结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系研究

目的研究结直肠癌组织MICA基因的表达与肿瘤临床特征及p53、K-ras基因突变的关系。方法共纳入本院2014年3月-2016年3月66例结直肠癌患者,应用半定量PCR-SSCP技术检测癌组织MICA基因表达水平与p53、K-ras基因突变情况,分析MICA基因表达与肿瘤临床特征及p53、K-ras基因突变的关系。结果 MICA基因表达与结直肠癌患者的肿瘤部位、年龄和性别无相关性(P0.05)。22例淋巴结转移者的MICA平均表达量明显高于淋巴结未转移者,8例K-ras和p53基因联合突变者MICA基因平均表达量高于非联合突变者,12例K-ras基因突变者MICA平均表达量与未突变者,差异无统计学意义(P0.05),16例p53基因突变者MICA平均表达量显著高于未突变者。结论MICA基因高表达可能与肿瘤淋巴结转移及p53、K-ras基因突变密切相关。     

利用激光捕获显微分离技术和突变分析法检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变

[目的]探索激光捕获显微分离技术在检测肺癌病人K-ras和p53基因突变的应用。[方法]以3种不同的基因突变分析法对20例患者的痰细胞进行基因突变分析：①以PCR＋DGGE方法分析K—ras基因突变，以PCR＋SSCP方法分析p53基因突变；②以PCR十MAE＋DGGE方法分析K—ras基因突变；以PCR＋MAE＋SSCP方法分析p53基因突变；③以激光捕获显微分离技术和突变分析法检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变。[结果]在20例患者中，以现有的方法仅发现有15％（3／20）的基因突变，而激光捕获显微分离技术则发现有60％（12／20）的基因突变。[结论]激光捕获显微分离技术和突变分析法能高效灵敏检测肺癌病人痰细胞的K—ras和p53基因突变。     

肺癌患者K-ras、FHIT基因异常与吸烟关系

目的 探讨吸烟与肺癌患者原癌基因K-ras点突变和人类脆性组氨酸三联体(FHIT)基因转录异常的关系,探讨吸烟致肺癌作用靶点.方法 应用PCR-RFLP和RT-PCR分别检测80例肺癌患者及20例正常肺组织中K-ras、FHIT基因的异常情况,分析吸烟与K-ras、FHIT基因异常的关系.结果 肺癌组织K-ras基因突变率为52.58%,FHIT基因转录异常阳性率为71.25%,与正常肺组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).肺癌组吸烟者的K-ras、FHIT基因异常率高于不吸烟者(P＜0.05).K-ras、FHIT基因异常与吸烟指数相关联,列联系数P分别为0.337和0.399;吸烟与肺腺癌K-rss基因点突变、肺鳞癌和小细胞肺癌的FHIT基因异常转录关系密切(P＜0.05).肺癌患者K-ras突变与FHIT转录异常无明显关联性,但两者在肺癌组织中差异有统计学意义(P＜0.01).结论 K-ras、FHIT基因异常与肺癌发生密切相关.吸烟是肺腺癌中K-ras基因点突变和肺鳞癌、小细胞肺癌中FHIF基因异常转录的一个重要因素.     

PCR-SSCP及克隆测序法研究燃煤型砷中毒患者p53基因突变与皮肤癌的关系

[目的]分析燃煤型砷中毒患者外周血中p53基因突变情况。[方法]采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR—SSCP)技术对60例燃煤型砷中毒患者外周血中p53基因5∽8外显子的突变情况进行初筛，并进一步克隆测序，以确定突变位点及类型。[结果]癌变组p53基因突变率为30％(3／10)；癌前组为16．67％(2／12)；一般病变组未发现突变(0／38)。对筛查出来的5例突变阳性者进行克隆测序，突变均为G：C→A：T的转换，分别位于密码子143、146及151。[结论]燃煤型砷中毒患者外周血中p53基因突变的检出，对研究砷致癌作用机制有着重要的理论意义。     

1例甲状腺激素抵抗综合征患者THRβ基因突变的研究

目的分析1例甲状腺激素抵抗综合征患者及家系的甲状腺激素受体β(thyroid hormone receptor-β,THRβ)基因的突变情况。方法收集患者及其父母和50名健康对照者的外周抗凝血标本,检测甲状腺功能并提取基因组DNA,PCR扩增THRβ基因的第1号~第10号外显子,PCR产物纯化后直接测序检测THRβ基因是否发生突变。结果患者THRβ基因的第4外显子107位核苷酸发生G转换为A的杂合错义突变(c.107 GA)。该突变致编码的THRβ第36位氨基酸由半胱氨酸变为酪氨酸(p.C36Y)。患者母亲具有相同的杂合点突变,患者父亲及50名健康对照者未发现THRβ基因突变。该突变为新发突变。结论新发现的THRβ基因第4外显子突变可能是该患者甲状腺激素抵抗综合征的致病原因。     

K-ras基因状况预测转移性结直肠癌药物治疗后生存期

目的旨在通过前瞻性检测转移性结直肠癌的K-ras基因表达状况,观察比较化疗单用或联合靶向治疗的长期疗效,为临床医生提供可靠预测指标。方法初治的转移性结直肠癌62例,一线化疗前全部检测了癌组织K-ras基因,62例癌组织K-ras基因进行检测,突变率为30.6%(19/62),其中G12占89.5%(17/19),G13占10.5%(2/19);43例K-ras野生型者分两组进行姑息化疗,包括单纯化疗组及化疗联合靶向治疗组,治疗期间密切随访,统计疗效及毒性并进行统计学分析。结果 K-ras突变者中位PFS和OS分别为4.7月和14.5月,野生型者中位PFS和OS分别为8.5月和24.0月,差异均有统计学意义(Log-rank检验P﹤0.05);10名K-ras野生型者在化疗基础上加用靶向治疗(西妥昔单抗),其中位生存期36.5月,显著高于未用靶向治疗患者的18.0月(Log-rank检验P﹤0.01)。结论癌组织K-ras基因突变者生存期明显短于K-ras基因野生型者,表明K-ras基因突变可作为本组转移性结直肠癌的有效预后预测指标;化疗联合靶向治疗转移性结直肠癌,可有效改善K-ras基因野生型者的PFS和OS,值得推广应用。     

高分辨率熔解曲线分析检测大肠癌患者粪便基因突变与临床病理参数的关系

目的初步探讨高分辨率熔解曲线分析检测大肠癌患者粪便DNA突变与临床病理参数的关系。方法收集2009年3月～2009年9月在本院住院的39例大肠癌患者的新鲜粪便标本约1g,应用HRM法检测粪便中APC、K-ras、P53基因的突变情况,并对结果进行统计学分析。结果大肠癌患者粪便中APC、K-ras、P53基因的突变与大肠癌患者性别、年龄、分化状态、病变部位、Dukes分期和有无淋巴结转移无关。结论未发现粪便APC、K-ras和P53基因突变情况与大肠癌患者的临床病理参数具有相关性。     

Peutz-Jeghers综合征一家系的STK11基因的突变研究

目的研究Peutz-Jeghers综合征一家系的STK11基因突变情况。方法收集1例Peutz-Jeghers综合征家系,采用聚合酶链反应(PCR)及直接测序法对该家系中4例患者STK11基因进行突变检测,以家系中的8例健康者和100例无亲缘关系的正常人作对照。结果家系中4例患者STK11基因的5号外显子第725位碱基鸟嘌呤(G)被腺嘌呤(A)替代,导致第242位的甘氨酸被谷氨酸取代(G242E),而在家系中健康者及无亲缘关系的正常人中均未发现此突变。结论错义突变c.725G>A是导致该家系临床表型的主要原因。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系

目的比较分析非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增的关系,并探讨其与血清癌胚抗原(CEA)水平有无相关性。方法对270例确诊非小细胞肺癌的肺组织标本(包括手术切除及经纤支镜活检取得)用实时荧光定量PCR法技术检测EGFR基因突变状态,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因的扩增情况。治疗前抽取患者静脉血,用化学发光法检测血清CEA水平。结果 270例NSCLC中EGFR基因突变率为31.11%,EGFR基因扩增率为20%,基因突变并扩增的占10.74%。基因突变组、基因扩增组、基因突变并扩增组和基因无突变无扩增组血清CEA平均水平分另为[3.03(1.68-6.22)]ng/mL、[3.19(1.8-17.17)]ng/mL、[3.39(1.85-20.87)]ng/mL和[2.54(1.5-4.62)]ng/mL。基因突变组与基因扩增组、基因突变组与基因无突变无扩增组血清CEA比较无显著性差异(P>0.05)。基因扩增组与基因无突变无扩增组、基因突变并扩增组与基因无突变无扩增组血清CEA比较有显著性差异(P<0.05)。EGFR基因突变、基因扩增及基因突变并扩增与血清CEA水平有明显相关性。结论在NSCLC中EGFR基因突变率大于扩增率,其机制有待进一步阐明。EGFR基因与血清CEA水平有明显相关性。血清CEA水平有可能成为指导非小细胞肺癌EGFR靶向治疗的指标。     

PCR检测细菌DNA对大鼠结肠吻合口漏的早期诊断

目的探讨PCR检测大鼠血液中细菌DNA对结肠吻合口漏的早期诊断价值。方法健康Wistar雌性大鼠48只，随机分成：A组（n=8）为假手术组；B组（n=20）为结肠-结肠吻合组；C组（n=20）为结肠吻合口漏组；采集手术前后外周血，抽提DNA，比较PCR检测大肠杆菌lacZ基因和细菌共有的16SrRNA基因的PCR阳性率，并观察各组的病理学情况。结果C组外周血lacZ基因的PCR阳性率显著高于B组（P〈0．05）；C组外周血16SrRNA基因的PCR阳性率与B组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PCR检测术后外周血lacZ基因对结肠吻合口漏的诊断可能有一定的意义，而检测术后外周血16SrRNA基因对结肠吻合口漏的意义可能不大。     

肺癌患者支气管肺泡灌洗液中K-ras基因第1外显子点突变与吸烟的关系

[目的 ]探讨支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞中K ras原癌基因点突变与吸烟的关系及其在肺癌早期诊断中的意义。 [方法 ]应用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法 (PCR RFLP) ,检测了 3 7例吸烟肺癌患者、2 5例非吸烟肺癌患者以及 2 0例肺良性疾病支气管肺泡灌洗液细胞中K ras基因第 12位密码子突变的情况。 [结果 ]肺癌患者K ras基因突变率为 3 5 5 % (2 2 / 62 ) ,肺良性疾病中未发现有K ras基因突变者。突变的发生与患者的年龄及吸烟史有关 ,与性别、TNM分期无关 ;另外 ,重度吸烟者突变率 (68 8% )高于轻度 (2 5 0 % )及中度吸烟者 (3 0 8% ) ,(P <0 0 5 ) ,更明显地高于非吸烟者 (2 0 0 % ) ,(P <0 0 1)。 [结论 ]①吸烟可能是导致K ras基因突变的重要因素之一 ;②BALF细胞中K ras基因突变的检测对肺癌有一定的早期诊断价值 ,可以协助纤维支气管镜提高对周围型肺癌的诊断率     

石英的人类致癌性在DNA分子水平的证据

收集３６例石英粉尘作业工人肺癌（石英肺癌）的组织石蜡包埋物,提取其 Ｄ Ｎ Ａ,对 ｐ５３基因和 Ｋ ｒａｓ 基因进行了 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ及 Ｄ Ｎ Ａ 测序分析,发现具有完全有别于普通肺癌的特异基因突变谱。小细胞肺癌的 ｐ５３基因突变多发于第８外显子,腺癌的 ｐ５３基因突变率高。石英肺癌的 Ｋ ｒａｓ 基因突变未见一例发生于普通肺癌突变热点区第１２密码子上,相反发现多处非热点区突变,突变类型以 Ｇ→ Ｃ 突变为主。     

IL-6基因多态性与脑出血的相关性研究

目的分析IL-6基因-634位点C/G替换单核苷酸多态性与脑出血的关系。方法采用PCR和RFLP方法检测596例脑出血及335例正常对照者IL-6基因-634位点多态性。结果湖南汉族人群中,IL-6基因-634位点存在GG、GC、CC基因型,其不同基因型频率及等位基因频率在脑出血组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国湖南汉族人群中,IL-6-634C/G基因多态性可能与脑出血的发病无关。     

肿瘤标志物联合检测对肺癌早期诊断及病理分型的意义

目的探讨肿瘤标志物联合检测对肺癌早期诊断的意义及与肺癌不同病理组织类型的关系。方法选择2010年9月—2011年11月肺癌患者91例为肺癌组,同期住院的45例肺部良性疾病患者为肺部良性疾病组,36名健康人为对照组,采用电化学发光法对其血清进行血清肿瘤标志物神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、细胞角蛋白(cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原125(carbohydrate antigen,CA125)联合检测,比较3组检测结果及单项与联合检测的灵敏度、特异性和准确性。结果肺癌组4种肿瘤标志物水平均明显高于肺部良性疾病组和对照组(均P<0.05),4种肿瘤标志物联合检测对肺癌诊断的灵敏度、特异性和准确性分别为91.2%、81.3%和88.4%,灵敏度和准确性明显大于各标志物单项检测。结论 NSE、CYFRA21-1、CEA、CA125联合检测可提高肺癌的早期诊断率和准确率,对鉴别肺癌的病理类型有一定价值。     

Rapid identification of Wilson's disease carriers by denaturing high-performance liquid chromatography

BACKGROUND: Wilson's disease is an autosomal recessive disorder characterized by decreased biliary copper excretion and reduced copper incorporation into ceruloplasmin. The disease gene ATP7B maps to chromosome 13q14.3, contains 21 exons, and encodes a copper-transporting P-type ATPase. ATP7B mutations are scattered over the entire gene, and scanning methods to detect mutation carriers are in demand. We have tested the usefulness of denaturing high-performance liquid chromatography for mutation detection in Wilson's disease. METHODS: Genomic DNA from five Sardinian Wilson's disease families (32 individuals, 8 patients) was subjected to polymerase chain reactions for ATP7B exons 2-21 and the 5' untranslated region. PCR products were analyzed by chromatography and by direct sequencing. RESULTS: Three disease-causing mutations and seven sequence variants were detected by chromatography. Five patients were homozygotes for -441/-427del, and three were compound heterozygotes for V1146M plus 1512-13insT (N505X) and for -441/-427del plus V1146M, respectively. Eighteen unaffected individuals were mutation carriers. Sequence variants comprised V290V, A406S, L456V, R832K, A1140V, the novel K952R, and T991T. The novel intronic IVS18+6c>t change escaped detection by chromatography. CONCLUSIONS: Denaturing high-performance liquid chromatography is a dependable tool for ATP7B screening that is superior to traditional haplotyping. This method allows for fast, sensitive, and specific mutation detection and identification of carriers in Wilson's disease families.     

Association between coffee drinking and K-ras mutations in exocrine pancreatic cancer. PANKRAS II Study Group

STUDY OBJECTIVE: To analyse the relation between coffee consumption and mutations in the K-ras gene in exocrine pancreatic cancer. DESIGN: Case-case study. Consumption of coffee among cases with the activating mutation in the K-ras gene was compared with that of cases without the mutation. SETTING AND PATIENTS: All cases of pancreatic cancer newly diagnosed at five hospitals in Spain during three years were included in the PANKRAS II Study (n = 185, of whom 121 whose tissue was available for molecular analysis are the object of the present report). Over 88% were personally interviewed in hospital. DNA was amplified from paraffin wax embedded tissues, and mutations in codon 12 of K-ras were detected by the artificial RFLP technique. MAIN RESULTS: Mutations were found in tumours from 94 of 121 patients (77.7%). Mutations were more common among regular coffee drinkers than among non-regular coffee drinkers (82.0% v 55.6%, p = 0.018, n = 107). The odds ratio adjusted by age, sex, smoking and alcohol drinking was 5.41 (95% CI 1.64, 17.78). The weekly intake of coffee was significantly higher among patients with a mutated tumour (mean of 14.5 cups/week v 8.8 among patients with a wild type tumour, p < 0.05). With respect to non-regular coffee drinkers, the odds ratio of a mutated tumour adjusted by age, sex, smoking and alcohol drinking was 3.26 for drinkers of 2-7 cups/week, 5.77 for drinkers of 8-14 cups/week and 9.99 for drinkers of > or = 15 cups/week (p < 0.01, test for trend). CONCLUSIONS: Pancreatic cancer cases without activating mutations in the K-ras gene had drank significantly less coffee than cases with a mutation, with a significant dose response relation: the less they drank, the less likely their tumours were to harbour a mutation. In exocrine pancreatic cancer the K-ras gene may be activated less often among non-regular coffee drinkers than among regular drinkers. Caffeine, other coffee compounds or other factors with which coffee drinking is associated may modulate K-ras activation.     

变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性

目的:探讨变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性。方法:收集202例诊断为原发性乳腺癌女性患者,同时采用PCR/DNA测序法和变性高效液相色谱分析技术检测BRCA1基因突变,以PCR/DNA测序法作为"金标准",评估变性高效液相色谱分析技术的敏感性和特异性。结果:202例乳腺癌标本中,PCR/DNA测序法发现BRCA1基因突变例数为76例,变性高效液相色谱分析技术结果,阳性73例,敏感性为96.1%;PCR/DNA检测结果为阴性126例,采用变性高效液相色谱分析技术,阴性120例,特异性为95.2%。两种检测方法敏感性和特异性无统计学差异(P=0.265,P=0.226)。结论:采用变性高效液相色谱分析技术检测乳腺癌易感基因BRCA1具有较高的敏感性和特异性,与传统检测方法相比,变性高效液相色谱分析技术具有较多的优点,值得推广。     

十二种肿瘤标志物联合检测对三种癌症诊断价值的探讨

目的 本文研究多肿瘤标志物（TM）联合定量检测对肝癌、胰腺癌和肺癌的临床应用价值.方法 采用蛋白芯片检测系统（C-12）,定量检测37例肝癌患者（A组）、25例胰腺癌患者（B组）、39例肺癌患者（C组）及70例良性相关疾病患者（D组）和62名正常人（对照组）血清中的12种肿瘤标志物,包括CA19-9、AFP、CEA、f-PSA、PSA、CA125、CA15-3、CA50、CA72-4、NSE、CF21-1、TSGF.结果 （1）A组AFP、CA125、CEA、CA19-9、CA50和TSGF的检测结果较D组和对照组有极其显著想差异（P＜0.01）.本组联合检测的灵敏度为89.5％,特异性为87.32％,阳性预测值为70.49％,阴性预测值为96.12％,准确度为87.89％;（2）B组CA19-9、CA125、CEA、CA72-4、CA15-3、CA50和TSGF的检测结果较D组和对照组有显著差异（P＜0.01）.本组联合检测的灵敏度为82.7％,特异性为87.32％,阳性预测值为57.14％,阴性预测值为96.12％,准确度为86.55％;（3）C组CEA、CA15-3、CF21-1、NSE、CA72-4、CA50和TSGF的检测结果较D组和对照组有显著差异（P＜0.01）.本组联合检测的灵敏度为80.9％,特异性为87.32％,阳性预测值为65.38％,阴性预测值为93.94％,准确度为85.87％.结论 总之,多肿瘤标志物C-12联合检测提高相应肿瘤诊断的阳性率,不同类型的肿瘤选用相应多肿瘤标志物联合检测,这样可以为体检人群和癌症患者的早期筛查、术前和术后的临床跟踪等提供很好的依据.     

血浆循环DNA定量检测在乳腺癌患者诊断与预后中的意义

目的:建立一种荧光定量PCR方法用于血浆循环DNA定量,并讨论血浆循环DNA检测在乳腺癌诊断及预后中的意义。方法:以61例乳腺癌患者、33例乳腺良性病变患者和25例健康对照者血浆为材料,用Qiagen纯化柱提取血浆DNA,采用荧光定量PCR技术(SYBR Green I染料法)对血浆DNA水平进行检测,DNA水平用临界域值时的循环数(Ct值)表示,并应用ROC曲线分析血浆循环DNA定量在乳腺癌诊断中的价值。结果:乳腺癌血浆循环DNA水平(27.71±1.41)显著高于健康对照(30.37±1.32)和良性对照(29.7±1.12)(P<0.001),ROC曲线下面积分别为0.921和0.837。循环DNA水平与分期、淋巴结转移、肿瘤大小、年龄及雌激素受体状况均无相关性(P>0.05)。术后乳腺癌患者血浆循环DNA水平显著下降,其中复发患者血浆循环DNA水平显著高于未复发者。结论:血浆循环DNA水平对于乳腺癌诊断和预后均具有一定临床意义。