中国壮、汉族家族性肌萎缩侧索硬化症之红细胞内SOD-1活性分析

目的探讨家族性肌萎缩侧索硬化症(FALS)患者及家系成员中红细胞内SOD-1活性变化.方法采用生物化学方法测定红细胞内SOD-1活性.结果在2个家系中发现6例SOD-1活性下降.结论在SOD-1活性下降的2个家系可能为ALS1型,红细胞内SOD-1活性测定有可能作为ALS1型患者及症状前诊断的方法之一,并可用于FALS初步分型及基因检测前的筛查.     

家族性肌萎缩侧索硬化症血中Cu/Zn SOD及MDA值变化与临床分配研究

目的：探讨家族性肌萎缩侧硬化症患者及家系成员铜锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）活性和丙二醛（MDA）含量变化及家族性肌萎缩侧索硬化症（FALS）的临床分型。方法：采用生物化学方法测定红细胞内Cu/Zn SOD活性及MDA值。结果：在2个家系中发现6例Cu/Zn SOD活性下降，3例MDA含量增高。结论；在Cu/Zn SOD活性下降的2个家系临床分型可能为肌萎缩侧索硬化症ALS1例，MDA含量增高间接反映Cu/Zn SOD变化。红细胞内Cu/Zn SOD活性测定及MDA含量测定有可能作为ALS1型患者及基因携带者的诊断方法之一，并可用于FALS初步分型及基因检测前的筛查。     

白血病铜锌超氧化物歧化酶的初步研究

应用放射免疫法测定了早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞,白血病病人外周血白细胞,红细胞及血浆中的铜锌超氧化物歧化酶(SOD-1)含量。HL-60细胞SOD-1含量明显高于正常对照多形核粒细胞(PMN)。粒细胞白血病20例,白血病细胞SOD-1含量较正常PMN阴显升高;完全缓解(CR)9例,PMN SOD-1含量较发病组明显降低,与正常PMN比较差异不显著。淋巴细胞白血病10例,白血病细胞SOD-1含量与正常对照单个核细胞差异不显著;CR5例,MNC中SOD-1含量较发病组明显降低。急性白血病初诊时红细胞SOD-1含量下降,化疗期逐渐升高,CR后恢复正常;慢性白血病红细胞SOD-1含量与     

北京市100个早发糖尿病家系MODY1基因突变的筛查

目的早发2型糖尿病家系中可能存在MDOY1基因的致病突变，本研究旨在了解MDOY1基因（HNF-4α）在早发家族性2型糖尿病发病中的作用。方法收集100个2型糖尿病家系，先证者均在40岁前被诊断为糖尿病，且至少还有一个一级亲属在45岁之前被诊断糖尿病。提取先证者血DNA，用PCR产物扩增MDOY1基因的所有外显子和外显子／内含子拼接区．将PCR产物直接进行测序。SPSS进行统计分析。结果在MDOY1基因的筛查中，我们发现3个编码区的变异Exonlc M49V、Exon4 T130I、Exon10 S462S及二个非编码区的DNA变异ⅣS1C＋44A〉T、IVS．5C〉T。结论肘DOY1基因内或附近的基因变异不是早发2型糖尿病家系的主要致病原因。     

脑梗塞患者ECRI基因组密度多态性变化的实验研究

目的：研究脑梗塞患ECRI基因多态性分布，探讨脑梗塞患ECRI活性下降与CRI基因缺陷的关系及脑梗塞发病与红细胞CRI基因缺陷的关系。方法：采用PCR和Hind Ⅲ酶切技术测定ECRI分子基因型，采用C3b受体花环试验测定ECRI活性，并对两个脑梗塞 家系进行研究分析。结果；脑梗塞组ECRI基因密度多态性分布；HH型较正常人群低，但无统计学意义，其中40－49岁组脑梗塞患用HH性明显低于相应年龄正常对照（P＜0．05），HH型、HL型ECRI活性明显低于对照组（P＜0．05），两个脑梗塞家系的研究显示：与正常对照组脑梗塞组相比，HH型明显降低而HL型明显升高（P＜0．05）。结论：年轻脑梗塞患的发病可能与ECRI基因点突变有关，HH型脑梗塞患ECRI活性下降为继发性，而HL行ECRI活性下降有继发性又有原发性因素引起，并且脑梗塞家系中ECRI基因缺陷与脑梗塞易感性高度相关。     

脑梗塞患者红细胞补体受体1活性及其数量基因多态性

为探讨脑梗塞(CI)患者红细胞表面补体受体1(ECR1)活性及CR1数量基因表型分布,分别从细胞及基因2个水平揭示了脑梗塞ECR1活性下降的机理,并为基因重组产物补体受体(rCR1)用于早期预防和治疗CI提供理论基础.用红细胞-酵母菌花环结合试验测定CI组及对照组ECR1活性,测定参数为C3bRR(C3b受体花环率)、CICRR(免疫复合物花环率).用聚合酶链反应&&限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法测定CI组及对照组的数量基因多态性各表型分布情况.与对照组相比,CI组C3bRR下降、CICRR上升,差异均有显著意义(P<0.05).CR1数量基因表型分布CI组与对照组相比,HH型下降,HL增高,差异有显著意义(P<0.05).结果表明CI患者ECR1活性下降与CR1基因表型分布有关.     

2型糖尿病患者红细胞CR1分子基因型及数量表达和黏附活性的变化

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与红细胞CR1分子基因型及数量表达和黏附活性的相关性。方法采用聚合酶链反应(PCR)和HindⅢ酶切技术测定红细胞CR1分子基因型,采用酶联法定量测定红细胞CR1分子的数量,以红细胞天然免疫黏附试验测定红细胞CR1分子黏附活性。结果58例T2DM患者红细胞CR1分子基因型(HH:53.3%,HL:34.5%,LL:12.0%)与58名健康人(HH:68.9%,HL:25.9%,LL:5.2%)比较无显著性意义;T2DM患者红细胞CR1数量表达和黏附活性明显低于健康人(P<0.01)。并且T2DM患者红细胞CR1高、中、低表达基因型的数量表达和黏附活性均低于健康人高、中、低表达基因型(P<0.01,P<0.05)。结论T2DM患者红细胞CR1数量表达和黏附活性的变化主要是后天因素引起,红细胞CR1数量表达和黏附活性与T2DM的发生有着非常密切的关系。     

体外循环心脏手术中和手术后红细胞糖代谢限速酶活性的改变

目的 以往研究发现上腹部或胸部手术后第1天存在红细胞内糖酵解途径受抑制,磷酸戊糖途径、多元醇通路相应活跃现象,但不知在体外循环心脏手术患者围麻醉手术期间这些代谢通路是否有改变.文中拟观察体外循环心脏手术中和手术后血糖及红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phasphate dehydrogenase,G-6PD)、磷酸果糖激酶(phosphofructoki-nase,PFK)及醛糖还原酶(aldose reductase,AR)活性的变化. 方法 对32例体外循环心脏手术患者围麻醉手术期红细G-6PD、PFK及AR活性变化进行了动态观察.分别于麻醉前、锯胸骨、体外心肺转流建立、主动脉阻断5 min、转流结束、手术结束、术后第1天、术后第2天8个时点取动脉血,同步测定血糖及红细胞内G-6PD、PFK、AR活性. 结果 与麻醉前相比,血糖浓度自主动脉阻断5 min开始,至术后第1天均升高显著(P＜0.05);术后第1天PFK活性显著下降(P＜0.05),G-6PD、AR活性显著升高(P＜0.05). 结论 体外循环心脏手术中和手术后存在明显的高血糖反应,术后第1天出现红细胞内糖酵解途径受抑制,磷酸戊糖途径、多元醇通路相应活跃现象.     

2型糖尿病不同中医证型红细胞Ins-RTPK活性变化机理探讨

目的 :研究 2型糖尿病病人不同中医证型红细胞 Ins- RTPK活性变化。方法 :对 2型糖尿病 1 0 8例分别进行中医辨证分型 ,另设正常对照 3 0例 ,分别测定红细胞 Ins- RTPK活性及 2 4 h尿1 7- OHCS排出量。结果 :中医各证型红细胞 Ins- RTPK活性下降 ,其变化规律呈气滞血瘀型≌阴虚热盛型 >气阴两虚型 >阴阳两虚型 ;各证型 2 4 h尿 1 7- OHCS也有一定改变。结论 :不同中医证型的实验室变化说明 2型糖尿病病理机制与下丘脑 -垂体 -肾上腺皮质轴的功能改变有关。     

血浆凝血因子Ⅷ和Ⅸ在急性白血病患者中测定的价值

目的测定FVIII、FIX在急性白血病(AL)患者诊疗中的应用价值。方法将2012.8至2017.4我院治疗的91例AL住院患者作为AL组,随机抽取与AL组同期入院治疗的95例患者作为非AL组,对比AL组与非AL组的FVIII、FIX、D-D、PT、TT、a PTT,同时比较了AL组中CR患者、非CR患者的FVIII、FIX。结果非AL组的FVIII活性、FIX活性高于AL组,D-D、PT、TT及a PTT低于AL组,经过化疗后AL组非CR患者的FIX活性、FVIII活性低于CR患者。结论测定FVIII及FIX有助于诊断AL及评估AL患者的病情。     

Induced pluripotent stem cell-derived motor neurons from amyotrophic lateral sclerosis (ALS) patients carrying different superoxide dismutase 1 mutations recapitulate pathological features of ALS

Background:Investigations of the pathogenic mechanisms in motor neurons (MNs) derived from amyotrophic lateral sclerosis (ALS) disease-specific induced pluripotent stem (iPS) cell lines could improve understanding of the issues affecting MNs. Therefore, in this study we explored mutant superoxide dismutase 1 (SOD1) protein expression in MNs derived from the iPS cell lines of ALS patients carrying different SOD1 mutations.Methods:We generated induced pluripotent stem cell (iPSC) lines from two familial ALS (FALS) patients with SOD1-V14M and SOD1-C111Y mutations, and then differentiated them into MNs. We investigated levels of the SOD1 protein in iPSCs and MNs, the intracellular Ca²⁺ levels in MNs, and the lactate dehydrogenase (LDH) activity in the process of differentiation into the MNs derived from the controls and ALS patients’ iPSCs.Results:The iPSCs from the two FALS patients were capable of differentiation into MNs carrying different SOD1 mutations and differentially expressed MN markers. We detected high SOD1 protein expression and high intracellular calcium levels in both the MN and iPSCs that were derived from the two SOD1 mutant patients. However, at no time did we observe stronger LDH activity in the patient lines compared with the control lines.Conclusions:MNs derived from patient-specific iPSC lines can recapitulate key aspects of ALS pathogenesis, providing a cell-based disease model to further elucidate disease pathogenesis and explore gene repair coupled with cell-replacement therapy. Incremental mutant expressions of SOD1 in MNs may have disrupted MN function, either causing or contributing to the intracellular calcium disturbances, which could lead to the occurrence and development of the disease.     

家族性肌萎缩侧索硬化症转基因鼠的繁殖和鉴定

目的 建立家族性肌萎缩侧索硬化症（FALS）转基因模型鼠的繁育方法,并对其子代鼠进行基因鉴定。方法 （1）以6只B6SJLSOD1G93～＋半合子雄鼠与6只B6SJLFIJ＋／＋雌鼠（1：1）交配;（2）由鼠尾血提取基因组DNA,PCR扩增hmSOD1基因的片段,电泳后观察结果;（3）对PCR产物进行纯化测序,并通过BLAST验证。结果 6对种鼠交配产鼠仔53只,存活率为98％（52／53）;G93AhmSODl阳性鼠约占44．2％（23／52）;PCR扩增产物分别为内对照（IL-2）：324bp;Tg（hmSOD1）：236bp;测序证实PCR产物的基因序列和hmSODl基因片段中的序列一致．并存在G93A突变。结论 B6SJL-Tg（SOD1-G93A）1Gur／J雄鼠与B6SJLFI／J雌鼠配种能成功繁育出Tg（hmSOD1）阳性的ALS半合子子代鼠：本实验的PCR法能准确鉴定hmSOD1基因阳性鼠,并证实该转人的基因按近似孟德尔方式遗传,为ALS实验研究奠定了基础。     

肌萎缩侧索硬化症SOD1基因突变特点

 【目的】 探讨中国南方人群肌萎缩侧索硬化症铜锌超氧化物岐化酶（CulZnsuperoxidedismutase；SOD1）基因突变的特点。【方法】 采用SOD1基因的5对引物对4个家系的15例家族性肌萎缩侧索硬化症（FALS）患者、56例散发性肌萎缩侧索硬化症（SALS）患者和46例正常对照DNA进行PCR扩增，重复三次应用单链构象多态性方法分析各外显子的多态性。【结果】 SOD1基因的5个外显子未发现异常泳动。【结论】 中国南方人群肌萎缩侧索硬化症患者可能不存在SOD1基因第1-5号外显子突变或突变率极低，可能存在其他位点的基因突变。     

肌萎缩侧索硬化模型鼠中microRNA-29b的表达

目的：探讨microRNA-29b (miR-29b)在肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）中的表达水平及其在该病诊断中的可能价值。方法：留取16只SOD1-G93A ALS模型鼠和16只野生型鼠脑皮质、脊髓、前肢肌肉组织和血浆,提取microRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）方法检测miR-29b的表达量,并通过受试者工作特征曲线（receiver operator characteristic curve,ROC）评估SOD1-G93A ALS模型鼠miR-29b对于ALS的诊断价值。结果：以U6 snRNA为内参,实验组SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b相对表达量显著高于对照组水平(P=0.001)。按周龄分组,8、12和16周龄实验组SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b的相对表达量显著高于对照组水平（3个不同周龄的实验组vs.对照组显著性检验分别为P=0.044、P=0.018、P=0.045）。通过SOD1-G93A ALS模型鼠脑皮质miR-29b的相对表达量（以U6 snRNA为内参）对ALS进行诊断时,ROC曲线下面积（area under the curve,AUC）为0.885,如果以0.185 6为诊断临界值,灵敏度和特异度均较高,分别为92.9%和71.4%。结论：miR-29b可能会成为早期诊断ALS的检测指标。     

骨髓干细胞移植治疗肌萎缩侧索硬化症转基因鼠的疗效

目的观察骨髓干细胞移植后肌萎缩侧索硬化症(ALS)模型鼠生存期和运动功能的变化。方法PCR法鉴定的6~9周龄ALS转基因阳性雌鼠(40只)分为ALS移植组(25只)和ALS对照组(15只),移植前5~7d给予5·5~6·5Gyγ射线预处理移植鼠;收取来自同窝正常雄鼠的全骨髓细胞,经尾静脉注射移植到移植鼠体内[(1~2)×107/只],ALS对照组尾静脉注射无血清培养基;评估移植物抗宿主病(GVHD)表现,移植8周后PCR法检测ALS移植鼠血基因组Y染色体的性别决定基因(Sry基因);与ALS对照组比较发病时间、生存期的改变,并以悬尾、转棒、转轮和牵引实验检测16~17周龄时两组ALS鼠的运动功能差别。结果部分移植鼠出现不同程度GVHD反应,GVHD总体评分1~2分,移植8周后检测移植鼠血基因组Sry基因结果呈阳性;ALS移植组比ALS对照组发病时间和生存期平均延后5周(P<0·01);16~17周龄时的悬尾、转棒、转轮和牵引实验检测结果显示移植组的运动功能比ALS对照组明显改善(P<0·01)。结论经静脉移植的正常小鼠骨髓干细胞能在ALS转基因阳性鼠体内长期存活,并可改善模型鼠的生存期、发病时间和运动功能,提示骨髓干细胞移植可能改善ALS预后的临床治疗前景。     

Increased Orexin Expression Promotes Sleep/Wake Disturbances in the SOD1-G93A Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis

Background:Sleep/wake disturbances in patients with amyotrophic lateral sclerosis (ALS) are well-documented,however,no animal or mechanistic studies on these disturbances exist.Orexin is a crucial neur...     

肌萎缩性脊髓侧索硬化症相关蛋白SOD1的氨基酸突变对其聚集的影响

目的探讨肌萎缩性脊髓侧索硬化症（ALS）发病过程中超氧化物歧化酶1（SOD1）氨基酸突变对其聚集的影响。方法收集全部已知SOD1氨基酸错义突变106个,运用AGGRESCAN、PASTA、TANGO3种生物信息学方法和工具,预测错义突变对蛋白质聚集倾向的作用。结果3种生物信息学工具预测结果基本一致,共有39个对蛋白质聚集有促进作用的突变,占所有突变的37%。结论氨基酸突变导致蛋白质聚集并非是导致ALS发病的唯一途径,ALS发病机制是一个多因素的复杂过程。     

Therapeutic effects of dl-3-n-butylphthalide in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis

Background Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) represents a fatal neurodegenerative disorder characterized by progressive death of the upper and lower motor neurons. Transgenic mice over-expressing a mutant form of the human SOD1 gene develop an ALS-like phenotype. Currently, there is no effective treatment or drug for the lethal disease. Previous studies reported potent efficacy of DL-NBP for several neurodegenerative disorders and cerebral ischemia. In this study,we investigated the efficacy of DL-NBP on ALS model mice. Methods Sixty SOD1-G93A female mice were divided into four groups: vehicle control, 30mg, 60mg, and 120mg DL-NBP/kg. For measurement of motor activity, Hanging wire test and Rotarod test were performed and survival statistics were analyzed by Kaplan-Meier survival curves. The body weight of each mouse was recorded twice one week. The statistical motor unit number estimation (MUNE) technique was used to estimate the number of functioning motor units in gastrocnemius muscle.Musle morphology was evaluated by hematoxylin and eosin staining. Motor neuron quantitation was performed by Nissl staining and microglia activation was observed by immunohistochemistry. Results Oral administration of 60 mg/kg DL-NBP significantly prolonged survival (164.78±16.672 days) compared to vehicle control(140.00±16.892 days). 60mg/kg DL-NBP treatment significantly decreased the progression rate of motor deficits and suppressed body weight reduction. Furthermore, we found that 60mg/kg DL-NBP slowed the rate of MUNE reduction (p<0.01).Motor neurons were remarkably preserved in the anterior horns in mice treated with 60mg/kg DL-NBP at the stage of 19 weeks, (p<0.01). 60mg/kg DL-NBP treatment significantly reduced CD11b immunoreactivity compared with vehicle control mice (p<0.05). No significant effect was observed in 30mg/kg and 120mg/kg DL-NBP-treament. Conclusions The post-onset administration of DL-NBP significantly prolonged survival and improved motor performance in SOD1-G93A mice. DL-NBP may be a potential therapeutic agent for ALS.