促红细胞生成素预处理增强大鼠骨髓间充质干细胞定向归巢能力的初步研究

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖及迁移能力的影响。方法将第5代BMSC分为5组,分别为对照组(不加EPO)及10、100、500、1000 IU/mL EPO组,培养24 h和48 h后检测各组BMSC的增殖率、迁移能力以及趋化因子受体(CXCR)4的表达情况。将第5代BMSC分为BMSC组和EPO-BMSC组,培养48 h后观察EPO对两组BMSC的表面标志物、定向分化和细胞骨架形态的影响。结果EPO与BMSC共培养48 h后,与对照组比较,100、500 IU/mL EPO组BMSC增殖率和迁移能力增强,CXCR4蛋白表达量增高(均为P<0.05)。EPO-BMSC组BMSC表面标志物的表达和定向分化能力未受EPO影响。在EPO-BMSC组中,大多数细胞的纤维骨架沿细胞的长轴排列,呈平行状。结论EPO可提高BMSC的增殖率、迁移能力和组织修复治疗能力,可能通过增加CXCR4的表达,促进其向损伤器官组织的定向归巢。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠残肾组织归巢因子表达的影响

目的 观察红细胞生成素(EPO)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾组织归巢因子表达的影响.方法 采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型.实验动物随机分为3组:假手术组、CRF模型组和EPO治疗组.从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO 50 IU/kg,每周3次,共6周.8周后检测各组大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白、血红蛋白(Hb)；采用实时荧光定量PCR、Western印迹和免疫组化方法检测残肾组织EPO及其受体(EPOR)、归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)的表达.结果 与模型组比较,EPO治疗可上调残肾组织归巢因子及其受体(SDF-1、CXCR4、Ang-1、Tie2、SCF、c-Kit)mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05)；同时,EPO治疗还可上调残肾组织EPO及EPOR的mRNA和蛋白的表达(均P＜ 0.05).此外,EPO治疗还能下调大鼠Scr、BUN和尿蛋白水平(均P＜0.05),上调Hb水平(P＜0.05).结论 EPO能改善慢性肾衰竭大鼠的肾功能,这种作用可能与其激活残肾组织归巢因子而参与损伤肾脏的修复有关.     

血红素氧化酶-1保护异种胰岛移植物及机制研究

目的:探讨钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)诱导血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)过表达对异种胰岛移植物的保护作用及其可能的机制.方法:采用大鼠对受体鼠胰岛移植模型.按术前不同处理方式将分离纯化的胰岛随机分为3组:A组胰岛体外培养36 h;B组胰岛与50 mmol/L的HO-1诱导剂CoPP共培养36 h:C组胰岛与50 mmol/L的CoPP及50 mmol/L的诱导阻断剂锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)共培养36 h.RT-PCR及Western印迹法检测各组胰岛HO-1 mRNA及蛋白表达.受体鼠也随机分为3组,每组11只,分别接受上述3组胰岛;比较各组受体鼠血糖维持正常之时间.ELISA法检测受体鼠血清IFN-γ、TNF-γ、IL-10及IL-1γ的含量.结果:CoPP预处理可诱导胰岛HO-1 mRNA和蛋白过表达.B组受体鼠血糖维持正常时间为(14.63±1.19)d.与A组的(9.88±2.17)d及C组的(9.38±1.60)d相比,有显著差异(P＜0.01),而A、C两组间无显著差异(P＞0.05).B组受体鼠血清IL-10含量为(72.97±9.74)pg/mL,与A组的(30.57±3.94)pg/mL及C组的(45.55±8.26)pg/mL比较,差异有统计学意义,P值分别为0.005及0.02.而3组间血清IFN-γ、TNF-γ及IL-1γ含量无显著差异(P＞0.05).结论:CoPP体外诱导HO-1过表达对异种胰岛移植物具保护作用;该作用可能与IL-10有关.     

肾移植围手术期醛固酮的变化与肾功能的关系研究

目的分析肾移植患者围手术期醛固酮与肾功能变化的关系,从而初步探讨醛固酮在慢性移植肾肾病中的作用。方法选取2010年1月1日到2013年12月31日,在沈阳军区总医院泌尿外科行同种异体肾移植患者共100例作为实验组,根据肾移植术后30 d时Scr水平将实验组再分为A组(Scr≥133μmol/L,13例)和B组(Scr133μmol/L,87例)。另选取年龄在25~35岁之间身体健康的志愿者10名,作为对照组。实验组在肾移植的当日(0 d)、移植术后1、7、15、30 d清晨抽血,对照组在相应时段抽血,测定血清醛固酮和Scr水平。结果肾移植当日,实验组和对照组的Scr水平分别为(598±37)μmol/L和(75±5)μmol/L,醛固酮水平分别为(0.26±0.06)ng/dl和(0.13±0.03)ng/dl,两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。与0 d同组比较,术后30 d A组受者Scr水平降低,差异有统计学意义(P0.05),醛固酮水平变化不大,差异无统计学意义(P0.05);术后30 d B组受者Scr和醛固酮水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P0.05)。相关分析结果显示,实验组的血清醛固酮与Scr的变化均呈正相关(r=0.85,P0.05)。结论肾移植术后Scr及醛固酮的变化趋势呈正相关,初步认为醛固酮在介导移植肾损伤过程中发挥着一定的作用。     

供体年龄对活体肾移植预后的影响

目的 探讨供体年龄对活体肾移植预后的影响.方法 回顾性分析2004年至2011年间在我院实施的活体亲属肾移植217例,按供体年龄或供受体年龄差异分组,随访并比较各组受者的血肌酐水平和术后并发症情况.结果 随着供体年龄的增长,受体移植术后血肌酐水平呈上升趋势.与供受体年龄差＜-5岁组比较,供体年龄差＞5岁组的Scr水平在1个月[(143.5±42.1) μmol/L比(114.4±30.4)μ mol/L]、3个月[(139.9±36.6) μmol/L比(110.6 ±33.3)μmol/L]、1年[(132.1±22.1)μmol/L比(105.5±35.9) μmol/L]及2年(132.0±45.4) μmol/L比(97.2±17.5) μmol/L]均增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).与年轻供肾组(＜50岁)相比,老年供肾组(＞50岁)的急性排斥反应发生率(19.4％比9.7％)和慢性排斥反应发生率(9.7％比1.4％)也显著增高(均P＜ 0.05).术后人及肾的存活率比较差异无统计学意义.供受体年龄差异是术后2年Scr水平异常的独立危险因素(OR=5.010,P＜0.05).结论 供体年龄是肾移植预后的重要影响因素,老年供肾的疗效较差.     

高龄亲属活体供肾在青年受体内病理学改变的长期研究

目的通过长期病理随访探讨青年受体接受高龄亲属活体供肾肾移植的安全性。方法根据供体年龄不同,将28例青年受体分为观察组(14例,高龄供体)和对照组(14例,中青年供体)。分别比较两组移植肾术后7年的存活情况及术后各时间点的血清肌酐(Scr)水平;比较两组在零时、术后6个月、术后7年移植肾活组织检查(活检)的慢性病理损伤评分;比较两组受体术后6个月、术后7年移植肾间质纤维化相关指标结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子(TGF)-β、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及细胞衰老相关指标细胞间连接蛋白(Cx)43及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达量。结果观察组和对照组移植肾术后7年存活率分别为78.5%和92.8%,差异无统计学意义(P0.05)。观察组、对照组术后7 d Scr水平分别为190、160μmol/L,术后1个月Scr水平分别为170、125μmol/L,观察组术后各时间点的Scr水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P0.05)。观察组移植肾组织零时活检的慢性病理损伤总评分明显高于对照组(P0.05),但两组术后7年的慢性病理损伤总评分无明显差异(P0.05)。观察组和对照组组内各时间点比较,术后7年活检的慢性病理损伤总评分均高于零时活检及术后6个月活检的慢性病理损伤总评分(均为P0.05)。两组术后7年移植肾组织中CTGF、TGF-β、LN、FN、mTOR、Cx43表达量的比较差异均无统计学意义(均为P0.05)。结论长期随访结果显示青年受体接受高龄供肾与接受中青年供肾的病理学改变相似,从病理学角度考虑青年受体接受高龄供肾是安全可行的。     

肾移植受者血清同型半胱氨酸水平的变化

目的观察肾移植受者移植前后血清同型半胱氨酸(Hcy)水平的变化,评估其与移植物功能之间的关系。方法横断面回顾性研究选择2013年1月至2014年6月间在解放军第309医院全军器官移植研究所接受首次同种异体肾移植手术且肾功能恢复稳定33例受者为移植组,经临床检查确诊为慢性肾衰竭(CRF)的患者65例为CRF组,30名健康体检人员作为对照组。比较各组血清Hcy、血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平。连续监测移植组在肾移植术前及术后3、7、14、21 d的血清Hcy和Scr水平,比较肾移植前后血清Hcy水平的变化与肾功能之间的关系。结果 CRF组患者的血清Hcy水平为(25±10)μmol/L,明显高于对照组的(9±4)μmol/L和移植组稳定期的(15±9)μmol/L,移植组的血清Hcy水平亦明显高于对照组,差异均有统计学意义(均为P0.001)。CRF组、移植组和对照组的Scr水平分别为(708±302)μmol/L、(98±23)μmol/L、(72±18)μmol/L,CRF组的Scr水平明显高于移植组和对照组,差异均有统计学意义(均为P0.001)。CRF组、移植组和对照组的BUN水平分别为(18.1±5.9)mmol/L、(10.9±5.3)mmol/L、(4.9±1.3)mmol/L,CRF组的BUN水平明显高于移植组和对照组,差异均有统计学意义(均为P0.001),移植组BUN水平亦高于对照组,差异有统计学意义(P0.001)。移植组患者肾移植术后随着肾功能好转,Scr和血清Hcy水平逐渐降低,其中术后14 d血清Hcy水平降至最低(15±5)μmol/L,与术前的(25±10)μmol/L相比,差异有统计学意义(P0.05)。术后14 d内,移植组肾移植受者的血清Hcy水平与Scr水平呈正相关(r=0.761,P0.05)。结论肾移植受者的血清Hcy水平与移植肾功能相关,联合检测血清Hcy与肾功能指标对预防高Hcy血症和早期评估移植物功能有一定指导意义。     

辅助性T细胞亚群分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用

目的 探讨前列腺液(EPS)中CD+4T细胞亚群辅助性T细胞(Th细胞)分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用. 方法门诊诊断前列腺炎患者76例,年龄18～47岁,平均32岁.患者均有慢性前列腺炎典型临床症状,病程均＞3个月.按美国国立卫生院分类方法分为ⅢA型组(47例)、ⅢB型组(29例).其中ⅢA型组根据炎症程度又分为ⅢAl组(轻度炎症26例)和ⅢA2组(重度炎症21例).另设健康对照组(16例),年龄19～45岁,平均31岁.采用双抗体夹心酶联免疫法检测EPS中Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)水平及Th1/Th2比值(IFN-γ/IL-4),比较各组问差异.结果 ⅢA、ⅢB组IFN-γ水平[(134.78±43.67),(109.82±30.09)pg/m1]与对照组[(60.63±15.16)pg/m1]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ⅢA组较ⅢB组升高更明显(P＜0.05);ⅢA组IL-4水平[(51.99±20.59)pg/m1]与对照组[(53.88±17.92)pg/m1]比较差异无统计学意义P＞0.05),ⅢB组IL-4水平[(76.40±17.99)pg/m1]明显上调(P＜0.05);ⅢA组IFN-γ/IL-4水平(2.94±1.12)明显高于对照组(1.20±0.48,P＜0.05),Ⅲ B组(1.49±0.48)无明显改变(P＞0.05).与对照组比较,Ⅲ A1组IL-4水平[(63.03±18.86)pg/m1]无明显变化(P＞0.05),而ⅢA2组水平[(30.20±13.16)pg/m1]显著下调(P＜0.05);ⅢA1组和m A2组IFN-γ水平均明显上调[(127.65±36.57),(143.49±50.76)pg/m1],P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05);ⅢA2组IFN-γ/IL-4明显高于ⅢA1组(3.67±0.82 vs 2.34±0.97,P＜0.05).结论 ⅢA型前列腺炎Th1细胞分化占优势,Th1/Th2平衡向Th1漂移,以细胞免疫反应为主;Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病,但Th1/Th2处于相对平衡状态.Th1的优势分化可能是导致前列腺局部炎症发展的原因之一.     

心脏死亡器官捐献扩展标准供体肾移植早期临床效果分析

目的比较扩展标准供体(ECD)及标准供体(SCD)肾移植的早期临床效果。方法回顾性分析接受心脏死亡器官捐献(DCD)供肾肾移植的85例受体临床资料。根据供体类型,将相应受体分为ECD组(31例)和SCD组(54例)。比较两组受体肾移植术后3个月内血清肌酐(Scr)水平、早期并发症发生情况及预后情况。结果 ECD组和SCD组术后1个月内的Scr水平差异无统计学意义(均为P0.05),ECD组术后60、90 d的Scr水平分别为(189±97)、(175±69)μmol/L,明显高于SCD组的(142±49)、(135±41)μmol/L(P=0.005,0.002)。ECD组和SCD组的急性排斥反应(AR)发生率分别为6%和15%,移植物功能延迟恢复(DGF)发生率分别为23%和19%,肺部感染发生率分别为10%和6%,其他早期并发症发生率分别为32%和15%,差异均无统计学意义(均为P0.05)。ECD组和SCD组人存活率分别为97%和94%,ECD组和SCD组肾存活率分别为84%和91%,差异均无统计学意义(均为P0.05)。结论与SCD相比,ECD肾移植亦可获得相当的早期临床效果。在目前供肾来源严重缺乏的条件下,ECD的使用可以扩大供肾来源。     

高糖通过ERK1/2通路对人肾小管上皮细胞脂联素表达的影响

目的通过体外培养人肾小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK-2),观察高糖对HK-2脂联素(adiponectin,ADPN)表达水平的影响并探讨其可能机制。方法将培养的HK-2细胞分为4组:①低糖对照组(5.6 mmol/L葡萄糖);②PD98059(职K1/2信号传导通路的抑制剂)组(5.6 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059);③高糖组(30 mmol/L葡萄糖);④高糖+PD98059组(30 mmol/L葡萄糖+50μmol/L PD98059)。各组分别培养48 h后荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HK-2细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activator receptor,PPAR-γ)及脂联素mRNA的表达,免疫印迹(Western blotting)法检测各组脂联素蛋白的表达水平。结果 HK-2细胞表达脂联素;PD98059组与低糖对照组相比,PPAR-γmRNA及脂联素的mRNA和蛋白表达的差异均无统计学意义(均P0.05);与低糖对照组相比,高糖组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与高糖组相比,高糖+PD98059组PPAR-γmRNA及脂联素mRNA和蛋白表达均显著升高,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论高糖可以降低HK-2细胞脂联素mRNA和蛋白的表达;高糖作用于HK-2细胞可能是通过激活ERK1/2信号传导通路降低PPAR-γ的表达,从而影响其脂联素的表达。     

不同培养基对骨髓间充质干细胞免疫学特性的影响

目的比较ScienCell(SCI)干细胞培养基和低糖(LG)完全培养基培养下骨髓间充质干细胞(BMSC)的免疫学特性。方法利用流式细胞分析BMSC表面标志物的表达;通过体外成骨和成脂诱导,鉴定BMSC的多向分化能力;应用混合淋巴细胞反应实验,比较SCI组和LG组BMSC的免疫原性及免疫调节功能;采用流式细胞仪分析IFN-γ刺激前后BMSC表面免疫分子的表达情况。结果混合淋巴细胞反应结果显示,两组培养基培养的BMSC均具有低免疫原性和免疫抑制功能,但SCI组单向混合淋巴细胞增殖率显著高于LG组,而两组双向混合淋巴细胞增殖率未见显著差异。流式细胞仪分析结果显示,SCI组BMSC中免疫共刺激因子CD40阳性的细胞比例显著高于LG组,而HLA-DR以及免疫共抑制因子B7-H1和B7-DC阳性细胞比例均显著低于LG组。IFN-γ刺激后可显著上调两组BMSC中HLADR的阳性细胞比例至90%以上。低浓度的IFN-γ(10 U/mL)仅轻微上调LG组BMSCs的CD40的表达水平;而高浓度IFN-γ(1 000 U/mL)可显著提高两组BMSC中CD40和B7-H1的阳性细胞比例,以及SCI组BMSC中B7-DC的阳性细胞比例。结论在体外,含有不同成分的干细胞培养基可改变BMSC免疫分子的表达水平;SCI组BMSC的免疫原性显著高于LG组,但免疫抑制功能两组无明显差异。     

抑炎因子IL-35与移植肾功能延迟恢复关系的研究

目的探讨白细胞介素(IL)-35与移植肾功能恢复情况之间的关系。方法回顾性分析45例心脏死亡器官捐献(DCD)供肾肾移植受体的临床资料。根据肾移植术后是否发生移植物功能延迟恢复(DGF),所有受体分为早期肾功能恢复良好(IGF)组(32例)和DGF组(13例)。比较肾移植术后1、2、3、7、14、28 d及术后3个月、6个月、1年各时间点两组受体的血清肌酐(Scr)和估算肾小球滤过率(e GFR)水平;比较肾移植术后1、2、3、7、14、28 d各时间点两组受体血清和尿液IL-35含量。结果 DGF组受体术后肾功能恢复迟缓,术后7 d时Scr水平高于IGF组,e GFR水平低于IGF组,差异均有统计学意义(均为P0.05)。术后1年,两组受体Scr水平的差异无统计学意义,但e GFR仍存在较大差异,与IGF组相比,DGF组受体术后1年时e GFR仍降低(P0.05)。术后1、2、3、7、14 d,DGF组血清中IL-35含量均低于IGF组,两组比较差异均有统计学意义(均为P0.05);术后28 d,与IGF组相比,DGF组血清IL-35含量反而升高,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。术后1、2、3、7 d,DGF组尿液中IL-35含量均低于IGF组,两组比较差异均有统计学意义(均为P0.05);术后14、28 d,两组受体尿液IL-35含量进行比较,差异均无统计学意义(均为P0.05)。结论肾移植术后受体血清和尿液中IL-35含量低与DGF发生存在一定的联系,提示术后早期受体全身和移植肾局部抑炎应答过弱,过度的炎症应答得不到有效控制,可能是DGF发生的重要原因。     

谷胱甘肽在激素诱导的BMSCs功能失调中的作用

目的探讨抗氧化剂谷胱甘肽(glutathione,GSH)对激素诱导的人BMSCs成脂、成骨关键因子表达水平的影响。方法取3例股骨颈骨折患者股骨近端骨髓,采用密度梯度离心联合贴壁法进行BMSCs的分离、培养和纯化。取第3代BMSCs分为5组:A组,单纯BMSCs组(1×10~5个/mL);B组,BMSCs(1×10~5个/mL)+10μmol/L地塞米松;C组,BMSCs(1×10~5个/mL)+10μmol/L地塞米松+5μmol/L GSH;D组,BMSCs(1×10~5个/mL)+10μmol/L地塞米松+10μmol/L GSH;E组,BMSCs(1×10~5个/mL)+10μmol/L地塞米松+50μmol/L GSH。培养7 d,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,RT-PCR检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase)mRNA表达水平,实时荧光定量PCR检测成脂转录因子过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorsγ,PPAR-γ)、CCAAT增强结合蛋白(CCAAT/enhancer-binding family of proteins,C/EBP)和成骨转录因子Runx2、ALP基因表达情况;培养21 d,采用油红O染色观察细胞成脂分化情况,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果 B组细胞内活性氧水平显著高于其余各组,C组高于A、D、E组,D、E组高于A组(P0.05);D、E组间比较差异无统计学意义(P0.05)。B组油红O染色阳性细胞明显多于其余各组,C、D、E、A组依次减少,各组吸光度(A)值比较差异均有统计学意义(P0.05)。RT-PCR检测示,B组SOD和Catalase mRNA相对表达量较其余各组显著降低,C组低于A、D、E组(P0.05);A、D、E组间比较差异无统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测示,B组PPAR-γ、C/EBP m RNA相对表达量显著高于其余各组(P0.05);C组高于A、D、E组,D、E组高于A组,差异均有统计学意义(P0.05);D、E组间比较差异无统计学意义(P0.05)。B组Runx2、ALP m RNA相对表达量显著低于其余各组,C组低于A、D、E组,D、E组低于A组,差异均有统计学意义(P0.05);D、E组间比较差异无统计学意义(P0.05)。Western blot检测示,B组PPAR-γ、C/EBP蛋白相对表达量较其余各组显著提高,C、D、E、A组呈逐渐下降趋势,组间比较差异均有统计学意义(P0.05);B组Runx2、ALP蛋白相对表达量较其余各组显著下降,C、D、E、A组呈逐渐上升趋势,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 GSH可通过降低细胞内活性氧水平抑制人BMSCs成脂分化,增强成骨分化;在一定范围内,GSH浓度越高,效果越明显。     

亲属活体供肾肾体积与受体体表面积比值对早期移植肾功能的影响

目的探讨亲属活体供肾肾体积(RV)与受体体表面积(BSA)比值(RV/BSA)与术后早期移植肾功能的关系。方法回顾性分析行亲属活体肾移植术的120对供、受体的临床资料。根据RV/BSA将受体分为A组(RV/BSA65.33 m L/m2),B组(RV/BSA为65.33~76.49 m L/m2),C组(RV/BSA为76.50~96.96 m L/m2),D组(RV/BSA96.96 m L/m2)。比较4组受体术后估算肾小球滤过率(e GFR),分析RV/BSA与受体术后6、12个月e GFR的相关性。结果 A组术后6个月e GFR明显低于B组、C组和D组(t=2.313,2.947,5.903;均为P0.05)。A组术后12个月e GFR亦明显低于B组、C组和D组(t=2.189,2.433,2.909;均为P0.05)。RV/BSA与受体术后6、12个月的e GFR均存在相关性(均为P0.05)。结论 RV/BSA与亲属活体肾移植术后早期移植肾功能密切相关。     

维持性透析患者红细胞生成素抗体水平及其临床意义

目的 检测透析患者红细胞生成素（EPO）抗体水平及探讨其临床意义。 方法 本院80例维持性血液透析患者和30例维持性腹膜透析患者为对象。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测EPO抗体。用电化学发光法检测全段甲状旁腺素（iPTH）。用常规方法检测血红蛋白（Hb）、BUN、Scr、C反应蛋白（CRP）。分析透析患者EPO抗体水平与Hb、BUN、Scr、iPTH、CRP的关系。分析不同基础病患者与EPO抗体、Hb、BUN、Scr、iPTH、CRP的关系。研究EPO抗体和贫血关系。 结果 透析患者EPO抗体水平显著高于健康人,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）,而血透患者与腹透患者间EPO抗体水平差异无统计学意义。不同基础病的EPO抗体水平、Hb、BUN、Scr、iPTH、CRP差异无统计学意义。透析患者Hb与EPO抗体、CRP呈负相关（r = -0.56、-0.20,P ＜ 0.05）,而与BUN、Scr、iPTH均无相关;EPO抗体与BUN、Scr、iPTH、CRP均无相关。1例应用重组人红细胞生成素（rHuEPO,环尔博)患者EPO抗体为43.63 U/L,骨髓活检示红细胞系增生低下——纯红细胞再生障碍性贫血。 结论 透析患者EPO抗体水平显著高于健康人。血透患者与腹透患者间EPO抗体水平差异无统计学意义。透析患者EPO抗体与BUN、Scr、iPTH、CRP无相关。透析患者Hb与EPO抗体、CRP呈负相关。使用rHuEPO能产生抗体,可导致骨髓红细胞系增生低下,加重贫血。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠小肠缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞( BMSC)移植对其小肠缺血再灌注损伤的影响.方法 获取健康Wistar大鼠骨髓,体外提取、培养BMSC,收获传代培养的第3代细胞并鉴定其表型.在健康Wistar大鼠肠黏膜下注射皮肤黑色素瘤细胞,并用底物荧光素法示踪细胞.另外制作Wistar大鼠肠道缺血再灌注模型,将模型大鼠分为2组:实验组大鼠在肠黏膜下注射BMSC悬液1 ml(含5×106个细胞);对照组大鼠在肠黏膜下注射等量生理盐水.分别于术后0、2、6、24、72和120h处死大鼠,留取血清和小肠组织样本.采用酶联免疫吸附试验检测血清二胺氧化酶( DAO)、D-乳酸和肿瘤坏死因子α(TNF-α),用光镜和透射电镜观察肠组织,蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测紧密连接蛋白-1(ZO-1).结果 体外成功分离培养出BMSC.经肠黏膜移植后的皮肤黑色素瘤细胞定植在肠道.实验组大鼠小肠病理改变较对照组轻,小肠黏膜屏障更完好.术后6h实验组DAO为(11.36±1.89) IU/ml,对照组为(14.27±2.09) IU/ml(P＜0.05);24 h时实验组DAO为(5.04±1.04)IU/ml,对照组为(7.35±1.46) IU/ml(P＜0.05).术后6 h实验组D-乳酸为(1.57±0.25) mmol/L,对照组为(1.93±0.19)mmol/L(P＜0.05);术后24 h实验组D-乳酸为(1.09±0.13)mmol/L,对照组为(1.41±0.07) mmol/L(P＜0.01).术后6h实验组TNF-α为(266.09±8.84)ng/L,对照组为(286.81±11.54) ng/L (P＜0.01);术后24 h实验组TNF-α为(190.39±4.24) ng/L,对照组为(218.49±15.51 )ng/L(P＜0.01).实验组ZO-1的表达高于对照组.结论 肠黏膜下移植BMSC可以减轻小肠缺血再灌注损伤.     

不同睾丸活检术对睾丸功能及抗精子抗体的影响

目的:研究不同睾丸活检术对无精子症患者血清抑制素B(INHB)、血清抗精子抗体(As Ab)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)的影响。方法:选取无精子症患者210例,根据不同的睾丸活检手术方式,分为睾丸切开活检取精术(TESE)组50例、睾丸穿刺抽吸取精术(TESA)组56例、睾丸细针穿刺抽吸取精术(TEFNA)组64例、显微睾丸切开取精术(micro-TESE)组40例,分别检测睾丸活检术前及术后1、3个月患者血清INHB、FSH、T水平和As Ab阳性率。结果:4组患者术后1、3个月FSH与术前比较均无显著性差异[TESE:(8.76±3.07)IU/L、(7.24±3.32)IU/L vs(8.51±4.34)IU/L;TESA:(7.90±4.57)IU/L、(8.04±3.65)IU/L vs(7.70±2.72)IU/L;TEFNA:(6.08±2.70)IU/L、(6.10±3.32)IU/L vs(6.04±3.17)IU/L;micro-TESE:(6.89±1.78)IU/L、(6.75±2.57)IU/L vs(6.59±2.74)IU/L,P均>0.05]。TESE组和micro-TESE组术后1个月As Ab Ig M阳性率(14.00%和15.00%)较术前(0.00和2.50%)明显升高(P<0.05)。TESE组和micro-TESE组患者术后1个月T水平[(9.25±5.76)nmol/L和(8.23±4.12)nmol/L]较术前[(16.52±6.25)nmol/L和(14.16±5.45)nmol/L]明显下降(P均<0.05)。TESE、TESA、TEFNA、micro-TESE4组患者术后1、3个月血清INHB较术前均明显下降[TESE:(42.63±15.34)pg/ml、(44.05±18.47)pg/ml vs(70.56±23.17)pg/ml;TESA:(40.55±20.51)pg/ml、(42.11±19.34)pg/ml vs(68.71±14.74)pg/ml;TEFNA:(46.31±19.28)pg/ml、(48.32±20.54)pg/ml vs(76.81±27.04)pg/ml;micro-TESE:(45.27±18.83)pg/ml、(47.64±28.34)pg/ml vs(74.74±28.35)pg/ml,P均<0.05],但不同方法组组间无统计学差异(P>0.05)。结论:不同睾丸活检术对无精子症患者睾丸功能及As Ab有影响,且存在一定差异。     

骨髓间充质干细胞表达肿瘤坏死因子刺激蛋白-6对大鼠肝脏移植排斥反应的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)表达肿瘤坏死因子刺激蛋白-6(TSG-6)在大鼠原位肝移植排斥反应的作用.方法 Kupffer细胞(KCs)和BMSC分离培养,慢病毒载体(LV3-shTSG-6)感染下调TSG-6的表达,RT-PCR以及Western blot检测BMSC的TSG-6mRNA以及蛋白表达情况,KCs与BMSC共培养,检测上清液TNF-α、TSG-6含量;建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,术后1d、3d、7d处死3只受体,检测血清AST、ALT、TBIL、γ-GGT、TNF-α、IL-6、IL-4含量,RT-PCR以及Western blot检测肝组织TSG-6mRNA以及蛋白表达情况,苏木精-伊红染色观察肝组织结构,各组剩余大鼠观察术后生存率.结果 BMSC慢病毒转染率＞70％;KCs和BMSC共培养,TSG-6-shRNA-BMSC+ KCs组各时间点分泌TSG-6明显低于BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组(P＜0.05),BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组分泌TNF-α于6h达高峰,12 h与6h比较明显降低(P＜0.05),但TSG-6-shRNA-BMSC+ KCs组12 h分泌TNF-α明显高于BMSC+ KCs组和TSG-6-NC-BMSC+ KCs组(P＜0.05);移植术后,TSG-6-shRNA-BMSC组ALT、AST、TBIL、γ-GGT、TNF-α、IL-6明显高于TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组(P＜0.05),与PBS组比较差异无统计学意义;TSG-6-shRNA-BMSC组、TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组IL-4明显高于PBS组(P＜0.05),而TSG-6-shRNA-BMSC组IL-4低于TSG-6-NC-BMSC组和BMSC组(P＜0.05);在肝脏病理中,TSG-6-shRNA-BMSC组与PBS组肝组织排斥反应程度明显较高,Banff评分Ⅱ～Ⅲ级;TSG-6-shRNA-BMSC组与PBS组大鼠肝移植术后存活时间分别为(16.6±4.6)d、(15.4±6.7)d,明显低于TSG-6-NC-BMSC组(69.6±28.1)d和BMSC组(69.2±28.2) d(P ＜0.05).结论 BMSC分泌表达TSG-6在一定程度上具有减轻肝移植急性排斥反应的作用.     

参苓白术散对尿毒症小剂量腹膜透析临床疗效的影响

目的:探讨参苓白术散对尿毒症小剂量腹膜透析临床疗效的影响。方法:选取符合纳入标准腹膜透析的尿毒症患者60例,随机分为两组,各30例。观察组采用小剂量(4 L/d)腹膜透析,同时每日服用参苓白术散;对照组采用常规剂量(8 L/d)腹膜透析,疗程均为6个月。比较两组血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、钾、钙、磷、白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb)水平,以及计算尿量、超滤量、残肾Kt/V、腹膜Kt/V评估患者腹膜透析充分性。通过饮食热量(DEI)和蛋白的摄入量、主观综合性营养评估(SGA)、生活质量问卷(ADL)调查,评估患者的营养状况和生活质量。结果:(1)两组治疗前后比较,血Scr、BUN差异无统计学意义(P0.05);血Alb、Hb差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。两组治疗后,血Scr、BUN比较,差异无统计学意义(P0.05);血Alb、Hb比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。(2)两组治疗前后比较,血钾、钙、磷水平差异无统计学意义(P0.05)。两组治疗后比较,血钾、钙、磷水平差异同样差异无统计学意义(P0.05)。(3)观察组治疗前后比较,肾Kt/V差异无统计学意义(P0.05),腹膜Kt/V、尿量、超滤量差异均有统计学意义(P0.01)。对照组治疗前后比较,肾Kt/V、腹膜Kt/V、尿量差异均无统计学意义(P0.05),超滤量差异均有统计学意义(P0.01)。两组治疗后比较,肾Kt/V差异无统计学意义(P0.05);腹膜Kt/V、尿量、超滤量差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。(4)两组治疗前后比较,SGA、ADL、DEI、DPI差异均有统计学意义(P0.01)。两组治疗后比较,SGA、ADL、DEI、DPI差异均有统计学意义(P0.01)。结论:小剂量腹膜透析加用参苓白术散透析更充分,能显著改善尿毒症患者的营养状况和生活质量。     

青藤碱抑制人外周血CD4+T淋巴细胞内NF-AT和IFN-γ表达的体外研究

目的 通过研究青藤碱(SIN)对人外周血CD4+T淋巴细胞内核因子-AT(NF-AT)和γ干扰素(IFN-γ)表达的影响来探讨其免疫作用机制.方法 免疫磁珠法分选人外周血CD4+T淋巴细胞,并分为5组进行培养.(1)阴性对照组:细胞培养液中不加入任何药物;(2)阳性对照组:细胞培养液中加入终浓度为50ng/ml的环孢素A(CsA)溶液;(3)低浓度青藤碱(L-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为10μmol/L的青藤碱溶液;(4)中浓度SIN(M-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为200 μmol/L的青藤碱溶液;(5)高浓度SIN(H-SIN)组:细胞培养液中加入终浓度为1000 μmol/L的青藤碱溶液.观察各组CD4+T淋巴细胞的增殖情况,蛋白印迹法检测各组细胞内NF-AT的蛋白表达,流式细胞术检测各组细胞内IFN-γ的表达水平.结果 与阴性对照组比较,M-SIN和H-SIN组明显抑制了CD4+T淋巴细胞的增殖(P＜0.01).青藤碱呈浓度依赖性抑制CD4+T细胞内NF-AT和IFN-γ的表达(P＜0.01),而加入CsA培养的阳性对照组NF-AT和IFN-γ表达最低.CD4+T淋巴细胞内NF-AT的表达与细胞增殖抑制率之间存在负相关关系(rs=-0.969,P=0.000).结论 青藤碱抑制人外周血CD4+T淋巴细胞内NF-AT和IFN-γ表达;其免疫作用机制可能是通过降低NF-AT的表达以抑制T淋巴细胞的活化和增殖.