pEGFP-NeuroD重组质粒的构建及其在肝癌细胞中的表达

神经分化因子1(NeuroD-1)又名B细胞E盒转录激活因子2(Beta-2),属于B类碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族.NeuroD-1蛋白与广泛存在的A类bHLH蛋白E47形成异二聚体,激活胰岛素基因的转录,对胰腺β细胞的发育及生理功能有重要作用,被认为是治疗糖尿病的候选基因之一.     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后STAT1和STAT3表达的影响及MRI表现

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死面积变化及信号转导与转录激活子-1(STAT1)、磷酸化STAT1(P-STAT1)、信号转导与转录激活子-3(STAT3)、磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白表达的影响。方法雄性健康SD大鼠40只,随机分为假手术组(A)、脑缺血再灌注组(B)、生理盐水治疗组(C)、EPO治疗组(D),采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉血流2 h,再灌注24 h,建成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。治疗组于脑缺血刚开始时腹腔注射EPO或等量生理盐水,于24 h时行MRI检查观察脑梗死面积,采用Western blotting检测STAT1、P-STAT1、STAT3、P-STAT3蛋白表达水平的变化。结果与B、C组相比,D组脑梗死面积减小(P<0.05),STAT3磷酸化水平增加(P<0.05),STAT1磷酸化水平有所减少。结论 EPO可能通过影响JAK/STAT信号转导通路减小脑梗死面积。     

The Effect of Erythropoietin on Focal Cerebral Ischemia Reperfusion in Rats by Observing STAT1, STAT3 Protein and MRI Expression

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑梗死面积变化及信号转导与转录激活子-1( STAT1)、磷酸化STAT1( P-STAT1)、信号转导与转录激活子-3(STAT3)、磷酸化STAT3( P-STAT3)蛋白表达的影响.方法 雄性健康SD大鼠40只,随机分为假手术组(A)、脑缺血再灌注组(B)、生理盐水治疗组(C)、EPO治疗组(D),采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉血流2h,再灌注24h,建成局灶性脑缺血再灌注损伤模型.治疗组于脑缺血刚开始时腹腔注射EPO或等量生理盐水,于24h时行MRI检查观察脑梗死面积,采用Western blotting检测STAT1、P-STAT1、STAT3、P-STAT3蛋白表达水平的变化.结果 与B、C组相比,D组脑梗死面积减小(P＜0.05),STAT3磷酸化水平增加(P＜0.05),STAT1磷酸化水平有所减少.结论 EPO可能通过影响JAK/STAT信号转导通路减小脑梗死面积.     

日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用

目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。     

PCBP1:一种在多水平上参与基因表达调控的蛋白因子

多聚胞嘧啶结合蛋白1 (poly C binding protein-1,PCBP1),属于RNA结合蛋白亚家族,因其具有同RNA的多聚胞嘧啶(poly C)区域特异的结合活性而得名.目前该亚家族共有5个成员:hnRNP K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)、PCBP1、PCBP2、PCBP3和PCBP4.PCBP1蛋白在多个水平参与基因的表达调控,如转录、mRNA加工、mRNA的转运、mRNA稳定以及翻译水平调控等.本文对PCBP1基因的结构和生物学功能进行了综述.     

严重腹腔感染大鼠JAK/STAT通路活化与多器官功能损害的关系

目的　观察Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )通路在腹腔感染所致脓毒症大鼠组织中的活化规律及其与多器官功能损害的关系。方法　采用盲肠结扎穿孔 (CLP)法制作大鼠脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、CLP组、JAK 2抑制剂 (AG4 90 )组和STAT 3抑制剂 (雷帕霉素 ,RPM)组。留取肝、肺、肾、肠组织测定STAT1/ 3活性 ,同时测定血清AST、BUN含量及肺组织髓过氧化物酶 (MPO)和肠组织二胺氧化酶 (DAO)活性。结果　CLP后 2h肝、肺、肠组织中STAT1均迅速活化 ,6～ 2 4h达高峰 ,而肾组织STAT1活化相对迟缓。肝、肺组织中STAT3活性亦明显升高 ,但肾、肠组织中未检测到活化的STAT 3。AG4 90、RPM早期处理后 ,除肾组织外 ,其他组织STAT1活性均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,肝、肺组织STAT3活性也显著降低。同时 ,AG4 90、RPM处理组血清AST、BUN水平和肺组织MPO活性在 2 4～ 4 8h均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,但小肠DAO活性无明显改变。结论　STAT1、STAT3在脓毒症时高度活化 ,并参与了严重腹腔感染所致脓毒症的病理过程。抑制JAK/STAT通路活化有助于多器官功能损害的防治。     

肢体骨肉瘤介入性综合治疗远期疗效分析

目的　分析介入性综合治疗方法治疗肢体骨肉瘤的效果。方法　对 5 5例经病理证实的肢体骨肉瘤给予 3个阶段性的治疗 :(1)经动脉局部灌注及全身化疗 2个疗程。 (2 )动脉内局部小剂量灌注同时放疗。 (3)全身化疗 6个疗程。所有病例随访 12～ 2 10个月。按完成治疗阶段分A、B、C3组 ;A组完成全部 3个阶段的治疗 ,B组完成第 1、2阶段的治疗 ,C组仅完成第 1阶段的治疗。回顾分析 3组患者的肿瘤局部控制率、累计生存率和中位生存期。结果　A、B两组总的局部控制率为86 36 % ,局部复发率为 13 6 4 %。 1、3、5年的累计生存率分别为A组 10 0 0 0 %、71 4 3%、5 3 19% ,B组 81 2 5 %、6 2 5 %、6 2 5 % ;C组 1年生存率为 2 7 2 7% ,第 2年全部死亡。 3个组的中位生存期 (含带瘤 )为 :A组 6 2 2 3个月、B组 2 0 5 7个月、C组 8 2 5个月 ,差异有非常显著性意义 (A组与B组比较 :χ2 =2 8 5 8,P <0 0 0 0 1;A组与C组比较 :χ2 =5 3 95 ,P <0 0 0 0 1;B组与C组比较 :χ2 =16 39,P <0 0 0 0 1)。结论　对肢体骨肉瘤进行介入性综合治疗能获得良好的肿瘤局部控制率及较好的远期生存率     

2型糖尿病及其伴大血管并发症患者血清IL-6、TNF-α和CRP水平变化

白细胞介素 6(IL - 6)、及肿瘤坏死因子α(TNF -α)是具有广泛生物学功能的细胞因子。C -反应蛋白是急性时相蛋白中最敏感的指标。本文对 80例 2型糖尿病患者的血清IL- 6、TNF -α和CRP水平进行了检测 ,旨在探讨其与糖尿病及其大血管并发症关系。1　对象和方法1 .1　研究对象 :2型糖尿病组 (2型DM组 ) :40例 ,男 2 2例 ,女 1 8例 ,根据WHO标准诊断 ,均为近年我院住院病人 ,平均年龄 55岁 (32～ 82岁 ) ,平均病程 5 .68年 (1月～ 1 7年 )。2型糖尿病伴大血管并发症组 (大血管并发症组 )者 40例 ,全部病人排除肝肾功能不良。另设正常…     

体外循环手术麻醉中TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的动态观察

目的 :观察 30例体外循环麻醉手术患者血清中TNF -α、IL - 6、IL - 8、IL - 1 0的动态变化。方法 :分两组 ,A组 :1 5例先心病体外循环麻醉手术患者 ;B组 :1 5例后心病体外循环麻醉手术患者 ,采用ELISA法和放射免疫法检测血清中细胞因子的浓度。结果 :30例心脏病体外循环麻醉手术患者 ,在心肺转流前开始 ,TNF -α、IL - 6、IL - 8、IL - 1 0均有显著升高 ,A、B两组的TNF -α值分别由 (3 .94± 1 .55)和 (4.89± 2 .60 )升高至 (2 1 .85± 9.93)和 (52 .36± 1 4 .79) ;A组的IL - 6由 (0 .1 6± 0 .0 5)升高(0 .95± 0 .48) ;IL - 8由 (0 .60± 0 .0 7)升高至 (1 .2 4± 0 .0 9) ;A、B两组的IL - 1 0分别由 (51 .2 1± 1 0 .60 )和 (78.50± 62 .40 )升高至(52 9.40± 2 57.1 2 )和 (1 1 51 .1 2± 62 4 .0 0 ) (P <0 .0 1 ) ,TNF -α、IL - 1 0先心病与后心病对比有显著差异。结论 :体外循环麻醉手术患者围手术期 ,TNF -α、IL - 6、IL - 8、IL - 1 0的表达提示免疫系统功能紊乱 ,且与术后感染、心功能不全有关 ,应予以足够的重视     

高效反义STAT3对A549细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨高效反义STAT3转染肺腺癌A549细胞后,肿瘤细胞辐射敏感性的变化,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的探索思路和途径。方法 用自行设计成功的高效反义STAT3(AS10)转染A549细胞后,以不同剂量γ射线照射,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,Hoechst 33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察;用Annexin V/PI复染,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率的变化;Western blot检测STAT3蛋白表达及磷酸化变化情况,以及其下游基因表达变化情况。结果高效反义STAT3(AS10)转染后,加以γ射线照射,A549细胞的增殖相比于单独作用组受到明显抑制,细胞早期凋亡水平也增加,STAT3蛋白及其下游Bcl-Xl、Cyclin D1蛋白表达变化明显下降,STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 反义STAT3(AS10)联合γ射线对A549细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,提高了A549细胞的辐射敏感性;表明阻断STAT3蛋白表达可能成为一种新的提高肿瘤辐射敏感性的有效手段。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后STATl和STAT3表达的影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后信号转导与转录激活因子（STAT）1、磷酸化STATl（P．STATl）、STAT3、P—STAT3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将雄性sD大鼠80只完全随机分为假手术（A）组、单纯脑缺血再灌注（B）组、脑缺血再灌注＋生理盐水（c）组和脑缺血再灌注＋EPO（D）组,每组20只,采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型。各组大鼠均于缺血2h后再灌注24h时,行MRI检查并计算缺血区异常信号相对面积值,Westernblot检测STATl、P—STATl、STAT3、P—STAT3蛋白表达水平的变化并计算相对灰度（rOD）值,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况并计算细胞凋亡指数。应用单因素方差分析和q检验分析数据。结果MRIT,WI示B、C组在左侧大脑半球皮质及皮质下均可见大片脑缺血异常高信号影,D组仅皮质下脑实质内或仅皮质处可见斑片状脑缺血高信号影;与B、C组比较,D组异常高信号区相对面积明显减小[（28．00±4．60）％、（29．70±4．80）％和（21．10±2．40）％;F=11．285,P〈0．01]。STATl、STAT3蛋白在正常脑组织中表达,缺血再灌注及EPO干预对二者表达水平均无明显影响（F=0．806和1．558,均P〉0．05）。P—STATl在A组表达较低,rOD值为0．75±0．13,缺血再灌注后表达显著增加;与B、C组相比,D组P—STATl表达水平有所减少（B～D：2．08±0．15、2．05±0．16、1．92＋0．05;F=3．274,P〉0．05）。P—STAT3在A组表达也较低,rOD值为1．02±0．09,缺血再灌注后表达显著增加;与B、c组相比,D组P—STAT3表达明显增加（B—D：2．22±0．13、2．04±0．14、4．21±0．21;F=40．719,P〈0．01）。B、C组细胞凋亡指数分别为（42．00±1．30）％和（41．20±2．50）％,高于D组[（20．90±1．46）％;F=378．704,JP〈0．01]。结论EPO可增加脑缺血区域P—STAT3表达水平、降低P—STATl表达水平,从而减少脑细胞凋亡的数目、减小脑梗死面积。     

FHL2蛋白的研究进展

FHL蛋白是分子结构中仅含有4个半LIM结构域的蛋白质家族,人类FHL蛋白有4个成员:FHL1、FHL2、FHL3及ACT.它们通过LIM结构域与某些结构蛋白、激酶、转录调控因子等多种蛋白质相互作用,对某些基因的表达、细胞分化与发育、细胞骨架形成等发挥重要调控作用.FHL2是其中研究最深入的成员.本文介绍FHL2的结构特征、组织和细胞中的分布、FHL2与其他蛋白之间的相互作用、生物学功能,以及在肿瘤和其他疾病的发生和发展中的作用等方面的研究进展.     

Synthesis, radiosynthesis, in vitro and preliminary in vivo evaluation of biphenyl carboxylic and hydroxamic matrix metalloproteinase (MMP) inhibitors as potential tumor imaging agents

Excess matrix degradation is one of the hallmarks of cancer and is an important factor in the process of tumor progression. It is implicated in invasion, metastasis, growth, angiogenesis and migration. Many characteristics of matrix metalloproteinases (MMPs) make them attractive therapeutic and diagnostic targets. MMP expression is upregulated at the tumor site, with localization of activity in the tumor or the surrounding stroma, providing a target for medical imaging techniques. Radioiodinated carboxylic and hydroxamic MMP inhibitors 2-(4′-[¹²³I] iodo-biphenyl-4-sulfonylamino)-3-methyl-butyric acid (9) and 2-(4′-[¹²³I] iodo-biphenyl-4-sulfonylamino)-3-methyl-butyramide (11), their unlabelled standards and precursors were synthesized. Radioiodination was conducted by electrophilic aromatic substitution of the tributylstannyl precursors and resulted in radiochemical yields of 70±5% (n=6) and 60±5% (n=4), respectively. In vitro zymography and enzyme assays showed for both hydroxamic acid and carboxylic acid compounds a good inhibition activity and a high selectivity for MMP-2. In vivo biodistribution in NMRI mice showed no long-term accumulation in organs and the possibility to accumulate in the tumor in a later phase of this study.     

MR findings in mannosidosis

Summary MR findings are reported in three patients presenting mannosidosis. Among a family of 8 children, 4 presented typical clinical and biological abnormalities related to mannosidosis. Brain MR examinations including sagittal T1 and axial T2 sections were obtained in three patients of this family (one 25-year-old male, one 34-year-old female, and one 35-year-old female). MR scans demonstrate seven types of modifications: (1) brachycephaly, (2) thick calvaria, (3) verticalization of the chiasmatic sulcus, (4) poor pneumatization of the sphenoid body, (5) partial empty sella turcica (6) cerebellar atrophy, and (7) white matter signal modifications. High signal abnormalities involving the parieto-occipital white matter are identified on axial T2-weighted scans in the three patients and are probably related to demyelination and associated gliosis as described previously by several authors on specimens.     

鼻咽癌放射抗拒相关的信号通路

目的 研究具有不同放射抗拒性的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE-2的基因表达谱差异,筛选与鼻咽癌放射抗拒相关的基因信号通路.方法 验证已构建的鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R的放射抗拒性,选用Human-6v3.0全基因组表达谱微珠芯片,筛选这2种细胞的差异表达基因.对差异基因进行生物信息学分析,寻找与鼻咽癌放射抗拒...