乙醇和锌离子对爪蟾卵母细胞表达的5 '-三磷酸腺苷门控P2X3受体的影响

目的 探讨乙醇和锌离子(Zn2+)对爪蟾卵母细胞表达的重组P2X3受体的影响.方法 使用双极电压钳技术检测乙醇和Zn2+对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的5'-三磷酸腺苷(ATP)门控电流的影响.实验共分3组,第1组研究不同浓度乙醇对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在乙醇的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第2组研究不同浓度Zn2对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在Zn2+的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第3组研究乙醇和Zn2+共同作用于爪蟾卵母细胞表达的ATP门控P2X3受体的影响.结果 乙醇(5～ 200 mmoL/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇以变构的方式增强ATP效应,乙醇不会改变Hill系数或ATP最大效应(Emax).Zn2+(1 ～300 μmol/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇和Zn2+联合应用导致协同作用.乙醇增强了Zn2+对P2X3受体介导的ATP门控电流的最大效应,这表明乙醇和Zn2+作用于不同的位点.结论 乙醇和Zn2+可能作用于P2X3受体上的不同位点,但乙醇在P2X受体上起作用的机制和位点尚未明确,后续研究可以使用嵌合方法和定点突变来识别和分析P2X受体中乙醇潜在的作用位点.     

依托咪酯对离体大鼠脊髓运动神经元感觉传入的差异性作用

目的 了解全麻药依托咪酯(ET)对新生大鼠离体脊髓运动神经元(MN)感觉传入的作用及受体机制.方法 应用新生大鼠(7～14 d)脊髓切片MN细胞内记录技术,观察ET对MN细胞电生理特性和电刺激脊髓同侧背根残端(DR)诱发兴奋性突触后电位(DR-EPSP)的作用,并进行受体机制的分析.结果 ET对MN的动作电位(AP)和放电频率呈浓度依赖性抑制.与正常MN比较,0.3、3.0和30.0 μmol/L的ET(3.0 μmol/L相当于临床浓度0.8～20.0 μmol/L)可分别压抑AP的幅度(mⅤ:57.5±33.5、33.8± 34.9、31.2±34.9比74.3土9.4,P＜0.05或P＜0.01);0.3μmol/L的ET对DR-EPSP及介导EPSP的谷氨酸受体[包括N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)和非NMDA受体]具有双向作用,既可表现为增强[DR-EPSP的曲线下面积(AUC)为67.1±43.0比38.9±26.7; NMDA受体介导的DR-EPSP的幅度(mV)为4.6土4.3比2.4±3.6;非NMDA受体介导的DR-EPSP的AUC为78.4±53.6比70.5±32.7,均P＜0.05],亦可表现为抑制(DR-EPSP的幅度为1.0土0.6比2.0±0.8,AUC为18.0±13.4比35.1±13.4,均P＜0.01),而在灌流浓度≥3.0 μmol/L则仅呈浓度、时间依赖性抑制(3.0 μmol/L时DR-EPSP幅度为0.4±0.6比2.0±0.8;30.0μmol/L时DR-EPSP幅度为0.1±0.4比2.0±0.8,均P＜0.01).结论 ET不仅浓度依赖性抑制新生大鼠离体脊髓MN的AP发放,并对感觉传入的突触传递及其介导受体呈现浓度相关的差异性作用.     

17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞的影响及细胞内活性氧的研究

目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-DMAG）对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞凋亡的影响及其细胞内活性氧（ROS）的变化.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增殖影响;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率;酶标仪检测细胞内ROS的变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖.0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.5μmol/L作用于HT-29细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为（22.17±1.15）％、（28.45±1.16）％、（35.04±1.58）％和（46.85±2.44）％,作用48 h后,细胞增殖抑制率分别为（27.55±0.65）％、（33.33±1.23）％、（46.20±4.76）％和（55.45±4.47）％,作用72h,细胞增殖抑制率分别为（39.19±1.74）％、（44.29±2.00）％、（50.66±2.17）％和（58.84±3.18）％.正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率（早期＋晚期）为（2.72±0.57）％,0.25 μmol/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24h后细胞总凋亡率分别为（5.38±0.46）％、（6.88±0.52）％、（10.44±0.32）％与（17.87 ±4.66）％,17-DMAG作用HT-29细胞24h的凋亡率与对照组细胞凋亡率相比差异有统计学意义（P＜0.05）.0.25 μmoL/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5 μmol/L 17-DMAG作用HT-29细胞12 h与24h,其活性氧水平均较对照组有不同程度的上升,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖,诱导其凋亡,可能部分与细胞内的ROS升高有关.     

室温下光线照射对血清胆红素测定结果的影响

目的探讨室温下血清标本在实验室放置不同时间和受实验室光线照射对总胆红素和直接胆红素测定结果的影响。方法将一组标本暴露在实验室光线下,另一组标本避光保存,分别于0、2、4、8、24h测定总胆红素和直接胆红素,对比分析两组标本测定结果的平均偏差。结果室温下血清标本在0h测定的总胆红素结果为（17.47±9.33）μmol/L,2、4、8、24h后光照组总胆红素结果为（16.73±9.09）、（15.98±8.85）、（15.13±8.35）、（13.50±7.37）μmol/L（P〈0.05）;2、4、8、24h后避光组总胆红素结果为（17.47±9.45）、（17.58±9.60）μmol/L（P〉0.05）、（17.92±9.95）、（19.86±11.21）μmol/L（P〈0.01）;室温下血清标本在0h测定的直接胆红素结果为（5.40±3.19）μmol/L,2、4、8、24h后光照组直接胆红素结果为（5.49±3.22）μmol/L（P〉0.05）、（5.55±3.26）、（5.80±3.37）、（6.08±3.64）μmol/L（P〈0.05）;2、4、8、24h后避光组总胆红素结果为（5.28±3.17）、（5.39±3.28）、（5.51±3.40）、（5.63±3.72）μmol/L（P〉0.05）。结论室温下受光线照射血清标本的总胆红素不断下降,2h后总胆红素测定值差异也有统计学意义,避光保存组的血清总胆红素标本测定值略微上升,但至少可以保存4h;室温下受光线照射血清标本的直接胆红素值不断上升,但2h内检测结果差异无统计学意义,避光组的直接胆红素标本测定值也不断上升,但至少可以保存24h。     

莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒

目的 研究莫诺苷抑制过氧化氧诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒作用.方法 体外培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞分别加入莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2 O2 300～500 μmol/L,作用18 h,检测细胞内游离钙离子浓度、乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与未加莫诺苷预孵育的细胞相比,莫诺苷10μmol/L、100μmol/L能抑制神经细胞内游离钙离子浓度增加,莫诺苷1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L能降低LDH的释放率.结论 莫诺苷能够抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞钙超载和细胞毒,有神经保护作用.     

脑小血管病患者外周血Hcy，VILIP-1和UA水平与病情严重程度及认知障碍的相关性研究

目的　探究外周血同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）、视椎蛋白样蛋白1（visinin-like protein 1,VILIP- 1）、尿酸（uric acid,UA）与脑小血管病（cerebral small vessel disease,CSVD）患者病情程度及认知障碍相关性。方法　选取2017 年6 月～ 2019 年6 月沧州市人民医院医专院区70 例CSVD 患者作为观察组,同期选取30 例健康体检者作为对照组。统计两组及观察组不同神经功能、脑动脉搏动指数（PI）、有无认知障碍、外周血Hcy,VILIP-1 和UA 水平,通过Spearman 和多元线性回归模型分析外周血各指标与病情程度、认知障碍的关系。结果　①观察组外周血VILIP-1（671.05±201.32 pg/ml）,Hcy（20.83±6.25 μmol/L）,UA（352.21±78.66 μmol/L）高于对照组（475.12±142.54pg/ml,10.05±3.02 μmol/L 和241.25±40.86 μmol/L）, 差异均有统计学意义（t=4.831,8.989,7.698,均P ＜ 0.05）。②观察组PI 重度者外周血UA（449.79±134.94μmol/L）,Hcy（30.43±5.89μmol/L）和VILIP-1（876.94±263.08pg/ml）水平高于PI 轻中度者（273.46±82.04μmol/L,360.18±108.05μmol/L;15.33±4.60μmol/L,20.58±6.27μmol/L;502.51±150.75pg/ml,689.84±206.95pg/ml）, 差异均有统计学意义（F=13.545~35.749,均P ＜ 0.05）。观察组NIHSS评分外周血UA（443.70±133.11μmol/L）,Hcy（28.33±5.46μmol/L）,VILIP-1（941.35±282.41pg/ml）水平高于NIHSS 评分轻中度者（280.25±84.08μmol/L,372.59±111.78μmol/L;16.05±4.82μmol/L,21.42±5.91μmol/L;498.88±149.65pg/ml,692.27±207.61pg/ml）,差异均有统计学意义（F=12.544~23.020,均P ＜ 0.05）。③观察组认知障碍者UA（389.96±116.99μmol/L）,Hcy（25.66±7.71μmol/L）,VILIP-1（811.52±243.56pg/ml）水平高于无认知障碍者（301.88±90.56μmol/L,14.39±4.32μmol/L,483.76±145.13pg/ml）,差异均有统计学意义（F=3.424~7.710,均P＜ 0.05）。④外周血Hcy,VILIP-1,UA与PI 呈正相关（r=0.836,0.883,0.728）,与NIHSS 评分呈正相关（r=0.665,0.762,0.666）,与认知障碍呈负相关（r=-0.591,0.635,0.599）;在控制年龄、性别等其他因素后,外周血Hcy（标准化偏回归系数:0.277,1.122,-0.250）,VILIP-1（标准化偏回归系数:0.638,0.304,-0.319）,UA（标准化偏回归系数:0.251,0.656,-0.398）与PI 和NIHSS 评分、认知障碍显著相关（均P ＜ 0.05）。结论　CSVD 患者外周血Hcy,VILIP-1 和UA 水平呈高表达,与病情程度、认知障碍密切相关。联合检测其水平变化有助于指导临床治疗。     

苦参碱对急性早幼粒细胞白血病细胞维甲酸耐药的逆转作用研究

目的 探讨苦参碱逆转急性早幼粒细胞白血病(APL)全反式维甲酸(ATRA)耐药的作用及可能的机制.方法 以ATRA敏感的APL细胞系NB4及其ATRA耐药株NB4-R1、NIM-R2作为研究对象.用MTT法明确苦参碱低毒性剂量,进一步计算ATRA联合100μmoL/L苦参碱作用前后细胞ATRA IC50值,明确苦参碱的逆转耐药倍数;用NBT还原实验分析不同浓度(10、8、6、4、2、1、mmol/L,100、10、1μmol/L)苦参碱联用1μmol/L ATRA对耐药细胞分化能力的影响,并观察细胞形态变化;Annexin V/PI染色流式细胞术检测不同浓度苦参碱联用1 μmol/L ATRA作用下细胞凋亡率.结果 ①苦参碱对NB4、NB4-R1、NB4-R2细胞的增殖抑制作用随浓度增加而增强,IC50值分别为(0.661±0.035)、(0.673±0.132)、(0.329±0.020)mmol/L;②联用100 μmol/L苦参碱能显著逆转NB4-R1细胞的耐药性(逆转耐药倍数为4.96±1.15),但不能增强NB4-R2细胞对ATRA的敏感性,甚至增强其耐药性(逆转耐药倍数为0.66±0.17);③苦参碱与1 μmol/L ATRA联用时,NB4、NB4-R1细胞的分化能力随苦参碱作用浓度的增大而增强,且在苦参碱为100 μmol/L时达到峰值(P<0.05),但对NB4-R2细胞无明显影响;④1 μmol/L ATRA联合苦参碱能显著提高NB4、NB4-R1细胞凋亡率(P<0.05和P<0.01),但对NB4-R2细胞同样无明显作用.结论 苦参碱能有效逆转NB4-R1细胞的ATRA耐药,可能与其协同ATRA诱导分化及促进细胞凋亡有关.苦参碱与ATRA联用非但不能缓解NB4-R2细胞的ATRA耐药,甚至可能加重耐药、阻断耐药细胞的凋亡过程.     

波动性高糖对人视网膜色素上皮细胞氧化应激的影响

目的 对比研究波动性高糖与恒定高糖对人视网膜色素上皮（HRPE）细胞氧化应激的影响.方法 培养HRPE细胞株,根据培养条件不同分为4组：（1）正常对照组：5.5 mmol/L葡萄糖;（2）恒定高糖组：33.0 mmol/L葡萄糖;（3）波动性高糖组：5.5 mmol/L和33.0 mmol/L葡萄糖波动组,日间每3小时高糖、2小时低糖交替3次,高糖过夜;（4）渗透压控制组：33.0 mmol/L甘露醇.每组均设6个复孔,置于37℃、5％ CO2孵箱中,分别于培养24、48、72 h收集细胞培养上清液用于过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛检测.结果 （1）培养24 h,波动性高糖组SOD为（12.1 ±3.0） U/ml,GSH为（68.5±3.8） mg/L,丙二醛为（17.5±3.0） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.8±1.6） U/ml,GSH为（90.8±4.8） mg/L,丙二醛为（12.9±1.2） μmol/L;正常对照组SOD为（31.1±4.7） U/ml,GSH为（143.4±8.3） mg/L,丙二醛为（3.1±1.1） μmol/L;渗透压控制组SOD为（32.4±2.8） U/ml,GSH为（143.3±12.8）mg/L,丙二醛为（2.8±1.2） μmol/L.（2）培养48 h,波动性高糖组SOD为（9.6±1.8） U/ml,GSH为（72.5±4.3）mg/L,丙二醛为（19.1 ±1.7） μmol/L;恒定高糖组SOD为（21.0±2.5） U/ml,GSH为（93.4±4.6） mg/L,丙二醛为（11.6±2.2）μmol/L;正常对照组SOD为（31.0±2.5） U/ml,GSH为（145.5±6.6） mg/L,丙二醛为（3.9±1.0） μmol/L;渗透压控制组SOD为（28.4±0.8） U/ml,GSH为（142.0 ±4.9）mg/L,丙二醛为（2.9±0.8）μmol/L.（3）培养72 h,波动性高糖组SOD为（10.9±1.7）U/ml,GSH为（70.9±7.3） mg/L,丙二醛为（19.5±0.5）μmol/L;恒定高糖组SOD为（20.4±1.7）U/ml,GSH为（91.6±7.2） mg/L,丙二醛为（11.2±3.3） μmol/L;正常对照组SOD为（32.4±4.4）U/ml,GSH为（143.0±23.2） mg/L,丙二醛为（3.0±1.0）μmol/L;渗透压控制组SOD为（29.5±2.6）U/ml,GSH为（134.5±11.1） mg/L,丙二醛为（2.8±0.8）μmol/L.（4）培养24、48、72 h波动性高糖组、恒定高糖组与正常对照组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,波动性高糖组与恒定高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,渗透压控制组与正常对照组相比差异均无统计学意义（P均＞0.05）,与恒定高糖组、波动性高糖组相比,差异均有统计学意义（P均＜0.01）.结论 波动性高糖较恒定高糖对HRPE细胞有更强的氧化应激损伤.     

血液透析对ADMA的清除作用及与NO生成的相关性研究

目的观察血液透析对尿毒症患者体内非对称性二甲基精氨酸（asymmetic dimethyl arginine,ADMA）的清除作用及与一氧化氮（nitricoxide,NO）生成的相关关系。方法选择单中心维持性血液透析（maintenance hemodialysis,MHD）患者159例,检测透析前、后血清ADMA和一氧化氮代谢产物（nitricoxide productions,NOx）的浓度,测算单次透析清除ADMA和NOx的总量,对比MHD患者透析前后、MHD患者与健康对照、MHD患者不同年龄组、糖尿病与非糖尿病组、高血压、低血压与血压稳定组之间透析前血清ADMA及NOx的浓度,对透析前和透析后血清ADMA与NOx浓度分别进行相关性分析。结果MHD患者透析后血清ADMA水平明显降低[（1.05±0.67）μmol/L比（0.83±0.53）μmol/L,P〈0.001],NOx水平明显升高[（61.1±38.5）μmol/L比（96.1±58.1）μmol/L,P〈0.001];4h血液透析对ADMA和NOx的总清除量为[（9.15±4.70）μmol和（448.62±58.59）μmol];与健康人相比,MHD患者透析前后ADMA水平都高[（1.05±0.67）μmol/L、（0.83±0.53）μmol/L比（0.35±0.06）μmol/L,P值分别为0.002和0.004],NOx水平则相当[（61.1±38.5）μmol/L、（96.1±58.1）μmol/L比（68.1±13.6）μmol/L,P值分别为0.596和0.166];MHD患者各组之间透析前血清ADMA与NOx水平差异均无统计学意义;透析前、后ADMA与NOx水平均呈明显负相关关系（r分别为-0.344和-0.612,P值分别为0.047和0.001）。结论MHD患者透析前血清ADMA水平高于健康人,NOx水平与健康人相当;血液透析可以清除ADMA和NOx,对ADMA的清除作用相对要小;透析后血清NOx水平升高可能与透析清除ADMA等抑制NO生成的物质有关。     

阿托伐他汀钙对人脐静脉内皮细胞adropin表达的影响

目的：探讨阿托伐他汀钙对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）adropin表达的影响。方法不同浓度的阿托伐他汀钙（0.002、0.02、0.2、2和20μmol/L）与HUVEC共培养6、12和24 h。采用MTT法检测HUVEC的增殖情况。半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HUVEC adropin mRNA的表达。ELISA法测定细胞上清液中adropin的浓度。结果阿托伐他汀钙在0.002-20μmol/L范围均能促进HUVEC的增殖，20μmol/L（与对照组比较P＜0.05）和24 h（与6 h时比较P＜0.05）时作用最强。阿托伐他汀钙呈浓度依赖性和时间依赖性增加了adropin mRNA的表达和培养上清液中adropin蛋白的浓度，在20μmol/L（与对照组比较P＜0.01）和24 h（与6 h时比较P＜0.01）作用最强。HUVEC上清液中adropin蛋白浓度与反映细胞增殖的OD值呈明显正相关（12 h，P=0.001；24 h，P＜0.001）。结论阿托伐他汀钙在一定范围内能够促进HUVEC adropin相关基因及蛋白的表达，且呈剂量和时间依赖性。     

咖啡因对棕榈酸作用下β细胞增殖和凋亡影响

目的观察咖啡因对游离脂肪酸棕榈酸作用下体外培养的β细胞增殖和凋亡的影响。方法根据不同浓度咖啡因(1、10、25μmol/L)和游离脂肪酸棕榈酸(500μmol/L)同时作用于体外培养胰岛β细胞分为5组:空白组(不含游离脂肪酸)、咖啡因1μmol/L组(含咖啡因1μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因10μmol/L组(咖啡因10μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因25μmol/L组(咖啡因25μmol/L+棕榈酸500μmol/L)和PA组(500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法反映细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡并计算凋亡率。结果 PA组细胞培养48小时、72小时、96小时于490nm光密度值分别为0.144±0.011、0.184±0.026、0.261±0.033,明显低于空白组(P<0.05)。咖啡因10μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.274±0.031、0.452±0.039;咖啡因25μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.280±0.049、0.463±0.051,显著高于PA组(P<0.05)。培养96小时PA组细胞凋亡率(40.55±20.33)%,较空白组(6.68±1.09)%明显升高(P<0.05)。咖啡因10μmol/L和25μmol/L组细胞凋亡率分别为(19.12±10.56)%和(20.97±9.75)%,较PA组明显下降(P<0.05)。结论游离脂肪酸棕榈酸导致体外培养β细胞增殖活性显著受抑、细胞凋亡增加。在一定浓度范围内,咖啡因可能改善棕榈酸诱导的胰岛β细胞增殖受抑和细胞凋亡。     

血液透析联合血液灌流对中、大分子毒素清除与瘙痒症状疗效的观察

目的观察血液透析联合血液灌流对尿毒症毒素的清除与治疗的效果。方法选择维持性血液透析(MHD)患者40例,随机分为血液透析(HD)组和血液透析联合血液灌流(HD+HP)组,每组20例,分别对2组患者观察期治疗前后血晚期糖基化终末产物(AGEs)、同型半胱氨酸(Hcy)、甲状旁腺素(PTH)、β2-微球蛋白(β2-MG)进行测定,临床观察2组治疗对尿毒症合并顽固性瘙痒的疗效并分析测定指标的变化与合并症的变化的相关性。结果 HD+HP组治疗12周后血AGEs、Hcy、PTH、β2-MG指标较HD组治疗12周后低,P<0.05(依次为0.024,0.002,0.042,0.001),HD+HP组血AGEs、Hcy、PTH、β2-MG指标治疗后较治疗前均有下降,AGEs由759.22±227.80AU×10-3/mg降至351.17±266.58AU×10-3/mg,Hcy由26.17±7.15umol/L降至14.03±4.67umol/L,PTH由304.03±284.28pg/ml降至134.23±105.30pg/ml,β2-MG由19.51±5.70mg/L降至15.22±4.29mg/L,P<0.05(依次为0.001,0.000,0.005,0.023),HD组除血Hcy降低[由26.17±7.15 umol/L降至14.03±4.67umol/L(P=0.081)]外其余3项指标(血AGEs、PTH、β2-MG)治疗后均较治疗前升高,AGEs由615.56±369.06AU×10-3/mg升高至704.62±551.97AU×10-3/mg,PTH由285.30±248.94pg/ml升高至345.73±397.45pg/ml,β2-MG由19.07±4.25mg/L升高至19.45±4.68mg/L,但P>0.05(依次为0.867,0.054,0.727)。血PTH、β2-MG降低与皮肤瘙痒症状缓解情况之间的r=0~1,P<0.05(依次为0.045,0.037)。结论血液透析联合血液灌流能有效清除维持性血液透析患者血AGEs、Hcy、PTH、β2-MG等中大分子物质;并能有效缓解MHD患者顽固性瘙痒合并症,这与其对PTH和β2-MG的有效清除有关。     

辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导的内皮细胞凋亡的影响

【目的】探讨辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响及其影响的量效关系和时效关系。【方法】体外培养HUVES,取对数生长期的细胞分为四个组：①TNF-α干预的浓度依赖性组（Ac组）[按浓度分为Acl（Ong／mL）,Ac2（1ng／mL）,Ac3（10ng／mL）,Ac4（25ng／mL）];②TNF-α干预的时间依赖性组（At组）[按时间分为Atl（Oh）,At2（12h）,At3（24h）,At4（48h）];③10ng／mLTNF_a＋不同浓度辛伐他汀干预组（B组）[浓度分为B1（O μmol／L）,B2（O．01 μmol／L。）,B3（O．1 μmol／L。）,B4（1．0t μmol／L）];④1O ng／mL TNF-a不同浓度普罗布考干预组（c组）[浓度分为C1 （0 μmol／L。）,C2（20 μmol／L）,c3（40 μmol／L）,C4（80 μmol／L）]。以上四组均干预12h后,用流式细胞术检测各组凋亡率。【结果】①Ac组凋亡率分别为：Acl（O．81±0．25％）,Ac2（2．35±0．04％）,Ac3（4．54±0．32％）,Ac4（6．17±0．28％）,各组之间存在统计学差异（P〈0．01）。②At组凋亡率分别为,Atl（0．87±o．35％）,At2（4．53±0．32％）,At3（7．45±1．97％）,At4（10．92±1．27％）,各组间存在统计学差异（P〈O．01）。③B组凋亡率分别为,B1（4．46±0．53％）,B2（1．38±0．12％）,B3（2．89±0．27％）,B4（3．65±0．08％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈O．01）。④C组细胞凋亡率分别为,C1（4．60±0．64％）,C2（2．61±0．18％）,C3（2．21±0．22％）,c4（1．28±0．34％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈0．01）。【结论】①TNF-α可以诱导内皮细胞凋亡,且存在浓度依赖性和时．：良赖性。②辛伐他汀可以抑制TNF-α口诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。③普罗布考可以抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。     

感染性休克患者外周血T淋巴细胞凋亡和影响因素分析

目的观察感染性休克患者的外周血T淋巴细胞的凋亡情况,并对可能诱导T淋巴细胞凋亡的原因进行探讨。方法采集南京市第一医院ICU自2006年1月至2009年1月收治的32例感染性休克患者的外周血,用Annexin-V法和流式细胞仪测定其中的T淋巴细胞的凋亡情况,同时用酶联免疫法（ELISA）测定血浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素1β（IL-1β）的浓度,用化学发光法检测血浆中的游离皮质醇浓度,将上述的结果和脓毒血症病患者及健康对照（n=22）相比。结果在初始状态下,外周血T淋巴细胞CD4＋亚群在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组分别为（4.41±1.45）%、（7.87±3.82）%及（11.01±4.52）%,感染性休克患者的外周血T淋巴细胞CD4＋亚群的凋亡比例高于脓毒血症患者（P〈0.05）,脓毒血症患者高于健康对照组（P〈0.05）;而初始状态下健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组患者外周血T淋巴细胞CD8＋亚群的凋亡为（9.62±8.32）%、（13.09±15.84）%及（11.33±19.62）%,3组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在基础状态下TNF-α的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（16.44±9.55）ng/L、（29.58±13.6）ng/L及（47.99±25.63）ng/L,感染性休克组TNF-α的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-10的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（6.38±7.5）ng/L、（9.67±4.88）ng/L及（15.01±5.36）ng/L,感染性休克组中的IL-10的浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;游离皮质醇的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为（0.45±0.42）μmol/L、（0.87±0.49）μmol/L及（1.39±0.84）μmol/L,感染性休克组中的游离皮质醇浓度高于脓毒血症组（P〈0.05）,脓毒血症组高于健康对照组（P〈0.05）,持续72小时;IL-1β在健康对照组、脓毒血症组及感染性休克组中分别为（13.12±5.07）ng/L、（25.21±14.76）ng/L及（22.94±22.01）ng/L,感染性休克组和脓毒血症组的浓度高于健康对照组（P〈0.05）,但是感染性休克组和脓毒血症组的浓度差异无统计学意义（P〉0.05）。结论感染性休克患者的外周血T淋巴细胞中CD4＋亚群可发生明显的凋亡,TNF-α、IL-10及皮质醇可能参与了诱导CD4＋亚群的凋亡。     

正常妊娠妇女血清同型半胱氨酸水平调查

目的观察正常妊娠妇女血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,为确定妊娠妇女Hcy水平的参考区间提供临床依据。方法采用循环酶法测定942例正常妊娠妇女血清Hcy水平,并收集其产检资料,追踪其分娩结局。根据测定Hcy时妊娠妇女的妊娠周期分为早、中和晚孕3组,各组例数分别为98例、202例和642例。结果正常妊娠妇女血清Hcy水平为(7.25±2.90)μmol/L,95%参考区间为1.57~12.93μmol/L。早孕组Hcy水平为(6.87±2.78)μmol/L,第75百分位数(P75)为7.53μmol/L;中孕组为(6.43±2.90)μmol/L,P75为7.21μmol/L;晚孕组为(7.54±2.86)μmol/L,P75为8.32μmol/L;3组之间差异有统计学意义(F=12.03,P=0.000)。两两比较显示早孕组与中孕组之间差异无统计学意义(t=0.99,P=0.321),中孕组与晚孕组之间差异有统计学意义(t=4.77,P=0.000)。晚孕组Hcy水平较中孕组平均升高(1.11±0.23)μmol/L[P=0.000;95%可信区间(CI)为0.65~1.56μmol/L]。线性相关分析显示Hcy水平与妊娠妇女年龄、检测孕周呈正相关(r值分别为0.14、0.15,P=0.000);将早、中和晚孕3组分别进行线性相关分析,仅晚孕组Hcy水平与检测孕周呈正相关(r=0.10,P=0.009)。多因素分析显示年龄、服用叶酸和Hcy检测孕周是影响孕妇Hcy水平的因素(F=16.59,P=0.000)。结论正常妊娠妇女血清Hcy水平妊娠早期为6.87μmol/L、中期为6.43μmol/L、晚期为7.54μmol/L;如妊娠早期Hcy水平7.53μmol/L(P75)、中期7.21μmol/L(P75)、晚期8.32μmol/L(P75)可能提示高Hcy血症。     

恩替卡韦联合扶正化淤胶囊治疗乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的观察乙型肝炎肝纤维化患者抗病毒、抗肝纤维化治疗的疗效和安全性。方法将126例乙型肝炎肝纤维化患者随机分为3组,A组38例,给予传统方法治疗;B组41例,给予传统方法＋恩替卡韦治疗;C组47例,给予传统方法＋恩替卡韦＋扶正化淤胶囊治疗。扶正化淤胶囊治疗24周,其他3组患者治疗观察48周。观察肺功能指标,肝纤维化指标,Child．Pugh评分和乙型肝炎病毒血清学改变效果。结果治疗后C组患者血清肝纤维化指标与A、B组比较[透明质酸（HA）：（152．3±72．3）μg/L、（212．3±86．9）μg/L、（325．6±153．1）μg/L,F=30．18,P〈0．01];[层粘连蛋白（LN）：（104．7±23．9）μg／L、（139．9±28．9）μg/L、（127．7．4-76．0）μg/L,F=36．99,P〈0．01];（Ⅲ型前胶原（PcⅢ）：（167．8±61．4）μg／L、（207．5±78．1）μg／L、（263．1±113．2）μg/L,F=30．34,P〈0．01）]和Child—Pugh评分（6．94±1．31、7．53±1．24、8．77±1．36,F=14．45,P〈0．01）下降均优于A组和B组,差异有统计学意义。治疗后C组患者肝功能与A、B组比较,差异有统计学意义[丙氨酸氨基转移酶（ALT）：（58±41）U／L、（147±96）U／L、（75±19）U／L,F=16．82,P〈0．01];[白蛋白（ALB）：（38．1±1．7）g／L、（26．5±3．5）g/L、（35．4±1．8）g/L,F=4．69,P〈0．01];[总胆红素（TBil）：（31．9±12．7）μmol／L、（85．2±58．3）μmol／L、（46．1±17．8）μmol／L,F=15．10,P〈0．01]和凝血酶原活动度（PTA）的改善[（76±24）％、（57±12）％、（73±18）％,F=79．26,P〈0．01）]。结论乙型肝炎肝纤维化患者抗病毒治疗,快速抑制乙型肝炎肝纤维化患者的病毒复制,改善肝功能。同时应用扶正化淤胶囊抗肝纤维化治疗可有效的改善患者肝纤维化和棍高廉者的向洁蛋白含骨．     

氧化还原态失衡与冠状动脉粥样硬化性心脏病

目的探讨氧化还原态失衡与冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的关系。方法根据冠状动脉造影结果,将123例疑似冠心病住院患者分为冠心病组（A组）41例,冠状动脉粥样硬化组（B组）45例,冠状动脉正常组（C组）37例。取所有研究对象静脉血,测血浆还原型谷胱甘肽（GSH）与氧化型谷胱甘肽（GSSG）,氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）和丙二醛（MDA）浓度。计算GSH／GSSG氧化还原电位,与冠状动脉斑块积分及oxLDL行相关性分析。结果随冠状动脉斑块积分增高（从C组-A组）,GSH、GSH／GSSG逐次减低,分别为（321．27±56．89）μmol／L,（309．52±44．56）μmol／L,（285．71±38．23）μmol／L（P〈O．05）;10．56±1．70,9．86±1．58,8．65±1．18（P〈0．05）;GSSG、GSH／GSSG氧化还原电位逐次升高,分别为（30．42±1．53）μmol／L,（31．39±1．64）μmol／L,（33．03±1．75）μmol／L（P〈0．05）;（-142．39±1．33）mV,（-140．18±1．12）mV,（-136．17±1．01）mV（P〈0．05）;氧化应激损伤产物oxLDI、MDA亦随冠状动脉斑块积分增高而增加,分别为（417．22±126．61）μg／L,（557．24±171．83）μg／L,（691．96±203．55）μg／L（P〈0．05）;（2．39±1．24）μmol／L,（3．25±1．37）μmol／L,（4．39±1．52）μmol／L（P〈0．05）;GSH／GSSG氧化还原电位与oxLDL呈明显正相关（r=0．823,P〈0．001）。结论随着冠状动脉斑块积分增高,血浆GSH／GSSG氧化还原态向氧化方向明显偏移,这可能与动脉粥样硬化的发生发展有关。     

紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒基因型与细胞免疫功能的关系

目的探讨慢性乙型肝炎（cHB）患者的乙型肝炎病毒（HBV）基因型与细胞免疫功能的关系及其临床意义。方法对108例CHB患者用聚合酶链反应（PCR）微板核酸杂交-酶联免疫吸附测定（ELISA）技术进行HBV基因分型,用流式细胞仪检测T细胞亚群、非特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、辅助性T细胞（Th）1、Th2、自然杀伤（NK）细胞,对其中55例人白细胞抗原（HLA）-A2阳性CHB患者检测HBV特异性CTL。结果108例CHB患者中,B基因型59例（54．6％）,C基因型48例（44．4％）,B、C混合型1例（0．9％）,HLA—A2阳性55例（51．4％）中,C基因型感染者27例,B基因型感染者28例;乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性率高于B基因型感染者（75．0％VS49．2％）（P〈0．01）,C基因型的HBVDNA水平高于B基因型感染者（6．12±0．81）log10copies／mlvs（5．02±0．61）log10 copies／ml（P〈0．01）,HBV特异性CTL低于B基因型感染者（0．21±0．06）％vs（0．39士o．12）％（P〈0．01）。非特异性CTL高于B基因型感染者（19．84±6．17）％vs（16．81±3．56）％（P〈0．01）,丙氨酸转氨酶（ATL）高于B基因型感染者（505．12±312．91）U／Lvs（222．11±205．16）U／L（P〈0．01）,血清总胆红素（TBIL）高于B基因型感染者（45．71±41．12）μmol／Lvs（28．18±15．12）μmol／L（P〈0．05）。结论与CHBB基因型感染者相比,C基因型感染者的HBV特异性CTL较低,导致HBVDNA水平高于B基因型感染者,HBeAg阳性率也高于B基因型感染者,因此C基因型感染者的肝功能损害比B基因型感染者重,C基因型感染者的肝功能损害比B基因型感染者重,可能也与C基因型感染者的非特异性CTL比B基因型感染者高有关。