芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

芦荟大黄素对白细胞介素-2引起大鼠T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度变化的影响

目的 研究芦荟大黄素对白细胞介素-2(IL-2)引起的T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对淋巴细胞增殖的作用和机制.方法 采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2+]i.结果 芦荟大黄素对IL-2引起的T细胞增殖有显著抑制作用,且抑制效果与剂量有关;IL-2引起[Ca2+]i升高,并持续维持高[Ca2+]i水平,引起[Ca2+]i升高的机制包括胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流;芦荟大黄素显著抑制IL-2引起的[Ca2+]i升高,作用途径包括抑制胞内Ca2+释放和胞外Ca2+内流.结论 芦荟大黄素对IL-2诱发的T细胞增殖有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内[Ca2+]i升高相关.     

大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2 )]_i的抑制作用特征

目的:研究大黄影响正常的及内毒素细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的特征及其与细胞[Ca~(2 )]_i 的变化关系。方法:利用 TNF-α敏感细胞系 L929,用 MTT法检测 PMφ分泌的 TNF-α量;用荧光探针和荧光光谱法分别测定多细胞和单细胞的[Ca~(2 )]_i。结果:适宜浓度的大黄可轻度活化正常的 PMφ分泌 TNF-α和升高[Ca~(2 )]_i,大黄对 LPS 刺激的 PMφ分泌 TNF-α和升高[Ca~(2 )]_i 有剂量依赖性的抑制效应,1.0%大黄分别抑制了 LPS 刺激的 PMφTNF-α分泌量的92.5%和[Ca~(2 )]_i升高的90.5%。其抑制作用主要表现在给药的早期阶段。结论:大黄对 PMφ分泌 TNF-α有双向调节作用,降低细胞[Ca~(2 )]_i 是其抑制 LPS 刺激作用的细胞内信号传导的关键环节。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca~(2 )]_i的影响

目的　揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法　采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2 ]i 的影响及 [Ca2 ]i 变化时 Ca2 的来源 ,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果　海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,[Ca2 ]i 升高时 ,Ca2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论　海嘧啶通过升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,从而启动肿瘤细胞凋亡机制 ,诱导肿瘤细胞凋亡 ;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道、引起肿瘤细胞内钙库释放、降低肿瘤细胞钙泵活性 3条途径达到的。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNF_α、IL-1、IL-6及细胞[Ca~(2 )]_i的影响

目的　研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i 的影响。方法　利用脂多糖 (lipopolysacchride,L PS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型 ,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的 TNFα、IL- 1、IL- 6和 [Ca2 ]i。结果　大黄素对 TNFα 的分泌和[Ca2 ]i 有双向调节作用。结论　大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

白藜芦醇甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-6和IL-1及细胞内钙浓度的影响

目的:研究白藜芦醇甙(polydatin,pol)对大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)分泌TNF-α、IL-6和 IL-1的作用及其与[Ca~(2 )]_i 的关系,以了解 pol 的抗炎作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylterazolium bromide,MTT]比色法检测 IL-1、TNF-α和 IL-6,采用荧光指示剂和荧光分光光度计检测 PM 的[Ca~(2 )]_i。结果:(1)pol 增加正常大鼠 PM 分泌 TNF-α和 IL-6,对 IL-1的分泌无明显作用。pol 可降低经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的大鼠 PM 分泌 TNF-α、IL-6和 IL-1。(2)pol 降低正常的和经 LPS 刺激后的大鼠 PM 静息[Ca~(2 )]_i 和外加 CaCl_2后[Ca~(2 )]_i 的升高。结论:pol 对PM 分泌细胞因子有双向调节作用。pol 可以抑制细胞内贮存钙释放和细胞外钙的进入。Pol 的抗炎机制可能与其抑制上述炎症介质有关,并可能通...     

大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度的影响

用钙敏感的荧光指示剂Fura－2／Am定量分析大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞内（Ca2 ）i的影响。结果显示：在巨噬细胞悬液中相继加入不同剂量的CaCl2后，（Ca2 ）i明显增高（P＜0．01）。巨噬细胞用适当剂量大黄素予处理10min，使用上述不同剂量的CaCl2后，（Ca2 ）i水平明显增高，该实验进一步提示；大黄素可促进细胞内Ca2 释放，也可促进细胞外Ca2 内流。而且大黄素对［Ca2 ］i的作用呈剂量依赖性。     

青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响

目的考察青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性及[Ca2 ]i的影响。方法青龙衣多糖对S180小鼠ip给药7 d,比色法结合试剂盒测定S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,采用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM荧光探针测定红细胞内[Ca2 ]i。结果青龙衣多糖能提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性(P<0.05);降低S180小鼠红细胞[Ca2 ]i(P<0.05),并且青龙衣多糖的作用呈剂量依赖性,以高剂量组的作用最佳(P<0.01)。结论青龙衣多糖通过提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,排除离子跨膜转运障碍,稳定其能量代谢和物质代谢,有利于维持细胞内Ca2 的正常浓度。     

大承气汤和大黄对巨噬细胞免疫活性的双向调节作用

[目的]研究大承气汤(DCQ)及其主药大黄(DH)对正常的和脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)释放肿瘤坏死因子α(TNFα)作用的特征。[方法]利用对TNF敏感的细胞系L929，用MTT法检测PMΦ释放的TNFα量。[结果]LPS刺激PMO释放TNFα在8h达到峰值，其峰值随LPS浓度增加而增加；低浓度。DCQ和DH对正常PMO释放TNFα有轻度激活作用；DCQ和DH对LPS刺激PMO过量释放TNF(有显著抑制作用，其效应随药物浓度的增加而增强，并且抑制作用主要表现在给药后的早期阶段。[结论]DCQ及其主药DH对PMΦ释放TNFα有双向调节作用。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

大黄素对大鼠腹腔巨噬细胞产生的TNFα、IL-1、IL-6及细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i的方法。利用脂多糖（lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i。结果 大黄素对TNFα的分泌和[Ca^2 ]i有双向调节作用。结论 大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

重楼总皂苷对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1β的影响

目的:探讨重楼总皂苷对细菌内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)分泌TNF-α、IL-1β的影响.方法:分离并纯化大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),与重楼总皂苷共同孵育,2小时后予LPS(100ng/ml)诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β,以ELISA酶联免疫吸附测定法检测上清液中TNF-α、IL-1β浓度.结果:重楼总皂苷对LPS诱导PMΦ释放TNF-α、IL-1β具有显著的抑制作用(P＜0.01).结论:重楼总皂苷可以抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β的活性.     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2+浓度[Ca2+]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2+]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2+]i(以细胞内Ca2+相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时(P<0.05)。假手术组与正常组相比[,Ca2+]i变化差异无统计学意义(P>0.05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2+]i比较,无统计学意义(P>0.05)。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2+]i低于模型组(P<0.01)。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2+]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2+]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪多糖对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞肥大的保护作用。方法新生1～2 d的SD大鼠心肌细胞培养48 h后,设对照组,模型组,黄芪多糖低、中、高质量浓度(1、10、100 mg/L)组。计算机图像分析系统测量细胞体积;RT-PCR法检测心房利钠多肽(ANP)mRNA的表达;ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的量;采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的瞬间变化。结果与对照组相比,LPS 1 mg/L可使心肌细胞体积显著增大,ANP mRNA的表达显著增强,细胞分泌TNF-α蛋白的量显著增加,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大(P<0.01)。与模型组相比,黄芪多糖1、10、100 mg/L预先给药均可抑制心肌细胞体积增大;细胞产生的TNF-α显著减少,ANP mRNA的表达不同程度地减少(P<0.05),其中10、100 mg/L组这两项指标可恢复到对照组的水平(P>0.05);黄芪多糖10 mg/L可拮抗LPS对正常心肌细胞内[Ca2+]i瞬间变化幅度增大的作用(P<0.01)。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与抑制TNF-α的产生、降低[Ca2+]i有关。     

蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞游离钙离子的影响

目的 探讨蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子的影响及其作用机制.方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用钙敏荧光探针Fura-2/ AM负载染色后,采用阳离子测定系统,检测给药前后心肌细胞游离钙离子浓度[Ca2+]i及心肌细胞钙瞬变.结果 (1)静息状态下,心肌细胞[Ca2+]i为(83.3±11.7) nmol/L(x±s,n=6),终质量浓度分别为0.2、1、5μg/mL蜂胶黄酮对静息[Ca2+]i无影响.(2) KC1、Iso能明显升高[Ca2+]i(P ＜0.01),预孵蜂胶黄酮能抑制KCl及Iso引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01);(3)蜂胶黄酮能降低心肌细胞钙瞬变峰值,抑制钙瞬变频率,对KCl、异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙瞬变变化具有抑制作用.结论 蜂胶黄酮可抑制心肌细胞内钙超载,其作用机制可能与影响钙通道及细胞内钙释放有关.     

大黄素对脂多糖诱导后巨噬细胞释放炎症因子的影响

目的:研究大黄素对脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导后巨噬细胞RAW264.7释放炎症因子的影响及其分子机制。方法:将细胞分为6组,空白组,LPS组和不同浓度(1μM,5μM,10μM,25μM)大黄素+LPS组,不同浓度的大黄素预处理细胞2 h后,再加入1μg/m L LPS刺激细胞,用ELISA法检测细胞上清液中的TNF-α,IL-1β,IL-6蛋白水平,用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达,用Western-Blot检测核转录因子(NF-κB p65)的磷酸化。结果:LPS刺激后RAW264.7巨噬细胞炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的表达和分泌明显高于空白组,而给予大黄素的LPS组表达和分泌上述细胞因子明显降低,且呈剂量依赖性。LPS刺激后的细胞NF-κB p65磷酸化明显增强,而大黄素则能抑制NF-κB p65的磷酸化,且呈剂量依赖性。结论:大黄素能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子,降低mRNA的表达,其作用机制主要通过抑制NF-κB p65磷酸化的信号通路。     

妍婷颗粒对脂多糖诱导小鼠脾细胞产生TNF-α的影响

[目的]研究中药复方妍婷颗粒对脂多糖(LPS)诱导小鼠脾细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,初步探讨妍婷颗粒对慢性盆腔炎抗炎、免疫调节的内在机制.[方法]体外培养小鼠脾细胞用LPS刺激,用不同浓度妍婷颗粒含药血清干预,酶联免疫银光法(ELISA)法检测上清液中TNF-α含量,反向逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测细胞中TNF-α mRNA表达.[结果]1)经LPS诱导后小鼠脾细胞TNF-α分泌量明显升高,TNF-α mRNA表达增强.2)小鼠脾细胞TNF-α的分泌量与表达与妍婷颗粒含药血清浓度呈剂量依赖性.[结论]妍婷颗粒具有抑制LPS诱导的小鼠脾细胞产生TNF-α的作用,据此推测妍婷颗粒的抗炎、免疫调节作用机制可能与其抑制脂多糖介导的TNF-α释放有关.     

川芎嗪对PGF2α诱导心肌肥大的抑制作用

目的:研究川芎嗪(Tetraethylpyrazine,TMP)对前列腺素F2α(PGF2α)所致心肌肥大的影响.方法:利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径大小、蛋白质含量为心肌肥大反应指标,观察药物的抗心肌肥大效应;用Fura 2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i).结果:PGF2α10-7mol/L使心肌细胞明显增大,蛋白质含量明显增加,并使[Ca2 ]i显著升高.与PGF2α组比较,TMP 10-6、10-5和10-4mol/L可分别使心肌细胞直径缩小36%、44%和55%(P<0.05);蛋白质含量分别减少13%、21%和24%(P<0.01);[Ca2 ]i分别降低17%、37%和48%(P<0.05).结论:TMP可抑制PGF2α诱导的心肌细胞肥大,该作用可能与其抑制心肌细胞[Ca2 ]i的升高有关.     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2＋浓度[Ca2＋]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血（MCAO）模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2＋]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2＋]i（以细胞内Ca2＋相对荧光强度表示）在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时（P〈0.05）。假手术组与正常组相比[,Ca2＋]i变化差异无统计学意义（P〉0.05）。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2＋]i比较,无统计学意义（P〉0.05）。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2＋]i低于模型组（P〈0.01）。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2＋]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2＋]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

粉防己碱对培养乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

 目的：观察粉防己碱（Tet)对培养大鼠心肌细胞内游离钙（[Ca2+]i)的影响。方法：运用Ca2+指示剂Fura-2作 为细胞内钙离子的荧光探针，利用AR-CM-MIC阳离子測定系统，检測培养乳鼠心肌细胞内游离钙的浓度 [Ca2+]i。结果：在细胞外液钙浓度为1.8mmol/L时，心肌细胞静息[Ca2+]i为80.3士6.9mmol/L。在细胞外液钙浓度为1.8-5.4mmol/L时，粉防己碱（Tet)对细胞静息[Ca2+]i无明显影响。Tet1-100Mmol/L剂量依賴的抑 制高钾和H202引起的[Ca2+]i的升高，Tetl0μmol/L能对抗去甲肾上腺素引起的[Ca2+]i,升高。对搏动细胞，Tet 能抑制细胞外高钙引起的收缩期[Ca2+]i瞬间的变化，减慢搏动頻率。结论:Tet对高K+、去甲肾上腺素、H202及高 钙引起的[Ca2+]i,增高的抑制作用可能是其抗心肌缺血机理之一。