脂肪干细胞构建组织工程化角膜基质组织

 目的 探讨以可降解高分子材料聚羟基乙醇（polylactic-co-glycolic acid,PLGA）为支架,复合自体脂肪干细胞构建组织工程角膜基质修复角膜基质层缺损的可行性。方法 兔脂肪干细胞（rabbit adipose derived stem cells,rASCs）培养至第4代接种在PLGA载体支架上,扫描电镜观察细胞在支架上生长黏附情况。体外培养7天后将rASCs-PLGA复合物回植到角膜基质缺损模型的兔角膜基质层间,术后第12周和24周取材行组织学和透射电镜超微结构观察。未接种细胞的PLGA材料移植基质层间作为对照组。结果 细胞在PLGA支架上生长增殖良好,实验组移植术后12周材料降解,角膜基本恢复透明。组织学检查显示移植后24周新生角膜基质样组织与正常角膜基质组织相似,电镜下胶原纤维直径与正常角膜基质组织比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脂肪干细胞可作为种子细胞来源用于构建组织工程角膜基质。     

Q值优化非球面切削矫正高度近视的远期高阶像差观察

目的观察Q值优化的非球面切削准分子激光手术矫正高度近视的远期Q值和高阶像差变化。方法回顾性分析2007年在上海交通大学附属第六人民医院眼科行Q值引导的个体化切削（F—CAT）准分子激光手术的高度近视患者35例（70眼）,其中行准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK117例（34眼）,准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术（LASEK）18例（36眼）,观察并用配对≠检验比较两种手术方式术前、术后远期角膜Q值和高阶像差的变化,采用独立样本t检验比较两组间各项指标的差异,采用Pearson相关和线性回归分析术后高阶像差的相关影响因素。结果术后3年,所有患者裸眼视力〉10．8,LASIK组和LASEK组安全性指数均〉1,有效性指数均接近1。两组Q值与术前相比,均从负值变为正值。术后总高阶像差均比术前增加,差异有统计学意义（t=-3．90、-6．75,P〈0．01）。术后LASIK组和LASEK组三阶像差均方根（RMS）值（t=-3．50、-5．22）、四阶像差RMS值（t=-6．79、-10．14）、垂直彗差RMS值（t=5．73、-5．50）、球差RMS值（t=-8．57、-13．79）均比术前增加（P〈0．01）,两组间垂直彗差,球差差异均无统计学意义;水平彗差与术前相比差异无统计学意义。术后总高阶像差RMS值（R^2=372,F=16．96,P〈0．01）和术后球差RMS值（R^2=0．224,F=10．93,P〈0．01）与术前等效球镜度、手术光学区大小相关。术后垂直彗差与术前等效球镜度、手术目标Q值相关（R^2=0．224,F=10．93,P〈0．01）。结论Q值引导LASIK和LASEK矫正高度近视手术远期安全、有效。IASIK和LASEK术后Q值均由负值变为正值,远期高阶像差和球差增加。垂直彗差的增加可能与手术瓣蒂位置有关。术后高阶像差与患者术前屈光度、手术方式及光学区相关。     

兔脂肪干细胞复合PLGA支架的生物相容性研究

背景种子细胞和支架材料是角膜组织工程研究的主要课题。脂肪干细胞具有来源广泛、增生和分化能力强的特点而成为目前组织工程种子细胞的研究热点,聚羟基乙醇（PLGA）作为高分子可降解支架材料已成功用于构建多种组织器官。目的探讨兔脂肪干细胞的生物学特性及其复合多孔支架材料聚羟基乙醇（PLGA）的生物相容性,为进一步构建脂肪干细胞组织工程化角膜基质提供实验基础。方法取雌性新西兰大白兔颈背部脂肪组织,采用消化法分离培养兔脂肪细胞,传至第4代。将传代细胞分别以3×10^4／cm^2、3×10^4／cm^2、3×10^6／cm^2的密度接种于6孔板中,分别用成骨诱导培养液、成脂诱导培养液及成软骨诱导液进行诱导培养,并分别以质量分数1％茜素红-Tris-盐酸溶液、质量分数0．6％油红染液和免疫荧光法鉴定培养细胞的多向分化能力。将第4代细胞用稀释的DiO荧光染液重悬的脂肪干细胞按1×10^7／ml的密度接种于自制的多孔PLGA支架形成细胞-生物材料复合物,Hoechst法定量检测细胞在支架上的生长情况,并分别于接种后第1、3、7天对细胞-生物材料复合物行共焦显微镜和扫描电子显微镜检测,观察细胞在该支架上的黏附生长和基质分泌情况,评价PLGA的生物相容性。结果原代培养的脂肪细胞7～8d后可达80％～90％融合,呈成纤维细胞样外观。传代第4代的细胞成骨诱导2周后茜素红染色显示矿化结节及周围细胞着深红色;成脂诱导2周后油红0染色显示细胞质内布满红色脂滴颗粒;微团培养成软骨诱导2周后,免疫荧光染色结果显示Ⅱ型胶原表达阳性。细胞接种至PLGA支架材料第7天增生达到高峰期,扫描电子显微镜和共焦显微镜检测显示细胞在支架上贴附生长良好,能够在支架表面及孔隙内壁得到充分伸展和生长,细胞外基质分泌旺盛。结论培养的兔脂肪细胞具有脂肪干细胞的多向分化功能,与多孔PLGA支架复合具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程化角膜基质的种子细胞和支架材料。     

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的 探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法 利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力（OD值）,TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 mi...     

青年近视患者神经纤维层厚度的临床研究

目的 探讨青年近视患者的神经纤维层(RNFL)厚度分布特性及其影响因素.方法 横断面研究.选取准分子激光角膜屈光手术前的青年近视患者162例(162眼),平均年龄(27.0±4.6)岁,等效球镜度-0.75～-11.00 D,平均(-4.98±2.64)D.其中,低度近视组54例,平均等效球镜度为(-2.27±0.64)D;中度近视组55例,平均等效球镜度为(-4.54±0.79)D;高度组53例,平均等效球镜度为(-8.19±1.51)D.采用光学相干断层扫描(OCT)仪检查视盘周围神经纤维层厚度,用偏相关分析RNFL厚度与患者年龄、性别、等效球镜度、眼轴、角膜中央厚度及角膜曲率的相关性.结果 本组入选患者视盘周围平均RNFL厚度:全周为(103.6±9.5)μm,上方为(128.7±16.8)μm,鼻侧为(67.8± 16.5)μm,下方为(125.9± 17.2)μm,颞侧为(91.9±16.9)μm.各RNFL厚度参数与年龄、性别、角膜曲率、中央角膜厚度无相关性,全周、上方、鼻侧、下方的平均RNFL厚度与眼轴呈负相关(r=-0.379、-0.297、-0.180 、-0.291,P＜0.05),颞侧的平均RNFL厚度则与眼轴无相关性,鼻侧、下方的平均RNFL厚度与等效球镜度呈负相关(r=-0.233、-0.163,P＜0.05),颞侧平均RNFL厚度与等效球镜度则呈正相关(r=0.159,P＜0.05).结论 青年近视患者视盘周围平均RNFL厚度上方＞下方＞颞侧＞鼻侧,全周、鼻侧、上方、下方平均RNFL厚度随眼轴的增长而变薄,下方和鼻侧RNFL厚度随等效球镜度增加而变薄,颞侧平均RNFL厚度随着等效球镜度增加而增厚.     

微环境改变调制干细胞分化的研究进展

干细胞是一类能够自我复制的未分化细胞,具有向多种细胞类型分化的功能.近年来有关干细胞分化的研究备受关注并取得了显著成果.细胞生长微环境中的生物化学和生物物理学因素的改变对干细胞分化方向有显著影响,本文简要综述微环境改变调控干细胞分化的相关进展.