交联透明质酸植入角膜超声生物显微镜观察

目的探讨交联透明质酸材料对兔角膜组织的生物学反应影响,评价其作为角膜组织工程支架材料的可行性。方法将交联透明质酸材料植入兔角膜基质层间内3个月,超声生物显微镜观察该材料在角膜内生物学反应。结果观察期内交联透明质酸材料与兔角膜基质愈合良好,超声生物显微镜检测到兔眼角膜中间有一高回声条带,随着观察时间延长,角膜中央高回声条带有减弱。结论交联透明质酸材料植入兔角膜后无排异等反应发生,材料逐渐降解吸收,其生物相容性良好,是一种理想的角膜组织工程支架材料。     

脂肪干细胞构建组织工程化角膜基质组织

 目的 探讨以可降解高分子材料聚羟基乙醇（polylactic-co-glycolic acid,PLGA）为支架,复合自体脂肪干细胞构建组织工程角膜基质修复角膜基质层缺损的可行性。方法 兔脂肪干细胞（rabbit adipose derived stem cells,rASCs）培养至第4代接种在PLGA载体支架上,扫描电镜观察细胞在支架上生长黏附情况。体外培养7天后将rASCs-PLGA复合物回植到角膜基质缺损模型的兔角膜基质层间,术后第12周和24周取材行组织学和透射电镜超微结构观察。未接种细胞的PLGA材料移植基质层间作为对照组。结果 细胞在PLGA支架上生长增殖良好,实验组移植术后12周材料降解,角膜基本恢复透明。组织学检查显示移植后24周新生角膜基质样组织与正常角膜基质组织相似,电镜下胶原纤维直径与正常角膜基质组织比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脂肪干细胞可作为种子细胞来源用于构建组织工程角膜基质。     

利用表皮干细胞治疗兔角膜缘干细胞缺损

目的利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞在体外构建双层组织工程角膜,并修复兔角膜缘干细胞的缺损.方法建立兔角膜缘干细胞缺损模型,以去细胞猪角膜基质片作为支架材料,以自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞作为种子细胞,在体外构建组织工程角膜,并用来修复兔角膜缘干细胞缺损.结果利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞复合异种去角膜基质片在体外成功构建组织工程角膜;构建的组织工程角膜与正常角膜相似,具有上皮层和基质层;用组织工程角膜修复兔角膜缘干细胞缺损3个月后,损伤角膜透明度恢复良好,组织学结构基本恢复正常.结论成功构建了兔的双层组织工程眼角膜,并修复了兔角膜缘干细胞缺损.     

细菌纤维素构建组织工程角膜基质的方法及其评价

目的：探讨以细菌纤维素(BC)为支架构建组织工程角膜基质的可行性。方法： 体外分离培养兔和人角膜基质细胞,种植到BC膜中,构建完成后进行兔和人角膜基质细胞-BC复合膜的生物检测,并将兔角膜细胞生物复合物进行同种异体移植。术后1、4和8周时分别活体行前节OCT、角膜共焦显微镜检查,离体后组织学及免疫组织化学检查。结果： 人和兔角膜基质细胞长入BC的网架结构,细胞生长状态良好。移植术后1周兔眼无炎症反应及新生血管,4周后植片边缘出现新生血管,表面无水肿及溃疡形成。术后8周角膜共焦显微镜显示：移植片周围基质细胞增生活跃,邻近的角膜内皮细胞数量和形态正常。前节OCT显示：移植后复合膜逐渐降解,4周时复合膜边界模糊,8周时密度接近正常角膜组织。离体组织学检查显示：BC复合膜与正常角膜基质相似,有炎细胞浸润和血管形成,角膜组织无坏死和溶解。结论： BC无细胞毒性,具有良好的组织相容性和可降解性,可作为构建组织工程角膜基质的生物支架。     

兔角膜植入改性HEMA人工角膜支架材料的实验研究

目的：评价兔角膜层间植入改性聚羟乙基丙烯酸甲酯[poly(2-hydroxyethyl methacrylate),PHEMA]孔隙性材料的生物学反应。方法：选用新西兰白兔，将材料植入角膜板层口袋内，定期观察。结果：植入后材料全部稳定存留于角膜内，现最长达6个月以上。未见材料排出、白内障、视网膜脱离、角膜后膜等并发症。术后并发症包括睑缘红肿，畏光，流泪等刺激症状，均于术后1周内消失；组织学提示材料孔隙内有多量的成纤维细胞并有胶原等细胞外基质沉积。电镜检查材料周围角膜细胞数量增多，排列规则，功能活跃；材料内见有纤维细胞，类似正常的组织愈合过程。结论：结果提示此新忆隙材料是人工角膜支架的理想材料；由于该材料还可以制作成光学性能良好的光学部，故可望制成一体式人工角膜。     

脂肪组织工程中透明质酸支架的研究进展

透明质酸作为细胞外基质的主要成分,其独特的分子结构与理化性质使其广泛应用于伤口修复材料、美容填充物质、药物递送体系等医疗领域。透明质酸对细胞的黏附、增殖、分化、基因表达等多方面起着重要的调控作用。基于透明质酸改性、交联的天然生物支架材料对细胞无毒性、不引起炎症反应、具有三维立体多孔的空间结构,孔隙贯穿性高、大小均匀、界面利用细胞黏附、增殖,可塑性强并具有一定机械强度,生物性能优越、可在体内稳定降解等特点,其是构建脂肪组织工程理想的支架材料。     

化学处理多孔硅胶人工角膜支架在动物体内的生物学反应

目的：观察多孔硅胶支架材料经不同化学处理后植入免眼角膜内的生物学反应。方法：选用20只新西兰大白兔，平均分为4组，将多孔硅胶支架材料制成直径4mm的圆盘状，化学处理后植入兔角膜板层囊袋内。材料经酸溶液处理10min为Ⅰ组；酸溶液处理15min为Ⅱ组；H2O2溶液处理15min为Ⅲ组；未处理即对照组。术后每天裂隙灯观察，持续84d后取角膜行光镜、扫描电镜及免疫组织化学分析。结果：材料经化学处理后，眼睑充血减轻、分泌物减少，新生血管出现延迟，范围较小。光镜HE染色及扫描电镜观察见化学处理组多孔硅胶支架内角膜成纤维细胞和胶原蛋白较未处理组多。免疫组化染色见处理组Ⅰ型胶原沉积明显多于对照组。结论：化学溶液对多孔硅胶的表面处理可明显减轻兔角膜炎症反应，增加材料的组织相容性。     

组织工程膀胱细胞外基质生物相容性的实验研究

目的 制备兔膀胱细胞外基质材料,检测其生物相容性,探讨其作为组织工程泌尿道修复重建支架材料的可行性.方法 联合应用渗透溶液法-酶消化法-去垢剂洗涤法制备兔膀胱细胞外基质,将体外培养的兔膀胱移行上皮细胞与其复合培养,观察细胞在材料表面的黏附、生长、增殖情况;MTT法检测材料浸提液对膀胱移行上皮细胞的细胞毒性;将材料植入兔背部皮下检测其组织相容性.结果 兔膀胱细胞外基质冻干后呈白色半透明薄膜状,扫描电镜观察材料一面呈纤维网状结构,另一面呈平坦致密结构,两面均无细胞残留.膀胱移行上皮细胞能够在材料表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好.MTT法检测材料细胞毒性分级为0级或1级.皮下植入实验中动物无异常反应,材料能在体内逐渐降解并引导新生组织长入.结论 本研究制备的兔膀胱细胞外基质已完全除去组织中的细胞成份,同时保留了细胞外基质的纤维网状结构,具有良好的细胞相容性和组织相容性,可以作为组织工程泌尿道修复重建的支架材料.     

胶原-壳聚糖和角膜基质细胞复合膜的构建及其生物相容性

目的：探讨以胶原-壳聚糖为生物支架构建角膜基质细胞复合膜及其生物相容性。方法：兔和人角膜基质细胞分离培养后种植到胶原-壳聚糖共混膜上,构建成复合膜后移植到异体大耳白兔角膜基质囊袋中,术后1、2和4周时分别于活体进行前节OCT、Cs-4检查和离体组织学及免疫组化检测,观察复合膜中角膜基质细胞生长状态、生物支架对正常角膜细胞的影响及生物膜的降解情况。结果：活体前节OCT、Cs-4检查和离体组织学及免疫组化观察结果显示,兔和人角膜基质细胞在胶原-壳聚糖共混膜上生长良好,移植后复合膜逐渐发生降解,角膜组织未发生坏死和溶解,角膜上皮、基质和内皮细胞形态结构正常。结论：胶原-壳聚糖可作为角膜基质构建的生物支架,角膜共焦显微镜及前节OCT作为新的手段可活体观察构建后的角膜基质生物学活性。     

人工角膜设计及应用实验研究

目的观察两种直径的人工角膜在兔角膜应用的生物学反应。方法两种人工角膜均由光学中心和周边支架组成。23只人工角膜分两组植入兔角膜并观察6个月以上。术前人工角膜经rf-argon-plas-ma处理并进行细胞培养。结果最佳人工角膜的直径是4．5～6mm。植入28d后纤维细胞迁徙入多孔的周边支架并有胶元蛋白沉积。组织学分析证实,6w后GAG和生长因子沉积在周边支架。结论rf-argon-plasma处理可增加材料的组织相容性,上皮细胞可迁徙至人工角膜的光学中心。     

Corneal permeability assay of topical eye drop solutions in rabbits by MRI

This study examined the corneal permeability of topical eye drop solutions added with various corneal penetrating accelerators and gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acid (Gd-DTPA) by nuclear magnetic resonance imaging (MRI).Twenty-four New Zealand rabbits were randomly divided into 3 groups according to the random digits table:Gd-DTPA group,in which the rabbits received 23.45% Gd-DTPA;hyaluronic acid group,in which 23.45% Gd-DTPA plus 0.2% hyaluronic acid was administered;azone group,in which 23.45% Gd-DTPA with 0.2% azone was given.Fifty microliters of the eye drops was instilled into the conjunctive sac every 5 min,for a total of 6 applications in each group.Contrast medium signals in the cornea,anterior chamber,posterior chamber,and vitreous body were scanned successively by MRI.The morphology and cell density of the corneal endothelium were examined before and 24 h after the treatment.The results showed that the residence time of Gd-DTPA in the conjunctival sac in the hyaluronic acid and azone groups was longer than that in the Gd-DTPA group.The signals in the anterior chamber of the Gd-DTPA and hyaluronic acid groups were increased slightly,and those in the azone group strengthened sharply.The signal intensity continuously rose over 80 min before reaching plateau.The strengthening rate of signals in the anterior chamber was 19.63% in the Gd-DTPA group,53.42% in the sodium hyaluronate group,and 226.94% in the azone group.No signal was detected in the posterior chamber or vitreous body in all the 3 groups.Corneal morphology and cell density did not show any significant changes after the treatment in all the 3 groups.It was concluded that azone can significantly improve the corneal permeability of drugs that are similar to Gd-DTPA in molecular weight and molecular size,and MRI is a noninvasive technique that can dynamically detect eye drop metabolism in real time.     

角膜缘上皮细胞与脱细胞角膜材料移植修复碱烧伤角膜的实验研究

目的 探讨应用角膜缘上皮细胞(limbal epithelial cells,LECs)及脱细胞角膜材料(decellularized porcine cornea,DPC)移植修复碱烧伤兔角膜的疗效.方法 培养同种异体兔LECs,鉴定其中的角膜缘干细胞(limbal stem cells,LSCs),制备DPC作为支架材料,将LECs和DPC两者复合培养后板层移植到碱烧伤的兔眼角膜,观察移植后4个月内的角膜修复情况.结果 免疫细胞化学及RT-PCR检测培养的LECs中有表达ABCG2的LSCs.大体观察LECs-DPC移植后碱烧伤角膜的混浊度减轻,新生血管消退.HE、Masson Trichrome染色显示移植后上皮面的细胞复层化生长,炎性细胞浸润减少,DPC纤维整合于碱烧伤的角膜植床,角膜胶原排列趋于规则.透射电镜检查有桥粒及微绒毛结构形成.结论 体外培养的同种异体角膜缘上皮细胞联合脱细胞角膜材料移植能够修复碱烧伤的兔眼角膜.     

兔眼紫外交联术去上皮与保留上皮的角膜生物力学差异性研究

目的研究保留上皮的角膜直接照射术后生物力学变化,并与传统去上皮法进行比较,以明确其对圆锥角膜的疗效。方法将30只新西兰大白兔(60眼)随机分为两组,一眼为对照组,对侧眼行紫外交联作为实验组;实验组随机选一组去掉上皮后照射,另一组保留上皮照射,照射后立即取角膜中央区长条进行生物力学测试。结果经交联治疗后,对照组与实验组的角膜厚度差异有统计学意义(P<0.05),两实验组间差异无统计学意义(P=0.098)。去上皮组角膜试件的最大应力明显高于保留上皮组和对照组(P<0.05),实验组间差异无统计学意义(P=0.058)。弹性模量:E去上皮组>E保留上皮组>E对照组(P<0.05)。结论紫外交联术后角膜最大应力及生物力学强度显著增加,去上皮组增加幅度大于保留上皮组。     

青藤碱对膝骨性关节炎兔关节液及血清白细胞介素1β含量的影响

目的：探讨关节腔内注射青藤碱对膝骨关节炎兔关节液及血清中白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）含量的影响。方法：除正常对照组（n=4）外，36只免采用左后肢膝关节伸直位石膏管型制动法建立兔骨关节炎模型。造模6周后青藤碱组兔关节腔内注射青藤碱，1次／N，连续5周，透明质酸组关节腔内注射透明质酸，模型组关节腔内注射生理盐水，正常组不治疗。分别于治疗前及治疗后采用酶联免疫吸附测定法检测关节液及血清IL-1β含量，并对软骨组织进行Mankin评分。结果：与模型组比较，青藤碱组骨性关节炎兔血清及关节液中IL-1β含量下降（P〈0．01），且青藤碱组低于透明质酸组（P〈0．05）。青藤碱组的软骨Mankin评分明显低于透明质酸组（P〈0．05）。结论：青藤碱可能通过抑制关节液及血清中IL—1β表达降低兔骨性关节炎模型的关节退变程度。     

Biocompatibility evaluation of chitosan-g-polyvinylpyrrolidone]

OBJECTIVE: To evaluate the biocompatibility of chitosan-g-polyvinylpyrrolidone as a new scaffold material. METHODS: The material was tested and measured for water absorption and contact angle, followed by evaluation of the biocompatibility by implantation into rabbits and in vitro cultured with the corneal epithelial cells. RESULTS: The water absorption rate of the material reached 1 100% with contact angle of 83-86. The results of implantation revealed partial degradation of the material 3 months after implantation, and much collagen and numerous corneal stromal cells appeared on the material without obvious inflammation reactions. In vitro coculture with epithelial cells showed good adhesion of the cells to the material which induced no obvious cytotoxicity. CONCLUSION: The novel chitosan derivative has excellent biocompatibility and can be used as a tissue scaffold material.     

小肠黏膜下层复合材料修复兔下颌骨缺损

 目的 探讨猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)与纳米β 磷酸三钙(nano meter crystal β tricalcium phosphate,nm β TCP)结合形成的复合支架材料修复骨组织缺损的作用。方法 新西兰大白兔13只,在双侧下颌骨上制备骨缺损,随机分为4组,分别使用SIS、nm β TCP及两者混合制成的复合支架材料进行修复,并设置空白对照。12周时处死动物取材,进行组织学切片及扫描电镜观察,计算骨矿化沉积率、骨小梁厚度和体积分数,并作统计学处理。结果 12周时新生骨小梁占据大部分缺损区域,材料已基本降解,nm β TCP组残余少量材料。复合支架组新生骨小梁形态较成熟,荧光双带距离较宽,骨矿化沉积率、骨小梁厚度以及骨小梁体积分数均明显高于其他几组(P<0.05)。结论 猪SIS与nm β TCP混合制成的复合支架材料,具有良好的成骨特性和组织相容性,能够有效地修复下颌骨缺损。     

灌注法去细胞技术构建食管全层细胞外基质的实验研究

目的：利用灌注法去细胞技术构建食管全层去细胞外基质,为组织工程食管重建选择1种理想的支架材料。方法成年新西兰大白兔（雌雄不限）24只,随机分为灌注组（n＝16）和正常对照组（n＝8）,采用灌注法去细胞技术处理兔食管,处理后的标本均行大体、组织学、扫描电镜、免疫荧光R染色检测及MTT 细胞毒性试验。结果大体观察：离体食管经灌注2 h后可见大部分变白,经16 h灌注后食管变得苍白剔透,清楚可见脉管纹理。组织学与扫描电镜观察：灌注法构建的食管全层去细胞外基质的去细胞程度均匀,孔隙多,孔隙率为（88.25±2.37）％。免疫荧光染色：离体食管 M HC‐I和 M HC‐II染色呈阳性表达,灌注法构建的食管全层去细胞外基质M HC‐I和M HC‐II染色呈阴性表达。M T T细胞毒性试验：含食管外基质浸提液培养的骨髓间充质干细胞与普通细胞培养液培养的骨髓间充质干细胞相比较,细胞相对增殖率＞1。结论采用灌注法构建食管全层去细胞外基质可操作性强,安全性好,免疫原性极低,且食管全层去细胞外基质对细胞无毒性,有一定的促生长作用,是组织工程食管重建的理想支架材料。     

可降解输尿管支架材料的特性研究

目的 构建一种生物可降解输尿管载药支架材料,并研究其体内外降解特性、药物释放特性及组织相容性.方法 乙交酯-L-丙交酯-ε-己内酯三元无规共聚物材料、雷帕霉素共溶于三氯甲烷溶液中,溶液蒸发法制备两种规格载药支架材料.将材料浸泡于体外尿液环境中,恒温振荡2、4、6、8、10周后,通过大体形态、电镜扫描观察材料的体外降解情况;通过高效液相色谱测定材料载药量变化研究材料药物释放特性.将材料包埋于兔两侧椎旁肌,于1、4、12周时手术取出材料行组织染色切片研究材料的组织相容性.结果 体外振荡环境下,4周时管内可见絮状漂浮物,此时质量丢失率约为27%,扫描电镜下材料表面可见细小孔洞,10周时材料降解为泥沙样沉积物.支架载药量逐渐降低,0周组(1412±28)μg与2周组(1335±74)μg载药量差异无统计学意义(P>0.05),2周组与4周组(1165±84)μg、4周组与6周组(622±25)μg、6周组与8周组(286±17)μg载药量差异均有统计学意义(P<0.01).组织学切片观察急性期表现为手术损伤后炎症反应,植入后期纤维增生不明显.结论 新型生物可降解输尿管载药支架材料肌肉包埋组织学反应轻微,具有良好的组织相容性,体外环境下其在降解同时,能持续释放雷帕霉素达8周.