三氧化二砷对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4~＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化的影响

目的：观察三氧化二砷（ATO）对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化的影响。方法：免疫磁珠法分选16～18周MRL/lpr狼疮小鼠和C57BL/6J正常对照小鼠脾脏CD4＋T细胞,PHA-p（20μg/mL）和IL-2（1 000 IU/mL）刺激48 h后分为以下不同药物处理组：①PBS组：空白对照;②ATO组：1μmol/L ATO作用24 h;③ATO＋5-氮杂胞苷（5-AzaC）组：1μmol/L 5-AzaC作用72 h后1μmol/L ATO作用24 h。CD4＋T细胞经过以上处理后抽提基因组DNA,亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子,产物凝胶回收,克隆入pMD-19T载体,转化入E.coli DH5α,筛选阳性克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析。结果：①MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子呈低甲基化水平。②1μmol/LATO作用24 h后MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高。③1μmol/L ATO作用24 h能使经过5-AzaC干预后的MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平明显增高。结论：1μmol/L ATO作用24 h能在一定程度上有效逆转活化状态下MRL/lpr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子低甲基化。     

三氧化二砷对MRL／1pr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ表达及其mRNA的影响

目的：观察三氧化二砷（ATO）对MRL／1pr狼疮小鼠脾脏CD4＋T细胞分泌IFN-γ及其mRNA的影响。方法：免疫磁珠分别分选18—20周MRL／1pr狼疮小鼠和C57BL／6J正常对照小鼠脾脏CD4＋T细胞,采用流式细胞术鉴定细胞纯度。PHA-P（20μg／mL）和IL-2（1000IU／mL）常规刺激48h后进行如下实验：（1）不同浓度ATO（0.5、1.0和2.0μmol／L）作用24h;（2）1μmol／LATO作用不同时间（12、24和48h）;（3）不同药物处理组：①PBS组：空白对照;②ATO组：lumol／LATO;③5-氮杂胞苷（5-AzaC）组：1μmol／L 5-AzaC;④ATO＋5-AzaC组：1μmol／LATO＋1μmol／L 5-AzaC。酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液IFN-γ的表达量;实时荧光定量PCR法检测不同药物处理组中IFN-γ mRNA的表达情况。结果：①1.0μmol／LATO作用24h对细胞存活率无明显影响。②1mmol／l AT0作用24h能抑制MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的转录和翻译水平。③经5-AazC处理后MRL／1pr和C57BL／6J小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的转录和翻译水平升高,1mmol／L ATO作用24h能抑制其异常活化状态。④MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-γ的分泌和表达水平均较CS7BL／6J小鼠明显升高。结论：1mmol／L ATO作用24h能在一定程度上有效抑制活化状态下MRL／1pr小鼠脾脏CD4＋T细胞IFN-g的异常分泌,下调其mRNA表达水平而不影响其存活率。     

三氧化二砷对MRL/lpr自发性狼疮小鼠脾脏单个核细胞DNMT1及CD_(11a)表达的影响

目的探讨三氧化二砷（ATO）对MRL/lpr自发性狼疮小鼠脾脏单个核细胞（SMC）中DNA甲基转移酶1（DNMT1）和黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）的亚基CD11a表达的影响及其可能作用机制。方法分离小鼠SMC,采用20g/ml植物血凝素和1000IU/ml白介素-2体外诱导培养SMC 48h后,随机分为空白组、ATO组和5-氮胞苷（5-Az）组,继续培养24h,采用RT-PCR法检测两组小鼠SMC中DNMT1及CD11a基因转录水平的表达情况。结果MRL/lpr小鼠ATO组中DNMT1-mRNA的灰度比值较5-Az组增高（P〈0.05）,MRL/lpr小鼠ATO组中CD11a-mRNA的灰度比值较5-Az组降低（P〈0.05）。结论ATO治疗系统性红斑狼疮的作用机制可能与其能逆转低甲基化状态有关。     

吡格列酮联合5-氮杂胞苷干预对大鼠胰岛素瘤细胞增殖、凋亡及功能的影响

目的观察吡格列酮(PGZ)联合5-氮杂胞苷(5-AzaC)干预对大鼠胰岛素瘤细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌量的影响。方法 2015年6月—2016年6月于河南省平顶山市第二人民医院内分泌科进行实验。将大鼠胰岛素瘤细胞(RIN-m5f)行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:空白组(不加任何试剂)、模型组[白细胞介素-1 3(IL-1β)2 ng/ml+干扰素γ(IFN-γ)100 U/m1]、吡格列酮组(IL-1β2 ng/ml+IFN-γ100 U/ml+PGZ 15μmol/L)、5-AzaC组(IL-Iβ2 ng/ml+IFN-γ100 U/ml+5-AzaC 1.5μ.mol/L)及PGZ+5-AzaC组(IL-1β2 ng/ml+IFN-γ100 U/ml+PGZ 15μmoL/L+5-AzaC 1.5μmol/L)。应用倒置显微镜观察RIN-m5f细胞形态学的变化,流式细胞仪测定RIN-m5f细胞凋亡情况,应用Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、多糖聚合酶(PGZRP)表达情况,应用ELISA法检测葡萄糖刺激胰岛素分泌能力。结果 RIN-m5f细胞培养24 h、48 h、72 h后应用流式细胞仪可观察到PGZ组、5-AzaC组、PGZ+5-AzaC组和RIN-m5f细胞凋亡率低于模型组(q_(PGZ组)=12.122、8.452、8.252,P均<0.05;q_(t5-AzaC组)=12.252、8.563、7.529,P均<0.05;q_(PGZ+5-AzaC组)=8.563、7.452、8.963,P<0.05),PGZ+5-AzaC组细胞凋亡率低于PGZ组与5-AzaC组(q_(PGZ组)=7.022、6.986、8.523,P均<0.05;q_(5-AzuC组)=8.963、9.123、10.523,P均<0.05),培养48 h、72 h后PGZ+5-AzaC组细胞凋亡率较培养24 h时显著下降(q=5.996、6.789,P均<0.05)。Bcl-2、PGZRP表达水平:模型组>PGZ组>5-AzaC组>PGZ+5-AzaC组(q=7.896、8.233、9.102,P均<0.05)。PGZ+5-AzaC组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力大于PGZ组、5-AzaC组(q=8.252、7.896,P均<0.05),5-AzaC组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力大于PGZ组,差异均有统计学意义(q=8.123,P<0.05)。结论 PGZ联合5-AzaC能有效抑制高糖诱导大鼠胰岛素瘤凋亡,恢复胰岛素瘤分泌能力,其作用机制可能与其能下调Bcl-2、PGZRP表达水平有关。     

MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+调节性T细胞含量、增殖能力及抑制能力的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的含量、增殖能力及其对效应性T淋巴细胞(Teff细胞)的抑制能力及意义。方法流式细胞检测法检测8只MRL/lpr小鼠及8只BALB/c小鼠脾脏中Treg细胞的水平;磁珠分选法分选出脾脏中的Treg细胞与Teff细胞,离体培养2周后,分别测量Treg细胞数量,并比较差异;用Treg细胞与Teff细胞组成共培养体系,5 d后检测Teff细胞的水平,计算Treg细胞对Teff细胞的抑制率并比较差异。结果 MRL/lpr小鼠脾脏中Treg细胞的总含量与BALB/c小鼠无统计学差异[(4.88±0.55)%vs(5.03±0.34)%,P>0.05];离体培养2周后MRL/lpr小鼠的Treg细胞数量显著低于BALB/c小鼠[(6.61±0.92)×105vs(13.25±1.91)×105,P<0.05];共培养5 d后MRL/lpr小鼠Treg细胞对Teff细胞的抑制率显著低于BALB/c小鼠Treg细胞(P<0.05)。结论 MRL/lpr小鼠体内Treg细胞增殖能力、抑制能力的下降可能导致体内免疫平衡的破坏、自身抗原-抗体反应,参与MRL...     

脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

目的：探讨移植脂肪间充质干细胞（adipose tissue derived stem cells,ADSCs）对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法：15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组（cyclophosphamide,CTX组）,每组5只。ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150 μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg（体重）,每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次。留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度。治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化。结果：（1）24 h尿蛋白浓度变化：治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义（P>0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义［(5.02±1.61) g/L vs. (7.10±1.63) g/L、(4.90±0.71) g/L vs. (7.10±1.63) g/L,P<0.05］,而且治疗时间越长,效果越明显,治疗8周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组［(2.24±0.73) g/L vs. (10.36±1.64) g/L、(3.80±1.45) g/L vs. (10.36±1.64) g/L,P<0.01］;ADSCs组和CTX组之间24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义（P>0.05）。（2）脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率：ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62%±1.87%、14.14%±1.29%、0.71%±1.23%,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。（3）脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率：ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43%±020%、1.63%±0.65%、6.37%±1.64%,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著。ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用。     

MRL/lpr小鼠肾组织MCP-l表达及MMF对其表达的影响和相关机制研究

目的:检测MRL/lpr狼疮小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达及探讨霉酚酸酯(MMF)对其影响和相关机制,研究MMF对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用.方法:MRL/lpr狼疮小鼠分为对照组和治疗组两组.观察肾组织病理学改变及其MCP-1、CD14和蛋白激酶C(PKC)等的表达以及尿蛋白、抗ds-DNA抗体水平的变化.结果:对照组小鼠肾小球基底膜增厚,系膜基质增多,肾组织MCP-1表达上调,CD14+细胞数明显增多,伴尿蛋白及抗ds-DNA抗体水平增加.治疗组小鼠肾组织MCP-1表达减少,CD14+细胞数减少,尿蛋白和抗ds-DNA抗体水平减少,且肾小球MCP-1与其PKC表达水平及肾小球CD14+细胞数、尿蛋白水平呈直线相关关系.结论:MMF对MRL/lpr小鼠自发狼疮肾炎具有治疗作用,其机制可能通过抑制PKC通道激活减少小鼠肾组织MCP-1的表达,从而减少肾组织单核细胞的浸润,减轻肾脏损害.     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠CD4~+T细胞DNA甲基化的影响及与GRα表达的相关性研究

[目的]探讨解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响及与糖皮质激素受体α(GRα)之间的关系。[方法]将24只6周龄SPF级MRL/lpr狼疮小鼠随机平均分为对照组和中药组。免疫磁珠技术分离出脾脏CD4+T细胞,采用MethyflashTM总体DNA甲基化试剂盒检测CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平,实时定量PCR技术检测GRα、DNA甲基化转移酶1(DNMT1)、生长停滞与DNA损伤诱导蛋白α(Gadd45α)m RNA表达水平。[结果]同对照组比较,中药组MRL/Lpr小鼠CD4+T细胞基因组DNA整体甲基化水平明显升高(P0.05),DNMT1基因m RNA表达明显上升(P0.05),Gadd45α基因m RNA表达明显下降(P0.05),GRα基因m RNA表达明显升高(P0.05)。[结论]解毒祛瘀滋阴方可以升高MRL/lpr狼疮小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平,同时可以上调GRαm RNA表达,但二者之间没有直接联系。解毒祛瘀滋阴方可能是通过其他效应基因实现DNA甲基化调控作用,而不是通过GRα基因。     

静脉注射免疫球蛋白对MRL/lpr小鼠外周血NK细胞的影响

目的 研究静脉注射免疫球蛋白对MRL/lpr小鼠蛋白尿及外周血自然杀伤(NK)细胞的影响.方法 MRL/lpr小鼠随机分为免疫球蛋白治疗组(尾静脉注射丙种球蛋白4 μL/kg×5 d)和对照组(尾静脉注等量生理盐水).两组小鼠治疗前后分别进行24 h尿蛋白定量和血常规检测,流式细胞术检测外周血NK细胞数量.结果 与治疗前比较,治疗后免疫球蛋白治疗组MRL/lpr小鼠24 h尿蛋白定量明显减少(P<0.05),外周血NK细胞比例明显上升(P<0.05);而对照组MRL/lpr小鼠治疗前后24 h尿蛋白定量和外周血NK细胞比例无明显变化(P>0.05).结论 静脉注射免疫球蛋白可有效改善MRL/lpr小鼠的蛋白尿症状,其作用机制可能与增加外周血NK细胞数量有关.     

甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 探讨甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮肾炎是否具有保护作用及其机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(20 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(40 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA法检测各组小鼠血清中尿酸(UA)与肌酐(Cr)含量,各组小鼠血清及肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平;采用HE染色法检测肾脏病理改变;采用Western blot技术检测各组小鼠脾脏NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、NF-κB、p-IκBα、IκBα蛋白的表达.结果 甘草酸能显著降低血清尿酸、肌酐含量;减少血清及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子表达,改善肾脏病理改变;并能显著抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、p-IκBα表达.结论 甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏起到保护作用.     

泼尼松和TACI-Ig联合用药对MRL/lpr小鼠产生自身抗体的作用及机制

目的研究泼尼松和跨膜激活和钙调和亲环素配体相互作用因子融合蛋白( TACI-Ig)联合用药对系统性红斑狼疮MRL/Mpslac-lpr( MRL/lpr)小鼠的治疗作用及部分机制。方法将MRL/lpr小鼠随机分为6组,即模型组、醋酸泼尼松(Pre)组(2.5、5.0 mg/kg)、TACI-Ig组(15.0 mg/kg)、Pre+TACI-Ig[(2.5+7.5)、(2.5+15.0) mg/kg]联合用药组,另设BALB/c小鼠作为正常对照组。各给药组小鼠每日灌胃给予Pre,TACI-Ig隔日皮下注射给药,模型组和正常对照组给予生理盐水,共计13周。观察联合用药对小鼠一般体征和尿蛋白的影响,HE染色法检测小鼠脾脏和肾脏病理学变化,ELISA法检测小鼠血清中自身抗体和B细胞活化因子( BAFF)水平的变化,流式细胞术检测脾脏浆细胞亚群比例,免疫组化法检测脾脏CD138的变化。结果 Pre和TACI-Ig联合用药可以改善MRL/lpr小鼠皮肤损伤,降低尿蛋白,明显减少脾脏生发中心形成和白髓增生,显著减轻小鼠肾脏肾小球系膜细胞增生和肾小球纤维化,改善炎症状态,降低脾脏浆细胞(CD19- CD138+)的比例,降低血清BAFF 和抗核抗体(ANA)水平,但是对抗ds-DNA 抗体水平无明显影响。结论摇Pre 和TACI-Ig 联合用药对MRL/ lpr 小鼠具有治疗作用,其机制可能与抑制浆细胞分化、降低自身抗体产生有关。     

骨髓间充质干细胞输注对MRL/lpr狼疮鼠B淋巴细胞CXCR4表达的影响

目的：研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）输注对狼疮鼠血浆C3、IgG浓度及B细胞、浆细胞表面CXCR4表达的影响,分析BMMSCs改善系统性红斑狼疮疾病活动的机制。方法：分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs,并对MRL/lpr 狼疮鼠进行尾静脉输注。实验分为C57BL/6组（C57BL/6小鼠未进行尾静脉输注）、MRL/lpr组（MRL/lpr鼠未进行尾静脉输注）、BMMSCs组（MRL/lpr鼠12周龄注射BMMSCs）和PBS 组（MRL/lpr鼠12周龄注射PBS）。在20周末取小鼠的外周血、骨髓、脾脏进行流式细胞分析,检测B细胞、浆细胞表面CXCR4表达;同时取4组血浆,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测C3、 IgG浓度。取小鼠肾脏组织行苏木精伊红（HE）染色。结果：① MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠血浆C3浓度明显降低、IgG浓度明显增高（P均<0.01）;MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠B细胞表面CXCR4的表达在外周血明显下降,在骨髓和脾脏明显升高（P均<0.01）;MRL/lpr组小鼠骨髓（P<0.05）及脾脏（P＜0.01）浆细胞表面CXCR4表达明显高于C57BL/6小鼠。② BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组C3浓度明显升高、IgG浓度明显降低（P均<0.01）; BMMSCs组较PBS组B细胞表面CXCR4表达在外周血明显增加（P<0.01）,在骨髓（P<0.01）和脾脏（P<0.05）明显下降, 较MRL/lpr组在骨髓和脾脏均明显下降（P均<0.01）。③ BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组浆细胞表面CXCR4表达在骨髓和脾脏均明显降低（P均<0.05）。④ 肾脏HE染色提示输注BMMSCs后狼疮鼠肾脏炎症改善。结论：BMMSCs输注可调节B细胞、浆细胞表面CXCR4的表达,改善MRL/lpr鼠病情活动指标。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4+T细胞DNA甲基化敏感基因表达的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠CD4~+T细胞DNA甲基化敏感基因白介素10(IL-10)、蛋白磷酸酶2Ac(protein phosphatase 2Ac,PP2Ac)、CD70表达水平的影响。方法:40只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组和解毒祛瘀滋阴方中药组,分别予解毒祛瘀滋阴方中药和生理盐水灌胃8周。干预结束后,观察小鼠皮损及血清抗ds DNA抗体、C3浓度、尿蛋白水平变化;HE染色及荧光染色后观察肾脏病理改变;荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4~+T细胞甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,中药组小鼠血清抗ds DNA抗体、C3浓度和肾脏病理损伤明显改善,CD70、PP2Ac和IL-10的mRNA表达水平明显降低(P0.05)。结论:解毒祛瘀滋阴方具有对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用,其作用机制可能与其抑制下游甲基化敏感基因CD70、PP2Ac、IL-10的过度表达有关。     

小鼠脾脏和外周血免疫细胞及部分细胞因子的增龄性变化

目的 探索不同年龄小鼠脾脏和外周血免疫细胞、细胞因子的变化.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠分为幼年(1月龄)组7只、青年(2月龄)组7只、中年(12月龄)组7只、老年(17月龄)组3只.分别用流式细胞术和ELISA检测小鼠脾脏和外周血免疫细胞(CD3-CD19+B细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细...     

静脉注射免疫球蛋白对MRL/lpr小鼠外周血NK细胞的影响

目的 研究静脉注射免疫球蛋白对MRL/lpr小鼠蛋白尿及外周血自然杀伤（NK）细胞的影响。方法 MRL/lpr小鼠随机分为免疫球蛋白治疗组（尾静脉注射丙种球蛋白4 μL/kg×5 d）和对照组（尾静脉注等量生理盐水）。两组小鼠治疗前后分别进行24 h尿蛋白定量和血常规检测,流式细胞术检测外周血NK细胞数量。结果 与治疗前比较,治疗后免疫球蛋白治疗组MRL/lpr小鼠24 h尿蛋白定量明显减少（P<0.05）,外周血NK细胞比例明显上升（P<0.05）;而对照组MRL/lpr小鼠治疗前后24 h尿蛋白定量和外周血NK细胞比例无明显变化(P>0.05)。结论 静脉注射免疫球蛋白可有效改善MRL/lpr小鼠的蛋白尿症状,其作用机制可能与增加外周血NK细胞数量有关。     

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的:初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法:将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白(蒸馏水)对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果:雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义(P0.05);雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义(P0.05)。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。     

双氢青蒿素对MRL/lprSLE小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响研究

目的探讨双氢青蒿素对MRL/lpr系统性红斑狼疮（SLE）小鼠CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法从MRL/lprSLE小鼠脾脏获取CD4+T细胞,进行体外细胞双氢青蒿素干预培养。通过CCK-8实验检测双氢青蒿素的细胞毒性,高效液相色谱技术检测CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平,RT-PCR和Westernblot检测CD4+T细胞DNA甲基化转移酶1（DNMT1）、生长阻滞和DNA损伤基因a（Gadd45a）mRNA和蛋白表达水平。结果双氢青蒿素对SLE小鼠CD4+T的半抑制浓度（IC50）为62滋mol/L。双氢青蒿素可抑制CD4+T细胞增殖,且随着浓度的增加,对CD4+T细胞增殖的抑制作用增强。双氢青蒿素干预后,CD4+T细胞基因组DNA甲基化水平显著升高;且双氢青蒿素浓度越高,基因组DNA甲基化水平越高。双氢青蒿素干预培养后,SLE小鼠CD4+T细胞DNMT1mRNA和蛋白水平均明显上调,而Gadd45amRNA和蛋白水平均明显下调,其作用与浓度有关。结论双氢青蒿素可能通过DNA甲基化调控机制发挥治疗SLE的作用。     

条件性敲除CD4+T细胞的多巴胺D2受体对帕金森病模型小鼠的影响*

目的：研究CD4+T细胞上的多巴胺D2受体(dopamine receptor D2, DRD2)对帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型小鼠的影响。方法：条件性敲除CD4+T细胞DRD2基因的雄性小鼠(CD4-Cre Drd2fl/fl)、C57BL/6小鼠通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)制备PD模型,注射7 d后,用旷场实验法来测量小鼠运动的平均速度,再无菌取小鼠脾脏,制备单个核细胞悬液,用Trizol法提取细胞总RNA,然后用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠脾脏单个核细胞中的促炎因子白细胞介素(interleukin, IL)-17、干扰素γ(interferon γ, IFN-γ)和抗炎因子IL-4、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达。用流式细胞术来检测脾脏中CD4+T细胞占单个核细胞的百分比。结果：CD4-Cre Drd2fl/flPD模型小鼠旷场运动速度较野生型PD模型小鼠减慢,脾脏中CD4+T细胞占单个核细胞的百分比较野生型PD模型小鼠降低,脾脏单个核细胞中IL-17、IFN-γ的mRNA表达均高于野生PD模型小鼠,IL-4、TGF-β1的mRNA表达没有明显变化。结论：条件性敲除CD4+T细胞DRD2基因加重了PD模型小鼠的病变及外周炎症的变化。     

特异性COX-2抑制剂对小鼠狼疮性肾炎CD14+表达及TNF-α、IL-6的影响

目的:探讨特异性COX-2抑制剂对MRL/lpr自发狼疮小鼠的CD14 表达及TNF-α、IL-6的影响.方法:用特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂(Rofecoxib10·kg-1·d-1)治疗12周龄雌性MRL/lpr自发狼疮小鼠,并与未干预组对照.12周后用放射免疫方法检测小鼠血清和尿中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)及尿血栓索B2(TXB2)的变化;并观察小鼠尿蛋白、血肌酐、肾组织病理改变及CD14 细胞数的变化.结果:治疗12周后,治疗组与对照组比较,小鼠血清和尿中TNF-α、IL-6水平降低(P＜0.05);24h尿蛋白排泄量、血肌酐水平及肾组织CD14 细胞数差异均有显著性意义(P＜0.05);肾小球基底膜(GBM)增厚程度差异有显著性意义(P＜0.05).结论:特异性COX-2抑制剂治疗MRL/lpr自发狼疮小鼠,可能通过抑制单核/巨噬细胞在肾组织中的浸润,降低血清和尿中TNF-α、IL-6水平,从而减轻了MRL/lpr小鼠肾损害,对LN有较好的治疗作用.     

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:1)B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;2)B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;3)B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;4)B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果与B6 WT组比较,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性移植物抗宿主疾病(GVHD);其受者体内的CD8+T细胞大量增生;T细胞恢复后产生更多的干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,进一步促进T细胞增生。组织学检测提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现病理损伤,肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增生加重肝肾损害。提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。