多重耐药大肠埃希菌rmtB基因检测与整合子初步研究

目的对2010年临床分离的125株大肠埃希菌进行rmtB基因及整合子进行分析筛选。方法针对住院儿童大肠埃希菌采用KB法对氨基糖苷类药物及其他药物进行敏感性测定,并采用PCR方法扩增3种氨基糖苷类耐药基因和整合子。结果显示对12种药物耐药率达30%~75%。其中16S rRNA甲基化酶基因rmtB检出率12%,氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅱ和氨基糖苷类核苷转移酶基因aadA1检出率1.6%。rmtB阳性菌株携带I类整合子的检出率66.7%,主要携带了dfrA12+aadA2+orfF、dfrA17+aadA5两种排列形式。结论 rmtB基因及I类整合子在大肠埃希菌中广泛存在,其在耐药性播散中发挥着重要的作用。     

产ESBLs大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性关系分析

目的 了解Ⅰ类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布流行状况,分析Ⅰ类整合子在细菌多重耐药中的作用.方法 根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,用双纸片协同试验检测产ESBLs菌,PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.结果 大肠埃希菌ESBLs和Ⅰ类整合子的检出率分别为57.4%和45.4%,Ⅰ类整合子在产ESBLs菌的分布明显高于非产ESBLs菌.结论 Ⅰ类整合子的存在与细菌产生ESBLs相关,影响着临床分离株多重耐药率的高低.     

产ESBLs大肠埃希菌I类整合子与耐药性关系分析

目的了解I类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布流行状况,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,用双纸片协同试验检测产ESBLs菌,PCR扩增Ⅰ类整合酶基因。结果大肠埃希菌ESBLs和I类整合子的检出率分别为57.4%和45.4%,I类整合子在产ESBLs菌的分布明显高于非产ESBLs菌。结论I类整合子的存在与细菌产生ESBLs相关,影响着临床分离株多重耐药率的高低。     

多重耐药临床菌株中整合子结构的检测与分析

目的研究广州暨南大学附属第一医院2004年部分临床菌株样本的整合子及其基因盒的分布特性。方法多重PCR检测与细菌耐药关系密切的1、2、3类整合酶基因,进一步对阳性样本可变区的基因盒序列鉴定分析。结果随机抽取109株临床菌株,整合酶阳性检出率为97.2%(106/109),其中1类整合酶阳性菌100株(91.7%),2类整合酶阳性菌1株(0.92%),此外有5株(4.6%)同时检出1、2类整合酶,没有检测到3类整合酶;基因盒鉴定结果显示,插入基因盒以dfrA(甲氧苄氨嘧啶耐药相关)和aadA(氨基糖苷类耐药相关)基因家族为主,也在少数菌株中发现了aacA4、cmlA1、catB3以及sat1基因盒。其中又以dfrA12、orfF和aadA2组合最为常见,耐药基因盒PCR扩增片段为1913bp(64.6%);此外,还发现了同时存在两种整合子结构的菌株。结论整合子普遍存在于临床菌株中,可通过基因水平转移在不同菌属间传播,提示各医药单位必须加强耐药监测及合理选择抗菌药物,以减少多重耐药细菌的发生和发展。     

肺炎克雷伯菌Ⅰ型整合子的检测与鉴定

目的研究Ⅰ型整合子参与肺炎克雷伯菌耐药的分子机制。方法收集2007年至2010年某院临床分离的297株肺炎克雷伯菌,应用K-B纸片扩散法检测耐药性,采用聚合酶链式反应进行I类整合子整合酶基因的检测;整合子可变区扩增、克隆测序,分析I类整合子基因结构。结果 297株肺炎克雷伯菌中,除MEM、IPM外,对其余11种抗菌素,Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药率明显高于Ⅰ类整合酶基因阴性菌株。57.91%(172/297)的菌株I类整合子整合酶基因阳性,共检测出10种不同基因盒。可变区编码耐药基因有aadA2、aadA1、aadA5、aadA3C、aacA4,介导氨基糖苷类抗菌素耐药;dhfrhI、dfrA12、dfrA14、dfrA17、dfrA1、dfrA25、dhfrhI,介导磺胺类抗菌素的耐药;aar-2,介导利福平耐药。结论Ⅰ类整合子在本院临床分离肺炎克雷伯菌中分布较广泛,主要介导氨基糖苷类和磺胺类抗菌素耐药。整合子与肺炎克雷伯菌的耐药有关,在肺炎克雷伯菌耐药性的形成和播散中具有重要作用。     

产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的研究

目的:观察25株产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的分类、结构及其在介导AmpC酶基因转移中的作用。方法:采用微量稀释法测定20种抗生素对试验菌株的敏感性。利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因(intI)及其定位,对其阳性菌株可变区(Int)扩增产物进行测序分析。结果:这25株菌对多种抗生素耐药。20株Ⅰ类整合酶基因阳性(80%);所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA5和dfr17;未发现携带AmpC基因盒的整合子。结论:Ⅰ类整合子广泛地存在于产AmpC酶的大肠杆菌中;耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类药物及氯霉素耐药的主要原因,但对介导AmpC酶基因转移,不起主要作用。     

多重耐药大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的 探讨本地区临床分离多重耐药大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)的氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合子基因存在情况.方法 纸片扩散法(K-B法)测定71株大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药性,应用PCR技术对E.coli进行氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因的检测.结果 71株大肠埃希菌对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶的耐药率分别分为66.20％、63.38％、59.15％、18.31％,其中23株为多重耐药株(32.39％).氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ阳性40株(56.34％),aac(6′)-Ⅰ阳性22株(30.99％),ant(3″)-Ⅰ阳性14株(19.72％),未检出aac(6′)-Ⅱ阳性株,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为74.65％;Ⅰ类整合酶基因(intI1)阳性53株(74.65％).多重耐药与非多重耐药大肠埃希菌中aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、总氨基糖苷类修饰酶基因、intI1的阳性率有统计学差异(P＜0.05).结论 本地区多重耐药E.coli的氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高.     

健康人群中大肠埃希菌耐药整合子的检测

目的 了解上海市浦东新区健康人群中肠道大肠埃希菌的耐药情况,并检测其耐药整合子的携带情况和结构.方法 采用纸片扩散法(E-B法)检测17种抗生素药物的敏感性;PCR法扩增1、2、3类整合酶,对1类整合酶阳性样本进一步扩增整合子;扩增产物经限制性内切酶分析测序后,分析其所携带的基因盒结构和可能的功能.结果 浦东新区健康人群中肠道大肠埃希菌多重耐药率为63.5%,耐药性主要集中在老一代抗生素,对较新的抗生素仍然敏感.1、2类整合酶的检出率分别为38.5%、4%,且有1%同时检测到1、2类整合酶,未检测到3类整合酶.结论 健康人群中肠道大肠埃希菌耐药现象已非常普遍,耐药整合子在人群中分布也比较广泛,已成为耐药基因的储存,但和临床相比还有差别.     

Ⅰ类整合子介导大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药机制的初步研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中I类整合子的分布情况,探讨整合子与细菌耐药之间的关系。方法琼脂平皿稀释法进行药敏试验;双纸片法筛选出产ESBLs的菌株;运用PCR扩增、DNA测序及DNA序列比对等方法对其携带的I类整合子相关耐药基因进行分析。结果 36株大肠埃希菌与46株肺炎克雷伯菌对头孢克肟、头孢克洛、头孢氨苄、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟钠、阿莫西林纳/舒巴坦钠、氨苄西林钠/舒巴坦钠及头孢哌酮/舒巴坦钠等的耐药率分别为61%、86%、86%、50%、75%、64%、39%、47%、30%与65%、63%、78%、52%、67%、54%、48%、41%、28%;10株细菌检测出产ESBLs,其中大肠埃希菌4株,肺炎克雷伯菌6株,并全部检测出1类整合子,其整合子可变区的耐药基因排列顺序与GenBank登录号为NC010410的菌株达到100%相似,并且皆含有blaVEB-1耐药基因盒。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

大肠埃希菌中Ⅰ类整合子耐药基因的分析

目的 对临床分离大肠埃希菌株携带的Ⅰ类整合子及相关耐药基因进行筛选和分析.探讨Ⅰ类整合子在大肠埃希菌耐药中的作用.方法 对43株大肠埃希菌临床分离株做药敏试验;采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法 对其携带的Ⅰ类整合子相关耐约基因进行分析.结果 43株大肠埃希菌分离株对10种抗菌药物的耐药率依次为亚胺培南4.7%、阿米卡星18.6%、头孢他啶、27.9%、头孢吡肟37.2%、头孢呋辛55.8%、复方磺胺甲嗯唑58.1%、妥布霉素74.4%、庆大霉素79.1%、头孢噻肟81.4%和哌拉两林83.7%.在43株大肠埃希菌分离株中有25株含有Ⅰ类整合子,其中18株携带整合子相关耐药基因,如介导对磺胺类和氨基糖苷类约物的耐药基因等;某些菌株携带的整合子相关耐药基因相同.结论 Ⅰ类整合子在大肠埃希菌中广泛存在,整合子相关耐约基因在该菌耐药性的形成和播散中发挥作用.     

天津地区志贺菌耐药性及整合子携带调查

目的:了解天津地区志贺菌抗生素耐药性变迁及1、2类整合子携带状况。方法:K-B纸片法测定1981—1983年及2009年天津地区临床分离的57株志贺菌药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。PCR方法扩增1、2类整合子整合酶及可变区并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与GenBank数据库标准菌株比对分析。结果:1981—1983年组志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及复方新诺明敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为66.67%;2009年组志贺菌对氨苄西林、链霉素、复方新诺明、哌拉西林和四环素敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为83.33%。1981—1983年组1类整合子阳性率为87.88%(29/33),27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;1株宋内志贺菌可变区含甲氧苄啶耐药基因dfrA17和氨基糖苷类药物耐药基因aadA5;未发现2类整合子阳性株;2009年组1类整合酶阳性率为79.17%(19/24),可变区及3末端扩增均阴性;2类整合子阳性率87.50%(21/24),可变区含dfrA1+sat1+aadA1,介导甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药;其中17株1、2类整合酶均阳性。结论:2009年分离的志贺菌抗生素耐药较上世纪80年代分离的志贺菌增强,多重耐药菌株增加。天津地区志贺菌携带1、2类整合子。′     

大肠埃希菌临床分离株Ⅰ类整合子分布与耐药相关性研究

目的 川北地区大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系.方法 采用琼脂稀释法测定临床分离的180株大肠埃希菌对15种抗菌药物的敏感性,敏感、中介、耐药采用美国临床实验室标准化协会(CSLI)2006年公布的标准判定.PCR方法检测临床大肠埃希菌中的第一类整合酶基因(intI),应用统计学方法比较第一类整合酶基因(intI)阳性与阴性菌株的耐药性差异,分析Ⅰ类整合子与耐药性形成的的相关性.结果 180株大肠埃希菌对氨苄西林、环丙沙星、左旋氧氟沙星、庆大霉素、复方磺胺甲嗯唑、头孢唑啉、妥布霉素、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松的耐药率高,达32.9%～92.3%.临床分离180株大肠埃希菌中intI带率为64.4%,intI性菌株对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类等抗菌药物呈现多重耐药性.结论 川北地区大肠埃希菌对临床常用抗菌药物耐药突出.intI携带率高,并且与耐药性的形成关系密切.     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区耐药基因的研究

目的 研究阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类及位置，探讨Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒特点，分析耐药基因盒与阴沟肠杆菌耐药性的关系。方法 采用纸片扩散法(K-B法)测定抗生素的敏感性；PCR扩增阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子阳性株中的可变区基因盒，并测序分析。结果 可变区一共扩增出15种基因盒，其中耐药基因盒7种：aadA2-dfrA12、aadA2-aadB、aadA2、aadB、dfrA12、aac(6′)-Iica-catB3和blaIMP-4，以aadA2-dfrA12(1913bp)最常见。许多质粒DNA和染色体DNA的PCR扩增产物相同。结论 Ⅰ类整合子可变区携带的耐药基因盒以耐氨基糖昔类和耐甲氧苄氨嘧啶类抗生素基因为主。耐药基因在阴沟肠杆菌中存在水平播散和垂直传播的现象。     

鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子与多重耐药相关性研究

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药状况、Ⅰ类整合子的分布情况,探讨Ⅰ类整合子与多重耐药的关系.方法 检测20种临床常用抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC).PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.对部分Ⅰ类整合酶阳性菌株进行耐药基因盒序列分析.结果 鲍曼不动杆菌呈现多重耐药,鲍曼不动杆菌对IMP和MRP耐药率分别为0.9%和1.8%,对CPZ/SB的耐药率为35.7%,对其它抗菌药物的耐药率均大于60%,多重耐药率为76.8%(86/112),但对COL和MIN均敏感.80.4%(90/112)的菌株检测出Ⅰ类整合子.Ⅰ类整合子阳性株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且Ⅰ类整合子阳性株多重耐药率(90%)明显高于阴性株(22.7%)(P<0.01).Ⅰ类整合子基因盒序列分析显示,Ⅰ类整合子携带aacA4,catB8和aadA13种耐药基因.结论 Ⅰ类整合子在鲍曼不动杆菌中检出率很高并与其多重耐药性关系密切.     

产ESBLs并高产AmpC酶肺炎克雷伯氏杆菌中整合子的基因研究

目的 :观察 4株从临床分离产超广谱内 β内酰胺酶 (ESBLs)及AmpC酶肺炎克雷伯氏杆菌的多重耐药情况 ,分析其中整合子的存在 ,对整合子的特性进行研究 ,探讨整合子基因盒表达对肺炎克雷伯杆菌耐药表型的影响。方法 :采用微量稀释法测定复方新诺明等 15种抗菌药物对细菌的最低抑菌浓度 (MIC)。PCR技术检测整合子基因 ,DNA测序研究整合子插入耐药基因盒情况。结果 :这 4株菌对多种抗菌素耐药。其中 1株存在整合子 (扩增片段 2 0 0 0bp左右 ) ,携有dhfrXII和aadA2基因。结论 :4株菌中仅 1株存在整合子结构 ,尽管产ESBLs和AmpC酶基因未位于整合子的基因盒上 ,但整合子参与多重耐药的产生。     

大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲(噁)唑耐药相关基因研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和复方磺胺甲噁唑(SMZ/TMP)耐药相关基因存在状况。方法测定临床连续分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)检测SMZ/TMP耐药相关基因(sul1、dfrA1、dfrA17)。结果60株中sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性分别为34株(56.7%)、1株(1.7%)、35株(58.3%)。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重;复方磺胺甲噁唑耐药相关基因携带率高。     

肠外致病性大肠埃希菌多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分析

目的 检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制.方法 应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况.用双纸片法检测产ESBLs菌株并进行基因分型.用PCR和测序方法检测氨基精苷类抗性基因aadA1,aadA2,strA-strB,aadB,aacC2,aac(3)-Ⅳ,aph(3')-Ⅰa,aph(3')-Ⅱa.结果 临床分离株表现多重耐药性,对头孢菌素类药物和阿米卡星的敏感性最高(63%～97%),93%的菌株耐药谱值≥10.共检测到两株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,基因型属TEM-1+CTX-M-14.耐药菌株与相应的氨基糖苷类耐药基因符合率高(≥74%)且序列保守.结论 猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌呈多重耐药性,其对氨基糖苷类抗生素的抗性机制以产生针对该类抗生素的修饰酶为主.     

临床分离志贺菌耐药性分析及1类整合子的检测

目的了解2007年至2010年安徽省临床分离志贺菌耐药性和1类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sul1基因及整合子携带的耐药基因盒的分布。方法琼脂稀释法检测21种抗菌药物对志贺菌的最低抑菌浓度。PCR扩增intⅠ1和qacE△1-sul1基因,对阳性菌株可变区基因盒序列进行分析。结果 137株志贺菌对萘啶酸、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均80.0%以上,且多重耐药率达94.2%,但对三代头孢菌素和氟喹诺酮类耐药率在33.0%以下。intⅠ1的检出率为89.1%(122/137),检出dfrA17-aadA5和aar-3-aacA4两种基因盒,首次在志贺菌中检测到aar-3-aacA4基因,GenBank登录号JF271916。结论安徽省临床分离志贺菌多重耐药现象严重。临床仍可选用氟喹诺酮类和三代头孢菌素作为本地区细菌性痢疾的经验性治疗。1类整合子与志贺菌的耐药具有一定的相关性。     

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及相关耐药机制

目的 了解安徽省35所医院2005年随机月份临床分离402株大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶及对常用抗菌药物的耐药情况，揭示其相关耐药机制，指导临床合理用药。方法 三维试验筛选产AmpC酶株；多重PCR检测产质粒介导AmpC酶菌株，对产质粒介导AmpC酶菌株用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶（EsBLs）基因、1类整合子基因盒插入序列和主动外排系统acrAB-tolC基因。结果检出产质粒介导AmpC酶菌株28株（7．0％），其中2株经测序证实为新的质粒ampC基因型（GenBank登录号分别为EF054895，EF417572）。产酶菌株对12种常用抗菌药物，除亚胺培南、美罗培南全部敏感外，对其他大多数抗菌药物耐药率均高于非产酶株。28株产酶菌株中有23株表现为多重耐药，20株检测出各型ESBLs基因，21株扩增出Ⅰ类整合子基因盒插入序列，20株主动外排系统acrAB-tolC基因阳性。结论产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药率均较高，多重耐药现象普遍，同时存在多种耐药机制，其中以产生灭活酶和Ⅰ类整合子介导的耐药机制为主。对产酶株临床经验用药可选用碳青霉烯类、阿米卡星及第四代头孢菌素类抗菌药物。     

大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲嘿唑耐药相关基因研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和复方磺胺甲噁唑（SMZ／TMP）耐药相关基因存在状况。方法测定临床连续分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应（PCR）检测SMZ／TMP耐药相关基因（sull、dfrAl、dfrA17）。结果60株中sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性分别为34株（56．7%）、1株（1．7%）、35株（58．3％）。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重；复方磺胺甲嗯唑耐药相关基因携带率高。