Effects of UbcH10 gene silencing combined with paclitaxel treatment on proliferation and apoptosis of NCI-H226 cells

目的 观察小干扰RNA(siRNA)介导的UbcH10基因沉默联合紫杉醇处理对人肺鳞癌细胞株NCI-H226细胞增殖活性和凋亡的影响.方法 化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞(siRNA转染组),转染后24 h,采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测UbcH10 mRNA和蛋白的表达水平,以未予任何转染细胞作为空白对照,以阴性序列转染细胞作为阴性对照.以紫杉醇(1μmol/L)处理siRNA转染及未转染NCI-H226细胞(siRNA+紫杉醇组和紫杉醇组),分别于转染后24、48 h收集细胞,MTT比色法检测细胞增殖;转染后24 h收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡;以未经紫杉醇处理的siRNA转染、阴性序列转染和未予转染的NCI-H226细胞作为siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组.结果 Real-Time PCR和Western blotting检测结果显示:转染后24 h,siRNA转染组UbcH10 mRNA和蛋白的表达较空白对照组和阴性对照组显著下调(P＜0.01).MTT比色法检测结果显示,siRNA转染组细胞增殖抑制率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞增殖抑制率显著高于siRNA转染组(P＜0.05).siRNA转染组细胞凋亡率显著高于紫杉醇组和对照组(P＜0.05),而siRNA+紫杉醇组细胞凋亡率显著高于siRNA转染组(P＜0.05),紫杉醇组与对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 UbcH10基因沉默可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性.     

UbcH10基因沉默对肺癌NCI-H226细胞增殖及细胞周期的影响

目的：通过脂质体转染siRNA方法沉默人肺鳞癌细胞NCI-H226中UbcH10基因,观察基因沉默后细胞增殖活性的变化及其对细胞周期的影响。方法：设计3条针对UbcH10基因CDS区不同位点的siRNA序列并构建shRNA表达载体,脂质体法转染重组质粒至NCI-H226细胞。转染后48小时,RT-PCR,Western-blot检测细胞内UbcH10 mRNA及蛋白含量。使用有效siRNA序列（pshRNA2）转染细胞,转染后24、48小时CCK-8检测细胞活性。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后48小时收集细胞,流式法检测细胞周期。结果：成功构建shRNA重组质粒并转染NCI-H226细胞。转染siRNA 48小时后,3组NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量均明显下降;其中2号siRNA序列的沉默效果最好,UbcH10基因剩余表达量为对照组的14%。使用有效序列转染NCI-H226细胞24、48小时,细胞增殖活性明显降低,与基因未干预组比较,差异显著（P＜0.05）。使用有效序列转染NCI-H226细胞48小时,细胞明显阻滞于G2期,与基因未干预组比较有显著差异（P＜0.05）。结论：UbcH10基因沉默,可显著抑制NCI-H226细胞增殖活性,并使肺癌细胞阻滞于细胞G2期。     

Aurora B基因沉默对卵巢癌细胞A2780紫杉醇化疗敏感性的影响

目的 研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Aurora B基因表达对卵巢癌细胞A2780细胞紫杉醇化疗敏感性的影响.方法 采用RNAi方法,将不同浓度AURKB siRNA转入A2780细胞(实验组),同时设阴性对照组和空白对照组,并以不同浓度紫杉醇作用各组细胞.采用MTT检测细胞存活率;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白水平;Hoechst染色观察细胞凋亡.结果 A2780细胞转染不同浓度siRNA后,随着siRNA浓度增加,细胞存活率逐渐下降,至50 pmol/L时,实验组与空白对照组和阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度紫杉醇处理各组细胞,随着紫杉醇浓度增加,细胞存活率明显下降,当紫杉醇浓度至10 μmol/L时,实验组与空白对照和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);50 pmol/L siRNA 转染A2780细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞凋亡率明显增加,与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);50 pmol/L浓度siRNA转染A2780 细胞48 h,再以10 μmol/L 浓度紫杉醇处理细胞,实验组细胞内Caspase-3蛋白表达明显上调,细胞凋亡明显增加.结论 Aurora B的抑制可增强A2780细胞对紫杉醇的化疗敏感性,并使细胞凋亡增加.     

小分子干扰RNA下调星形细胞上调基因1的表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反应观察AEG-1 siRNA对AEG-1基因表达的影响;甲基噻唑基四唑法观察AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响。结果空白对照组和阴性对照组AEG-1 mRNA表达、SKOV3细胞增殖、细胞凋亡率及在DNA合成前期(G0/G1期)、合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组SKOV3细胞AEG-1 mRNA表达显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞增殖在24、48、72 h较空白对照组和阴性对照组均显著减慢,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞凋亡率显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组SKOV3细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),而合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论 siRNA可通过下调卵巢癌SKOV3细胞AEG-1基因的表达,抑制其增殖,促进其凋亡。     

小分子干扰RNA下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用设计合成的SCD-1 siRNA转染人肝癌细胞HepG2细胞株,转染后细胞分为3组:空白对照组(未做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和SCD-1 siRNA组(SCD-1 siRNA转染)。采用反转录聚合酶链反应检测HepG2细胞SCD-1 mRNA的表达,噻唑蓝法检测HepG2细胞的增殖,用流式细胞术检测SCD-1 siRNA对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 SCD-1 siRNA组的SCD-1 mRNA表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);转染后24、48、72 h,SCD-1 siRNA组HepG2细胞增殖较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P<0.01);SCD-1siRNA组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);SCD-1 siRNA组HepG2细胞在合成前期(G0/G1期)的细胞比例明显高于空白对照组和阴性对照组,在合成期(S期)和合成后期(G2/M期)的细胞比例均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。空白对照组和阴性对照组HepG2细胞在SCD-1 mRNA表达、细胞增殖、细胞凋亡率及细胞周期方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA可通过下调HepG2细胞SCD-1基因的表达,抑制HepG2细胞的增殖,并促进其凋亡。     

细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2通过干预线粒体功能促进宫颈癌细胞增殖机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶亚基(CKS)2通过干预线粒体功能促进宫颈癌细胞增殖的机制。方法:对数生长期的宫颈癌SiHa细胞分为三组:空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染Hs-NC siRNA)与CKS2 siRNA组(转染Hs-CKS2 siRNA),采用MTT法检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞侵袭及转移,线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位,qPCR检测CKS2与线粒体整合蛋白2(Mfn2) mRNA水平,Western blot法检测Mfn2、CKS2蛋白水平。结果:转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的细胞增殖指数、细胞侵袭及转移指数低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05);转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的细胞线粒体膜电位水平高于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05);转染后24、36 h, CKS2 siRNA组的CKS2与Mfn2 mRNA、蛋白相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组(均P<0.05)。结论:抑制CKS2的表达可通过干预线粒体膜电位水平,抑制宫颈癌细胞Mfn2的表达,从而抑制宫颈癌细胞...     

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。     

3种不同的survivin siRNA对EJ28细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察靶向survivin的不同siRNA对EJ28细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过化学合成方法合成3对siRNA和1对荧光标记的阴性对照siRNA.转染荧光标记的siRNA后,在荧光显微镜下观察转染效率.实验分为siRNA164、siRNA167、siRNA389、阴性对照组、脂质体对照组和细胞对照组.转染后24、48 h和72 h,MTT法检测siRNA对EJ28细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA均能抑制EJ28细胞的增殖,其中以siRNA164抑制细胞的增殖能力最强(P＜0.05),转染48 h后的抑制率最高[(41.32±2.54)%];转染48 h后,siRNA164组凋亡率最高[(13.20±0.25)%].结论 靶向survivin的RNAi技术在膀胱癌的基因治疗中可能具有一定的价值.     

CXCR4基因158沉默对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡及迁移能力的影响

目的 探讨CXCR4基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。 方法 将T24细胞分为3组,即干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将靶向沉默CXCR4基因的小干扰RNA(siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,Western-blot检测转染后T24细胞中CXCR4蛋白的表达水平,MTT比色法检测细胞凋亡,Transwell迁移试验观察T24细胞迁移能力。 结果 转染siRNA后,CXCR4蛋白表达量明显下调(P<0.05),与空白对照组及阴性对照组的T24细胞比较,沉默CXCR4基因后,显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(均为P<0.05),促进T24细胞凋亡(均为P<0.05); Transwell实验结果提示,RNAi干扰CXCR4表达后能显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(P<0.05)。 结论 RNAi干扰CXCR4表达水平能够抑制T24细胞增殖、促进细胞凋亡及降低细胞的迁移能力,推测CXCR4基因可能是膀胱肿瘤细胞增殖及迁移的重要调控因子之一。     

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA) 沉默转录因子叉头框M1(FoxM1) 对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制.方法 采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平.siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡率.Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1) 及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK) 、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P＜0. 05),Ki67表达降低(P＜0. 05) .siRNA转染组G1期细胞比例增加(P＜0. 01),S期比例减低(P＜0. 05),Cyclin E1低表达(P＜0. 01) .同时, siRNA +紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+ 紫杉醇组(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P＜0. 05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P＜0. 01) .siRNA + 紫杉醇组与阴性对照+ 紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P＜0. 01),Bcl-2表达下调(P＜0. 01) .结论 特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性.     

c-myc特异性小分子干扰RNA对体外培养HL-60细胞增殖、细胞周期及C-myc蛋白表达的作用

目的:研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基凶治疗的可能性.方法:取倍增期HL-60细胞分空白对照组、阴性对照组、转染组3组,培养24～96 h后收获细胞进行检测.采用MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪进行细胞周期分析,逆转录PCR方法检测c-myc mRNA表达的变化,免疫细胞化学染色法检测C-myc蛋白表达的改变.结果:分组培养后,转染组细胞增殖较2个对照组受到抑制(P均<0.05),其抑制作用于转染后48、72 h最明显(P均<0.05).转染组S期细胞比值由空白对照组的(56.1±4.7)%降至(29.2±3.5)%,G./G1 期细胞由(36.8±3.3)%升高至(53.6±4.3)%,差异有统计学意义(P均<0.05).c-myc siRNA对目的基因mRNA表达的抑制作用于24 h最明显(P<0.05),96 h抑制作用基本消失(P>0.05).转染组细胞中C-myc蛋白表达与2个对照组相比降低(P均<0.05).结论:针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达有抑制作用,有望为白血病提供新的治疗靶位点.     

SPARCL1基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteines like 1,SPARCL1)基因对肝癌SMMC 7721细胞增殖与凋亡的影响。方法: 将肝癌SMMC 7721细胞随机分为5组,即空白对照组,pIRES2 ZsGreen组,pIRES2 ZsGreen SPARCL1组,阴性 siRNA组和SPARCL1 siRNA组,空白对照组不转染,其余4组分别转染pIRES2 ZsGreen空质粒、pIRES2 ZsGreen SPARCL1、阴性 siRNA及SPARCL1 siRNA;蛋白质印迹法检测SPARCL1蛋白表达,同时联合荧光显微镜检测转染效果;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。 结果： 蛋白质印迹和荧光镜结果同时证实转染效果良好。MTT结果显示5组细胞抑制率差异有统计学意义(F=55.45,P＜0.01),pIRES2 ZsGreen SPARCL1组增殖抑制率明显高于其余4组(P＜0.05);SPARCL1 siRNA组细胞增殖抑制率低于其余4组(P＜0.05)。流式细胞结果显示pIRES2 ZsGreen SPARCL1组凋亡率明显高于其余4组 (P<0.05);SPARCL1 siRNA组凋亡率明显低于其余4组(P＜0.05)。结论： 过表达SPARCL1抑制肝癌细胞SMMC 7721生长和促进凋亡,沉默SPARCL1则反之。     

miRNA-126对非小细胞肺癌细胞功能的影响及相关机制研究

目的观察miRNA-126对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡侵袭以及迁移能力的影响及相关机制。方法 2015年3-5月在辽宁省葫芦岛市中心医院实验室进行实验。将非小细胞肺癌A549细胞转染,建立稳定转染的miRNA-126组和空白对照组。采用RT-PCR检测miRNA-126基因的表达,MTT比色法检测细胞增殖能力,倒置显微镜观察细胞侵袭能力、细胞迁移能力,Western Blot检测表皮生长因了-受体(EGFR)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达。结果 miRNA-126转染组24 h、48 h、72 h时miRNA-126水平均高于空白对照组(t/P=15.112/0.000、8.714/0.012、7.537/0.013),而空白对照组各时间段miRNA-126的相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05);miRNA-126转染组72 h miRNA-126的相对表达量显著高于48 h和24 h(F/P=4.575/0.043)。miRNA-126转染组细胞24 h、48 h、72 h增殖率均低于空白对照组(t/P=6.280/0.000,6.804/0.000,6.401/0.000),凋亡率均高于空白对照组(t/P=19.726/0.000,22. 052/0. 000,5.170/0. 000);空白对照组各时间段的细胞增殖率和凋亡率差异无统计学意义(P> 0.05)。miRNA-126转染组72 h的细胞增殖率显著低于48 h和24 h (F/P=5.738/0.001),miRNA-126转染组72 h的细胞凋亡率显著高于48 h和24 h(F/P=2. 681/0. 045); miRNA-126转染组划痕宽度宽于空白对照组(t/P=8. 318/0.000),侵袭细胞数显著低于空白对照组(t/P=24. 394/0. 000)。miRNA-126转染组EGFR、AKT、mTOR蛋白表达量均低于空白对照组(t/P=4.093/0.000、6.325/0.000、3.061/0.000)。结论转染的miRNA-126通过调控EGFR、AKT、mTOR表达,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移能力。     

EGCG对人肺癌细胞NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖凋亡、周期的作用机制.方法 对数生长期NSCLC细胞系NCI-H1975和NCI-H520,分为空白对照组(0 mol/LEGCG)和不同剂量(20、40、80、160、320 mol/L) EGCG组,分别处理作用24、48、72 h,CCK-8法检测细胞凋亡率;细胞流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测细胞周期、凋亡相关蛋白表达及NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路变化;细胞分为:Control siRNA组、EGFR siRNA组和EGFRsiRNA+EGCG组,采用siRNA转染技术,分析下调EGFR对NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路的影响.结果 分组的相应浓度EGCG组NCI-H1975和NCI-H520细胞的增殖显著降低(P＜0.05),同时G1/G0细胞比例增高,G1/S期细胞比例下降(P＜0.05),CyclinD1、CyclinE、CDK6蛋白表达降低(P＜0.05),但对CDK4无明显影响(P＞0.05),同时细胞凋亡增多,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白表达上调(P＜0.05).P-P65、Bcl2、P-EGFR、P-AKT蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,但对P-ERK没有明显的影响.而EGCG+EGFR siRNA组,相比于EGFR siRNA组,明显降低各蛋白的表达,升高Bax蛋白(P＜0.05).结论 EGCG下调NF-kB/Bcl2和EGFR/ERK/AKT信号通路抑制NCI-H1975和NCI-H520细胞增殖、促进凋亡,并阻断细胞周期.     

LncRNA TCONS_00022381在胃癌组织中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的 检测LncRNA TCONS_00022381在胃癌组织中的表达,探讨其对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.方法 qPCR法检测LncRNA TCONS_00022381(TCONS)在胃癌和癌旁组织中的表达;将胃癌细胞系SGC-7901细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,采用脂质体2000转染法将靶向TCONS的siRNA和阴性对照siRNA分别转染,空白对照组不予任何处理.转染48h后采用qPCR法进行抑制效率的鉴定;MTT法检测各组细胞增殖情况;Western blot法检测各组细胞增殖核抗原PCNA的表达情况.结果 LncRNA TCONS_00022381在胃癌组织中的相对表达显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05).LncRNA TCONS_00022381的siRNA能够显著抑制其在SGC-7901细胞中的表达(P＜0.05).MTT实验可见siRNA干扰组较阴性和空白组相比,增殖活力显著下调(P＜0.05),PCNA的表达显著下调(P＜0.05).结论 LncRNA TCONS_00022381在胃癌组织中显著高表达,对胃癌细胞具有促进增殖的作用.     

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

RNA干扰对EC9706细胞mTOR表达及细胞生长与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人食管癌EC9706细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达及细胞生长与凋亡的影响.方法:设计合成mTOR siRNA,采用低、中、高浓度(50、100与150 nmoL/L)的mTOR siRNA分别转染EC9706细胞24、48与72 h.同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组EC9706细胞中mTOR蛋白与mRNA的表达;应用MTT法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率;应用TUNEL法检测转染24 h时细胞凋亡,计算凋亡指数(AI).结果:转染24、48与72 h,6组细胞mTOR蛋白和mRNA的表达差异均有统计学意义(mTOR蛋白:F=24.14,45.78,59.19,P均＜0.001;mTOR mRNA:F=41.42,69.74,43.71,P均＜0.001),细胞生长抑制率差异亦有统计学意义(F=143.85,172.98,155.01,P均＜0.001);低、中、高浓度组转染不同时间点间比较,mTOR蛋白(F=42.23,29.46,50.22,P均＜0.001)、mTOR mRNA(F=6.48,8.50,4.80,P均＜0.05)及细胞生长抑制率(F=78.77,76.14,52.28,P均＜0.001)差异均有统计学意义.mTOR siRNA转染组EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达均低于各对照组,且mTOR蛋白及mRNA的表达随mTOR siRNA浓度的增加及转染时间的延长而减弱(P＜0.05).不同浓度mTOR siRNA转染组EC9706细胞生长抑制率均高于各对照组,且细胞生长抑制率随mTOR siRNA浓度的增加和转染时间的延长而升高(P＜0.05).转染24 h,6组细胞AI相比,差异有统计学意义(F=442.96,P＜0.001),mTOR siRNA转染组AI均高于各对照组,且高浓度转染组AI高(P＜0.05).结论:mTOR siRNA可有效抑制EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达,且能抑制EC9706细胞的增殖并促进其凋亡.     

Wip-1基因在子宫内膜癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的 探讨野生型p53诱导磷酸酶1(Wip-1)基因在子宫内膜癌组织中的表达及与细胞凋亡的关系.方法 选取子宫内膜癌患者68例,子宫内膜不典型增生患者30例,并留取正常子宫内膜组织标本40份.培养子宫内膜癌细胞系ECC-1(ER阳性)和KLE(ER阴性),将细胞分为Wip-1 siRNA组、siRNA对照组和空白对照组.利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测不同组织及不同转染组细胞中Wip-1基因表达,四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理组细胞增殖能力,An-nexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色检测不同处理组细胞凋亡及细胞周期.结果 子宫内膜癌组织中Wip-1mRNA表达水平(2.37士0.16)高于子宫内膜不典型增生组织(1.59士0.14)和正常子宫内膜组织(1.14士0.12),且子宫内膜不典型增生组织高于正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P＜0.01);子宫内膜癌组织中Wip-1 mRNA表达水平与病理分期、病理分级、淋巴结转移、p53有关(P＜0.01);Wip-1 siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞在转染后24、48、96 h细胞存活率均低于siR-NA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);Wip-1 siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞Go+G1期比例均高于siR-NA对照组和空白对照组,而S期和G2 +M期比例均低于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);Wip-1siRNA组ECC-1细胞和KLE细胞凋亡率均高于siRNA对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P＜o.05).结论 Wip-1基因参与了子宫内膜癌细胞增殖和凋亡过程.     

RNA靶向干扰DcR3促进人肝癌HepG2细胞凋亡及机制研究

目的研究靶向干扰DcR3基因对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法设计并合成DcR3基因的特异性DcR3 siRNA(实验组)和非特异性DcR3 siRNA(对照组),在脂质体介导下分别转染HepG2细胞株。Western blot检测两组DcR3 siRNA转染HepG2细胞24和48 h后DcR3蛋白表达水平;MTT法检测转染48 h细胞生长增殖;流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳检测转染24 h细胞凋亡;免疫组化法检测转染24 h细胞caspase3蛋白的表达。结果实验组细胞24和48 h DcR3蛋白相对表达水平分别为(0.532±0.051)和(0.417±0.044);对照组分别为(1.978±0.246)和(2.018±0.275);两组比较,相同时间点相对表达水平差异有显著性(P0.05);实验组24和48 h DcR3蛋白相对表达水平比较差异有显著性(P0.05),对照组差异无显著性(P0.05)。两组细胞转染48 h抑制率分别为(59.8±5.4)%和(0.8±0.1)%,两者比较差异有显著性(P0.05);两组细胞转染24 h凋亡率分别为(19.7±3.2)%和(6.9±0.8)%,两者比较差异有显著性(P0.05);转染24 h后两组caspase3蛋白阳性率分别为72.8%和38.9%,平均光密度值分别为(0.41±0.06)和(0.21±0.03),两者比较差异有显著性(P0.05)。结论特异性DcR3 siRNA有抑制人肝癌HepG2细胞DcR3蛋白表达、细胞增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与上调caspase 3的表达有关。     

小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响。方法培养人骨肉瘤Saos-2细胞,将细胞随机分为siRNA-PIK3CA组、siRNA对照组和空白对照组,siRNA-PIK3CA组细胞转染siRNA-PIK3CA序列,siRNA对照组细胞转染siRNA对照序列,空白对照组细胞正常培养,不作任何干预。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中PIK3CA mRNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中PIK3CA、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化-PI3K (p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和磷酸化-m TOR(p-mTOR)蛋白表达。结果 siRNA-PIK3CA组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞转染后24、48、72、96 h增殖能力均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞凋亡率高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNAPIK3CA组细胞中PI3K、Akt、m TOR蛋白相对表达量均高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05),而p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05)。siRNA对照组与空白对照组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数及PI3K、Akt、m TORp-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PIK3CA基因可减少人骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞迁移及侵袭能力,增加细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。