益气生骨注射液促进体外成肌细胞增殖作用的研究

目的:研究益气生骨注射液对体外培养的成肌细胞的增殖作用.方法:将成肌细胞进行体外培养,实验组加入不同浓度的益气生骨注射液,对照组分别加入不同浓度的黄芪注射液和复方当归注射液,空白组不加任何药物.筛选出各药物对细胞增殖的最适生长浓度,并观察其对细胞的增殖作用.结果:益气生骨注射液对成肌细胞的增殖作用最强,与空白组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:益气生骨注射液有促进成肌细胞增殖的作用.     

益气生骨颗粒提取液对体外成纤维细胞增殖的影响

目的:评价不同浓度益气生骨颗粒提取液对成纤维细胞增殖的影响。方法:采用体外培养9 d鸡胚皮肤的成纤维细胞,在成纤维细胞培养液中分别加入不同浓度的益气生骨颗粒提取液(简称益气)、黄芪注射液(简称黄芪)、复方当归注射液(简称当归),应用倒置显微镜每日观察细胞的生长情况和计数单位面积内的细胞数测定1-7 d的细胞增殖动力学。结果:各种药物对成纤维细胞生长的最佳浓度为:益气,0.25 mL%;黄芪,2 mL%;当归,0.125 mL%。与空白组(0%)相比,0.25 mL%益气组与2 mL%黄芪组在第3、5、7天的成纤维细胞均明显增多(均P<0.05);0.125 mL%当归组的细胞计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益气生骨颗粒提取液能促进成纤维细胞增殖,0.25ml%是其最佳浓度。     

黄芪注射液对兔脂肪来源的间充质干细胞 体外增殖和细胞周期的影响

目的:观察黄芪注射液对兔脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)体外增殖的作用。方法:提取家兔脂肪间充质干细胞,培养后,设实验组和对照组,实验组加入不同质量浓度黄芪注射液,对照组加常规培养液,用流式细胞仪观察细胞周期,用四唑盐(MTT)法测定细胞的增殖率,比较两组的细胞周期和细胞增殖率。结果:培养24 h后,对照组增殖期的细胞占(65.3±4.8)%,黄芪注射液组占(72.6±5.7)%,差异有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,黄芪注射液0.390 6～200 g.L-1,细胞增殖(吸光度A)为(2.273±0.100)～(1.983±0.125),对照组为(1.341±0.424),表明实验范围内各浓度黄芪注射液对ASCs均有明显促进增殖的作用,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪注射液有明显的促进兔ASCs体外增殖的作用。     

益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/Mtor信号通路的影响

目的:通过观察益气化瘀散结方干预后胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/mTOR信号通路分子的表达变化,探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot、Real-time PCR技术检测PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达变化。结果:与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清均能不同程度抑制SGC-7901细胞的增殖,其中10%，20%更为明显，差异有统计学意义(P<0.05),时间上以48 h最为明显;与空白血清组比较,10%，20%益气化瘀散结方含药血清组G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05);与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清组PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路可能是益气化瘀散结方抑制胃癌细胞增殖、调节胃癌细胞生长周期的重要作用机制之一。     

少阳生骨方对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达影响研究

目的：对比观察少阳生骨方（SYSGF）与盐酸氨基葡萄糖胶囊对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达的影响,探讨少阳生骨方对膝关节软骨保护方面的作用。方法：①去分化软骨细胞体外培养体系的建立以及鉴定;②用CCK-8法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞增殖影响;③用免疫组化法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞Ⅱ型胶原表达影响。结果：①通过酶消化法建立1周龄SD大鼠去分化软骨细胞体外培养体系,通过镜下观察、甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原表达染色鉴定,确认分离培养的软骨细胞符合软骨细胞的生物学特性。②CCK-8法观察去分化细胞结果显示：0.6%、1.2%、2.4%含少阳生骨方药物以及盐酸氨基葡萄糖的药物血清与空白组相比,其均能促进去分化软骨细胞的增殖（P〈0.05）,但少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组相比其结果差异性没有统计学意义（P〉0.05）。③用免疫组化染色法观察去分化软骨细胞结果显示：不同药物以及不同药物浓度干预去分化软骨细胞后其Ⅱ型胶原均有表达,表达部位在胞浆,为红棕色颗粒或成片状,但与空白组相比,少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组表达率明显增加（P〈0.05）。同浓度含药血清少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原表达结果差异性没有统计学意义（P〉0.05）。结论：少阳生骨方能促进去分化软骨细胞的增殖以及Ⅱ型胶原的表达,提示少阳生骨方能有效保护关节软骨,这或许是其防治骨性关节炎的机制之一。     

参麦注射液对IL-1β体外诱导兔软骨细胞增殖的影响

目的：观察参麦注射液对白细胞介素-1β（IL-1β）体外诱导兔软骨细胞增殖的影响。方法：采用IL-1β体外诱导兔软骨细胞的方法,建立变性软骨细胞模型,将其分为空白组、模型组、1％参麦组、5％参麦组和10％参麦组。空白组采用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养;模型组采用含10ng／mLIL-1β的DMEM培养液培养;1％、5％、10％参麦组采用含10ng／mg/mLIL-1βDMEM培养液培养24h,再分别采用含1％、5％、10％参麦注射液的DMEM培养液培养。采用MTT比色法检测软骨细胞的增殖情况。结果：模型组吸光度值（OD值）低于空白组,2组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）,说明IL-1β可抑制软骨细胞的增殖,建立变性软骨细胞模型。模型组及不同浓度参麦组间的OD值比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）,不同浓度的参麦注射液均可明显促进变性软骨细胞的增殖,其增殖作用与参麦注射液浓度呈正相关。结论：参麦注射液能够明显促进IL-1β体外诱导兔软骨细胞的增殖,这可能是参麦注射液防治关节退变的机理之一。     

理中丸对胃肠道Cajal间质细胞增殖作用的影响

目的：探讨理中丸对胃肠道Cajal间质细胞（Interstitial Cells of Cajal，ICC）增殖作用的影响，为该方对胃肠动力障碍性疾病治疗提供思路。方法：采用Ⅱ胶原酶消化法体外培养ICC，成功鉴定后，通过直接给药法和含药血清法研究理中丸对该细胞的影响。结果：1.MTT法提示：①直接给药法：理中丸中、高剂量组均有促进增殖作用，与空白组比较统计学意义显著（P〈0.01）；②含药血清法：给药各组均与空白血清组有显著性差异（P〈0.01），其中理中丸组10％，15％浓度有促进增殖作用，20％浓度组呈现对体外ICC有抑制增殖作用。2.流式细胞术检测药物干预对体外ICC的细胞周期变化，结果提示：①直接给药法：各组s期均较优于空白组，但没有统计学意义；②含药血清法：各组的ICC的S期增加均优于空白组，其中以15％组最为明显，但是没有统计学意义。结论：①直接给药法中理中丸低剂量组与空白组比较无统计学意义，中、高剂量组对ICC促进分裂，提高增殖率优于空白组；②理中丸10％、15％含药血清组能促进ICC的分裂，提高增殖率和细胞数量，而20％含药血清组的增殖率和增殖数都低于空白组，有抑制ICC的趋势；以上提示，理中丸在一定浓度、剂型方式下能调节细胞周期，促进细胞增殖。     

益气生骨颗粒抗炎作用的实验研究

目的：研究益气生骨颗粒的抗炎作用。方法：对小白鼠分别进行毛细血管通透性实验、二甲苯皮肤毛细血管通透性实验和二甲苯耳肿胀实验,在每一实验中将参与该实验的小白鼠随机分为安慰剂对照组、用药组和阳性对照组3组,观察益气生骨颗粒的抗炎作用。结果：①益气生骨颗粒可明显抑制醋酸所引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加,与安慰剂对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。②益气生骨颗粒可以明显抑制二甲苯引起的皮肤毛细血管通透性增加,与安慰剂对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。③益气生骨颗粒可抑制二甲苯引起的耳肿胀,与安慰剂对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,与阳性对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：益气生骨颗粒具有很好的抗炎作用,可能与方中各药益气活血作用有关。     

益气化瘀补肾方血清对兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响

目的观察益气化瘀补肾方含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响。方法取兔的膝关节软骨,将软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,用10μg/L的IL-1β诱导正常软骨细胞退变,制备益气化瘀补肾方含药血清作为干预措施。益气化瘀补肾方组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）益气化瘀补肾方含药血清培养液,对照组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）空白血清培养液,分别培养24h、48h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖。另取对数生长期第三代软骨细胞分为4组：正常软骨细胞＋20%空白血清;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清。每组6个复孔,每孔100μl,各组分别用相应的血清培养24h、48h后进行检测,采用Caspase3/7试剂盒检测各组软骨细胞的Caspase3/7酶活性变化情况。结果不同浓度的益气化瘀补肾方血清均能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖;与正常软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组Caspase3/7酶活性升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组Caspase3/7酶活性降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组的Caspase3/7酶活性与正常软骨细胞＋20%空白血清组和IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气化瘀补肾方血清能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞Caspase3/7酶活性,从而抑制软骨细胞的凋亡。     

白蔹甲醇提取物对骨髓瘤细胞SP20增殖及凋亡的影响

目的 研究白蔹甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞SP20增殖及凋亡的影响。方法 体外培养骨髓瘤SP20细胞，光学显微镜观察加入白蔹甲醇提取物不同萃取部位后的细胞形态的变化；MTT法检测白蔹甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞增殖的影响。结果 光学显微镜观察到给药后骨髓瘤SP20细胞出现典型的细胞凋亡形态改变。药物作用48 h后，5-氟尿嘧啶组、氯仿组、乙醚组、乙酸乙酯组对细胞增殖均有抑制作用，与溶剂空白组比较，差异有统计学意义(P < 0.05，P < 0.01)；正丁醇组抑制率最小，与溶剂空白组比较，差异无统计学意义(P > 0.05)。白蔹甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞存活的抑制率，从大到小依次是:乙酸乙酯组 > 乙醚组 > 氯仿组。结论 白蔹甲醇提取物对体外培养的骨髓瘤细胞的生长有明显的抑制作用，并促其凋亡。     

中药配合手术治疗塌陷前期非创伤性股骨头坏死的临床研究

目的：观察髓芯减压打压支撑植骨术配合生骨饮Ⅱ号方治疗塌陷前期非创伤性股骨头坏死的临床疗效,进一步探讨该方法治疗塌陷前期非创伤性股骨头坏死的机理。方法：统计分析自2008年5月-2012年11月,共收治的单侧非创伤性股骨头坏死患者82例,其中治疗组42例采用髓芯减压打压支撑植骨术配合术后生骨饮Ⅱ号方口服治疗;对照组40例采用髓芯减压打压支撑植骨术治疗。观察记录治疗前和治疗后6个月、12个月股骨头塌陷程度、髋关节功能Harris评分及血清OPG三方面变化。结果：两组患者均获得满意临床效果,但治疗组优于对照组,差异有统计学意义。结论：髓芯减压打压支撑植骨术配合生骨饮Ⅱ号方综合治疗,可升高塌陷前期非创伤性股骨头坏死患者血清OPG水平,改善髋关节功能,有利于骨坏死修复,能够预防股骨头坏死塌陷。     

益气类中药对肺纤维化大鼠模型肺组织中TNF-α、IL-8的影响

目的：观察博莱霉素所致肺纤维化模型大鼠肺组织中TNF-α和IL-8的表达水平,探讨益气类中药对大鼠肺纤维化的作用及其机制。方法：32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、益气组和泼尼松组,采用气管内滴加博莱霉素的方法制作肺纤维化模型,并应用相应的药物灌胃干预,各组大鼠分别于第28 d处死,观察大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-8的表达水平。结果：与空白组比较,模型组、泼尼松组大鼠肺组织中TNF-α、IL-8的表达水平明显增高（P〈0.01）,益气组IL-8的表达水平明显增高（P〈0.01）、TNF-α表达水平无明显差异（P〉0.05）。与模型组比较,益气组和泼尼松组肺纤维化程度明显减轻（P〈0.01）,肺组织中TNF-α、IL-8表达水平也显著降低（P〈0.01）。益气组较泼尼松组肺纤维化程度更轻（P〈0.05）,肺组织中TNF-α、IL-8表达水平也更低（P〈0.01）。结论：益气类中药与泼尼松均可下调肺组织中TNF-α及IL-8的表达水平,抑制或延缓肺纤维化的发生发展,益气类中药疗效较泼尼松更好。     

调肝益气通络方药物血清对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的:通过观察调肝益气通络方对大鼠间充质干细胞增殖能力的影响,从而评价该方的促增殖能力。方法:腹腔注射"CCl4-橄榄油"混悬液制备Wistar小写大鼠(35只)肝纤维化模型;其中30只灌胃给予调肝益气通络方(低、中、高3个剂量)1个月,制备含药血清;另外5只用于MSC细胞的分离与培养;用含药血清诱导MSC向肝细胞的分化连续7 d;在各检测点进行形态学观察及通过MTT对细胞增殖情况进行评价。结果:各浓度含药血清在加入1⁷ d后,其细胞数量均比常规培养组增多,并同用药剂量呈正比,浓度越大细胞数量越多,细胞数随着时间的推移而不断增大。结论:调肝益气通络方对大鼠骨髓里的间充质肝细胞的增殖能力具有显著的促进作用。     

益气活血利水法对心衰大鼠血管加压素-水通道蛋白2系统的影响

目的:研究益气活血利水法对于心衰大鼠精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的影响,以探讨本法对心衰水液潴留的作用机制。方法:选择健康Wistar大鼠,应用腹腔注射阿霉素(3 mg/kg,每周1次,连续6周)及睡眠剥夺,造成心衰大鼠模型,然后分空白组、模型组,芪苈强心组、中药高剂量、中剂量、低剂量6组,服药4周后观察6组大鼠服药后血浆精氨酸血管加压素(AVP)浓度;血管加压素V2受体(V2R)、水通道蛋白2(AQP2)蛋白表达情况。结果:益气活血利水法可降低心衰大鼠血浆中升高的AVP浓度,与模型组比较,有统计学差异;可部分减弱肾脏组织V2R、AQP2蛋白表达。结论:益气活血利水法通过降低血浆中AVP浓度,下调V2R、AQP2蛋白表达来作用于精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的每个环节而起到改善水液潴留之目的。     

益气活血解毒方对小鼠卵巢癌ID-8细胞株增殖及血管生成过程的影响

目的:研究益气活血解毒方抑制鼠卵巢上皮癌ID-8细胞株增殖的作用,并观察本方对于脐静脉内皮细胞(HUVECs)形成血管过程的作用,为本方发挥疗效提供实验依据。方法:采用细胞增殖与检测方法(cell counting kit-8,CCK-8)检测本方对于ID-8细胞增殖的抑制作用;将含中药血清、磁珠分选的调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)与抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体分组共培养,观察血管生成情况差异。结果:与空白组比较,10%,20%含药血清均能够抑制卵巢上皮癌ID-8细胞株的增殖,此抑制作用在培养96 h时最明显;在72,96 h时,20%含药血清组的抑制率明显高于10%含药血清组(P0.05,P0.01)。与Tregs(-)各组相比,Tregs(+)各组HUVECs细胞呈现明显的血管网状结构,中药含药血清组血管成网不明显,VEGF抗体联合含药血清组血管成网情况最差。结论:益气活血解毒方对小鼠卵巢上皮癌ID-8细胞株的增殖过程有显著的抑制作用,同时能够干预血管的形成,这也许与本方影响Tregs促进肿瘤新生血管的作用相关。     

健脾益气方含药血清通过Caspase-3/Vimentin促进人肝癌MHCC-97H细胞凋亡

目的:观察健脾益气方含药血清对人MHCC-97H肝癌细胞凋亡的影响,探讨凋亡过程中波形蛋白(Vimentin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化及其意义。方法:采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%,15%,30%体积浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin,Caspase-3,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)蛋白表达的影响。结果:健脾益气方中、高剂量含药血清均可以降低MHCC-97H肝癌细胞中Vimentin蛋白表达(P0.01),其下调程度与肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;Vimentin裂解组细胞增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最高;Caspase抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率在各组中均最低。与空白血清组比较,健脾益气方中、高剂量组,Vimentin裂解组Caspase-3蛋白表达上调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达下调(P0.01),且PARP-1蛋白出现了裂解片段;Caspase抑制组Caspase-3表达下调(P0.01),Vimentin,PARP-1蛋白表达无统计学差异,PARP-1无蛋白裂解片段出现。结论:15%的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞MHCC-97H的干预效果最佳,可能通过Caspase-3下调细胞中Vimentin蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭;同时可能利用Caspase-3/Vimentin形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡。     

柴芍益气汤治疗急性重症胰腺炎37例临床分析

目的：观察柴芍益气汤治疗重症急性胰腺炎（SAP）的临床效果。方法：对照组（34例）给予常规内科综合治疗,治疗组（37例）在对照组基础上加用柴芍益气汤。结果：2组患者总有效率分别为94.6%和79.5%,治疗组疗效明显优于对照组（P〈0.05）。结论：柴芍益气汤配合常规西医治疗重症急性胰腺炎疗效确切。     

益气补肾方对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的 探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响.方法 将胃癌SGC-7901细胞接种于RPMI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml 7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复3次,37℃、5％CO2培养箱孵育48h.采用MTT法检测不同浓度益气补肾方对SGC-7901细胞增殖的抑制率;采用RT-PCR法检测其对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的基因表达活性的影响. 结果 不同浓度的益气补肾方对SGC-7901细胞都有一定的抑制作用,以16mg/ml和32mg/ml浓度抑瘤作用较好,抑制率分别为53.17％和56.47％;MMP-2 mRNA在32mg/ml组同空白对照比较,差异有统计学意义(P＜0.05),并且16mg/ml组也能下调MMP-2 mRNA的表达,但差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 益气补肾方能明显抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力,且以32mg/ml浓度最好.     

回阳生肌膏及其拆方对糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠血清白细胞介素-1α和血栓素B_2含量的影响

目的观察回阳生肌膏及其拆方对糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠白细胞介素-1α(IL-1α)和血栓素B2(TXB2)含量的影响,探讨其促进糖尿病慢性皮肤溃疡愈合的作用机制。方法 160只大鼠随机抽取6只作为空白组,不做任何处理,其余大鼠制备糖尿病模型,2周后随机分为1、3、5、7、14 d处理组,各处理组再分为正常组、模型组、回阳生肌膏组(全方组)、温阳益气拆方组(益气组)、活血生肌拆方组(活血组)。正常组及模型组给予凡士林纱条,全方组、益气组及活血组给予相应药物纱条。正常组采用皮肤缺损法,其他组采用复合因素制备慢性皮肤溃疡模型。在相应给药时间点处死各组大鼠,酶联免疫法检测各时点大鼠血清中IL-1α和TXB2的含量。结果 IL-1α含量:给药3 d益气组显著高于空白组、模型组、全方组和活血组(P0.05);给药5 d,全方组显著高于空白组和模型组(P0.05);给药7 d,各给药组显著高于空白组和模型组(P0.05),全方组高于益气组、活血组(P0.05);给药14 d,模型组和活血组低于空白组(P0.05)。TXB2含量:给药3 d,正常组和全方组高于空白组(P0.05);给药5 d,全方组高于空白组和正常组(P0.05);给药7 d,益气组高于空白组、模型组、全方组和活血组(P0.05);给药14 d,活血组高于空白组、模型组、全方组和益气组(P0.05),空白组和正常组低于其他各给药组(P0.05)。结论回阳生肌膏及其拆方均能促进炎症反应,刺激炎症因子分泌,益气温阳药对创面的促炎作用早期更为明显。