三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的诱导凋亡研究

Ｐ170表达阳性的白血病细胞往往对多种不同化学结构和作用靶点的药物同时发生耐药。我们观察了三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3 )对体外培养的人急性红白血病细胞系Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的凋亡诱导作用 ,以探讨Ａｓ2 Ｏ3 对多药耐药白血病细胞的作用。材料和方法1　药品　Ａｓ2 Ｏ3 (Ｓｉｇｍａ公司 )溶于Ｈａｎｋｓ缓冲液中 ,配制成 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,保存于 4℃。2　细胞株及细胞培养　Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞 (中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供 )置于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭ…     

端粒酶活性在白血病细胞凋亡中的变化及凋控机制研究

端粒酶是一种核糖核蛋白酶 ,具有维持端粒长度 ,防止染色体端 端融合、重组、丢失或降解 ,延长细胞生存时间的功能。白血病细胞内的高端粒酶活性是保持其永生化的关键。细胞外调节蛋白激酶 (ＥＲＫ)通路与细胞凋亡及细胞恶性表型转变等多种细胞生物学效应有关。我们观察了几种常用化疗药物诱导白血病细胞凋亡时 ,端粒酶活性和ＥＲＫ表达的变化 ,探讨了ＥＲＫ和端粒酶之间的相互关系及其在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的作用。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0和Ｋ5 6 2细胞系均引自中国典型培养物保藏中心。采用含体积分数为 10 %的胎牛血…     

CD3AK细胞对耐药白血病细胞的体外杀伤作用

肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中的重要进展之一 ,其中采用免疫效应细胞 ,如ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ、ＣＤ3 ＡＫ、ＣＩＫ、ＣＴＬ等进行的过继免疫治疗在某些肿瘤的治疗中取得了一定疗效。ＣＤ3 ＡＫ细胞是由抗ＣＤ3 单抗联合小剂量ＩＬ 2激活的Ｔ细胞 ,增殖能力和杀伤力较强。我们在实验中观察了ＣＤ3 ＡＫ细胞对耐药的白血病细胞株及慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)急变患者原代肿瘤细胞的体外杀伤作用。材料和方法1　材料　正常人外周血由健康男性提供 ;ＣＭＬ急变患者骨髓由附属医院血液科提供。Ｋ5 6 2、ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2 ＶＣＲ细胞系由上海血…     

一种分离提取非实体瘤凋亡细胞的方法

分离提取凋亡细胞对许多研究有重要意义 ,我们参考Ｍａｒｔｉｎ等[1] 的方法 ,建立了一种简便易行的非实体瘤凋亡细胞分离提取方法。1　材料和方法1 1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规ＲＰＭＩ 16 40培养基 (Ｇｂｉｃｏ产品 )培养 ,隔天换液 ,所有用于实验的细胞均处于对数生长期。1 2　凋亡细胞诱导　调整细胞浓度至 10 6/ｍｌ,加入以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)溶解的抗癌药物ＶＰ 16 (Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ,Ｓｉｇｍａ产品 )至所需浓度 (0、5、10、2 0、40 μｇ/ｍｌ)作用 3 5ｈ ,ＰＢＳ(ｐＨ 7 2 ,不含Ｃａ+ 、Ｍｇ2…     

重组人白细胞介素4对白血病细胞HL-60/VCR的多药耐药逆转研究

人白细胞介素 4具有抑制白血病细胞增殖、诱导分化、激发机体抗肿瘤免疫反应等作用 ,在辅助治疗白血病中具有良好的应用前景[1]。本研究中我们通过建立人白血病细胞ＨＬ 60多药耐药 (ＭＤＲ)模型 ,初步探讨重组人白细胞介素 4(ｒｈＩＬ 4 )是否逆转多药耐药及其可能的机制 ,为ｒｈＩＬ 4临床上辅助治疗白血病提供理论依据。材料和方法1　细胞　ＨＬ 60细胞本室常规传代培养于含体积分数为1 0 %的新生小牛血清 (Ｇｉｂｃｏ公司 )的ＲＰＭＩ 1 64 0培养液中。2　药物　ｒｈＩＬ 4 (纯度 >98% ,产地美国 ,ＥＤ5 0 >2× 1 0 6 Ｕ/ｍｌ)由北京邦…     

抗凝剂量不等对血细胞分析结果比较

采用湖南浏阳市医用仪具厂生产的ＥＤＴＡ -Ｋ2抗凝管 3支 ,分别加入 1、2、3ｍｌ同份全血 ,用混匀器及时混匀 ,在同一条件下 ,用美国生产的Ｃｏｕｌｔｅｒ -ＯＮＹＸ三分类血细胞分析仪 ,各测 2 7次 ,经统计学处理 ,三组结果两两比较 :ＷＢＣ、%ＬＹ、%ＭＯ、%ＧＲ、ＲＢＣ、Ｈｂ、ＨＣＴ、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、ＲＤＷ、ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＣＴ、ＰＤＷ所有 15个检测项目差异均无显著性 (Ｐ值均大于 0 .0 5)。本试验结果显示 ,在可抗凝 3ｍｌ全血的ＥＤＴＡ -Ｋ2 抗凝管中 ,加入 1ｍｌ、2ｍｌ、3ｍｌ三种不用量的全血 ,对白细胞各参…     

地塞米松、干扰素α及γ对骨髓瘤细胞系SKO-007IL-6及其受体表达的影响

近年来的研究表明 ,细胞因子网络的异常与骨髓瘤发病密切相关 ,其中ＩＬ 6及其受体的表达异常更为引人注目。我们选用骨髓瘤细胞系ＳＫＯ 0 0 7为研究对象 ,观察临床治疗多发性骨髓瘤常用药物地塞米松 (ＤＥＸ)、ＩＦＮ α、ＩＦＮ γ对骨髓瘤细胞系ＳＫＯ 0 0 7的ＩＬ 6及其受体 [ＩＬ 6Ｒ ,包括膜表面受体 (ＩＬ 6Ｒα)和可溶性受体 (ｓＩＬ 6Ｒ) ]表达的影响。为解释ＩＬ 6及其受体在多发性骨髓瘤发病机制中的作用提供线索。材料和方法1　材料和试剂　骨髓瘤细胞系ＳＫＯ 0 0 7,特淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ,ＤＥＸ磷酸钠 (相对分子质量为 5 1…     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

汉防己甲素 (Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ,Ｔｅｔ)是防己科植物粉防己的主要活性成分 ,研究表明它可以调节多种Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ)介导的多药耐药 (ＭＤＲ)细胞株的耐药性[1] 。屈洛昔芬 (Ｄｒｏｌｏ ｘｉｆｅｎｅ,Ｄｒｏｌ)是他莫昔芬的衍生物 ,比他莫昔芬作用强、不良反应小。为探讨Ｔｅｔ和Ｄｒｏｌ联合逆转ＭＤＲ作用 ,观察了Ｔｅｔ和Ｄｒｏｌ单独或联合对Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的体外耐药逆转作用。材料和方法1　细胞系和培养条件　Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞是具有ｍｄｒ1表型的耐药细胞系 ,由中国医学科学院血液学研究所提供 ,实验前无药培养 2周…     

外源性野生型p53基因对HL-60细胞的作用

野生型ｐ5 3基因是一种肿瘤抑制基因 ,急性髓系白血病(ＡＭＬ)患者伴有 17号染色体异常 [ｉ(17ｑ) ]者ｐ5 3基因点突变的发生率可高达 40 %。大多数ＡＭＬ细胞系 ,如ＨＬ 6 0、ＣＭＫ、ＭＬ 1、Ｕ937均可检出ｐ5 3基因严重缺失或者突变[1,2 ] 。我们利用脂质体介导法将两种ｐ5 3基因ｐＣ5 3 ＳＮ3(含人野生型ｐ5 3ｃＤＮＡ)、ｐＮ5 3ｃＧ(Ｖａｌ135 ) (32 .5℃表现野生型ｐ5 3基因功能 )分别导入Ｐ5 3蛋白缺失的ＨＬ 6 0细胞中 ,观察它的表达及其对ＨＬ 6 0细胞的影响。材料和方法1　细胞系及培养体系　ＨＬ 6 0细胞由福建省医学科学研究…     

六亚甲基二乙酰胺对人多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导分化作用

六亚甲基二乙酰胺 (ＨＭＢＡ)是一种杂合极性化合物类强效分化诱导剂 ,对小鼠及人红白血病ＭＥＬ细胞、Ｋ5 6 2细胞有很强的分化诱导作用[1 ,2 ] ,亦可诱导其它白血病 (肿瘤 )细胞成熟分化和凋亡[3 ,4] ,在大剂量时对Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｐ ,Ｐ170 )阳性的多药耐药 (ＭＤＲ)肿瘤细胞和Ｐ ｇｐ阴性的肿瘤细胞的增殖均有抑制作用[5] 。Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞是经阿霉素诱导的ｍｄｒ1基因超表达的白血病多药耐药细胞[6] 。我们选用ＨＭＢＡ作为分化诱导剂 ,通过观察其对Ｋ5 6 2 ＡＤＭ细胞增殖活性、形态学、细胞功能、细胞周期和Ｐ ｇｐ表达的作用…     

白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性的变化

本研究观察白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化，探讨端粒酶与ERK在白血病及卵巢癌耐药中的作用。采用MTT法评价白血病和卵巢癌亲代和耐药细胞系对HRT或DDP的敏感性，用流式细胞术分析这两种细胞系间细胞周期分布的差别，用端粒酶重复扩增技术(TRAP)、生物发光分析法定量和定性检测端粒酶活性及用Western blot检测法检测磷酸化ERK1和ERK2蛋白的表达水平。结果表明：白血病和卵巢癌耐药细胞系处于G0／G1期的细胞比例增加，端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平耐药细胞系较亲代细胞系高。结论：耐药细胞系G0／G1期细胞比例增加可能是细胞产生耐药的一种标志。白血病和卵巢癌细胞系耐药的产生可能与端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的增高有关。     

肾小管上皮细胞传代培养

长期传代的肾小管上皮细胞系已被广泛地研究。目前国内外应用较多的有ＭＤＣＫ、ＬＬＣ－ＰＫ１、ＯＫ、ＶＥＰ和ＥＴＰ细胞系。本文就送这些细胞及其在一介绍     

环孢霉素A对K562／DOX细胞药物积聚和外排的影响

目的：寻找克服肿瘤细胞多药耐药的方法。方法：以环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）作为耐药逆转剂，用ＭＴＴ法体外药物敏感试验，观察ＣｓＡ对多药耐药白血病细胞株Ｋ５６２／ＤＯＸ的药物敏感性、细胞内药物的积聚和外排的影响。结果：ＣｓＡ可增强阿霉素（ＤＯＸ）对Ｋ５６２／ＤＯＸ的细胞毒作用，且存在剂量依赖关系。ＣｓＡ≥２μｇ／ｍｌ能较明显提高Ｋ５６２／ＤＯＸ对ＤＯＸ的敏感性。用２μｇ／ｍｌＣｓＡ处理后，Ｋ５６２／ＤＯＸ细胞内ＤＯＸ外排速度明显减慢，ＤＯＸ含量仅减少１２．３％，但对Ｋ５６２细胞内药物外排无影响。结论：ＣｓＡ能有效地减慢Ｋ５６２／ＤＯＸ细胞内ＤＯＸ外排速度，增加细胞内ＤＯＸ积聚。ＣｓＡ对Ｋ５６２细胞药物敏感性、细胞内药物外排和积聚均无影响。     

维生素K3和三氧化二砷在诱导白血病细胞凋亡中的协同作用

维生素Ｋ类药物作为止血药在临床应用已有多年。近年来的研究表明 ,维生素Ｋ类药物尚具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用[1] 。最近 ,我们观察了维生素Ｋ3(ＶＫ3)对ＨＬ 6 0细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,现将结果报道如下。材料和方法1　主要试剂　Ａｓ2 Ｏ3 购于哈尔滨医科大学附属第一医院 ,ＶＫ3 为无锡第七制药厂产品 ,小牛血清购自杭州四季青生物制品公司 ,ＡｎｎｅｘｉｎＶ/ＰＩ试剂盒购自法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司。2　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞系引自中国科学院上海细胞生物学研…     

1,25-二羟基维生素D3与小剂量阿糖胞苷联用对HL-60细胞诱导分化作用的实验研究

我们以 1,2 5 二羟基维生素Ｄ3 (Ｄ3 )与小剂量阿糖胞苷(Ａｒａ Ｃ)联合作用于ＨＬ 6 0细胞 ,通过形态学、细胞功能及癌基因表达的检测 ,研究二者的联合效应 ,以及时间、剂量依赖关系。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞系由北京大学人民医院流式细胞室提供 ,用含体积分数为 2 0 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养基(含青霉素、链霉素、卡那霉素各 1.0× 10 5Ｕ/Ｌ)在体积分数为5 %的ＣＯ2 、37℃、饱和湿度下培养 ,每 2～ 3ｄ传代 1次 ,细胞悬浮生长。2　药物和试剂　Ｄ3 由上海罗氏制药有限公司提供 ,用无水乙醇溶解至 10 -3 ｍｏｌ/Ｌ…     

42例非霍奇金淋巴瘤组织学分型、免疫表型与EB病毒的关系

ＥＢ病毒 (ＥＢＶ)与许多恶性肿瘤有关 ,例如与地方性Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤以及鼻咽癌均有很高的相关性。本文对 42例非霍奇金淋巴瘤进行了研究 ,初步探讨其组织学分型、免疫表型及与ＥＢＶ的关系。1　材料与方法　　本文收集我院 1995～ 1997年手术及活检材料 ,病理诊断为非霍奇金恶性淋巴瘤的病例共 5 1例 ,经筛选最后确诊为非霍奇金淋巴瘤 42例。标本经 10 %甲醛固定 ,石蜡包埋及ＨＥ染色。免疫组织化学染色所用单克隆抗体ＵＣＨＬ 1(ＣＤ45ＲＯ) ,Ｌ2 6 (ＣＤ2 0 ) ,ＬＣＡ ,ＥＭＡ ,ＫＰ 1,ＣＤ6 8,ＣＤ15 ,多克隆抗体Ｓ 10 0均为ＤＡ…     

两种新的维生素D3类似物对白血病细胞的体外作用

为了寻找更加有效的诱导分化剂，我们测试了两种新的维生素Ｄ３类似物（ＥＢ１０８９和ＭＣ９０３）对人早幼粒细胞白血病细胞系（ＨＬ－６０）和人巨核细胞白血病细胞系（ＨＩＭｅｇ－１）的体外抑制生长和诱导分化作用。集落形成试验结果显示ＥＢ１０８９，ＭＣ９０３和１，２５（ＯＨ）２Ｄ３抑制ＨＬ－６０细胞生长的ＥＤ５０分别为９×１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ，１×１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ和７×１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ；它们抑制ＨＩ     

HLA不全相合外周血造血干细胞移植治疗三例急性淋巴细胞白血病

我们用ＨＬＡ不全相合外周血造血干细胞移植 (ＰＢＳＣＴ) ,治疗 3例急性淋巴细胞白血病患者。报告如下。病例与方法1　病例　 3例患者均经临床及实验室检查确诊为急性淋巴细胞白血病 ,临床资料见表 1。表 1　 3例急性淋巴细胞白血病患者临床资料例号性别年龄(岁 )诊断至移植时间(月 )移植时状态移植细胞数ＭＮＣ(× 10 8/ｋｇ)ＣＤ34 (× 10 6 /ｋｇ)目前状态1男 2 1　　 4ＣＲ1 3 .0　 10 .0ＣＣＲ3 5个月2男 14 2 4ＣＲ2 6.610 .0ＣＣＲ 2 3个月3男 15 12 2次复发 7.0 5 .2死亡2　供者　例 1为患者同胞姐姐 ,例 2及例 3均为患者母亲 ,供…     

多发性骨髓瘤耐药细胞株核基质蛋白的变化

为进一步阐明多发性骨髓瘤 (ＭＭ)细胞的耐药机制 ,我们从核基质蛋白 (ｎｕｃｌｅａｒｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ ,ＮＭＰ)水平研究ＭＭ细胞的多药耐药 (ＭＤＲ)机制。材料和方法1　人骨髓瘤细胞Ｓｋｏ 0 0 7及骨髓瘤长春新碱 (ＶＣＲ)耐药细胞Ｓｋｏ 0 0 7 ＶＣＲ的培养和标本处理　人骨髓瘤细胞株Ｓｋｏ 0 0 7由本校微生物免疫学教研室刘乐和教授提供。细胞培养用含 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养液 ,培养条件 :37℃ ,5 %ＣＯ2 ,饱和湿度。人骨髓瘤长春新碱耐药细胞的诱导参照Ｓｃｈｅｐｅｒ等介绍的方法[1 ] 进行 ,主要步骤包括收获…     

抗bcl—2核酶在HL—60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的“锤头型”核酶基因定向克隆于真核表达本ＰＤＯＲ－ｎｅｏ，构ｐＤＯＲ－ＲＺ重组体。通过脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法，把ｐＤＯＲ－ＲＺ导入ＨＬ－细胞。