慢性镉中毒对小鼠学习记忆及海马CA3区的影响

目的 研究慢性镉中毒对小鼠学习记忆能力及海马CA3区神经元与星形胶质细胞的影响.方法 将健康清洁级4～5月龄昆明小鼠20只随机分为对照组与镉中毒组,每组10只,雌雄各半.镉中毒组采用皮下注射2mg/kg氯化镉,每周2次,连续染毒3个月;对照组同时注射等体积生理盐水.染毒3个月后先对小鼠进行Y型迷宫学习记忆能力测试,并进行:HE染色、尼氏染色、TUNEL与GFAP免疫组化染色光镜观察;并对海马CA3区神经元、凋亡神经元及GFAP免疫组化染色阳性神经元进行计数,测量GFAP阳性反应产物的平均光密度值.结果 Y型迷宫检测结果显示,与对照组相比,镉中毒组小鼠的学习、记忆能力均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色及尼氏染色结果显示,对照组小鼠海马CA3区神经元细胞排列整齐、规则、结构完整;镉中毒组小鼠海马CA3区部分神经元胞体变小,胞浆内可见大小、数量不等的嗜酸性颗粒,尼氏体明显减少或消失,有软化灶形成,并出现大量淋巴细胞浸润,而胶质细胞体积增大,数量增多.与对照组相比,镉中毒组海马CA3区神经元的数量较少,胶质细胞的数量较多,差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL免疫组化染色结果显示,对照组小鼠海马CA3区凋亡细胞皱缩,但质膜完整,细胞核、核仁消失,染色质呈颗粒状,边集于核膜下;镉中毒组小鼠海马CA3区凋亡细胞的细胞核染色质凝集成块,核固缩、颜色深、致密度高,进而核碎裂.对照组小鼠海马凋亡细胞数低于镉中毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).GFAP免疫染色结果显示,对照组海马CA3区GFAP免疫染色阳性细胞较少,呈星形,胞浆内棕黄色反应颗粒较少,胞核不着色,位于细胞中央;镉中毒组海马CA3区GFAP免疫染色阳性细胞较多,胞浆内有丰富的棕黄色阳性反应颗粒,细胞胞体较大,突起多.与对照组相比,镉中毒组海马CA3区GFAP免疫染色阳性细胞数较多,胞浆内GFAP免疫反应阳性产物光密度值较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性镉中毒可导致小鼠学习记忆能力降低,海马CA3区神经元减少、星型胶质细胞反应性增多,这些变化可能是镉的神经毒性作用之一.     

壬基酚对仔鼠皮质部星形胶质细胞GFAP的影响

将交配成功的31只孕鼠根据妊娠日期分层后随机分为4组:对照组,壬基酚(NP)低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)染毒组;NP暴露时间为受孕第6天到出生后21 d哺乳期结束。Real Time PCR和免疫组织化学法检测胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白的表达,并分析上述变化与NP暴露之间的关系。高剂量组21 d、60 d海马GFAP mRNA表达增加,差异有统计学意义(P0.05),21d、60 d仔鼠皮质部位GFAP mRNA表达与NP暴露剂量呈正相关(r=0.670、0.588,P0.05),免疫组化切片可见仔鼠皮质部位星形胶质细胞体肥大,细胞分支增多,染色较深,高剂量组GFAP阳性细胞数与NP暴露剂量呈正相关(r=0.624、0.713,P0.05);GFAP光密度与NP暴露剂量呈正相关(r=0.733、0.679,P0.05)。各暴露组21 d仔鼠海马GFAP阳性细胞数低于60 d(t=-5.525,P0.05)。提示NP孕期暴露影响子代大鼠脑组织GFAP的表达,且剂量越高,GFAP表达越低。     

饮水铅暴露对大鼠不同脑区铁、锌、锰和铜含量的影响

目的探讨不同时间和不同浓度铅暴露对SD大鼠不同脑区铁、锌、锰和铜含量的影响。方法将36只健康初断乳(21d龄)清洁级SD大鼠随机分成3组,分别为低(400mg/L)、高(800mg/L)浓度铅染毒组和对照(去离子水)组,每组12只,雌雄各半。采用自由饮水方式进行染毒,日饮水量为100ml/kg,连续染毒8周。分别于染毒4、8周,取脑,测定额叶、颞叶、顶叶、海马四个脑区铅、铁、锌、锰和铜的含量。结果染毒4、8周时,各脑区铅含量高于对照组;与染毒4周比较,染毒8周时大鼠额叶和颞叶两脑区铅含量较高(P0.05)。染毒4周时高浓度染毒组顶叶和海马铅含量高于低浓度染毒组,差异有统计学意义(P0.05);染毒8周时高浓度铅染毒组顶叶和海马两脑区铅含量虽高于低浓度铅染毒组,但差异无统计学意义。脑铁含量随铅染毒浓度的增加而升高,脑铁含量与脑铅含量呈正相关(r=0.452,P0.01);脑锌含量随着铅染毒浓度的增加而降低,脑锌含量与脑铅含量呈负相关(r=-0.357,P0.05)。顶叶和海马铁含量随染铅时间的延长而呈统计学意义的增加,而额叶和颞叶锌随染铅时间的延长而呈统计学意义的降低。铅染毒大鼠脑锰、脑铜含量无变化,差异无统计学意义。结论铅染毒使SD大鼠脑铅和脑铁含量升高,脑锌含量降低,对脑锰、脑铜含量无影响。     

脑缺血再灌小鼠额顶叶皮质ET-3和GFAP的表达

目的　探讨内皮素 -3 (ET -3 )及星形胶质细胞在脑缺血再灌损伤中的机制。方法　将 3 6只成年雄性昆明小鼠随机分为三组 :⑴缺血再灌组 (即IR组 ,n =2 4) ,双侧颈总动脉结扎 7min ,再灌 1、3、5、10d(每个时间点n =6)。⑵假手术组 (即ShO组 ,n =6) ,操作同上但不结扎双侧颈总动脉。⑶正常对照组 (即NG组 ,n =6)。采用免疫组化方法 ,观察脑缺血再灌小鼠额顶叶皮质ET -3和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达。结果　实验组小鼠各时间点额叶、顶叶皮质Ⅲ -Ⅵ层ET -3及GFAP免疫阳性细胞数均比对照组明显增多 (P <0 0 1) ,第 5d时 ,实验组ET -3和GFAP阳性细胞数达高峰 ,且ET -3和GFAP阳性细胞数的变化在时空上存在一致性。结论　在脑缺血再灌的早期 ,额叶、顶叶皮质ET -3和GFAP的表达显著升高 ,这可能是脑缺血再灌中枢神经功能损伤的重要机制之一。     

Nec-1对亚急性锰暴露大鼠星形胶质细胞异常活化的影响

目的 研究Nec-1对亚急性锰暴露大鼠海马及皮层星形胶质细胞异常活化的影响。方法 将48只SD大鼠随机分为对照组、Nec-1对照组、染锰组,Nec-1干预组。所有动物先经手术作侧脑室埋管,然后采用亚急性腹腔注射法对染锰及干预组动物染锰,干预组同时给予脑室内注射Nec-1。动物取材时取海马及顶叶皮层组织,采用免疫组织化学法、Western Blot和RT-qPCR法检测GFAP蛋白及NADPH相关基因表达的变化。结果 与对照组比较,染锰组海马CA1区和皮层的GFAP阳性细胞数增多,GFAP的蛋白表达量升高,NOX1、NOX4基因的表达升高(P＜0.05);与染锰组比较,Nec-1干预组海马CA1区GFAP阳性细胞数减少,海马及皮层的GFAP表达量下降(P＜0.05),NOX1、NOX4基因的表达降低。结论 Nec-1干预可降低染锰大鼠脑内星形胶质细胞以及氧化应激相关因子的反应水平,其机制可能与Nec-1能抑制神经组织细胞程序性坏死的发生有关。     

三磷酸甲酯中毒致母鸡脊髓神经元凋亡的研究

目的　研究细胞凋亡机制在有机磷中毒后的动物迟发性神经病 (OPIDN)中所起的作用及其动态病理改变。方法　采用给母鸡一次性肌内注射三磷酸甲酯染毒的方法建立OPIDN动物模型 ,以染毒后 3、5、7、10、14、18d为时间点分别取材 ,以HE染色、尼氏法和原位末端标记法 (TUNEL)观察其第三腰髓 (L3 )的病理改变、神经元数量及细胞凋亡的变化。结果　母鸡于肌内注射三磷酸甲酯后第 9天前后出现进行性共济失调和肌无力等OPIDN的典型症状。HE染色示染毒后 5d后母鸡脊髓前角大神经元出现细胞核红色深染 ,至 18d消失 ;尼氏法染色示母鸡脊髓前角神经元数量呈进行性减少 [从 (82±4)个 /mm2 到 (66± 6)个 /mm2 ] ;TUNEL法示母鸡腰段脊髓TUNEL阳性细胞于染毒后 5d左右开始出现[(2 2± 2 )个 /mm2 ] ,以 7d[(2 7± 3 )个 /mm2 ]数量最多 ,18d消失。结论　在母鸡OPIDN发病过程中出现腰髓前角神经元细胞凋亡现象。提示细胞凋亡可能在OPIDN发病机制中起重要作用     

母婴分离对大鼠成年后海马星形胶质细胞的影响

[目的]研究生后早期长期反复母婴分离对子代大鼠成年后海马星形胶质胶质细胞的影响.[方法]新生大鼠分为母婴分离组和对照组,每组分别有雄性和雌性大鼠各10只.母婴分离组大鼠于生后第2 d至生后第14 d每日与母鼠分离3 h,对照组大鼠不受干扰.各组大鼠于生后第60 d处死.采用免疫组化方法分析各组大鼠背侧和腹侧海马星形胶质细胞标记物(GFAP和S100β)的表达.[结果]双因素方差分析显示:与对照组相比,母婴分离组雄性大鼠成年后腹侧海马GFAP和S100β染色阳性细胞数显著减少(P＜0.05);背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β平均光密度明显下降(P＜0.001).[结论]母婴分离可使子代雄性大鼠成年后腹侧海马星形胶质细胞数量减少,背侧海马星形胶质细胞中GFAP和S100β含量下降.     

丙酸睾酮预处理对HIBD新生鼠脑细胞神经生长因子表达的影响

【目的】观察丙酸睾酮预处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)大脑皮质和海马区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达及神经细胞凋亡的影响,并探讨其保护作用机制。【方法】新生3日龄SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=24),HIBD组(n=24),T预处理组(n=24)。T预处理组大鼠于3日龄时给予T预处理。HIBD组和T预处理组大鼠于7日龄时进行HIBD模型制作。于HI后12、24、72h、7d观察各组脑组织病理形态及应用Nissl染色法测定神经元数目而间接检测神经细胞坏死和凋亡。并于HI后24、72h、7d制作石蜡切片,用免疫组化SABC法观察NGF在各组大鼠大脑皮质和海马表达的动态变化。【结果】HI后24、72h和7d,正常对照组和HIBD组大鼠脑皮质和海马区仅见极少量阳性细胞表达,而T预处理组大鼠于HI后24h和72h NGF表达水平明显增高(P<0.05)。正常对照组和HIBD组大鼠海马区偶尔可见NGF免疫阳性细胞表达,T预处理组大鼠海马区于HI后72h出现NGF免疫阳性细胞表达轻微增多,与正常对照组和HIBD组比较差异均有显著性(P<0.01)。【结论】丙酸睾酮预处理可明显见减轻大脑皮质神经细胞凋亡、增加HIBD新生大鼠脑皮质和海马区NGF表达,从而发挥神经保护作用。     

妊娠大鼠低铅暴露对子代海马GFAP表达影响

目的观察母体孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马组织胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和mRNA表达的影响，探讨铅影响学习记忆的分子机制。方法孕鼠随机分为4组，自怀孕1d起分别给予蒸馏水、125，250，500mg／L醋酸铅饮水，直到仔鼠出生。分别在仔鼠出生后1，21，60d，采用免疫组化和原位杂交方法观察海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达的变化。结果各染铅组仔鼠1，21d时海马CA1区GFAP蛋白和mRNA阳性细胞数显著高于对照组（P〈0．05），而60d时未见明显差异。结论妊娠期母体低水平铅暴露可以使仔鼠海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达增加，这可能是铅影响学习记忆的分子机制之一。     

哈伯因对急性有机磷中毒神经损伤的保护作用研究

目的观察哈伯因(HupA)对急性水胺硫磷和辛硫磷中毒的神经病理改变和神经递质谷氨酸(Glu)和nNOS表达的影响。方法选取成年雄性昆明小鼠,分为3组:空白对照组、染毒组、HupA组,每组20只。染毒组和HupA组动物分别经口染毒水胺硫磷(14.7mg/kg)或辛硫磷(1702mg/kg),治疗组染毒前2h经口给予HupA(0.5mg/kg),空白对照组给予吐温-80。染毒24h后处死动物,取出大脑,按大脑冠状切面进行选块、切片,一部分做甲苯胺蓝染色;一部分进行免疫组织化学检查,供检测脑皮质、海马组织的Glu和nNOS使用。结果染毒组病理学检查尼氏小体数量减少,染色变浅,而HupA组尼氏小体改变明显减轻。水胺硫磷中毒小鼠脑组织中Glu阳性细胞减少(P<0.01),nNOS阳性细胞增多(P<0.01)。与染毒组比较,HupA组Glu阳性细胞面积显著增多(P<0.01),海马区nNOS阳性面积显著减少(P<0.01)。辛硫磷染毒组未见改变。结论 HupA对水胺硫磷急性中毒引起的神经损伤有一定得保护作用,对辛硫磷急性中毒引起的神经递质改变无显著影响。