品未能扩增出目的片段.结论:柴胡DNA具有特异性指纹特征,可作为市售柴胡的真伪鉴定依据.     

基于PCR技术可视化鉴别金钱白花蛇方法的建立

目的 基于聚合酶链式反应(PCR)技术,利用核酸扩增产物,建立一种可以快速鉴定金钱白花蛇中药材真伪的可视化试纸条检测方法。方法 提取金钱白花蛇、赤链蛇及市售样本的基因;根据mtDNA Cytb序列进行对比分析,设计1对特异性鉴别引物,进行修饰物标记;建立鉴别PCR反应体系,使用核酸扩增产物,利用可视化试纸条对市售样本进行真伪鉴定。结果 鉴别引物可将正品金钱白花蛇中药材扩增出500~600 bp之间的特异性条带,而伪混品则不出现相应的特异性条带;可视化试纸条对市售样本进行检测,鉴别效果良好,灵敏度高,可准确鉴定中药材真伪。结论 可视化试纸条可以快速鉴别金钱白花蛇中药材真伪,稳定性高、特异性强,可应用于市场出售金钱白花蛇中药材的鉴定。     

快速PCR方法在山药真伪鉴别中的应用

目的:采用快速聚合酶链式反应(PCR)方法建立快速、准确、有效的山药药材真伪分子鉴定方法。方法:收集不同地区山药正品及其混伪品材料,对所有样品进行总DNA的提取,通过对山药及其混淆品DNA条形码rbc L片段进行同源对比分析,根据鉴别位点,设计中药山药的鉴别引物,引物序列为Sy89:5'-AAGGACGATGCTACCACATCGACAC-3',Sy90:5'-ATCCCAATAGGGGACGGCCA-3'。采用2步法进行PCR扩增,并对PCR反应体系和反应程序影响因素进行考察,从而对山药进行真伪鉴别。结果:通过对影响PCR退火温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行反应程序的优化,并对不同Mix进行考查,获得了山药快速特异性PCR反应程序。PCR扩增反应液为50μL,包括Premix TaqTM25μL,上、下游引物各1.5μL,DNA模板1.5μL,加无菌双蒸水至50μL。PCR扩增程序为98℃预变性1 min,98℃变性10 s,68℃复性15 s,30个循环,72℃后延伸30 s。以1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物在250 bp附近处有一清晰条带,而混淆品无条带。结论:快速特异性PCR方法可以简单快速鉴别山药的真伪,为实现中药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑。     

基于中医传承辅助系统分析高忠英治疗慢性萎缩性胃炎的用药规律

目的 探讨高忠英治疗慢性萎缩性胃炎的用药规律.方法 以高忠英门诊病历为数据源,利用“中医传承辅助平台(V2.5)”软件构建数据库,采用频数分析、关联规则分析方法进行数据挖掘,确定处方中核心药物组合及药物间的关联规则等.结果 共收集处方60首,包含83味中药,其中使用频次较高的药物包括浙贝母、天花粉、鸡内金等;频次较高的药物组合包括“浙贝母、天花粉”“浙贝母、鸡内金”“天花粉、鸡内金”“浙贝母、莪术”等.获得不同药物组合模式的关联规则447条.结论 高忠英治疗慢性萎缩性胃炎常采用益气健脾、和胃安中的治疗法则;“脾虚胃燥”是萎缩性胃炎病机的关键.     

运脾颗粒的质量标准研究

目的对运脾颗粒质量控制指标进行研究。方法对陈皮、当归、苍术、鸡内金分别进行薄层色谱鉴别,同时以橙皮苷为指标成分,应用高效液相色谱法对其进行定量测定。结果定性鉴别简便易行;含量测定方法中橙皮苷分离较好,橙皮苷柱效比较理想,其理论塔板数大于2000。加样回收率为101.70%。结论本法重复性好、精密度高,可用于该制剂的质量控制,并为运脾颗粒的深入研究提供了试验基础。     

鸡内金多糖对糖尿病高脂血症大鼠血脂、血糖及细胞免疫功能的影响

目的:研究鸡内金多糖(PECG)对糖尿病高脂血症模型的影响。方法:以高脂高糖饲料饲喂Wistar大鼠30 d后,腹腔注射链脲佐菌素,继续以高脂高糖饲料饲喂,并分别以80,20 mg.kg-1剂量的鸡内金多糖灌胃给药40 d,测定血清血脂和血糖水平,计算胸腺指数和脾脏指数,检测淋巴细胞增殖能力,考察PECG对大鼠血脂、血糖及免疫功能的影响。结果:PECG能显著降低糖尿病高脂血症大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和空腹血糖浓度(P<0.05),升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胸腺指数及脾指数(P<0.05),高剂量组大鼠的淋巴细胞转化能力增强,刺激指数(SI)明显升高(P<0.05)。结论:PECG能有效降低糖尿病高脂血症大鼠血糖和血脂水平,并能改善其细胞免疫功能。     

基于中医传承辅助平台的尹常健教授治疗肝硬化用药规律分析

目的:探讨与总结尹常健教授治疗肝硬化用药规律,挖掘治疗肝硬化的新组方,为肝硬化的防治提供新的思路。方法:收集尹常健教授治疗肝硬化门诊处方并建立相关数据库,通过中医传承辅助系统挖掘尹常健教授治疗肝硬化的用药规律。结果:筛选治疗肝硬化的方剂435首,分析得出尹教授治疗肝硬化的常用药物有豆蔻,鸡内金等21种,核心组合模式中多见马鞭草、水红花子等药物和豆蔻关联,并演化得到7首治疗肝硬化不同阶段的新处方。结论:以中医传承辅助系统为平台,利用文本挖掘、关联规则等数据挖掘方法较好的体现了尹常健教授治疗肝硬化的用药规律,即多以健脾化湿,活血利湿,软坚散结立法,重视顾护胃气,提出健脾磨积之法,注重阶段性用药。     

自拟赐育汤治疗男性不育症32例疗效观察

目的：观察自拟赐育汤治疗男性不育症的临床疗效-方法：运用自拟赐育汤(药物组成：肉苁蓉、熟地、黄精、枸杞、黄芪、当归、山药、茯苓、鸡内金、蜈蚣、牛膝、丹参、枣仁、菖蒲、柴胡、郁金、黄柏)与鲜鸡蛋同煎，每日1剂，10天为1疗程：结果：治疗3个程后，治愈11例，好转20例：结论：自拟赐育汤治疗男性不育症有较好疗效。     

狗脊饮片多成分的1H-NMR分析

目的:采用1H-NMR技术从多成分角度分析30批市售狗脊饮片的质量差异,建立狗脊饮片质量控制的新方法.方法:采用主成分分析和偏最小二乘法对600 MHz核磁谱仪测定的30批市售狗脊饮片1H-NMR谱图进行模式分析,揭示市售不同质地狗脊饮片内在成分上的差异.结果:狗脊饮片的质地与其多种成分含量密切相关.不同质地狗脊饮片成分差异主要表现为糖类、酚酸类、甾醇类及蕨素类成分的含量差异.狗脊饮片1H-NMR谱芳香区的酚酸类成分吸收信号可以作为评价狗脊饮片质量的指标.结论:1H-NMR技术与多元统计分析法结合能从多种成分角度提取狗脊饮片质量差异的成分信息,可以作为狗脊饮片的质量控制方法.     

基于拉曼光谱技术的白芍药汤剂的光谱特性分析

目的:分析测定单味白芍饮片汤剂中的化学成分.方法:分别采集7批次白芍饮片、5批次白芍药材、5批次赤芍饮片制备所得汤剂的拉曼光谱,并进行初步谱峰归属,分析白芍饮片汤剂与白芍药材汤剂的拉曼光谱,对比白芍饮片汤剂和同属药物赤芍饮片汤剂的拉曼光谱.结果:白芍饮片汤剂拉曼光谱在637,783,847,981,1 091,1 128,1 336,1 458,1 636cm-1处出现9个拉曼信号.白芍药材汤剂拉曼光谱中的783,981,1 128,1 336,1 458 cm-15个拉曼峰同样存在于白芍饮片汤剂的拉曼光谱中,633,1 633 cm-1拉曼峰发生微小频移,而716,737,835,916,1 072,1 271,1 600 cm-1等拉曼峰消失.此外白芍饮片汤剂和同属药物赤芍饮片汤剂的拉曼光谱存在较大差异.结论:拉曼光谱可能为白芍药或其他中药汤剂提供一种快速的化学成分检测方法.     

火焰原子吸收光谱法测定鸡内金中的金属元素

目的:利用原子吸收光谱法测定鸡内金中金属元素含量。方法:使用HNO3-HClO4体系消解样品,采用火焰原子吸收光谱法对鸡内金中的Mg,Fe,Mn,Zn,Cu 5种金属元素进行测定。结果:鸡内金样品中含有较丰富的Mg,Fe,Mn,Zn,Cu。5种金属元素回收率在95.27%～104.47%,RSD<3.53%。结论:建立了鸡内金药材中金属元素的分析方法,该方法操作简便,精密度好,结果准确可靠。     

猪胆粉及其中成药的特异性PCR鉴别方法

目的:建立一种适用于猪胆粉及其中成药的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,为复杂组分中动物源性成分的鉴定提供示范。方法:根据猪源性鉴别引物,建立PCR鉴别方法,优化反应体系,并对此方法进行考察和验证。利用建立的PCR鉴别方法,对20批自制猪胆粉药材,19批市售猪胆粉药材和22批含猪胆粉中成药的猪源性成分进行鉴别,将市售的猪胆粉药材和含猪胆粉中成药PCR扩增的阳性产物进行酶切验证和序列测定验证。结果:20批自制猪胆粉药材、猪胆粉对照药材均能扩出约212 bp的特异性鉴别条带,牛和羊参考品均无条带; 19批市售猪胆粉药材中仅5批扩出特异性鉴别条带; 22批含猪胆粉中成药中有10批检出猪源性成分;猪胆粉对照药材及市售猪胆粉药材PCR扩增的阳性产物经Mnl I酶切后均能产生约200 bp的条带;猪胆粉及其中成药中扩增产物序列与Gen Bank数据库中相似性最高的物种为Sus scrofa,一致性为99%,与猪的序列高度一致。结论:该文建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别猪胆粉及其中成药中的猪源性成分。     

基于电子舌的白及及其近似饮片的快速辨识研究＊

目的 探讨电子舌方法用于白及及其近似饮片快速辨识的可行性。方法 收集45批白及饮片及其近似品天麻饮片30批、玉竹饮片30批、黄花白及饮片29批，分别进行药典与地方标准辨识（M₁法）、HPLC指纹图谱辨识（M₂法），并结合原始采购信息获取最终饮片种类的标杆信息（Y），再采集电子舌味觉感官数据（X）并利用化学计量学方法分别建立主成分分析-判别分析（PCA-DA）、偏最小二乘-判别分析（PLS-DA）的45批白及饮片与剩余89批饮片的二分类辨识模型和45批白及饮片、30批天麻饮片、30批玉竹饮片、29批黄花白及饮片的四分类辨识模型（Y=F（X），M₃法）。结果 经留一法交互验证，基于PCA-DA、PLS-DA二分类辨识模型的正判率分别为98.51%、100.00%，基于PCA-DA、PLS-DA四分类辨识模型的正判率分别为100.00%（无未分类样本）、100.00%（有4个未分类样本），模型判别良好，结合正判率与模型未分类样本数两项指标，最终选择二分类辨识以PLS-DA为最终辨识模型、四分类辨识以PCA-DA为最终辨识模型，两种模型正判率均为最高，且均未出现未分类样本。结论 电子舌可快速准确辨识白及及其近似饮片，为未来研发智能化中药饮片快速辨识设备提供了思路。